乙型脑炎减毒活疫苗工艺中金黄地鼠肾细胞培养液里谷氨酰胺添加的研究

目的比较谷氨酰胺在不同浓度和不同添加阶段的条件下,作为细胞生长液的成分,对乙型脑炎减毒活疫苗生产中金黄地鼠肾细胞的培养效果以及后续生产工艺的影响。方法 (1)以两种添加阶段:将谷氨酰胺作为细胞生长液体培养基的成分加入细胞培养和培养细胞时临时配制后加入细胞培养;(2)以不同的浓度:按0.05、0.1、0.2 g/L的浓度加入细胞培养。结合两种条件后,每种组合条件生产3批地鼠肾细胞,对所有批次细胞的生长情况及后续接种病毒后,对应的病毒生长情况进行比较研究。结果谷氨酰胺在培养细胞时临时配制后加入细胞培养所生产的地鼠肾细胞质量优于其作为细胞生长液体培养基的成分加入细胞培养,采用秩和检验,差异有统计学意义(P=0.002<0.05);谷氨酰胺按0.1 g/L和0.2 g/L的浓度加入细胞培养所生产的地鼠肾细胞质量优于按0.05g/L浓度,在2种添加阶段其,差异有统计学意义(P=0.02<0.05),但0.1g/L和0.2 g/L的浓度之间,无论谷氨酰胺的添加阶段在培养基中添加P=0.513,在培养时临时添加P=0.827),两者差异无统计学意义(P>0.05)。结论在乙型脑炎减毒活疫苗生产所需的地鼠肾细胞培养中,谷氨酰胺适合在培养细胞时临时配制后加入细胞培养容器,浓度不宜低于0.1g/L。

应用不同代次兔肾细胞培养风疹病毒松叶株的研究

目的为提高兔肾细胞产量用于增加风疹病毒生产。方法 SPF级家兔肾细胞经传代培养10代,对不同代次兔肾细胞进行遗传稳定性、外源因子及兔脑原虫检测后接种风疹病毒松叶株(Matsuba strain)的试验。结果兔肾细胞产量得到提高,由1对兔肾平均生产1瓶细胞增加为8瓶,细胞核型检查传至第10代的细胞染色体数目与初代细胞一致,细胞培养物均一性提高。第0～第3代细胞病毒培养物滴度间无显著性差异,χ2检验返回相关性的P值均大于0.95。结论第1～第3代细胞培养风疹病毒与第0代相比,可获得相同滴度的病毒培养物,p3代兔肾细胞应用于疫苗生产可显著提高细胞及病毒产量。

甲型肝炎减毒活疫苗毒种

中型肝炎减毒活疫苗毒种(H2减毒株)的选育包括:用新生猴肾细胞(NMK)直接分离人粪便中的肝病毒(HAV);HAV在NMK细胞上的连续传代;低温传代;低温适应于人胚肺二倍体细胞(KMB17);减毒株特征研究;发现猕猴对HAV易感并建立用猕猴筛选减毒株;在KMB17细胞上制备合格的人用疫苗;疫苗安全性的考核、疫苗效果的考核等。

流行性乙型脑炎灭活疫苗(非洲绿猴肾细胞)和减毒活疫苗不同接种方案的安全性观察分析

目的对流行性乙型脑炎(乙脑)灭活疫苗(非洲绿猴肾细胞)[Japanese Encephalitis(JE)Inactivated Vaccine(Vero Cell),JEV-I(Vero)]和减毒活疫苗(JE Attenuated Live Vaccine,JEV-L)不同接种方案的安全性进行评价。方法对2453名8月龄、1074名2岁儿童随机分组,分别接种JEV-I(Vero)和JEV-L,观察接种后30min内、72h内和30d内的不良反应,并对JEV-I(Vero)和JEV-L进行比较。结果接种JEV-I(Vero)和JEV-L后,不良反应主要表现为轻(37.1～37.5℃)、中度(37.6～39.0℃)发热,局部反应主要为红肿,未观察到严重的或危及生命的不良反应。8月龄儿童30min内即时反应轻、中度合并发热率,JEV-I(Vero)(第1剂)和JEV-L分别为5.4%和6.4%;72h内分别为16.1%和14.1%;JEV-I(Vero)(第1剂)和JEV-L72h内重度(>39.0℃)发热率分别为0.4%和0.1%。2岁儿童30min内即时反应轻、中度合并发热率,JEV-I(Vero)和JEV-L分别为6.8%和7.7%;72h内分别为18.2%和19.0%;JEV-L72h内重度发热率为0.2%。JEV-I(Vero)和JEV-L不良反应发生率基本一致,30d内不良反应发生率与72h内不良反应发生率基本一致,差异无统计学意义。结论 8月龄儿童接种JEV-I(Vero)和JEV-L均有良好的安全性;曾在8月龄接种过JEV-L的2岁儿童,加强免疫JEV-I(Vero)或JEV-L也有良好的安全性。从安全性的角度,JEV-I(Vero)和JEV-L均可在预防控制JE中使用。

冻干流行性乙型脑炎灭活疫苗(非洲绿猴肾细胞)和减毒活疫苗序贯免疫的安全性评价

目的观察接种冻干流行性乙型脑炎(乙脑)灭活疫苗(非洲绿猴肾细胞)[Japanese Encephalitis Vaccine(Vero Cell),Inactivated,Freeze-dried;JEV-I]后的临床反应,以及和乙脑减毒活疫苗(Japanese Encephalitis Attenuated Live Vaccine;JEV-L)序贯免疫程序的安全性。方法以9月龄和2岁健康儿童为观察对象,分三种组合接种JEV,采取主动和被动监测相结合的方式观察接种后30d内的临床反应。结果 JEV-I和JEV-L的不良反应发生率分别为9.72%和9.59%,差异无统计学意义(χ2=0.024,P=0.876)。不良反应以Ⅰ级反应为主,占82.25%;需要治疗的发热反应占0.83%,未出现严重不良反应。三种免疫组合的不良反应发生率分别为10.50%、8.11%、9.59%,差异无统计学意义(χ2=4.267,P=0.118)。结论 JEV-I和JEV-L的不良反应发生率差异无统计学意义,JEV-I和JEV-L序贯免疫有良好的安全性。

病毒感染——优生大敌

病毒是体形虽比细菌小(直径为20～300毫微米),但其毒力比细菌大,要借助电子显微镜才能观察到的一大类致病微生物。由于病毒寄生在活细胞内,合成速度大大早于临床症状,容易出现抗药变异株等原因,人体一旦感染上后,除了对症治疗外,尚无理想的化学药物和特效的治疗方法。

1例接种两种疫苗偶合ITP和EBV感染病例的调查

目的调查某受种者发生特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)、EB病毒(Epstein-barr virus,EBV)感染与接种吸附无细胞百白破联合疫苗(diphtheria,tetanus and acellular pertussis combined vaccine,adsorbed,DTaP)、麻疹-腮腺炎-风疹联合减毒活疫苗(measles,mumps and rubella combined attenuated live vaccine,MMR)是否存在因果关联。方法县、乡两级专业人员根据受种者的调查诊断申请,开展个案调查、收集受种者、接种方、疫苗生产企业相关资料;对菏泽市2022年4月—2023年4月疑似预防接种异常反应(adverse events following immunization,AEFI)数据、疫苗接种剂次进行统计,查询接种同批号疫苗受种者AEFI的发生情况,并进行描述性分析;菏泽市预防接种异常反应调查专家组对该AEFI案例开展调查诊断。结果某受种者于2023年4月2日16:21接种DTaP、MMR,观察30min无异常;2023年4月5日20:21该病例发现全身散在出血点,于2023年4—5月先后在乙、丙医院住院治疗,诊断为ITP、EB病毒感染。在2022年4月3日—2023年4月2日接种的379.21万剂次各类疫苗中,AEFI发生率为0.16/10万剂,低于2020年全国2.41/10万剂水平(u=8.925,P<0.05)。调查诊断结果为该病例不属于预防接种异常反应。结论该受种者接种DTaP、MMR与发生EBV感染、ITP无因果关联性,为偶合症。

流行性乙型脑炎疫苗基础免疫血清学效果的Meta分析

目的汇总、比较不同流行性乙型脑炎(乙脑)疫苗(Japanese Encephalitis Vaccine,JEV)基础免疫后抗体阳转率,评价血清学效果。方法电子检索《中国医院知识库》、《万方全文数据库》和西文生物医学期刊文献数据库,将研究JEV基础免疫后血清学效果的随机对照试验和非随机对照试验的文献全部纳入分析,用RevMan4.2.10软件进行统计分析。结果共纳入12篇文献,7篇有对照组。乙脑减毒活疫苗(JEV,Attenuated Live;JEV-L)、乙脑灭活疫苗(非洲绿猴肾细胞)[JEV,Inactivated(Vero Cell),JEV-I(Vero)]和乙脑灭活疫苗(原代地鼠肾细胞)[JEV-I(Primary Hamster Kidney Cell),JEV-I(PHK)]基础免疫后,抗体阳转率分别为86%[95%可信区间(ConfidenceInterval,CI):80%～91%]、83%(95%CI:72%～94%)和64%(95%CI:58%～69%)。3种疫苗基础免疫抗体阳转率两两比较,JEV-I(Vero)基础免疫后的抗体阳转率显著高于JEV-I(PHK),其他两两比较抗体阳转率的差异无统计学意义。结论JEV-L和JEV-I(Vero)基础免疫后血清学效果要高于JEV-I(PHK)。