核酸提取试剂盒对饲料中牛羊源性成分检测的影响

实时荧光聚合酶链反应法(荧光PCR法)是目前饲料中牛羊源性成分的定性检测中常用方法之一。为了熟练操作和掌握这个方法,使得实验室工作人员在做饲料中牛羊源性成分定性这类检测时能有一个清晰的认识,通过核酸提取试剂盒的选取及平行实验比对,对此进行了阐释。

植物DNA提取方法的研究进展

随着分子生物学的快速发展,植物DNA提取技术在植物科学研究、农业生产、环境保护和法医物证学等领域发挥着至关重要的作用。传统方法如CTAB法、SDS法和高盐低pH法,虽然在提取效率和纯度方面取得了一定的成功,但存在操作繁琐、耗时长、试剂对人体有害等问题。为了克服这些问题,研究者开发了一系列快速、高效的提取方法,如微针贴片法、纤维素滤纸法、EZ-D法和碱裂解法。这些方法在提高提取速度和纯度的同时,减少了对环境和操作人员的影响。本文总结了植物DNA提取的传统方法和近年来发展起来的快速提取新技术的优缺点。

花椒果皮基因组DNA提取:不同试剂盒性能评估与比较研究

目的 通过比较不同植物试剂盒在花椒果皮DNA提取中的差异,探究适用于花椒果皮的基于离心柱法的DNA提取试剂盒。方法 选取8种不同品种的花椒,利用TIANGEN DNAsecure新型植物基因组DNA提取试剂盒(Tiangen-Ⅰ)、DNeasy Plant Mini kit (DNeasy)、多糖多酚植物基因组DNA提取试剂盒(Tiangen-Ⅱ)、Nucleospin?Food kit (Nucleospin) 4种基于离心柱法的试剂盒提取花椒果皮基因组DNA,通过对比提取到的DNA浓度、纯度、聚合酶链式反应扩增能力,以及提取过程中的成本、耗时等因素,基于简单加权(simple additive weighting, SAW)分析对比不同试剂盒对于花椒果皮DNA的提取效果,并进行综合评分。结果 不同试剂盒各有优缺点,最终Tiangen-Ⅰ试剂盒得分1.64,排名第一,综合考虑价格、所用时间与提取得到的DNA质量,Tiangen-Ⅰ试剂盒是更适用于花椒果皮DNA提取的试剂盒;同时,Nucleospin试剂盒在提取得到的花椒DNA质量方面有着较好的表现。结论 本研究以花椒为例探究干扰组分较多植物的基因组DNA试剂盒提取方案,通过比较Tiangen-Ⅰ试剂盒被推荐作为最佳选择,本研究为花椒果皮及其他相似植物的基因组DNA提取提供了参考方案。

三种游离核酸提取试剂盒对血浆cfDNA提取性能的比较

目的综合评估3种游离核酸(cfDNA)提取试剂盒,以筛选出经济可靠的商品试剂盒。方法我们使用了3种不同的试剂盒提取10名健康人血浆中的cfDNA,并使用Agilent 2100生物芯片分析仪对cfDNA片段大小和丰度进行评估。同时,我们还使用微滴式数字PCR(ddPCR)对cfDNA中的核糖核酸酶P蛋白亚基p30(RPP30)、NADH脱氢酶亚基1(ND1)、NADH脱氢酶亚基4(ND4)基因拷贝数进行定量,并利用实时荧光定量PCR(qPCR)检测cfDNA中藤黄节杆菌序列(ALU)ALU115和ALU247的浓度。此外,我们还在混合血浆中掺入50~766 bp的DNA Ladder,然后使用上述3种提取试剂盒对其进行提取,并使用Agilent 2100生物芯片分析仪分析各DNA片段的浓度,以计算不同试剂盒对不同大小的DNA片段的回收率和提取偏好性。结果3种试剂盒从健康人血浆中纯化的100~300 bp cfDNA浓度分别为(5.10±1.99)、(4.64±3.09)和(1.82±1.29)ng/mL(P=0.006)。Kit A所提取的RPP30拷贝数显著高于Kit C(P=0.018),而Kit A和Kit B所提取的ND1和ND4拷贝数也均显著高于Kit C(P=0.001;P=0.001;P=0.001;P=0.001)。此外,Kit A所提取的cfDNA中,ALU 115和ALU 247的浓度也显著高于Kit C(P=0.009;P=0.003)。3种试剂盒对混合血浆中掺入的外源性DNA Ladder的回收率差异有统计学意义(P<0.001),同时Kit B和Kit C对不同大小的DNA片段也存在提取偏好性。结论Kit A性能最佳,Kit B是一种低成本替代方案,其工作流程更简单省时。

全血DNA提取试剂盒改良法

目的建立简便、快捷、高纯度、高浓度的DNA提取方法。方法对原美国生产的EZNABloodDNAKit试剂盒方法进行改良(简称全血DNA提取试剂盒改良法),并与原试剂盒法、经典酚氯法改良法(微量法)[1]进行比较。取EDTA2Na抗凝血,分别用3种方法提取DNA,用琼脂糖凝胶电泳对其进行定性测定,并用紫外分光光度法定量测定。结果DNA提取的纯度A260/A280试剂盒改良法、原试剂盒法和微量法分别为1.8083±0.1655、2.0877±0.3230、1.7734±0.1152,前两法有显著性差异(P<0.05),试剂盒改良法提取DNA的纯度明显高于原试剂盒法,与微量法无显著性差异(P>0.05);改良法提取DNA的浓度分别为75.2476±18.0259、45.2771±14.973、123.8758±74.7367,与前两法的DNA提取浓度有显著性差异(P<0.05),明显高于原试剂盒法;DNA电泳图显示试剂盒改良盒法与微量法均很清晰,原试剂盒法有明显的拖尾现象。结论试剂盒改良法提高了DNA提取的纯度和浓度,可作为分子生物学研究DNA提取较好的选用方法。

运用Identifiler试剂盒对硅珠法提取石蜡包埋组织DNA质量的评估

目的:运用硅珠法从石蜡包埋的组织中提出DNA,Identifiler试剂盒评估DNA质量。方法:南京医科大学第一附属医院病理科2009～2011年石蜡包块49例,运用硅珠法提取石蜡包埋组织DNA,通过紫外分光光度计测定DNA纯度和Identifiler试剂盒PCR后3130型毛细管电泳仪分析提取DNA片段的完整性。结果:经紫外分光光度计测定胃癌组织D(260 nm)/D(280nm)均值为1.84±0.02,肺癌组织为1.85±0.02,甲状腺癌组织为1.82±0.02,3组间比较P>0.05,因此硅珠法提取石蜡包埋组织DNA不会因组织差异而影响提取效果;Identifiler试剂盒PCR后毛细管电泳显示其提取效果,46例(93%)得出完整的16个基因座STR峰型。结论:硅珠法可应用于多种组织的DNA提取,并保证提取DNA样品的纯度和完整度。

法医DNA提取纯化试剂盒在MP-120自动化工作站上提取案件样本DNA的性能研究

本文利用自主研制的法医DNA提取纯化试剂盒在MP-120自动化工作站上对48份检材样本DNA进行了提取和扩增,成功检测到所有样本DNA的STR分型,检测成功率为100%。结果表明法医DNA提取纯化试剂盒具有较高的灵敏度和检材适应性,提取得到的DNA模板质量完全能够满足法医日常DNA检验工作的需要。

法医DNA提取纯化试剂盒在Hamilton Microlab~ Starlet DNA自动提取仪上的应用研究

本文利用自主研制的法医DNA提取纯化试剂盒在Hamilton Microlab~ Starlet DNA自动提取仪上提取276份血斑样本DNA,PCR扩增检测到270份样本STR分型,成功率达97.8%。结果表明法医DNA提取纯化试剂盒可与国外进口的DNA自动提取仪相配伍进行血斑样本的批量提取。

不同商品化病毒DNA提取试剂盒对非洲猪瘟病毒检测效果的比较研究

为建立快速、准确的非洲猪瘟(African swine fever,ASF)检测方法,试验针对ASFV的晚期翻译p72蛋白基因构建了标准品质粒和标准曲线,并利用荧光定量PCR技术对OIE和CADC提供的引物和探针进行灵敏性的比对及对多种DNA提取试剂盒提取的ASFV DNA检测效率进行了评价,为ASFV的高效检测提供数据参考。结果表明:构建的ASFV晚期p72基因的标准品质粒和标准曲线中,p72标准品质粒的检测效率与灵敏度较优。通过使用OIE、CADC分别提供的引物、探针和多种DNA提取试剂盒进行ASFV荧光定量PCR检测,发现CADC提供的引物和探针对于ASFV的检测更加灵敏,Axygen品牌的DNA提取试剂盒对ASFV的检测性价比更高。

应用泛特津试剂盒提取染色体DNA的方法

采用一种简单、快速、安全、无污染的方法,从黑曲霉细胞中提取基因组DNA,以满足各种目的的PCR、Southern印迹的分析要求。该方法可在短时间内制备大量样品,浓度高、质量好,操作简单、实用,推广性强。

牛奶中牛DNA提取试剂盒法的建立

【目的】提高牛奶中牛DNA的分离提取效率,建立稳定的牛奶中牛DNA提取的试剂盒法。【方法】以从牧场中采集的新鲜牛奶为材料,在前期建立的牛奶中牛DNA提取方法基础上,针对消化温度(55,60,65℃)、消化时间(10,60,120,180,240 min)、质量分数20%十二烷基硫酸钠(SDS)裂解液用量(20,35,50,65,80μL)、20 mg/mL蛋白酶K用量(0,10,30,50,70μL)等重要参数依次进行优化,通过DNA品质测定筛选最佳的DNA提取条件,建立稳定的牛奶中牛DNA提取的试剂盒方法,并用深加工的奶粉和高低温液态奶制品对试剂盒方法进行验证。【结果】不同消化温度和消化时间从牛奶中提取的总DNA、线粒体DNA(mtDNA)和核DNA(nDNA)的完整性均表现良好,但不同消化温度和消化时间的DNA质量浓度和纯度存在差异,在消化温度为60℃、消化时间为10 min、SDS裂解液用量为50μL、蛋白酶K用量为50μL时,提取的DNA品质较优,是最佳的DNA提取条件,该条件下DNA平均质量浓度为97 ng/μL,平均纯度为1.44。对优化指标后建立的试剂盒方法进行验证,结果表明该方法不仅适用于生鲜牛奶,而且还适用于液态和固态奶制品。【结论】在所获得的最佳DNA提取条件下,牛奶体细胞裂解充分、完全,所提DNA质量浓度和纯度较高,完整性较好,PCR扩增性能较强。建立的牛奶中牛DNA提取试剂盒法适用范围较广。

兴安落叶松DNA提取-试剂盒改良法

[目的]寻找一种快速简便的兴安落叶松基因组DNA的提取方法。[方法]对DNA提取试剂盒进行改良,与原试剂盒法(离心柱)进行比较,并用琼脂糖凝胶电泳、蛋白核酸测定和ISSR-PCR对所提取的总DNA进行检测。[结果]试剂盒改良法提取的总DNA纯度和浓度较高,电泳显示其主条带较清晰,无降解现象,A260/A280值为1.75～1.84。[结论]改良后的DNA提取方法更适合兴安落叶松基因组DNA的提取。

市售酶抑制-比色法农残速测试剂盒对多种农药敏感性的研究

酶抑制法农药残留快速检测试剂盒是基于有机磷和氨基甲酸酯类农药对动物体内胆碱酯酶的抑制作用研制的。进行检测时,在胆碱酯酶及其底物(乙酰胆碱)的共存体系中加入农产品样品提取液,当样品中含有不同浓度的有机磷或氨基甲酸酯类农药时,酶活性受到不同程度抑制。

适合转录组测序的葡萄叶片总RNA试剂盒提取法的改进

RNA试剂盒法是获取植物高质量RNA样品的常用技术,针对3种常见RNA提取试剂盒在红地球葡萄叶样品RNA提取效果进行评估和优化,以期找到适合红地球葡萄叶片RNA表达谱测序需求的高质量RNA提取策略。试验依据3种试剂盒推荐时间和条件进行RNA提取,并对时间等条件进行优化,比对了优化前后RNA质量。结果显示,试剂盒经优化后的方法提取的RNA收率高,完整性好,OD260/OD280在1.8-2.2之间,OD260/OD230大于2,28S与18S条带清晰完整,RNA-Seq测序质量及基因覆盖度符合要求。在红地球葡萄叶片上的RNA提取结果表明,延长提取试剂与样品的接触时间操作可以显著提高RNA提取质量(纯度/完整性)。

试剂盒联合硅胶膜法提取陈旧性骨骼和牙齿DNA

目的探讨PrepFiler Express BTA^TM试剂盒联合硅胶膜法提取人体陈旧性骨骼和牙齿DNA检材的方法。方法选取陈旧性骨骼、牙齿类生物检材各10份,预处理后进行取样,利用PrepFiler Express BTA^TM试剂盒进行裂解,按照QIAcube全自动化核酸纯化仪操作手册提取检材DNA,用GolbalFiler试剂盒进行扩增,3500XL型基因分析仪进行电泳分离和激光扫描分析,然后对20个研究样本的DNA检验结果进行初步分析。结果骨骼牙齿DNA检材经检验获得了相对满意的效果,检出13个完整基因分型的占80%。同对照样本相比,30个扩增循环数相同的条件下,经检验获得的峰值普遍较低。结论本方法对于陈旧性骨骼、牙齿的DNA提取效率有较明显提高,对于日常检案中的尸源认定有进一步的帮助,加快了案件侦破速度,是DNA实验室常规检案方法的有效补充。

不同DNA提取试剂盒提取作物种子基因组DNA效果的比较

比较3种不同DNA提取试剂盒(宝生物、天根、LGC)在转基因产品检测中的应用效果,分别提取玉米、水稻和大豆种子的基因组DNA。结果表明,天根DNA提取试剂盒DP305更为适合从作物种子中提取基因组DNA进行转基因成分检测。

国标法和试剂盒法对婴幼儿食品中生物素质量分数的测定

比较GB5413.19-2010《食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中游离生物素的测定》中微生物法和商品化生物素检测试剂盒法对婴幼儿食品中生物素质量分数测定的差异性,为相关企业和检测机构提供有益参考.两方法均是利用植物乳杆菌（LactobaciLLuspLantarum）对生物素具有敏感性的特点,通过测定菌株的生长变化来反映样品中生物素质量分数.结果表明,国标法测定标准曲线在生物素质量分数为（0.01～0.1）× 10-2 μg/g范围内具有良好的线性关系（R2=0.9963）,试剂盒法在（0.08～0.72）×10-2 μg/g范围内线性良好（R2=0.9747）.以这两种方法对5份婴幼儿食品中生物素质量分数进行检测比较,两者均能有效测定生物素质量分数,国标法检测最大RSD％为2.836,而试剂盒法最大RSD％为9.777,但均不影响最终结果判断.两种方法均适合于婴幼儿食品中生物素的测定,国标法相对于试剂盒法有更好的稳定性,但操作过程较为繁杂;而试剂盒法的检测周期短,适合于大批量检测工作.

六种试剂盒提取血液基因组DNA效果比较

为筛选一种高效、快捷的血液基因组DNA提取试剂盒,采集24份新鲜西藏绵羊血液样本,选用6种市售商业化试剂盒(LifeFeng柱式试剂盒DK601和非柱式试剂盒DK602,康为世纪非柱式试剂盒CW0544和柱式试剂盒CW0546,上海生工非柱式试剂盒SK8224和柱式试剂盒SK8254),比较所提DNA的浓度、纯度、得率以及对嗜吞噬细胞无形体16S rRNA进行巢式PCR扩增,综合评价不同试剂盒DNA提取效果。结果表明,应用LifeFeng柱式试剂盒DK601提取的DNA浓度和纯度均最高,得率较高,分别达到75.63 ng/μL、1.894(OD260/OD280)、18.91 ng/μL;且嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因的PCR扩增条带清晰度最优。因此,LifeFeng DK601可作为提取绵羊血液基因组DNA及嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum)病原鉴定的首选试剂盒。

常见病原菌基因组DNA快速提取试剂盒研制

以单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌等6种常见食源性致病菌为研究对象，优化试剂盒工艺参数，采用琼脂糖凝胶电泳及OD260/OD280分析基因组DNA提取效果。结果表明，试验试剂盒可在30 min内完成基因组DNA提取，对常见10类食品样品抗基质干扰能力强。与实时荧光PCR技术联用，检测染菌量1～10 cfu·25 g-1食品样品时，仅一次增菌可得阳性结果；市售食品样品检测与国标方法结果无显著差异。所研制病原菌基因组DNA提取试剂盒适用于食品病原菌快速检测。

血液基因组DNA提取试剂盒提取条件的优化

目的针对两种实验室常用全血基因组提取DNA试剂盒(天根血液基因组DNA提取试剂盒、康为世纪血液基因组提取试剂盒)提取方法和DNA产量进行比较,建立方便、快捷、有效的外周血液基因组DNA的提取方法。方法采用500ul、800ul全血、裂解液1.5倍、2倍提取基因组DNA,利用分光光度计和凝胶电泳检测提取效果。结果两种试剂盒采用800ul全血与2倍裂解液时提取血液基因组DNA浓度最高,其中天根试剂盒提取的基因组DNA纯度和质量更优。结论利用商品化试剂盒提取血液基因组DNA时,针对实验目的,可采取增加全血用量和提高裂解液体积的方法提高基因组DNA的产量和纯度。