食源性单增李斯特菌毒力岛4基因缺失株的构建及其体外毒力研究

为研究单增李斯特菌毒力岛4(LIPI-4)对单增李斯特菌(LM)LM928毒力强弱的影响及其在LM穿越血脑屏障时发挥的作用。本研究利用同源重组技术构建LIPI-4缺失株,将亲本株与缺失株以不同的MOI值感染脑微血管内皮细胞(HCMEC)后,通过细胞增殖与细胞毒性试剂盒(CCK-8)检测细胞活性,空斑试验检测细胞病变及细菌胞间迁移率以及胞内增殖试验检测LIPI-4缺失后对LM胞内增殖的影响。结果表明:本试验成功构建LIPI-4缺失株。与亲本株相比,LIPI-4缺失株侵染HCMEC后,细胞活性极显著增强(P<0.01);空斑形成数量极显著降低(P<0.01);胞内增殖速度减慢,胞内增殖12 h时菌量极显著减少(P<0.01)。体外细胞实验表明LIPI-4的缺失显著降低了LM的毒力。研究结果可为LIPI-4在LM穿越血脑屏障时的作用机制提供研究基础。

食源性单增李斯特菌毒力岛基因检测与致病性

为了解食源性单增李斯特菌分离株的毒力岛1(LIPI-1)和毒力岛2(LIPI-2)的基因及致病性.利用PCR方法对8株分离株LIPI-1和LIPI-2进行基因检测,小鼠腹腔接种分离株菌悬液5×10^7CFU/只,进行致病性的初步试验.结果显示,LIPI-1的6个毒力基因除actA基因检出率为50.0%外,hly、prfA、plcA、plcB、mpl的检出率为100.0%;LIPI-2中inlA、inlB、inlC基因检出率为100.0%,inlD和inlE基因检出率分别为87.5%和75.0%,inlF和inlG毒力因子基因的检出率较低,分别为50.0%和37.5%.小鼠致病性试验显示,8株分离株均能致死小鼠,致死率在50.0%~100.0%.其中,LM5567和LM5570在5d内全部死亡,致死率为100.0%,表明这2株菌对小鼠有强致病力.说明LIPI-1基因检出率高于LIPI-2的基因检出率;菌株的致病性与毒力岛基因的携带率无明显相关,但分离株对小鼠均有致病性,提示食品安全不容忽视.本研究为食源性单增李斯特菌毒力岛基因携带率与致病力的关系提供铺垫.

食源性单增李斯特菌的分离鉴定及药物敏感试验

为了了解常规送检食物中单增李斯特菌的污染现况和分离株的药物敏感性,对2014年新疆生产建设兵团8个师常规送检的727份食品应用国标法进行细菌分离鉴定,采用Kirby-Bauer(K-B)纸片扩散法进行药物敏感试验。结果显示,从727份食品样品中分离出24株细菌,经革兰染色,培养特性和生化特性鉴定为单增李斯特菌。食品单增李斯特菌总检出率为3.3%,其中调理肉制品检出率最高,达17.77%,其次是冷冻鱼糜制品,检出率为4.95%。药敏试验表明, 24株单增李斯特菌对青霉素和环丙沙星耐药;大部分菌株对亚胺培南、强力霉素、万古霉素和庆大霉素敏感。表明送检食品不同程度受到单增李斯特菌的污染,食源性分离菌株出现多重耐药现象,提示食品安全不容忽视。

食源性单增李斯特菌检测方法研究进展

由单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)引起的疾病称为李斯特菌病,是主要的食源性疾病,致死率高达30%。单增李斯特菌存在于大多数食物中,其繁殖和生存能力强大。因此,有必要对食品进行微生物检测,以防止食品污染和食源性疾病的暴发。食品主要致病菌污染程度低,需要特异性的敏感检测方法,本文综述了用于单增李斯特菌的传统培养检测法、免疫学检测方法、分子生物学检测方法等。分子生物学方法、新型的检测方法与传统检测方法相比,具有省时、灵敏度高、特异好的优点,但也存在成本高、假阳性、不能高通量检测。本文总结了目前可用的和正在发展的检测技术,这些技术可能成为未来几年微生物诊断方法的主要技术。

食源性单增李斯特菌毒力岛基因检测与致病性分析

为更好了解食源性单增李斯特菌分离株的毒力岛1(LIPI-1)和毒力岛2(LIPI-2)基因和致病性,研究使用PCR方法对8株分离株进行基因检测,并通过小鼠腹腔接种分离株菌悬液的方式,进行致病性的初步试验。结果显示,除actA基因检出率为50.0%,LIPI-1其余5个毒力基因检出率为100.0%;LIPI-2中,inlD和inlE检出率分别为87.5%和75%,inlF和inlG检查率分别为50.0%和37.5%,其余为100.0%。致病性试验中,致死率为50.0%-100.0%,表明菌株具有强致病力。研究认为,相较于LIPI-2,LIPI-1基因检查率更高,但致病性与毒力岛基因携带率无明显相关。

豫西地区市售鸭翅中单增李斯特菌毒力基因的检测

为分析来自豫西地区市售鸭翅中单增李斯特菌毒力基因的分布变化,本研究以分离自豫西地区市售鸭翅的11株单增李斯特菌分离株为研究对象,利用PCR方法进行8种毒力基因的检测(inlA、inlB、virR、mprF、dltA、dltB、dltC、dltD基因)。结果显示有3株出现了基因缺失,dltA基因检出率为90.9%(10/11),dltC、mprF基因检出率均为81.8%(9/11),其他基因全部呈阳性。这些毒力基因在单增李斯特菌分离株中分布广泛,对豫西地区市售鸭翅具有潜在的威胁,应引起食品监管部门的高度关注。

食品中单增李斯特菌的存在现状及检测方法研究

随着全球经济的不断发展,食品安全已经成为了全世界人民广泛关注的话题,社会上食物中毒的例子屡见不鲜,中毒来源包括食物本身成分的毒性与食物中携带的某些病菌,其中单核细胞增生性李斯特菌(单增李斯特菌)是最常见的食源性致病菌,该菌很早就引起了国家卫生安全部门的重视,但是由于该菌可广泛存在于多种食物当中,尤其是冷冻食品,俗称"冰箱菌",想要实现病菌的完全控制难度很大,为减少食物中毒的发生,需要对食物中的污染情况与检测方法进行有效的探讨和研究。