毕赤酵母表达食琼脂火色杆菌褐藻胶裂解酶

选择食琼脂火色杆菌(Flammeovirga agarivorans)的潜在褐藻胶裂解酶基因,对其进行序列优化及全基因合成,在毕赤酵母(Pichia pastoris)中进行分泌表达。摇瓶诱导表达产物的蛋白浓度为0.23 mg/mL。表达的褐藻胶裂解酶最适pH值为9.0,最适温度为40℃,在该条件下的酶活力达400.00 U/mL。该酶在40℃及以下时较稳定。底物特异性分析结果显示,该酶对聚甘露糖醛酸及聚古罗糖醛酸均有水解能力,但对聚古罗糖醛酸的水解能力更强。利用该酶水解褐藻酸钠并使用高效液相色谱及质谱方法对产物进行了分析,结果显示,产物主要为聚合度2~4的褐藻寡糖。研究获得的褐藻胶裂解酶可用于褐藻寡糖的酶法规模制备。