蜘蛛毒素对食管癌细胞株作用机制的初步研究

目的探讨雷氏大疣蛛毒素对人食管癌细胞株作用机制。方法采用不同浓度的雷氏大疣蛛毒素处理食管癌细胞株TE-1,经MTT法测定蜘蛛毒素对人食管癌细胞株TE-1增殖的影响,透射电镜观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞增殖周期的分布,免疫组化法与ELISA法检测经蜘蛛毒素作用食管癌细胞株TE-1的VEGF表达情况。结果雷氏大疣蛛毒素能够抑制人食管癌细胞株TE-1的增殖,形态学观察到凋亡现象,流式细胞仪检测显示蜘蛛毒素作用后凋亡峰明显,出现G2/M期阻滞,对VEGF表达有抑制作用。结论雷氏大疣蛛毒素可抑制食管癌细胞株TE-1的增殖和VEGF表达,诱导凋亡,有可能是一种具有抗肿瘤作用的天然药物,其抗肿瘤作用的机制有待进一步研究。

黄芪丹参复方制剂对大鼠心肌线粒体氧自由基损伤的保护作用

目的:观察黄芪丹参复方制剂(芪丹通脉片)对盐酸异丙肾上腺素所致急性心肌缺血的防治作用。方法:①实验于2001-06在解放军第四军医大学病理生理实验室完成。选用32只SD大鼠,雌雄不拘。芪丹通脉片提取浸膏干粉(由黄芪、丹参、当归、桂枝、红花组成,1g干粉相当于生药2.86g),由西京医院提供。②随机将大鼠分为4组:正常对照组、模型组、芪丹通脉片组、硫氮卓酮组,每组8只。正常对照组:予生理盐水3mL/kg,每日灌服2次,连续14d。第15天,皮下三四点注射生理盐水,24h后相同方法、剂量注射生理盐水1次。模型组:用同样方法灌服生理盐水3mL/kg。第15天,皮下三四点注射盐酸异丙肾上腺素(5mg/kg),24h后相同方法、剂量注射盐酸异丙肾上腺素1次。芪丹通脉片组:灌服用蒸馏水配成3mL/kg的芪丹通脉片溶液2g/kg,用与模型组同样方法注射盐酸异丙肾上腺素。硫氮卓酮组:灌服用蒸馏水配成3mL/kg的硫氮卓酮(浙江亚太制药厂出品)5mg/kg,用与模型组同样方法,注射盐酸异丙肾上腺素。③用差速离心法提取心肌线粒体,考马斯亮蓝法测定蛋白含量。按南京建成生物工程研究所提供试剂盒说明测定线粒体中丙二醛含量,超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力。按上海复星-长征医学有限公司所提供肌酸磷酸激酶试剂盒和上海长征-康仁医学有限公司所提供乳酸脱氢酶活性试剂盒提供的方法测定肌酸磷酸激酶和乳酸脱氢酶活性。④苏木精-伊红染色,光镜下观察心肌病理变化,将病理损伤分为4级,0级:肌纤维排列整齐,横纹清晰,胞核明显,无细胞肿胀;Ⅰ级:心肌出现散在的坏死,主要为凝固性坏死,局限于心内膜下;Ⅱ级:心肌坏死灶呈片状分布,灶间无连接,病变累及心壁全层;Ⅲ级:心肌广泛性坏死,灶间相互连接,病变累及心壁全层;Ⅳ级:遍及整个心脏的融合性损伤,包括梗死样的广泛性坏死,偶有急性动脉瘤或附壁血栓。⑤实验数据采用方差分析,组间采用最小显著差数法进行两两比较。病理组织结果进行Ridit检验。结果:大鼠32只均进入结果分析。①在光镜下可以观察到,正常对照组心肌细胞形态正常,无炎细胞浸润;模型组心肌有片状坏死灶;芪丹通脉片组及硫氮卓酮组主要出现散在性点状坏死。②芪丹通脉片组和硫氮卓酮组心肌线粒体丙二醛含量明显低于模型组(P<0.01),超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力明显高于模型组(P<0.01)。模型组心肌线粒体丙二醛含量明显高于正常对照组(P<0.01),超氧化物歧化酶活力明显低于正常对照组(P<0.01)。③芪丹通脉片组和正常对照组心肌组织肌酸激酶、乳酸脱氢酶含量明显高于模型组(P<0.01),血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶水平明显低于模型组(P<0.01)。④芪丹通脉片组与硫氮卓酮组心肌细胞病理损伤级别差异不明显,两组与模型组差异明显(P<0.05)。结论:芪丹通脉片可能是通过降低心肌线粒体中丙二醛含量,增加超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力,减轻氧自由基损伤,以达到保护心肌细胞的目的。

纳洛酮对神经元GluR2表达的影响及缺氧损伤保护作用

目的:研究纳洛酮对缺氧损伤神经元膜表面AMPA(amino-3-hyoroxy-5-methylisoxazole-4-propionicacid,α-氨基-3-羟基-5甲基-4-异口恶唑丙酸)受体在谷氨酸受体第二亚单位(GluR2,glutamic acid receptor 2)表达的影响及其对神经细胞凋亡的保护作用。方法:取体外培养12 d的大鼠海马神经元,建立缺氧再灌注损伤模型,分别采用流式细胞和双重免疫荧光技术定量观察神经元凋亡数量、胞膜表面GluR2含量变化及纳洛酮的调节作用。结果:纳洛酮可上调缺氧损伤后神经元膜GluR2的含量(P<0.05),减少缺氧诱导的神经元凋亡的数量(P<0.01)。结论:纳洛酮通过上调神经元膜表面GluR2含量,减少神经元凋亡,减轻继发性脑损害。

吡格列酮抗实验性小鼠主动脉粥样硬化的作用

目的 观察停高脂喂饲或同时加吡格列酮干预对实验性小鼠主动脉壁脂质沉积及代谢紊乱的影响,探讨药物干预的时机及其血管保护作用的机制。方法 将经高脂喂养14周,血脂、血糖、胰岛素水平升高及主动脉内膜出现明显局灶性脂质沉积的成模型C57BL/6小鼠随机分为吡格列酮干预组(PIO组,予盐酸吡格列酮10 mg·kg-1·d-1灌胃)和动脉粥样硬化组(AS组)。分组后所有小鼠均改予普通饲料继续喂养8 周,前、后共22周。于实验第22周末再次测定血脂、血糖、胰岛素水平。采血同时取主动脉,采用油红“O”整体染色法观察其病理学变化。结果 与8周前相比,AS组血脂、血糖水平仅轻度下降(P>0.05),胰岛素水平无明显下降,主动脉血管处仍可见内膜有明显局灶性红染;PIO组血脂及胰岛素水平显著下降(P<0.05)、血糖轻度下降(P>0.05),主动脉血管分叉处内膜着色明显变淡。PIO组小鼠死亡数明显少于AS组。结论 经吡格列酮干预后,主动脉壁上沉积的脂质消退,吡格列酮这种血管保护的作用机制与其全面改善糖、脂代谢紊乱及胰岛素抵抗作用有关。

庆大霉素毒性机制及抗氧化剂的防治作用

本文探讨GM肾毒性发病机制,并观察SOD、Cs对GM肾毒性的影响。结果表明:GM组第8天后尿蛋白含量、尿渗透压、皮质丙二醛(MDA)含量的改变,与SOD组、Cs组比较有显著性差异(P<0.05)。提示脂质过氧化参与庆大霉素的肾毒性作用,SOD、Cs可以防治庆大霉素的肾毒性作用。

胎盘生长因子恢复急性心肌梗死大鼠心功能及其机制

目的：探讨胎盘生长因子（PIGF）及其受体（VEGFR1）在急性心肌梗死后心功能恢复中的作用。方法：采用结扎Wistar大鼠左冠状动脉前降支的方法建立急性心肌梗死模型。建模型成功后随机将30只Wistar大鼠分为对照组、PIGF组、抗VEGFR1抗体组，于心肌梗死区分别注射生理盐水、PIGF、鼠抗VEGFR1抗体。术后2周观测各组大鼠心功能，然后经股静脉注射2ml 15％氯化钠溶液处死大鼠，制作心脏病理切片评估左心室结构，免疫组织化学法检测冯·维勒布兰德因子（vWF）和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA），分析心肌梗死区域的新生血管，以及TUNEL法检测心肌梗死区心肌细胞凋亡情况。结果：PIGF组大鼠心肌血流动力学指标每搏输出量、收缩压／舒张压、左心室峰压、左心室发展峰压、左心室舒张末压明显优于对照组（均P〈0．01）；PIGF组大鼠左心室直径、心室梗死交界区室壁厚度均小于对照组（均P〈0．01），抗VEGFR1抗体组与对照组的心脏几何学参数基本一致；PIGF组大鼠新生血管和动脉密度均高于对照组（P〈0．01），抗VEGFR1抗体组的动脉密度略低于对照组，差异无统计学意义（P〉0．05）；PIGF组大鼠心肌细胞凋亡率明显低于对照组（P〈0．01）。结论：急性心肌梗死大鼠心肌局部注射PIGF可显著改善心功能恢复并抑制左心室扩张，促进血管再生并降低心肌细胞凋亡。PIGF治疗有望作为急性心肌梗死患者综合治疗中的一个辅助性手段。

马桑内酯致痫大鼠海马结构内SYN和GFAP的表达及其意义

目的:研究马桑内酯所致癫痫持续状态下海马结构内突触体素(SYN)及胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化规律,探讨癫痫的发生机制。方法:成年健康雄性SD大鼠30只,随机分为模型组及对照组,采用马桑内酯(50μg/kg)侧脑室注射法建立急性癫痫动物模型,应用免疫组织化学方法观察癫痫持续状态下SYN和GFAP的表达。结果:①模型组海马结构各区突触体素阳性免疫反应产物的密度较对照组普遍增加,尤以CA3区苔藓纤维层和齿状回分子层内带为甚(P<0.05)。②模型组海马结构内GFAP免疫反应阳性的胶质细胞与对照组相比,其平均光密度、胞体截面积和周长均显著增强或增大(P<0.05),GFAP免疫反应性增强。结论:突触体素表达的增强可能易化了神经递质的装载和释放,与癫痫持续状态的维持和加重相关。活化的星形胶质细胞在癫痫持续状态中可能主要起保护作用。

次硫酸氢钠甲醛对小鼠大脑Caspase-3、NOS-1表达的影响

目的:研究摄入次硫酸氢钠甲醛后小鼠大脑皮层中Caspase-3、NOS-1表达的变化,以探讨次硫酸氢钠甲醛对大脑的影响。方法:健康雄性昆明小鼠,随机分为10d组、30d组,每组再分为对照组和0.4‰、0.8‰、1‰三个剂量实验组。10d后处死10d组小鼠;30d后处死30d组小鼠,取出大脑,采用Zamboni固定液固定,常规冰冻制片,免疫组织化学染色,光镜观察。结果:10d实验组小鼠大脑皮层中Caspase-3、NOS-1阳性表达同对照组比较表达明显增强,不同剂量间未见显著性差异。30d实验组小鼠大脑皮层中Caspase-3阳性表达和对照组相比无显著性变化,不同剂量间未见明显差异;30d实验组小鼠大脑皮层中NOS-1阳性表达同对照组相比明显降低,不同剂量间未见显著性差异。结论:次硫酸氢钠甲醛喂食后,可引起小鼠大脑皮层中Caspase-3、NOS-1表达增高,提示次硫酸氢钠甲醛促使大脑皮层中神经元凋亡增加,长期摄入可使神经元濒临死亡。

Wortmannin对视网膜缺血再灌注后HIF-1α表达的影响

目的:探讨磷酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)途径在大鼠视网膜缺血再灌注后对低氧诱导因子(HIF-1α)表达的影响。方法:将磷酰肌醇-3激酶(PI3K)特异抑制剂Wortmannin(WT)注入大鼠玻璃体内,抑制PI3K活性为A组,玻璃体内注射等量林格液作为B组,空白对照组为C组,采用前房灌注生理盐水升高大鼠眼压到110mm Hg(1 kPa=7.5 mm Hg)持续1 h的方法制作实验性视网膜缺血再灌注损伤模型,于再灌注后0、2、6、8、12、24、48 h取材,行免疫组织化学法染色观察HIF-1α在视网膜细胞的阳性表达;并应用RT-PCR来检测HIF-1αmRNA的表达。结果:视网膜缺血再灌注6、8、12、24、48 h,视网膜神经节细胞层及内核层细胞出现HIF-1α阳性表达且表达逐渐增加,12 h达到高峰,然后逐渐降低,预先玻璃体内注射PI-3K特异抑制剂Wortmannin(WT)的大鼠视网膜HIF-1α表达明显减弱,亦在12 h达到高峰,然后逐渐降低。结论:缺血再灌注后大鼠视网膜HIF-1α的表达是经过PI3K途径来实现,阻断PI3K途径,可以明显减少HIF-1α的表达,但从实验结果来看PI3K途径被阻断后并没有完全阻断HIF-1α的表达,由此猜测HIF-1α的表达可能存在多种途径。

苯丙氨酸解氨酶诱导人白血病HL-60细胞凋亡的初步研究

目的 :研究苯丙氨酸解氨酶(L phenylalanineammonia lyase ,PAL)对白血病HL 60细胞生长的抑制作用 ,探讨其作用机制。方法 :应用MTT比色法观察PAL对HL 60细胞的生长抑制作用 ,应用倒置显微镜和DNA琼脂糖凝胶电泳技术分析细胞凋亡。结果 :PAL与HL 60细胞共育时 ,能明显抑制细胞生长 ,半数抑制浓度 (IC50 )为 3 0 2U/mL ;细胞呈典型的凋亡形态学改变 ,细胞皱缩 ,染色质凝集 ,沿核膜内侧分布 ,可见新月形 ;细胞DNA裂解成 180～ 2 0 0bp及其倍数的片段 ,电泳得到特有的梯形条带 ,凋亡率与PAL剂量和作用时间呈依赖关系。结论 :PAL能抑制HL 60细胞的生长 ,诱导细胞凋亡是其抗肿瘤的作用机制之一。

参麦注射液保护氧化损伤心肌细胞线粒体的机制研究

目的:探究参麦注射液对氧化损伤心肌细胞的保护作用及其对线粒体能量代谢过程的影响。方法:采用叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导构建H9c2心肌细胞氧化损伤模型。分别采用MTT法和化学发光法检测参麦注射液对细胞存活率和ATP水平的影响;采用Clark氧电极检测参麦注射液对细胞有氧呼吸速率的调节作用;采用ELISA法检测丙酮酸及丙酮酸脱氢酶(PDH)的含量及活性;采用蛋白质印迹法检测丙酮酸脱氢酶亚基(PDHA1)含量;采用实时定量RT-PCR检测丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1) mRNA的表达。结果:与氧化损伤模型比较,参麦注射液可有效提高心肌细胞存活率和ATP水平(均P<0.01),提高细胞氧呼吸速率,减少丙酮酸含量,并提高PDH活性(P<0.05或P<0.01)。在分子水平上,参麦注射液可提高PDHA1蛋白表达(P<0.05),并具有降低PDK1 mRNA表达的趋势(P>0.05)。结论:参麦注射液可有效保护氧化损伤心肌细胞,其机制可能与提高PDH活性、减少丙酮酸堆积,从而维持线粒体功能稳定和细胞能量代谢稳定有关。

氨基胍抑制丙酮醛介导的脑微血管内皮细胞缺糖缺氧损伤

目的:研究氨基胍对丙酮醛加重脑微血管内皮细胞(HBMEC)缺糖缺氧损伤的保护作用。方法:在培养的HBMEC上,利用丙酮醛加重缺糖缺氧诱导的损伤,通过MTT检测细胞活力,LDH释放检测细胞死亡,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western-blot检测晚期糖基化终产物的形成,观察氨基胍的作用和机制。结果:丙酮醛呈浓度依赖地诱导细胞损伤,在2 mmol/L时细胞的存活率为56.1%,而丙酮醛合并缺糖缺氧后,细胞的损伤率增加到90.0%。氨基胍(1 mmol/L)能抑制丙酮醛和缺糖缺氧诱导的LDH释放和AnnexinV/PI的形成。进一步研究发现氨基胍能抑制丙酮醛和缺糖缺氧诱导晚期糖基化终产物的形成。结论:氨基胍对丙酮醛加重HBMEC的缺糖缺氧损伤具有保护作用,这可能与其抗糖基化作用有关。

阿比特龙联合恩度对人激素敏感性前列腺癌细胞增殖及VEGF-A和PSA水平的影响

目的探讨阿比特龙联合恩度对前列腺癌LNCaP细胞增殖及培养液上清中血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)及前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)水平的影响。方法将体外培养的LNCaP细胞分为无药物干预的对照组及不同浓度阿比特龙(0.1、1、10和100μmol/L)、恩度(0.1、1、10及100μL/mL)单药和10μmol/L阿比特龙联合10μL/mL恩度组。应用噻唑蓝比色法检测药物对LNCaP细胞的增殖抑制情况,酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测阿比特龙、恩度单药及联合组LNCaP细胞培养液上清中VEGF-A及PSA的水平。结果与对照组比较,作用48 h后10、100μmol/L阿比特龙与10、100μL/mL恩度单药对LNCaP细胞的增殖均具有抑制作用(均P<0.05),呈浓度依赖性;10μmol/L阿比特龙联合10μL/mL恩度组较10μmol/L阿比特龙组及10μL/mL恩度组对LNCaP细胞的增殖抑制作用更强(均P<0.05);与对照组比较,作用48 h后10、100μmol/L阿比特龙与10、100μL/mL恩度单药干预LNCaP细胞后,培养液上清中VEGF-A水平均降低(均P<0.05);与对照组比较,作用48 h后1、10、100μmol/L阿比特龙与10、100μL/mL恩度单药干预LNCaP细胞后,培养液上清中PSA水平均降低(均P<0.05),其抑制效应均呈浓度依赖性。结论阿比特龙及恩度对LNCaP细胞增殖具有抑制作用,呈浓度依赖性,且两药联合对细胞增殖抑制作用更强。阿比特龙及恩度对LNCaP细胞分泌VEGF-A及PSA均具有抑制作用,呈浓度依赖性。

FK866对非小细胞肺癌细胞迁移的影响

目的:探讨低浓度烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)抑制剂FK866对人非小细胞肺癌细胞株(A549细胞)迁移的影响及作用机制。方法:MTT法检测不同浓度FK866对A549细胞增殖的影响;划痕实验检测1.0 nmol/L和10.0 nmol/L FK866对A549细胞迁移的影响;实时定量RT-PCR检测上皮间质转化相关蛋白上皮钙黏素和波形蛋白mRNA的表达量;蛋白质印迹法检测细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)和磷酸化ERK1/2蛋白的表达量。结果:FK866作用时间越长、浓度越高,对A549细胞增殖的抑制作用越明显。FK866作用72 h时的半抑制浓度(IC50)为9.55 nmol/L。以1.0、10.0 nmol/L的FK866预处理细胞48 h,划痕后继续给药48 h,两种浓度的FK866均能抑制A549细胞迁移;如不进行预处理,仅10.0 nmol/L浓度的FK866对划痕愈合有一定的抑制作用;1.0 nmol/L的FK866处理细胞72 h可上调上皮钙黏素和波形蛋白mRNA表达,并激活ERK1/2;以1.0 mmol/L的烟酰胺单核苷酸(NMN)或10.0μmol/L的ERK1/2抑制剂U0126预处理,能够逆转FK866引起的上皮钙黏素和波形蛋白表达上调。结论:低浓度FK866能够通过减少细胞内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和激活ERK1/2,增加上皮钙黏素表达,进而抑制细胞迁移,对肿瘤转移可能有一定的抑制作用;但其同时促进了波形蛋白的表达,不利于肿瘤的治疗。

p38MAPK参与胰蛋白酶诱导的食管上皮细胞炎症

目的 研究p38 MAPK在胰蛋白酶（trypsin）诱导食管黏膜上皮细胞炎症反应中的机制.方法 原代培养食管黏膜上皮细胞,使用胰蛋白酶进行刺激,观察p38 MAPK磷酸化程度;给予p38 MAPK抑制剂SB203580（1、10 μmol/L）进行干预治疗,观察炎症相关指标的变化.结果 胰蛋白酶刺激剂量依赖地增加了p38 MAPK磷酸化,提示胰蛋白酶激活了食管黏膜上皮细胞中的p38MAPK通路;SB203580治疗抑制了胰蛋白酶诱导的炎症因子白介素8（IL-8）、环氧酶2（COX2）、肿瘤坏死因子α（TNFα）的mRNA表达水平,同时抑制了胰蛋白酶诱导的食管上皮细胞中诱导性一氧化氮合酶（iNOS）的蛋白表达和细胞中一氧化氮（NO）的生成.结论 p38 MAPK通过调节IL-8、COX2、TNFα、iNOS等炎症相关因子参与了胰蛋白酶诱导的食管黏膜上皮损伤.

葛根素通过JNK信号通路调控自噬对大鼠创伤性脑损伤后的保护作用

目的初步探讨葛根素治疗对大鼠创伤性脑损伤的自噬影响以及分子机制。方法将75只成年sD大鼠按随机数字表法分为假手术组（S组）、创伤性脑损伤组（TBI组）、创伤性脑损伤＋葛根素治疗组（TBI＋Pue组）、创伤性脑损伤＋JNK选择性拮抗剂组（TBI＋SP组）以及创伤性脑损伤＋JNK激动剂＋葛根素组（TBI＋Pue＋An组）。Feeney法构建大鼠创伤性脑损伤模型。分别于模型制备后1、3、7d进行脑水含量测定以及神经功能缺陷评分。模型制备后第7天通过Westernblot法检测自噬标志蛋白LC3B和Beclin1以及JNK的磷酸化水平。结果与S组比较，其余四组在大鼠创伤模型制备后各个时间点的脑水含量与神经功能缺陷评分均明显升高（P〈0．05）；与TBI组比较，TBI＋Pne组和TBI＋sP组在各个时间点的脑水含量明显降低（P〈0．05），在模型制备后的第3天和第7天神经功能缺陷评分明显降低（P〈0．05）；而与TBI＋Pue组比较，TBI＋Pue＋An组脑水含量在模型制备后各个时间点均增加（P〈0．05），神经功能缺陷评分在模型制备后第3天和第7天均增加（P〈0．05）。与S组比较，在模型制备后第7天TBI组LC3II、Beclinl的表达明显增加（P〈0．05）；与TBI组比较，TBI＋Pue组、TBI＋sP组均明显抑制LC3II以及Beclinl的表达（P〈0．05）；而与TBI＋Pue组比较，TBI＋Pue＋An组LC3II和Beclinl表达均明显增加。与S组比较，TBI组P．JNK1／JNK1明显增加（P〈0．05）；与TBI组比较，TBI＋Pue组、TBI＋sP组的P-JNK1／JNK1明显减少（P〈0．05）；与TBI＋Pue组比较，TBI＋Pue＋An组的P-JNK1／JNK1明显增加（P〈0．05）。结论葛根素可通过抑制自噬发挥对创伤性脑损伤的保护作用，JNK通路可能是葛根素调控自噬的分子学机制。

过表达NDRG1对TGF-β诱导肺癌A549细胞上皮-间质转化的逆转作用

目的 探讨NDRG1对转化生长因子β（TGF-β）诱导的人肺癌A549细胞上皮-间质转化（EMT）的逆转作用及可能机制.方法 转染NDRG1过表达质粒至A549细胞,采用5 μg/L TGF-β1处理细胞,相差显微镜观察细胞形态学变化;Transwell侵袭实验检测A549细胞侵袭能力;Real-time RT-PCR、Western blot分别检测NDRGl mRNA、蛋白的表达,Western blot检测EMT相关标志物钙黏蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）,以及EMT相关信号分子Snail、AKT、Smad的表达.结果 TGF-131可诱导A549细胞向间质样细胞表型转化,上调间质样标志物Vimentin表达和下调上皮样标志物E-cadherin表达,并增强细胞侵袭能力;过表达NDRG1可逆转TGF-131的上述作用;且过表达NDRG1能够抑制AKT的磷酸化,下调EMT转录因子Snail的表达.结论 NDRG1能够逆转TGF-B1对人肺癌A549细胞上皮一间质转化的诱导作用,并降低细胞的侵袭能力,其机制可能与NDRG1抑制AKT/Snail信号有关.

三氧化二砷抑制食管癌细胞侵袭能力的机制研究

目的：观察三氧化二砷（ As2 O3）对食管癌细胞侵袭能力的影响并探讨其分子机制。方法食管癌细胞经As2 O3处理后，MTT比色法检测细胞增殖能力，细胞黏附实验与侵袭实验检测细胞转移能力，Western blot检测转移相关蛋白金属基质蛋白酶（MMP）2、MMP9、E-cadherin及O型受体蛋白酪氨酸磷酸酶（PTPRO）表达水平。结果不同浓度As2O3处理显著抑制EC9706与EC109细胞增殖与侵袭能力，同未加药（0μmol/L）的对照组比较差异均有统计学意义（ P ＜0.01）；As2 O3处理可以减弱MMP2与MMP9的表达水平（ P ＜0.01），增强E-cadherin 与PTPRO的表达水平（ P ＜0.01）。结论As2 O3对食管癌细胞的恶性转移能力有显著的抑制作用，下调MMP2与MMP9的表达、同时上调E-cadherin与PTPRO的表达，可能是其抑制转移的分子机制。

大黄素对人膀胱癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其机制

目的探讨大黄素对人膀胱癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用，并探讨其作用机制。方法建立人膀胱癌细胞株BIU87裸鼠移植瘤模型，并随机分为4组：对照组、大黄素组、Z—VAD—FMK组、大黄素＋Z—VAD—FMK组。观察各组裸鼠移植瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线，4周后处死全部裸鼠，取出肿瘤组织，称瘤质量；HE染色观察肿瘤细胞形态，流式细胞分析仪细胞凋亡，RT-PCR检测各组肿瘤组织中AIF和EndoGmRNA的表达，Western blot检测各组肿瘤组织中AIF和EndoG蛋白的表达。结果大黄素组肿瘤生长速度明显慢于其他3组，大黄素组[（0．41±0．05）g]和大黄素＋Z-VAD—FMK组[（0．69±0．07）g]肿瘤较其他2组[（1．08±0．13、1．04±0．09）g]轻，差异有统计学意义（F=90．56、27．49，P〈0．01），大黄素组与大黄素＋Z—VAD—FMK组相比差异也有统计学意义（t=10．01，P〈0．01）。流式细胞仪检测凋亡显示大黄素组细胞凋亡率[（42．71±2．69）％]明显高于大黄素＋Z-VAD—FMK组[（34．38±1．73）％]（t=6．38，P〈0．01）。RT—PCR和Western blot结果显示，大黄素＋Z—VAD—FMK组中AIF和EndoG的表达水平显著上调，与其他各组比较[（1．65±0．12）vs（1．24±0．08）、（0．51±0．07）、（0．48±0．04）；（2．12±0．16）vs（1．75±0．13）、（0．57±0．06）、（0．59±0．07）；（2．42±0．13）vs（1．73±0．11）、（0．78±0．07）;（0．75±0．08）；（3．13±0．25）vs（2．15±0．18）、（0．85±0．09）、（0．81±0．14）]，差异均有统计学意义（F=303．22，319．32，409．38，258．53，P〈0．01）。结论大黄素能够明显抑制人膀胱癌裸鼠移植瘤的生长，其机制可能部分与大黄素可上调膀胱癌细胞BIU87中AIF和EndoG的表达，通过启动非Caspase依赖途径诱导细胞凋亡有关。

Survivin在冬凌草甲素介导下对人前列腺癌细胞PC-3凋亡的作用

目的观察冬凌草甲素对人雄激素非依赖性前列腺癌细胞株-PC-3细胞的诱导凋亡作用，探讨Survivin在此过程中的作用。方法用不同浓度的冬凌草甲素干预PC-3细胞，MIT试验分析观察其对PC-3细胞活力的影响；通过用流式细胞仪分析PC．3早期凋亡细胞的百分率；用Western印迹检法、实时荧光定量PCR方法检测PC-3细胞Survivin的蛋白和mRNA表达的变化。结果（1）细胞生长抑制力呈一定的时间、剂量依赖性，冬凌草甲素浓度为2．5、5、10、20、40μmol／L时，干预48h后相对应的平均细胞生长抑制率依次为9．2％、25．3％、39．3％、77．2％、92．5％，药物抑制PC-3细胞活力的IC50约为10．29μmol／L；流式细胞仪检测经不同浓度的冬凌草甲素（0，10，20，40μmol／L）干预48h后，PC-3细胞的早期凋亡率分别为4．8％，15．4％，19．5％和27．4％（P〈0．05）。（2）冬凌草甲素以浓度依赖性方式抑制PC-3细胞的Survivin的蛋白和mRNA表达。结论冬凌草甲素能以浓度依赖性方式诱导PC-3细胞凋亡。冬凌草甲素通过影响Survivin的表达来诱导PC-3细胞凋亡。