六君子汤对食管癌细胞株EC9706致血管生成的影响

目的研究六君子汤对食管癌血管生成的影响。方法 MTT法检测六君子汤醇提物对食管癌细胞株EC9706生长抑制作用,收集其500μg/m L质量浓度的EC9706细胞条件培养基用于鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成、人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成的观察。ELISA法检测EC9706细胞和人脐静脉内皮细胞培养基上清中VEGF和IL-6含有量。结果六君子汤醇提物可明显抑制EC9706细胞增殖,具一定剂量依赖性,其IC50值为505.28μg/m L。六君子汤醇提物可减少EC9706细胞条件培养基所致鸡胚绒毛尿囊膜血管生成、人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成。六君子汤醇提物可减少EC9706细胞和内皮细胞IL-6及内皮细胞VEGF分泌。结论六君子汤醇提物可能通过干预EC9706细胞信号通路从而抑制血管生成的效应。

三氧化二砷对人食管癌细胞株EC-1的放射增敏作用

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对食管癌离体肿瘤细胞EC-1的放射增敏作用,并探讨其机制。方法利用多靶单击数学模型拟合放射剂量-细胞存活曲线,观察As2O3对食管癌细胞株EC-1的放射增敏作用。流式细胞法观察As2O3对细胞周期分布及细胞凋亡的影响。结果 As2O3对食管癌细胞株EC-1有明显的放射增敏效应,3μmol/L As2O3作用48 h的放射增敏比为1.285。药物作用后G2/M期细胞比例增加,G0/G1期和S期细胞比例减少;细胞凋亡指数增加,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 As2O3对食管癌细胞株EC-1有明显的放射增敏效应。放射增敏的机制可能与As2O3抑制EC-1细胞的修复能力、使细胞周期阻滞在G2/M期、G0/G1期和S期细胞减少以及凋亡增加有关。

人食管癌间充质干细胞对食管癌细胞株Eca-109侵袭性的影响

目的探讨人食管癌间充质干细胞(hEC-MSCs)对食管癌细胞株Eca-109侵袭性的影响。方法在体外将间质干细胞与食管癌细胞株ECA-109非接触共培养,使用RT-PCR和Western blotting的方法检测间质干细胞对ECA-109细胞株中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和抑癌基因E-cadherin表达的影响。结果间质干细胞可明显上调ECA-109细胞株中的MMP-9表达,显著下调ECA-109细胞株中E-cadherin的表达。结论食管癌间充质干细胞可能参与调节食管癌细胞的侵袭与转移。

miRNA-9在食管癌细胞株中的表达

目的探讨miRNA-9在食管癌细胞株与正常食管上皮细胞的表达。方法采用荧光定量PCR法检测食管癌细胞株及正常食管上皮细胞miRNA-9基因的表达水平。结果 5株食管癌细胞株和正常食管上皮细胞均存在miRNA-9基因表达,食管癌细胞株miRNA-9基因的表达量均高于正常食管上皮细胞(P<0.01)。结论 miRNA-9基因在食管癌细胞株表达明显上调,说明miRNA-9基因与食管癌的发生有关。

热疗对食管癌细胞株EC-1放疗的增敏作用

目的初步探讨热疗对食管癌细胞株EC-1放射增敏作用及其可能机制,为热疗与放疗联合治疗食管癌提供理论依据。方法采用平板克隆形成分析法计算各组细胞存活分数SF,"多靶单击数学模型"拟合细胞存活曲线。流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的变化。结果热疗对食管癌细胞株EC-1放疗有显著的增敏作用,热疗30 min的放射增敏比为1.060。热疗可使细胞阻滞在G2/M期,使G0/G1期、S期细胞比例减少,增加细胞凋亡,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论热疗对食管癌EC-l细胞具有增敏作用,热疗可通过影响食管癌EC-l细胞周期,诱导细胞凋亡,增强放射线对细胞的杀伤作用。

姜黄素对人食管癌细胞株Eca-109增殖抑制和凋亡诱导的实验研究

目的研究姜黄素对人食管癌细胞增殖抑制作用及对细胞周期的影响。方法以四甲基偶氮唑蓝(MTT)试验测定细胞的生长抑制率,以流式细胞仪检测细胞周期分布。结果姜黄素对细胞的生长有明显的抑制作用,且呈浓度依赖性。结论姜黄素可抑制人食管癌细胞增殖,诱导失巢凋亡是其机制之一。

腺病毒介导的COX—2反义RNA对食管癌细胞株生长的影响

目的：验证环氧合酶（COX）－2在食管癌组织是否高度表达；构建表达人COX－2反义RNA的腺病毒载体，研究其对人食管癌细胞生长的抑制作用。方法：用免疫组织化学方法（SP法），检测COX－1、COX－2在38例食管癌癌旁组织和癌组织中表达情况；并将人COX－2的cDNA片段反向构建于腺病毒载体并转染食管癌细胞EC9706，采用生长曲线、用^3H-TdR、^3H-Leucine掺入法及免疫细胞化学的方法，研究其对COX－2表达、及对食管癌细胞生长、DNA复制及蛋白合成的影响。结果：COX－2在食管癌中的阳性表达率为91．7％，主要为癌组织的表达，而在癌旁正常组织无表达或弱表达，而COX－1在食管癌正常组织和癌旁组织均有不同水平的表达。同时，我们构建的重组腺病毒感染肿瘤细胞后，COX－2表达水平与对照组比较明显降低，^3H-TdR和^3H-Leucine掺入量均明显减少，与对照组比较P＜0．001；同时发现食管癌细胞的生长细胞计数随时间递减，对照组生长细胞计数随时间而递增，Ad-LacZ组与空白对照组生长曲线几乎重叠。结论：COX－2可能与食管癌的发生发展有关；抑制COX－2的表达可能是治疗食管癌的一种新途径。

美登木对ECa109食管癌细胞株超微结构的影响

美登木是一种由我国云南植物中提出的抗癌药物。已证实美登木的果实、根和茎的酒精粗提物对KB细胞有明显抑制作用;对小鼠S_(180)、L_(1210)、P_(388)、路易斯肺癌及大鼠瓦克256癌均有效^([1])。我室曾用云南热带植物研究所提供的美登木甲醇部位提取物与美登木茎的中性部位提取物研究了它们对食管癌细胞的作用^([2]),但此药对肿瘤细胞超微结构的改变尚未见于文献报道。现将美登木所致ECa 109食管癌细胞株超微结构变化报道如下。材料和方法细胞及药物剂量食管癌细胞为我室培养的ECa 109细胞株^([3])。培养基成分为80%199培养液、20%小牛血清和青霉素100单位/毫升与链霉素100微克/毫升。

蒿甲醚对食管癌细胞株ECA-109细胞增殖的影响

食管癌是一种常见的消化道肿瘤,主要以手术和化疗为主,但复发率高.研究发现,青蒿素的衍生物蒿甲醚(artemether)能够抑制癌细胞增殖.本研究以食管癌细胞株ECA-109为研究对象,以二甲基亚砜(DMSO)为对照组,通过CCK-8方法检测蒿甲醚在不同作用浓度(0.1μM、1μM、10μM、100μM)以及不同时间梯度(2 h、4 h、6 h、24 h)对ECA-109细胞增殖的作用,使用酶标仪检测细胞OD值,通过GraphPad Prism软件进行数据分析.实验结果表明,蒿甲醚在100μM浓度时处理食管癌细胞株ECA-1092 h以及4 h后对癌细胞增殖有显著抑制作用(P<0.05);且药物处理4h后对癌细胞增殖抑制作用效果最好.本研究通过探索蒿甲醚对食管癌细胞株ECA-109增殖的抑制作用,为该疾病在临床上的治疗提供理论依据.

人食管癌细胞株与正常食管上皮细胞电镜观察的比较

食管癌是我国常见的恶性肿瘤。我国太行山地区食管癌的发病率仅次于伊朗,是世界两个食管癌高发区之一(anonymous author)^([1]),关于食管癌的超微结构研究的文献报道甚少(河南医学院等^([2]),Bey等^([3])。现将我院在太行山南麓林县培养成株的食管癌细胞(中国医学科学院肿瘤防治研究所细胞生物室^([4])),与培养的正常食管上皮细胞超微结构比较观察,报道如下:材料与方法细胞:癌细胞是采自我院培养的第14代到132代ECa 109食管癌上皮细胞株(中国医学科学院肿瘤防治研究所细胞生物室^([4])),正常人食管上皮细胞是采自食管癌手术标本远端粘膜上皮的原代培养。

小干扰RNA对食管癌细胞株CXCR4的基因表达和侵袭力的影响

近年来，趋化因子受体在肿瘤转移中的作用得到广泛关注，基质细胞衍生因子-1（SDF-1）与其特异性受体趋化因子受体4（CXCR4）构成的生物学轴激活的特殊信号传导途径，对癌细胞在转移好发部位种植、存活和增殖起关键的作用。因此，CXCR4可能是人类肿瘤治疗的一个潜在的靶位。RNA干扰（RNAi）是近几年基因表达调控领域的重大发现。

自杀基因联合放射对食管癌细胞株的实验研究

目的自杀基因具有能将无细胞毒性的前体药物转化为有细胞毒性作用的药物而使细胞死亡,通过观察大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶/氟胞嘧啶(CD/5-FC)自杀基因系统对食管癌EC109细胞杀伤效应及与放射联合应用对食管癌肿瘤细胞协同杀伤效应。方法采用PCR方法从大肠杆菌基因组DNA中扩增出CD基因;构建重组真核载体pcDNA3.1-CD;用脂质体转染法转染EC109细胞;观察CD/5-FC体系对EC109细胞的杀伤效应和旁观者效应及对放射的增敏效应。结果RT-PCR分析结果表明CD基因已转入EC109细胞并表达。离体实验证实5-FC对转CD基因后的食管癌细胞株有明显的细胞毒作用,含5%的转基因食管癌细胞加入5-FC后的细胞存活比率为41.8%±14.2%,低于对照组的94.6%±4.3%结果(t=3.14,P<0.05);加入10%的转基因细胞的存活比率为37.8%±4.4%,低于对照组的95.6%±5.4%结果(t=9.75,P<0.01)。CD/5-FC体系对肿瘤细胞放射增敏效果明显,加前药5-FC及放射组细胞存活曲线低于单纯加前药5-FC对照组或单纯放射对照组,重复测量数据方差分析结果显示F=11.50,P<0.01;治疗组分别与5-FC对照组及单纯放射对照组相比F值分别为4.11、10.53,P值分别<0.05、0.01。结论CD/5-FC体系的旁观者效应和放射增敏效果明显。

miR-9前体分子抑制食管癌细胞株TE6中NF-κB1的研究

目的:探讨micro RNA-9(miR-9)前体分子对食管癌细胞株TE6中NF-κB1表达的影响。方法:RT-PCR分析miR-9前体分子对食管癌细胞株TE6中NF-κB1mRNA表达,Western blot印迹法观察miR-9前体分子对食管癌细胞株TE6中NF-κB1蛋白表达。结果:食管癌细胞TE6的NF-κB1基因、蛋白高表达,转染阴性对照前体分子不能抑制NF-kB1基因及蛋白的表达,而转染miR-9前体分子可显著抑制NF-κB1的基因和蛋白表达,抑制率分别为73.21%,87.63%。结论:miR-9前体分子可显著抑制食管癌细胞株TE6中NF-κB1的表达,为食管癌的临床防治提供了新思路。

E2F1对食管癌细胞株ECA109生物学功能的影响及机制

目的探讨E2F1对食管癌细胞株生物学功能的影响及其调控机制。方法食管癌细胞株ECA109分为ECA109阴性对照组(对照组)、ECA109空载体组(空载体组)和ECA109-E2F1过表达组(过表达组)。对照组仅行电转染不加入质粒载体,空载体组电转染不携带E2F1基因的质粒载体,过表达组电转染E2F1过表达质粒载体。质粒转染48h后,3组采用荧光倒置显微镜观察绿色荧光的表达情况,采用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况,采用PCR检测转录因子E2F1、KB抑制蛋白激酶(I kappa B kinase,IKK)、IKKβ、核转录因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)和survivin mRNA表达情况,采用Western blot法检测E2F1、IKKα、IKKβ、NF-κB、survivin蛋白表达情况。结果过表达组绿色荧光蛋白表现为针尖状,呈强阳性表达,空载体组绿色荧光蛋白表达呈阳性,对照组未见绿色荧光蛋白表达;转染48h后,过表达组G1期细胞比例与空载体组和对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);过表达组G2期细胞比例[(9.30±4.45)%]和早期凋亡率[(16.50±3.21)%]明显低于空载体组[(18.16±1.25)%、(31.70±5.56)%]和对照组[(17.60±4.42)%、(31.46±2.73)%](P<0.05),S期细胞比例[(35.66±2.99)%]明显高于空载体组[(28.86±1.80)%]和对照组[(29.83±1.84)%](P<0.05);空载体组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);转染48h后,过表达组E2F1mRNA(1.79±0.18)和蛋白(0.535±0.003)、IKKβmRNA(0.20±0.06)和蛋白(0.394±0.044)、NF-κB mRNA(4.64±0.55)和蛋白(0.043±0.001)、survivin mRNA(2.98±0.20)和蛋白(0.039±0.001)表达水平明显高于对照组[E2F1 mRNA和蛋白(1.00±0.00、0.217±0.009)、IKKβmRNA和蛋白(1.00±0.00、0.217±0.021)、NF-κB mRNA和蛋白(1.00±0.00、0.014±0.002)、survivin mRNA和蛋白(1.00±0.00、0.027±0.003)]和空载体组[E2F1mRNA和蛋白(0.95±0.03、0.212±0.020)、IKKβmRNA和蛋白(0.99±0.05、0.188±0.018)、NF-κB mRNA和蛋白(0.99±0.03、0.019±0.001)、survivin mRNA和蛋白(0.95±0.03、0.025±0.002)](P<0.05),IKKαmRNA(0.60±0.14)和蛋白(0.614±0.050)表达水平低于对照组(1.00±0.00、0.817±0.055)和空载体组(0.96±0.02、0.733±0.036);对照组与空载体组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 ECA109细胞株中E2F1与survivin存在表达调控关系,E2F1对survivin的表达调控通过激活NF-κB的经典激活通路,导致了survivin的转录激活。

多烯紫杉醇对EC-9706食管癌细胞株Survivin与VEGF mRNA表达的影响

目的探讨多烯紫杉醇对EC-9706食管癌细胞株存活素蛋白(Survivin)与血管内皮细胞生长因子信使RNA(VEGF mRNA)表达的影响。方法将不同浓度(0、0.1、1和10 nmol/L)的多烯紫杉醇分别作用于食管癌EC-9706细胞,依次纳入A、B、C和D组,48h后观察各组食管癌细胞株的早期及晚期凋亡率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞株Survivin和VEGF mRNA的表达情况。结果 B、C、D组食管癌细胞株早期及晚期凋亡率均明显高于A组,C、D组食管癌细胞株早期及晚期凋亡率明显高于B组,D组食管癌细胞株早期及晚期凋亡率明显高于C组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。A、B、C、D组Survivin表达的相对灰度值分别为(0.5123±0.0125)、(0.4823±0.0134)、(0.3295±0.0065)和(0.2163±0.0034),各组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05),随着多烯紫杉醇浓度的升高,食管癌细胞株Survivin表达明显减少。A、B、C、D组VEGF mRNA表达的相对灰度值分别为(1.0683±0.0345)、(0.9423±0.0374)、(0.5235±0.0245)和(0.3763±0.0124),各组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论多烯紫杉醇能有效增加EC-9706食管癌细胞株凋亡,并减少肿瘤相关Survivin与VEGF mRNA表达的减少,且随着多烯紫杉醇浓度的升高,其抑制Survivin与VEGF mRNA表达的程度越明显,值得临床重视。

人食管癌细胞株EC-9706照射后细胞周期的研究

放射生物学研究表明，电离辐射作用后，不同肿瘤细胞的细胞周期变化不同。本研究主要采用流式细胞仪法检测人食管癌细胞株EC-9706接受不同剂量6MV X射线照射后细胞周期的变化情况。

5-氮-2'-脱氧胞苷联合应用顺铂对食管癌细胞株Eca109 bax和bcl-2基因mRNA表达的影响

目的检测5-氮-2'-脱氧胞苷(5Aza-d C)联合应用顺铂(CDDP)对食管癌细胞株Eca109中bax和bcl-2基因m RNA表达的影响。方法培养食管癌细胞株Eca109,通过加入不同浓度的5Aza-d C联合应用CDDP后,提取细胞总RNA,通过RT-PCR检测细胞中bax和bcl-2基因m RNA表达变化。结果低浓度5Aza-d C+高浓度CDDP联合用药组的bcl-2表达量与空白对照组、中浓度5Aza-d C用药组和低浓度CDDP用药组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);低浓度CDDP用药组与高浓度CDDP用药组,中浓度5Aza-d C+高浓度CDDP联合用药组,bcl-2表达量差异有统计学意义(P<0.05)。而bax的表达量各组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论在食管癌细胞株Eca109中,bax和bcl-2的表达量均较高。低浓度5Aza-d C+高浓度CDDP联合用药组,使bcl-2 m RNA表达明显低于空白对照组及单一用药组。高浓度的CDDP及高浓度CDDP联合不同浓度5Aza-d C用药组,与低浓度CDDP用药组相比,可使bcl-2 m RNA表达降低。而药物对bax m RNA的表达无影响。提示食管癌细胞株中联合用药使bcl-2 m RNA表达降低,可能是癌基因bcl-2的高表达与食管癌的发生有关,但细胞株对不同药物及浓度反应有差异。不同用药组bax的表达量无明显差异,提示bax的表达可能与食管癌的发生无直接关系。

新疆天然植物黑加仑对食管癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:观察新疆天然植物黑加仑水提物对食管癌细胞的影响及其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度(10-1、10-2、10-3g/ml)黑加仑水提物作用不同时间(12、24、36h)对人食管癌细胞株Eca109的细胞存活量的影响,以大鼠正常肝细胞(BRL)为正常对照细胞株;用Bradford法测定肿瘤细胞蛋白质合成的变化;采用流式细胞技术(FCM)观察黑加仑作用后肿瘤细胞周期变化及凋亡情况;通过倒置显微镜观察细胞的形态变化。结果:黑加仑水提物10-1g/ml组对人食管癌细胞株Eca109作用24h后,癌细胞的生长和蛋白合成均有明显抑制作用(P<0.05),对正常肝细胞的存活量及蛋白合成均无影响;流式细胞仪检测二倍体峰前出现凋亡峰,细胞凋亡率为49.6%;并且癌细胞呈现典型的凋亡细胞形态。结论:黑加仑水提物可通过诱导细胞凋亡而抑制人食管癌细胞株Eca109细胞的生长。

香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ对食管癌细胞及裸鼠移植瘤生长抑制作用研究

目的研究香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ在体内外对人食管癌细胞增殖作用的影响,以期为该成分用于临床治疗和预防食管癌提供实验依据。方法采用逐步分离法包括柱层析和高效液相色谱等对香加皮抗肿瘤活性成分进行分离、纯化,应用薄层层析和电喷质谱分析进行成分鉴定。采用MTT法分析不同浓度宝藿苷Ⅰ对食管癌细胞株Eca109增殖的抑制作用,应用流式细胞术分析细胞周期变化和凋亡率变化;皮下注射Eca109细胞建立裸鼠移植瘤动物模型,通过肌肉注射给药检测宝藿苷Ⅰ的体内抗肿瘤效果。结果宝藿苷Ⅰ可明显抑制Eca109细胞增殖(P<0.05),并呈浓度及时间依赖性。经宝藿苷Ⅰ作用48h后,随着药物浓度的增加,Eca109G0/G1期细胞明显增加(P<0.05),S期和G2/M期细胞明显减少(P<0.05);经宝藿苷Ⅰ作用后,Eca109细胞的凋亡率随药物作用时间的延长和宝藿苷Ⅰ浓度的增加而明显升高(P<0.01);经宝藿苷Ⅰ(15mg/kg)治疗荷Eca109细胞裸鼠后,肿瘤生长受到明显抑制(P<0.01),生长抑制率达(60.9±0.16)%。结论香加皮单体成分宝藿苷Ⅰ不仅在体外对Eca109细胞增殖具有显著的抑制作用,在体内也有较好的抗食管癌效果。其抗瘤机制可能与阻滞Eca109细胞周期发展和诱导细胞凋亡有关。

脂质体阿霉素热化疗对食管癌细胞的毒性实验研究

目的了解脂质体阿霉素体外不同温度热化疗对食管癌细胞株的细胞毒性作用。方法以体外培养食管癌细胞株EC9706为靶细胞,以游离阿霉素作为阳性对照,未加药物组作为阴性对照,采用WST-1法测定阿霉素和脂质体阿霉素对EC9706的半数抑制浓度(IC50)。再使用此IC50时药物的浓度,在37℃、41℃、43℃下水浴加温1h进行热化疗,同样使用WST-1法测定其细胞杀伤率。结果阿霉素、脂质体阿霉素对食管癌细胞株EC9706的IC50分别为19.064μg/ml、51.359μg/ml(含阿霉素的量为5.707μg/ml)。在37℃条件下,阿霉素与脂质体阿霉素对EC9706细胞株的杀伤率分别为(49.29±2.14)%、(49.39±6.07)%(P>0.05)。在41℃条件下,单纯加热、阿霉素、脂质体阿霉素对EC9706的杀伤率分别为(25.25±2.52)%、(64.80±5.01)%、(76.39±3.42)%,两种药物加热条件下的细胞杀伤作用均较单纯加热组高(P<0.01),且脂质体阿霉素较阿霉素的细胞毒作用提高了11.59%(P<0.01)。在43℃条件下,虽脂质体阿霉素的杀伤作用(79.05±3.09)%较阿霉素(71.89±2.30)%提高了7.16%(P<0.05),但与该药在41℃条件下的杀伤作用比较仅提高2.66%,且差异没有统计学意义(P>0.05)。结论食管癌细胞株EC9706对阿霉素和脂质体阿霉素都很敏感。在热化疗作用上,阿霉素和脂质体阿霉素对食管癌细胞较单纯热疗具有更强的杀伤作用;在37℃条件下,脂质体阿霉素对细胞的杀伤作用与阿霉素相当,在41℃和43℃条件下脂质体阿霉素对细胞的杀伤作用强于阿霉素,但脂质体阿霉素在43℃与41℃对细胞的杀伤作用相当,两种药物联合热疗都具有协同增敏作用。