大蒜素前药对食管癌细胞Eca9706增殖及凋亡基因表达的影响分析

目的研究分析大蒜素前药对食管癌细胞Eca9706的增殖及对凋亡基因表达的影响。方法不同浓度的大蒜素前药分为A1组(10μg/mL)、A2组(20μg/mL)、A3组(40μg/mL)、A4组(生理盐水,0μg/mL)共4组,分别作用于食管癌细胞Eca9706,在培养1、2、3 d后,用MTT比色法(噻唑蓝)检测细胞增殖情况,实时荧光定量(RT-PCR法)检测4组细胞p53基因在mRNA水平表达情况。结果大蒜素前药对食管癌细胞Eca9706的增值抑制的最佳浓度为20μg/mL,最佳抑制时间为2 d,其对食管癌细胞Eca9706基因水平的抑制呈剂量依赖性。结论大蒜素前药可以有效抑制食管癌细胞Eca9706的增值,通过对凋亡相关基因的调控可以控制食管癌细胞增殖,从而达到消除肿瘤细胞的目的。

食管癌细胞Eca9706 DNA聚合酶β基因敲除载体的构建

目的构建食管癌细胞Eca9706 DNA聚合酶β(DNA polβ)基因敲除载体,为DNA polβ基因敲除奠定基础。方法应用体细胞基因敲除技术的方法和原理,根据DNA polβ基因序列,设计并合成2对特异性引物(UP1/UP2和DOWN1/DOWN2),通过PCR扩增获得上游同源序列(UP)和下游同源序列(DOWN),其中上游同源序列长1 268 bp,下游同源序列长2 150 bp,将其插入骨架载体pcDNA3.1,从而构建了DNA polβ基因敲除载体pOUT-polβ,最后用PCR、酶切和测序进行鉴定。结果经过PCR筛选,限制性酶切及DNA测序鉴定,证实上游同源序列(UP)和下游同源序列(DOWN)2个片段插入正确。结论通过本研究所述方法,成功构建了用于食管癌细胞Eca9706 DNA polβ基因敲除载体pOUT-polβ。

白术内酯对IEC-6细胞及食管癌细胞ECA9706增殖能力的影响

目的:观察白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ对IEC-6细胞及食管癌细胞ECA9706增殖能力的影响。方法:细胞种植于96孔板,24h后分别加入白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ200、100、50、25、12.5、6.25μg/m L,放置培养箱48h后,MTT法检测白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ不同剂量对IEC-6细胞及ECA9706细胞增殖能力的影响。结果:白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ随着剂量的增加,呈现从增殖到抑制的作用,其中以白术内酯Ⅰ50μg/m L对IEC-6细胞增殖率效果最佳,白术内酯Ⅱ小剂量对IEC-6细胞作用不明显,但是随着剂量的增加,呈现抑制作用;白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ200、100、50μg/m L均能抑制ECA9706细胞的增殖,其中以白术内酯Ⅱ效果明显。结论:白术内酯Ⅰ可能是白术健脾的有效成分,而白术内酯Ⅱ可能是抑制肿瘤细胞增殖的主要成分之一。

启膈散乙酸乙酯提取物对食管癌Eca9706细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨启膈散乙酸乙酯提取物对食管癌Eca9706细胞增殖和凋亡的影响。方法按沙参∶丹参∶茯苓∶川贝母(去心)∶郁金∶砂仁壳∶杵头糠=6∶6∶2∶3∶1∶1∶1的比例配制启膈散,每克药物配10 ml的比例加入95%乙醇溶液,用旋转蒸发仪浓缩药液,浓缩液与乙酸乙酯按体积比2∶1进行萃取,获取启膈散乙酸乙酯提取物。Eca9706细胞与浓度分别为12.5、25.0、50.0、100.0、200.0μg/ml的启膈散提取物共培养,MTT法检测启膈散提取物对Eca9706细胞的抑制率。Eca9706细胞与35%抑制浓度(IC35)、50%抑制浓度(IC50)和70%抑制浓度(IC70)的启膈散提取物共培养,采用流式细胞仪检测启膈散提物对Eca9706细胞的凋亡率。结果不同浓度启膈散提取物对Eca9706细胞的抑制率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。启膈散提取物对Eca9706细胞的抑制率与启膈散提取物浓度拟合曲线方程为Y=-1.835×10^(-5)X2+0.006X+0.185,R2=0.996,概率法计算IC35为22.8μg/ml,IC50为81.8μg/ml,IC70为162.2μg/ml。显微镜下观察,随着启膈散提取物浓度的增加,细胞变圆、变小,贴壁细胞数目逐渐减少,细胞间隙增大,细胞碎片增多。IC35、IC50和IC70启膈散提取物对Eca9706细胞的凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.001)。激光共聚焦显微镜下显示,启膈散提取物作用于Eca9706细胞后,部分细胞膜呈绿色,提示早期凋亡;部分细胞膜呈绿色,且细胞核呈红色,细胞体积变小、变圆,形成凋亡小体,提示晚期凋亡细胞。结论启膈散乙酸乙酯提取物可抑制食管癌Eca9706细胞增殖,诱导细胞凋亡。

番茄红素干预食管癌细胞系Eca9706的实验研究

目的 :研究番茄红素体外对食管癌细胞 Eca970 6的作用及可能机制。方法 :番茄红素 1 0 - 3mol/L、1 0 - 4mol/L、1 0 - 5mol/L、1 0 - 6 mol/L、1 0 - 7mol/L 5个浓度组干预食管癌细胞2 4 h,观察细胞存活量及蛋白含量 ,并用免疫组织化学的方法观察 bcl- 2蛋白在干预前后的表达。结果 :番茄红素 1 0 - 3mol/L时 ,有促进肿瘤生长趋势 ,1 0 - 4mol/L、1 0 - 5mol/L、1 0 - 6 mol/L有抑制细胞肿瘤生长作用 ,而且 1 0 - 4mol/L效果最好 ,1 0 - 7mol/L对抑制肿瘤生长效果不明显 ,仅有轻度抑制作用 ( P>0 .0 5 )。而蛋白含量仅有 1 0 - 6 mol/L、1 0 - 7mol/L有轻度抑制作用但无统计学意义 ( P>0 .0 5 )。免疫组织化学结果显示 ,bcl- 2表达于此细胞系。干预后未见bcl- 2表达。结论 :番茄红素对食管癌细胞系 ( Eca970 6)有抑制生长作用 ,有剂量反应关系 ,此作用与抑制 bcl- 2蛋白表达有关。

奥曲肽对食管癌细胞株Eca9706增殖的影响

目的 研究奥曲肽对食管癌细胞株Eca970 6增殖的影响。方法 将不同浓度的奥曲肽加入食管癌细胞 ,用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法测定细胞生长抑制效应 ,3 H -胸腺嘧啶核苷 (3 H -TdR)掺入实验测定对DNA合成的影响 ,显微镜下观察细胞形态变化 ,流式细胞仪 (FCM )检测细胞周期。结果 奥曲肽对Eca970 6细胞的生长及DNA合成均有抑制作用 ,显微镜下可见明显的细胞病变 ,细胞变圆、变小、脱落 ,FCM显示奥曲肽作用后 ,G0 /G1期细胞增多 ,S期、G2 /M期细胞减少。结论 奥曲肽能明显抑制食管癌细胞株Eca970 6的DNA合成 ,并能形成G0 /G1期阻滞 ,使细胞存活率下降 ,表明奥曲肽显著抑制Eca970 6的增殖。

miR-216b-5p靶向ATG5介导自噬逆转食管癌Eca109细胞的顺铂耐药性

目的:探讨miR-216b-5p对食管癌Eca109细胞顺铂(DDP)耐药性的影响及其作用机制。方法:采用qPCR法检测miR-216b-5p在食管癌细胞TE-1、KYSE-150、Eca109和耐药细胞Eca109/DDP中的表达水平。利用脂质体转染技术分别将miR-216b-5p mimic及mimic NC、自噬相关蛋白5(ATG5)过表达质粒转染到Eca109/DDP细胞中,用CCK-8、EdU法和FCM分别检测转染后细胞的增殖和凋亡;mRFP-eGFP-LC3双荧光标记实验检测mRFP-eGFP-LC3慢病毒感染后各组细胞自噬发生情况,WB法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin 1和P62表达。用荧光素酶报告基因实验验证miR-216b-5p与ATG5的靶向关系,WB法检测ATG5的表达。建立裸鼠Eca109/DDP细胞移植瘤模型,观察miR-216b-5p过表达对移植瘤生长的影响。结果:miR-216b-5p在TE-1、KYSE-150、Eca109和Eca109/DDP细胞中均呈低表达(均P<0.05)。过表达miR-216b-5p可显著抑制Eca109/DDP细胞的增殖并诱导凋亡(均P<0.05),减少细胞中自噬小体数量(P<0.05),下调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin 1蛋白水平、上调P62蛋白水平(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-216b-5p靶向并负调控ATG5的表达(P<0.05),过表达ATG5可使miR-216b-5p mimic对Eca109/DDP细胞增殖、自噬的抑制作用和凋亡的诱导作用明显减弱(均P<0.05),自噬相关蛋白P62表达降低、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin 1表达升高(均P<0.05)。荷瘤实验结果表明,miR-216b-5p过表达可显著抑制裸鼠移植瘤的生长(P<0.05)。结论:miR-216b-5p过表达可逆转食管癌Eca109/DDP细胞对DDP的耐药性,其机制可能与靶向负调控ATG5表达并影响细胞自噬有关。

白藜芦醇通过铁死亡途径逆转食管癌细胞Eca109/DDP化疗耐药

背景白藜芦醇不仅具有抗肿瘤作用,其还能增强多种化疗药物的化疗敏感性,但其对食管癌耐药细胞的顺铂敏感性的作用尚不清楚.目的探讨白藜芦醇逆转食管癌细胞Eca109/DDP的耐药效应并从铁死亡的角度分析其潜在的作用机制.方法采用MTT法确定白藜芦醇和顺铂的最佳作用时间和浓度;检测细胞增殖、细胞内丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)及铁离子的水平;Western blot检测铁死亡相关调控因子酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acyl coenzyme A synthetase long chain family member 4,ACSL4)、铁蛋白重链(ferritin heavy chain,FTH)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)和肿瘤蛋白53(tumor protein 53,P53)的蛋白表达情况.结果MTT检测结果显示,相较于单用顺铂,联用白藜芦醇对Eca109/DDP细胞的生长抑制作用较为显著(P<0.05).此外,白藜芦醇和顺铂联用可显著降低Eca109/DDP细胞克隆形成数(P<0.05),增加细胞内铁离子、MDA和ROS水平(P<0.05),降低GSH水平(P<0.05).铁死亡抑制剂(ferrostatin-1,Fer-1)和铁离子螯合剂(deferoxamine,DFO)可部分逆转白藜芦醇对细胞增殖的抑制作用(P<0.05).Western blot的结果显示相较于其他组,白藜芦醇和顺铂联用组的FTH和GPX4的蛋白表达显著降低(P<0.05),而ACSL4和P53的蛋白表达显著增加(P<0.05).结论白藜芦醇可通过铁死亡抑制Eca109/DDP细胞的增殖并逆转顺铂耐药.

敲除DNA聚合酶β基因的人食管癌Eca9706细胞系的建立及其细胞生物学特性分析

目的：建立敲除DNA聚合酶β（ DNA polβ）基因的人食管癌Eca 9706细胞株，观察基因敲除细胞生物学行为的变化。方法：采用同源重组基因敲除方法，首先构建食管癌Eca9706细胞DNA polβ基因敲除载体，并将其导入Eca9706细胞，构建DNA polβ基因敲除细胞株。 PCR、RT-PCR、Western blot法检测DNA polβ基因敲除区段DNA存在及表达情况。流式细胞术和MTT法检测基因敲除细胞的细胞周期和生长速度。结果：筛选得到具有neo抗性的DNA polβ基因敲除Eca9706细胞，其基因组中DNA polβ基因区段已被敲除；RT-PCR和Western blot 检测不到DNA polβmRNA和蛋白表达。敲除DNA polβ基因的细胞生长速度缓慢，G2～M期细胞增多，S期细胞减少（ t＝3．882、3.869，P均＜0．05）。结论：成功构建了食管癌Eca9706 DNA polβ基因敲除细胞模型。

食管癌Eca9706细胞中KRT19基因的甲基化及表达

背景与目的:KRT19基因位于17q21.2,编码CK19蛋白。KRT19基因启动子的甲基化在肾癌、神经母细胞瘤中已有报道,而在食管癌中鲜见相关报道。本文研究甲基转移酶抑制剂5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对食管癌Eca9706细胞株生长活性的影响,并探讨5-Aza-CdR对食管癌Eca9706细胞株KRT19基因甲基化及其表达的影响。方法:用MTT比色法检测不同浓度5-Aza-CdR处理前后Eca9706细胞的生长活性;用结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法(combined bi sulfite restriction analysis,C0BRA)检测应用5-Aza-CdR后与未用药对照组细胞的的KRT19基因甲基化状态;用Western blot法检测应用5-Aza-CdR后与未用药对照组细胞的KRT19基因蛋白的表达情况。结果:5-Aza-CdR对食管癌Eca9706细胞系的增殖有抑制作用,且呈时间、浓度依赖性;食管癌Eca9706细胞株存在KRT19基因启动子区的甲基化;对照组无KRT19蛋白的表达,应用5-Aza-CdR后可以恢复其蛋白表达。结论:5-Aza-CdR抑制食管癌Eca9706细胞的增殖;5-Aza-CdR可以逆转KRT19基因启动子区的甲基化,恢复其蛋白表达,KRT19基因启动子区的甲基化可能是其失表达的重要机制。这为食管癌诊疗提供了一个新的靶点。

健脾和胃法对食管癌细胞株EC9706移植瘤生长的抑制作用

目的:通过观察健脾和胃法及其代表方六君子汤对裸鼠移植瘤的生长和组织中STAT3通路相关因子和蛋白表达的影响,探讨其治疗食管癌的分子机制。方法:用EC9706细胞皮下注射裸鼠制备移植瘤模型,实验分为:正常空白组(C组)、模型组(M组)、六君子汤组(L组)、抑制剂组(S组)、六君子汤加抑制剂组(L+S组),C、M组为空白对照组,灌服生理盐水和腹腔注射生理盐水;L组灌服六君子汤和腹腔注射生理盐水;S组灌服生理盐水和腹腔注射Stattic工作液;L+S组灌服六君子汤水煎液和腹腔注射Stattic工作液。4周后摘除眼球取血和移植瘤,ELISA检测血清中IL-6、VEGF含量;免疫组化检测移植瘤组织中CD34和VEGF表达;Western blot检测移植瘤组织细胞中JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结果:与模型组比较,六君子汤组肿瘤体积较小(P<0.05);各组移植瘤重量及组织中CD34表达均下降(P<0.05);血清中抑制剂组IL-6含量明显降低(P<0.05),其它各组没有明显差异;仅六君子汤组和抑制剂组中JAK2和STAT3表达下降(P<0.05),抑制剂组中p-STAT3明显降低(P<0.05),其它各组无明显差异。与抑制剂组比较,六君子汤组中CD34表达略高于抑制剂组(P<0.05),其它各组无明显差异;STAT3蛋白表达中六君子汤组表达降低(P<0.05),而联合抑制剂组则明显升高(P<0.05);p-STAT3表达中,六君子汤组和及其联合制剂组均明显升高(P<0.05)。与六君子汤组比较,除STAT3表达在联合抑制剂组表达有所增高(P<0.05)外,其它各组无明显差异。结论:健脾和胃法及其代表六君子汤可以抑制食管癌EC9706细胞裸鼠移植瘤的生长,可能与下调移植瘤中CD34、JAK2、STAT3的表达有关。

通幽汤及拆方对食管癌EC9706细胞PI3K/AKT信号通路影响的研究

目的:揭示通幽汤对食管癌抑制作用的细胞内分子机制,确定从功效分类的有效药物及瘀血内结证的分子本质。方法:体外培养食管鳞癌EC9706细胞,通幽汤及活血行气、滋阴养血拆方分别作用于细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化;以MTT法检测细胞抑制率,确定最佳药物浓度和作用时间;western blot法观察PI3K/AKT信号通路各蛋白表达变化情况。结果:通幽汤及活血行气拆方可显著抑制EC9706细胞增殖,48h作用最强,通幽汤全方IC50=1523μg.mL-1,活血行气拆方IC50=1001μg.mL-1;可抑制PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达,作用强弱依次为:活血行气拆方>通幽汤全方>滋阴养血拆方。结论:通幽汤抑制食管癌细胞增殖主要为活血行气类药物,根据"以方测证"理论,瘀血内结证与PI3K/AKT信号通路表达增强有关。

藤梨根提取物与奥沙利铂在诱导人食管癌细胞Ec9706细胞凋亡中的协同作用

目的:观察藤梨根提取物与第三代铂类奥沙利铂(L-OHP)对人食管癌Ec9706细胞株增殖的影响。方法:分别应用藤梨根正丁醇提取物与L-OHP单独应用以及联合应用于人食管癌Ec9706细胞株,并应用MTT法检测食管癌Ec9706细胞的抑制率,并且应用显微镜在镜下观察食管癌细胞株的形态变化;并且对细胞的凋亡率和细胞周期使用流式技术进行检测,且对食管癌细胞Ec9706株应用免疫细胞化学技术检测中细胞株内Bcl-2和Survivin蛋白的表达水平。结果:藤梨根提取物单用、奥沙利铂单用、以及联合应用均可对食管癌细胞Ec9706的增殖起到抑制作用。通过显微镜下观察食管癌细胞株发现Ec9706细胞的形态发生了改变,并且凋亡比率也显著增加;且藤梨根提取物与L-OHP连用后能起到协同增效的作用。而应用藤梨根提取物后食管癌细胞Ec9706中Bcl-2和Survivin蛋白的表达水平均受到了抑制。连用L-OHP后两种蛋白的阳性率表达均进一步降低。结论:藤梨根正丁醇提取物能显著抑制人食管癌细胞Ec9706细胞的增殖并且与L-OHP联用可有协同增效的作用,抑制作用明显增强,可能机制与Bcl-2和Survivin蛋白的下调有关。

戊地昔布诱导人食管癌Eca109细胞凋亡的机制研究

目的探讨特异选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂戊地昔布诱导人食管癌Eca109细胞凋亡及其作用机制。方法流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布；电子显微镜进一步检测细胞凋亡；采用乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒测定Eca109细胞的LDH含量；流式细胞术检测p-p38MAPK及凋亡基因Fas和FasL蛋白的表达。结果戊地昔布（25—400μmol·L^-1）可诱导人食管癌Eca109细胞发生凋亡，凋亡率由（2．95±0．83）％增力口到（48．46±0．73）％；50—400μmol·L^-1时增殖指数和S期的细胞比例则明显降低，G0／G1期的细胞比例增加；同时，流式细胞术显示，25μmol·L^-1戊地昔布即可上调人食管癌Eca109细胞p-p38MAPK蛋白的表达，并随剂量的增加而增强；50—400μmol·L^-1的戊地昔布可上调Eca109细胞Fas及FasL的表达。结论戊地昔布可诱导人Eca109细胞凋亡，其诱导凋亡的机制可能部分是通过激活p-p38MAPK／Fas、FasL途径实现的。

CHFR基因CpG岛甲基化对食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究CHFR基因启动子甲基化状态与食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的关系。方法:分别用不同浓度(2、5、10μmol/L)5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理Eca109细胞,未经药物处理的细胞为对照组。甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测CHRF基因CpG岛的甲基化状态,RT-PCR检测CHFR mRNA的表达情况,MTT法及流式细胞术检测不同浓度5-Aza-CdR处理对Eca109细胞增殖及凋亡的影响。结果:对照组Eca109细胞CHFR CpG岛处于高甲基化状态,5-Aza-CdR处理后CHFR CpG岛可发生不同程度的剂量依赖性的去甲基化。对照组Eca109细胞无CHFR mRNA表达,5-Aza-CdR处理组(2、5、10μmol/L)CHFR mRNA相对表达量显著增加(0.174±0.010、0.221±0.013、0.356±0.014)。不同浓度5-Aza-CdR处理后,Eca109细胞增殖受到抑制[作用72 h时的抑制率分别为(30.87±0.74)%、(44.60±0.79)%、(56.67±0.35)%],细胞凋亡显著增加[(7.46±1.46)%、(16.27±1.61)%、(25.29±2.25)%vs(1.83±0.41)%,P<0.01]。结论:食管癌Eca109细胞经5-Aza-CdR处理后,CHFR基因CpG岛发生部分去甲基化,出现CHFRmRNA表达,并抑制Eca109细胞增殖和促进细胞凋亡。

六君子汤对食管癌细胞株EC9706致血管生成的影响

目的研究六君子汤对食管癌血管生成的影响。方法 MTT法检测六君子汤醇提物对食管癌细胞株EC9706生长抑制作用,收集其500μg/m L质量浓度的EC9706细胞条件培养基用于鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成、人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成的观察。ELISA法检测EC9706细胞和人脐静脉内皮细胞培养基上清中VEGF和IL-6含有量。结果六君子汤醇提物可明显抑制EC9706细胞增殖,具一定剂量依赖性,其IC50值为505.28μg/m L。六君子汤醇提物可减少EC9706细胞条件培养基所致鸡胚绒毛尿囊膜血管生成、人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成。六君子汤醇提物可减少EC9706细胞和内皮细胞IL-6及内皮细胞VEGF分泌。结论六君子汤醇提物可能通过干预EC9706细胞信号通路从而抑制血管生成的效应。

启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤对人食管癌EC9706细胞Caspase-3介导的细胞凋亡信号转导的影响

目的:研究启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤对人食管癌EC9706细胞增殖影响,并从Caspase-3介导的细胞凋亡信号转导通路探讨三方作用机制。方法:体外培养食管鳞癌细胞株EC9706细胞,分别加入启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤提取液培养处理细胞,通过MTT染色观察细胞增殖变化,通过Western blot法检测Caspase-3介导的细胞凋亡信号转导通路蛋白表达。结果:启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤的IC50值分别是1462、1232、2875μg/m L,均可促进Caspase-3蛋白表达而诱导细胞凋亡,而Cyt.C蛋白表达较弱;启膈散和沙参麦冬汤对FADD、Fas、TNFR1和DR5蛋白表达有不同程度地影响。结论:三方可通过激活Caspase-3诱导细胞凋亡,其中启膈散主要通过非依赖FADD死亡受体途径,沙参麦冬汤主要通过依赖FADD死亡受体途径,通幽汤可能通过其他凋亡蛋白参与的上游信号途径而激活Caspase-3致细胞凋亡。

大蒜素对人食管癌EC9706细胞凋亡的诱导作用

目的:研究大蒜素对人食管癌EC9706细胞凋亡的诱导作用。方法:0、18g/mL大蒜素处理人食管癌EC9706细胞,应用细胞计数、流式细胞仪、Hoechst33258染色、HE染色和电镜观察经大蒜素诱导处理后EC9706细胞的凋亡情况。结果:与对照组比较,经18μg/mL大蒜素诱导处理7d后,EC9706细胞的增殖活动受到明显抑制,细胞生长抑制率达75.89%(P<0.05);细胞周期检测出现亚二倍体(亚G1期)细胞峰值,细胞凋亡率达23.8%(P<0.05),并发生G2/M期阻滞;经Hoechst33258染色出现细胞核浓染及致密的固缩形态和颗粒状荧光;光镜和电镜观察结果均显示,大蒜素处理组细胞体积缩小,细胞核固缩,出现染色质凝聚、边集化等显著的凋亡特征。结论:大蒜素对人食管癌EC9706细胞具有凋亡诱导作用。

顺铂增强食管癌相关基因2蛋白对人食管癌EC9706细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的:探讨食管癌相关基因2(esophageal cancer-related gene 2,ECRG2)蛋白联合顺铂(cisplatin,DDP)化疗对人食管癌EC9706细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT法分别检测单用ECRG2蛋白和ECRG2蛋白联合顺铂对EC9706细胞增殖的影响;采用Hoechst 33258染色法检测二者对EC9706细胞凋亡的影响;Westernblotting检测二者对EC9706细胞中p53蛋白表达的影响。结果:MTT结果显示,ECRG2蛋白可抑制EC9706细胞增殖,ECRG2蛋白和DDP联用后抑制细胞增殖作用增强,且在一定浓度范围内呈时间、剂量依赖关系。Hoechst33258染色显示,ECRG2蛋白和DDP联合作用24 h后EC9706细胞凋亡数目多于单用ECRG2蛋白。Western blot-ting结果提示ECRG2蛋白和DDP联合用药较单用ECRG2蛋白明显上调p53蛋白的表达。结论:DDP可增强ECRG2蛋白对人食管癌EC9706细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,其增强诱导EC9706细胞凋亡的机制可能与上调p53蛋白的表达有关。

通莲I号方对食管癌Eca109细胞NF-κB信号通路影响的研究

目的从分子水平揭示通莲I号方对食管癌细胞的抑制作用及其治疗噎膈的机制。方法体外培养食管鳞癌Eca109细胞,通莲I号方及3拆方分别作用于细胞,以MTT法检测细胞半数有效量,Western blot法观察NF-κB信号通路各基因表达变化情况。结果通莲I号方及活血行气、清热解毒拆方可显著抑制Eca109细胞增殖,通莲I号全方IC50=412 mg·L-1,清热解毒拆方IC50=718 mg·L-1,活血行气拆方IC50=693 mg·L-1;可抑制NF-κB信号通路相关分子IKKβ、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β表达,作用强弱依次为:通莲I号全方>活血行气拆方>清热解毒拆方>滋阴养血拆方。结论通莲I号方用于治疗食管癌的有效组分在活血行气、清热解毒、滋阴养血类药物的协同作用,通过调节NF-κB介导的信号通路相关基因表达,抑制癌细胞增殖。