沉默线粒体核糖体蛋白L35基因对人食管癌TE-1细胞生长的影响

目的:探讨慢病毒介导沉默线粒体核糖体蛋白L35 (MRPL35)基因对人食管癌TE-1细胞生长的影响,并阐明其机制。方法:选择3种人食管癌TE-1、ECA109和KYSE150细胞,采用实时定量PCR法检测3种细胞中MRPL35mRNA相对表达水平。食管癌TE-1细胞分为shMRPL35组和shCtrl组,分别加入沉默靶基因带有嘌呤霉素抗性的si-RNA慢病毒和带有嘌呤霉素抗性的阴性对照si-RNA慢病毒进行感染,建立稳定沉默MRPL35基因的食管癌细胞系,实时定量PCR及Western blotting法检测各组细胞中MRPL35基因沉默效率,采用CCK-8法检测各组细胞生长曲线,AnnexinⅤ-PE/7AAD双染色后流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:3种食管癌细胞均表达MRPL35基因,3种细胞中MRPL35mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。实时定量PCR法和Western blotting法检测,shMRPL35组TE-1细胞中MRPL35mRNA和蛋白表达水平明显低于shCtrl组(P<0.05)。与shCtrl组比较,shMRPL35组TE-1细胞生长速度明显降低(P<0.05),凋亡率明显升高(P<0.01)。结论:沉默MRPL35基因可抑制食管癌细胞TE-1增殖,并通过凋亡途径发挥作用。

辐射抗性食管癌细胞亚系TE-1R的建立及其辐射抗拒机制的研究

目的建立辐射抗性食管癌细胞亚系TE-1R，并探讨其辐射诱导的凋亡性及辐射抗性机制。方法采用分次、间歇照射的方法（2Gy，5次）诱导人食管癌细胞系TE-1产生具有稳定辐射抗性的细胞亚系TE-1R，显微镜下观察细胞形态学差异。以TE-1和TE-1R细胞为实验对象，给予6MVX射线单次照射（2Gy），流式细胞仪分析细胞照射后的凋亡情况，RT—PCR法和Western Blot法分别检测食管癌TE-1、TE-1R细胞中复制蛋白AI（RPA1）mRNA和蛋白的表达情况。结果筛选出辐射抗性食管癌细胞亚系TE—1R。2Gy射线照射后12、24和48hTE-1R细胞的凋亡率低于TE—1细胞（P〈0．05）。RPA1 mRNA和蛋白在TE—1R细胞中的表达高于TE-1细胞（P〈0．05）。结论成功建立了辐射抗性的食管癌细胞亚系TE-1R，新的细胞亚系TE-1R比其亲本细胞系TE-1对射线更加抗拒，RPA1可能在食管癌细胞辐射抗性的修复中起着重要作用。

干扰血管内皮生长因子表达联合γ射线对食管癌细胞移植瘤的影响

目的 研究反义cDNA干扰血管内皮生长因子（VEGF）表达联合γ射线对裸鼠移植瘤的影响,并观察各组裸鼠肿瘤病理组织学和细胞生物学特征的变化,为VEGF基因治疗联合放射治疗食管癌提供理论依据.方法 将32只Balb/c/nu裸鼠随机分为4组：对照组、单纯照射组、反义组和反义＋照射组,使用已转染和未转染反义VEGFcDNA TE-1食管癌细胞株,分别建立裸鼠爪垫移植瘤模型,瘤体直径0.8～1.0 cm,60Co γ射线18 Gy单次照射单纯照射组与反义＋照射组裸鼠移植瘤,对比观察各组移植瘤生长情况,检测移植瘤组织中VEGF mRNA和蛋白的表达,并分析肿瘤组织中细胞凋亡情况.结果 与未转染两组比较,转染两组瘤体生长速度慢,成瘤潜伏期延长（t=13.898,P＜0.01）.反义组肿瘤体积为（1207.50±97.07）mm3,反义＋照射组为（1057.5±91.50）mm3,两者差异无统计学意义（t=1.124,P＞0.05）,而此2组与对照组（5442.50±185.08）mm3和单纯照射组（2922.50±152.773）mm3体积间差异有统计学意义（t=9.475～21.238,P＜0.01）.反义组与反义＋照射组VEGF mRNA和蛋白表达较对照组和单纯照射组差异有统计学意义（F=387.394、13.519,P＜0.01）.结论 抗VEGF治疗可有效地抑制裸鼠移植瘤的生长,但单纯抑制VEGF表达对增加裸鼠移植瘤放射治疗增敏效果有限,需进一步研究.