Smo小干扰RNA对人食管癌CAES-17细胞凋亡的影响

目的:探讨Smoothened(Smo)小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对食管癌的CAES-17细胞的凋亡及凋亡相关基因Bcl-2表达的影响.方法:Smo siRNA转染食管癌CAES-17细胞,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组食管癌CAES-17细胞中Smo、Bcl-2 mRNA的表达;采用Western blot检测各组食管癌CAES-17细胞中Smo、Bcl-2的蛋白表达;采用TUNEL及流式细胞术检测CAES-17细胞的凋亡情况.结果:与各对照组相比,Smo siRNA转染细胞24、48和72 h Smo、Bcl-2蛋白及mRNA的表达均明显降低,其中Smo siRNA的mRNA转录水平为0.524±0.011、0.422±0.008和0.332±0.019;Bcl-2 mRNA的转录水平为0.571±0.024、0.512±0.017和0.492±0.011,具有明显下调(P<0.05);转染72 h后,Smo siRNA和Bcl-2蛋白翻译水平与对照相比,分别为0.330±0.016和0.391±0.019,差异均有显著性(P<0.05);各实验组凋亡细胞数与对照组相比均明显增多(P<0.05).结论:Smo siRNA可能通过抑制CAES-17细胞中Smo基因表达,进而下调Bcl-2表达,促进CAES-17细胞凋亡.

食管癌来源外泌体通过E2F4对CD4+T细胞向Th17细胞分化的影响

目的:研究食管癌来源外泌体对CD4+T细胞向Th17细胞分化的可能作用机制。方法:分离人正常食管上皮细胞HEEC和人食管癌细胞Eca-109来源外泌体(即HEEC-Exo、Eca-109-Exo),同时构建稳定表达的sh-NC和sh-E2F4的Eca-109细胞株并分离其外泌体(即sh-NC-Exo、sh-E2F4-Exo)。应用所得的外泌体处理CD4+T细胞;此外,应用稳定表达sh-NC和sh-E2F4的Eca-109细胞株建立食管癌异种移植小鼠模型。流式细胞术检测CD4+T细胞中Th17细胞比例;qRT-PCR检测E2F转录因子4(E2F4)mRNA表达;Western blot检测E2F4、维甲酸相关核孤儿受体γt(ROR-γt)和IL-17蛋白表达;ELISA试剂盒检测IL-17的含量。结果:与PBS组相比,HEEC-Exo组CD4+T细胞中Th17细胞比例、ROR-γt蛋白的表达、IL-17含量以及E2F4mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与HEEC-Exo组相比,Eca-109-Exo组CD4+T细胞中Th17细胞比例、ROR-γt蛋白表达、IL-17含量以及E2F4 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。与Eca-109-Exo组相比,sh-NC-Exo组CD4+T细胞中Th17细胞比例、ROR-γt蛋白表达、IL-17含量以及E2F4 mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与sh-NC-Exo组相比,shE2F4-Exo组CD4+T细胞中Th17细胞比例、ROR-γt蛋白表达、IL-17含量以及E2F4 mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05)。与Eca-109组相比,sh-NC组小鼠肿瘤大小和E2F4、ROR-γt、IL-17蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与sh-NC组相比,sh-E2F4组小鼠肿瘤大小和E2F4、ROR-γt、IL-17蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论:食管癌来源外泌体可能通过E2F4促进CD4+T细胞向Th17细胞分化,从而促进肿瘤生长。

miR-586靶向TLR7调控食管癌细胞CaES-17的凋亡和增殖

目的:探讨miRNA调控食管癌细胞CaES-17的凋亡和增殖的潜在机制。方法:纳入2019年06月至2020年06月在我院接受治疗的食管癌患者6例,采集其食管癌组织和癌旁组织后抽取总RNA进行miRNA高通量测序。在食管癌细胞CaES-17中过表达食管癌组织和癌旁组织中的差异miRNA,检测食管癌细胞CaES-17的凋亡和增殖情况。通过TargentScan7.2在线分析和荧光素酶报告实验分析miRNA的靶标mRNA。结果:6例患者的食管癌组织和癌旁组织通过高通量测序发现hsa-miR-30d-5p、hsa-miR-6818-5p、hsa-miR-525-5p、hsa-miR-1909-3p、hsa-miR-212-5p、hsa-miR-586、hsa-miR-1286、hsa-miR-365b-3p、hsa-miR-30e-5p、hsa-miR-4317在食管癌组织和癌旁组织中的表达差异在8倍以上,并且食管癌组织均高于癌旁组织。干扰上述miRNA后,发现干扰miR-586能够抑制食管癌细胞CaES-17的增殖水平和迁移水平,提高凋亡水平。过表达miR-586后,食管癌细胞CaES-17的凋亡水平下降,增殖水平和迁移水平上升。TargentScan7.2在线分析和荧光素酶报告实验发现miR-586靶向TLR7的3'端非编码区。敲低TLR7后,食管癌细胞CaES-17的凋亡水平下降,增殖水平和迁移水平上升。过表达TLR7后,食管癌细胞CaES-17的凋亡水平上升,增殖水平和迁移水平下降。但是,同时干扰miR-586和敲低TLR7后,相比于对照食管癌细胞,食管癌细胞CaES-17的凋亡水平和增殖水平无显著差异。结论:miR-586通过靶向TLR7的3'端非编码区,降解了TLR7的mRNA,抑制了TLR7的蛋白翻译,最终抑制了食管癌细胞CaES-17的凋亡、促进了食管癌细胞CaES-17的增殖。

Bcl-2、miR-451和Th17细胞在食管癌中的诊断价值及其与复发的关系

目的探讨Bcl-2、miR-451、Th17细胞在食管癌中的诊断价值及其与复发的关系。方法选取101例食管癌患者作为研究组,95例健康体检者作为对照组。分析两组临床病理特征与各外周血指标水平之间的相关性,ROC曲线分析各外周血指标诊断价值,多元线性回归分析各指标与肿瘤复发的关系。结果研究组外周血Bcl-2、miR-451和Th17细胞水平均高于对照组(均P<0.05);分化程度、临床分期、肿瘤直径、淋巴结转移与外周血Bcl-2、miR-451和Th17细胞水平呈正相关(均P<0.05)。复发患者外周血Bcl-2、miR-451和Th17细胞水平均高于未复发患者(均P<0.05);控制分化程度、临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移等其他因素后,外周血Bcl-2、miR-451和Th17细胞水平与复发显著相关(均P<0.05)。结论食管癌患者外周血Bcl-2、miR-451和Th17细胞异常表达且表达水平与分化程度、临床分期及复发等密切相关,联合检测可为临床诊断、预后评估提供客观依据。

右美托咪定对食管癌患者围术期Th17细胞功能的影响

目的观察右美托咪定对食管癌患者围术期Th17细胞功能的影响。方法将60例拟行食管癌根治术患者随机分为观察组和对照组各30例,2组术前30 min均给予东莨菪碱联合度冷丁肌肉注射。观察组诱导前静脉泵入右美托咪定,对照组用同等体积的生理盐水替代,2组均使用芬太尼3μg/kg+维库溴铵0.1 mg/kg+异丙酚2 mg/kg进行诱导,检测2组术前(t_0)、术毕(t_1)、术后24 h(t_2)、术后48 h(t_3)的Th17细胞频率、NK细胞活性及外周血IL-6、IL-8和IL-23水平。结果 2组手术输液量、手术时间、术中出血量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。t0时2组Th17细胞表达率和NK细胞活性比较差异均无统计学意义(P均>0.05);t1时2组Th17细胞表达率均明显高于t_0时(P均<0.05),且对照组上调的趋势更为明显(P<0.05);t_2时2组Th17细胞表达率继续上调,其中对照组增加的幅度较观察组明显(P<0.05);t_3时2组Th17细胞表达率均明显低于t_2时(P均<0.05),且观察组Th17细胞表达率明显低于对照组(P<0.05)。t_1时2组NK细胞活性均明显高于t0时(P均<0.05),且观察组明显高于对照组(P<0.05);t_2时观察组NK细胞活性虽然较t_1时降低但仍高于t0时(P<0.05),而对照组NK细胞活性与t0时比较差异无统计学意义(P>0.05);t_3时2组NK细胞活性与t0时比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。t_1时2组IL-6、IL-8和IL-23水平均明显高于t0时(P均<0.05),但观察组各指标水平均明显低于对照组(P均<0.05);t_2时2组IL-6、IL-23水平及对照组IL-8水平仍持续升高(P均<0.05),但观察组各指标水平均明显低于对照组(P均<0.05),观察组IL-8出现下降趋势;t3时2组IL-6、IL-8和IL-23水平仍高于t0时(P均<0.05),但观察组上述指标水平均明显低于对照组(P均<0.05)。结论右美托咪定可能通过调节Th17细胞功能达到减轻食管癌患者围术期的应激反应及免疫抑制的目的。

胸腔镜下食管癌根治术围术期红细胞免疫及Th17类细胞因子表达的变化研究

目的:探究胸腔镜下食管癌根治术围术期红细胞免疫及Th17类细胞因子表达的变化情况。方法:选取2018年10月-2019年12月本院收治的90例食管癌根治术患者为研究对象。将其根据手术方式的不同分为对照组(传统开胸食管癌根治术组)和观察组(胸腔镜下食管癌根治术组),每组45例。比较两组手术前后的炎性反应相关指标(PCT、CRP及ESR)、红细胞免疫(RBC-C3bR、RBC-ICR、FEER及FEIR)及Th17类细胞因子(IL-17、IL-23及TGF-β1)表达水平。结果:术前1 d,两组的炎性反应相关指标、红细胞免疫指标、Th17类细胞因子表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。术后3、7 d,观察组的炎性反应相关指标均显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);术后14 d,两组的炎性反应相关指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。术后3、7、14 d,观察组的RBC-C3bR、FEER均显著高于对照组,RBC-ICR、FEIR均显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。术后3、7、14 d,观察组的Th17类细胞因子均显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:胸腔镜下食管癌根治术对患者围术期的红细胞免疫及Th17类细胞因子影响相对小于传统开胸食管癌根治术,可能与机体炎性反应的控制较好有关,在本类患者围术期的检测价值较高。

右美托咪定对食管癌患者围术期Th17细胞功能调节研究

目的:观察右美托咪定对食管癌患者围术期辅助性T细胞(Th)17功能调节作用。方法:选取2012年1月—2016年3月我院收治的60例食管癌患者为研究对象,按随机数字表法分为对照组和观察组,各30例。两组术前30 min肌内注射东莨菪碱(0.3 mg)联合杜冷丁(50 mg),使用芬太尼(3μg/kg)+维库溴铵(0.1 mg/kg)+异丙酚(2 mg/kg)进行诱导,观察组诱导前静脉泵入右美托咪定(4μg),对照组泵入相同剂量的生理盐水。检测两组术前(T0)、术毕(T1)、术后24 h(T2)、术后48 h(T3)Th17细胞表达率及外周血白细胞介素(IL)-6、IL-8和IL-23水平。结果:(1)T1、T2及T3时观察组视觉模拟评分(VAS)低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);(2)T0时两组Th17细胞表达率及IL-6、IL-8和IL-23水平比较差异无统计学意义(P>0.05);T1时两组Th17细胞表达率及IL-6、IL-8、IL-23水平均较T0时升高,且对照组IL-8、IL-23高于观察组(P<0.05);T2时观察组Th17细胞表达率、IL-8和IL-23水平降低而IL-6水平升高,对照组各指标仍升高;T3时两组Th17细胞表达率、IL-6、IL-8和IL-23水平均降低,且观察组明显低于对照组(P<0.01)。结论:右美托咪定可通过抑制Th17细胞表达,调节食管癌患者围术期的免疫功能。

食管癌中IL-17和TNF-α的表达及临床意义

目的：研究食管癌患者外周血白介素17（IL-17）、TNF-α的表达水平，探讨IL-17、TNF-α在食管癌的调节作用及机制。方法：选取58例食管癌患者，采用免疫组织化学SP法和RT—PCR法检测2者表达水平。结果：①IL-17和TNF-α在食管癌组织和癌旁组织中的阳性表达率分别为67．2％和55．2％。②RT—PCR结果提示实验组IL-17mRNA表达含量显著高于对照组相对值（P〈0．05）。结论：IL-17、TNF-α表达水平高低与食管癌发生、发展呈正相关。

食管鳞癌组织中差异表达miR-17-92基因簇成员及其靶基因的筛选、生物学功能分析

目的筛选食管鳞癌(ESCC)组织中差异表达的miR-17-92基因簇及其靶基因,分析靶基因的生物学功能,并探讨miR-17-92基因簇及其靶基因与患者临床病理特征、预后的关系。方法下载癌症基因组图谱(TCGA)数据库和基因表达综合(GEO)数据库(GSE43732数据集)中ESCC相关数据,分别采用edgeR包和GEO2R分析miR-17-92基因簇的表达情况。将ESCC组织、正常食管组织及癌旁组织中差异表达最显著(差异倍数>2倍,校正后P<0.05)的miR-17-92基因簇成员作为关键miRNAs。采用miRDB 6.0、TargetScan 7.2及miRTarBase 8.0在线网站预测关键miRNAs的靶基因,经蛋白互作网络分析及差异表达分析确定关键靶基因。对关键靶基因进行KEGG信号通路和GO功能富集分析。采用独立样本t检验或Mann-Whitney U检验分析关键miRNAs及其关键靶基因与ESCC临床病理学特征间的关系,采用生存分析评价关键miRNAs及其关键靶基因与ESCC患者预后的关系。结果相对于正常食管组织及癌旁组织,ESCC组织中miR-17-92基因簇表达均上调,其中上调的关键miRNAs是miR-17-5p、miR-18a-5p。筛选出14个差异表达的关键靶基因,分别为CNOT6L、CTDSPL、ATM、FBXL5、NHLRC3、FEM1C、HIF1A、UBE2G1、CENPQ、CNOT7、RHOC、NR3C1、RUNX1、E2F3。关键靶基因主要富集于信号传导、转录调控、癌症通路、细胞周期等肿瘤相关生物学过程或通路。miR-17-5p、miR-18a-5p和关键靶基因CTDSPL在不同ESCC分化程度间存在差异表达(P均<0.05)。关键靶基因ATM和NHLRC在ESCC不同T分期间存在差异表达(P均<0.05)。关键靶基因UBE2G1在ESCC不同N分期间存在差异表达(P=0.03)。生存分析结果表明,关键靶基因ATM的表达水平与ESCC患者的预后相关(P<0.01)。结论 ESCC组织中miR-17-92基因簇表达上调,关键miRNAs为miR-17-5p、miR-18a-5p,关键靶基因为CNOT6L、CTDSPL、ATM、UBE2G1等14个。关键靶基因主要富集于信号传导、转录调控、癌症通路等肿瘤相关生物学过程或通路。CTDSPL、ATM、NHLRC、UBE2G1与ESCC患者临床病理特征有关,ATM的低表达与ESCC患者的预后差有关。

siRNA沉默ADAM17基因对食管癌EC109细胞增殖的影响

目的探讨小干扰RNA(siRNA)对EC109食管癌细胞增殖的影响。方法采用RNA干扰技术靶向人ADAM17基因的siRNA,分别标记为si257、si258及si259 3个序列,转染入EC109人食管癌细胞;采用实时定量PCR法检测各组癌细胞ADAM17 mRNA的含量;采用CCK8实验检测ADAM17沉默后食管癌细胞EC109的细胞增殖变化。结果 3个序列均能够有效抑制EC109中ADAM17的表达,显示有效的基因沉默效果。转染后72 h si259对EC109的增殖能力具有抑制作用(P<0.05)。未观察到si257对EC109增殖的抑制作用。结论 siRNA沉默ADAM17基因能够对食管癌细胞增殖产生一定的影响,提示ADMA17基因通过某种通道参与了食管癌细胞的增殖活动。

IL-12、IL-16和IL-17在食管癌患者血清中表达水平及意义

目的通过检测食管癌患者和正常健康体检者血清中白细胞介素12(Interleukin-12,IL-12)、IL-16和IL-17表达水平,探讨3种细胞因子在食管癌中的作用和临床意义。方法随机选取2013年6月—2014年6月在南充市中心医院就诊的食管癌患者51例作为试验组、40例正常健康体检者作为对照组,收集受试者外周静脉血血清,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测受试者IL-12、IL-16和IL-17血清表达水平,利用统计学软件SPSS 16.0,采用独立样本t检验、单向方差分析(One-way ANOVA)和偏相关分析(Partial)对数据进行详细分析。结果 IL-12、IL-16和IL-17在食管癌患者血清中表达水平均高于正常健康体检者(P<0.01),食管癌患者血清IL-12表达水平明显高于IL-16和IL-17(P<0.01),健康体检者血清IL-12和IL-16表达水平明显高于IL-17(P<0.01);在去除IL-16影响的条件下,食管癌患者血清中IL-12和与IL-17表达水平呈显著正相关(P<0.01);在去除IL-12影响的条件下,食管癌患者血清中IL-16和IL-17表达水平呈显著正相关(P<0.01)。结论与正常健康对照组比较,IL-12、IL-16和IL-17在食管癌患者血清中均呈高表达水平,3种细胞因子在食管癌的发生发展过程中具有重要作用,推测在食管癌发生发展过程中存在这3种细胞因子免疫调控失衡,3种细胞因子间的相互影响可能存在复杂的信号传导通路。