微RNA-205与人食管癌放射治疗抵抗细胞株Eca-109R放射抗性的相关性

目的探讨人食管癌放射治疗抵抗细胞株Eca-109R中微RNA(miR)-205的表达水平与放射抗性的相关性。方法取人食管鳞状细胞癌细胞株Eca-109,采用多次逐渐递增剂量的射线照射建立人食管癌放射治疗抵抗细胞株Eca-109R;另取Eca-109细胞,待细胞培养至融合度达到50%~70%时将miR-205 mimics转染入Eca-109细胞,形成Eca-109 miR-205过表达细胞。根据照射剂量将Eca-109细胞、Eca-109R细胞和Eca-109 miR-205过表达细胞分别分为0 Gy组、2 Gy组、4 Gy组、6 Gy组、8 Gy组、10 Gy组。用倒置显微镜观察Eca-109和Eca-109R细胞的形态,细胞计数试剂盒-8实验检测Eca-109细胞、Eca-109R细胞和Eca-109 miR-205过表达细胞的存活率;细胞克隆形成实验检测Eca-109细胞、Eca-109R细胞和Eca-109 miR-205过表达细胞的增殖情况;反转录聚合酶链式反应检测Eca-109细胞、Eca-109R细胞和Eca-109 miR-205过表达细胞中miR-205的表达水平。结果Eca-109细胞形态均一,大小一致,大多呈片状或梭状,折光性良好;Eca-109R细胞可见少量多角形细胞,伴有颗粒感,折光性差。在0 Gy组,Eca-109R细胞、Eca-109 miR-205过表达细胞与Eca-109细胞的存活率和细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。在2、4、6 Gy组,Eca-109R细胞、Eca-109 miR-205过表达细胞的存活率和细胞增殖能力显著高于Eca-109细胞(P<0.05)。在8 Gy组,Eca-109R细胞的存活率和细胞增殖能力显著高于Eca-109细胞(P<0.05);Eca-109 miR-205过表达细胞与Eca-109细胞的存活率和细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。在10 Gy组,Eca-109R细胞、Eca-109 miR-205过表达细胞与Eca-109细胞的存活率和细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。在0 Gy组,Eca-109R细胞、Eca-109 miR-205过表达细胞中miR-205的相对表达量显著高于Eca-109细胞(P<0.05)。在4 Gy组,Eca-109R细胞中miR-205的相对表达量显著高于Eca-109细胞(P<0.05)。4 Gy组的Eca-109细胞中miR-205的相对表达量显著高于0 Gy组中Eca-109细胞(P<0.05);4 Gy组的Eca-109R细胞中miR-205的相对表达量显著高于0 Gy组的Eca-109R细胞(P<0.05)。结论miR-205的表达与人食管癌放射治疗抵抗细胞株Eca-109R的放射抗性具有相关性,过表达miR-205可提高食管癌细胞的放射抗性。

汉防己甲素对人食管癌细胞株Eca-109放射增敏研究

目的研究汉防己甲素(Tet)在γ射线照射人食管癌细胞株Eca-109中的放射增敏作用,并探讨其机制。方法采用克隆形成分析法测定Tet对人食管癌细胞株Eca-109放射敏感性的影响,流式细胞术分析Eca-109细胞经放射线照射后细胞周期的再分布情况,Western blotting法分析周期相关蛋白表达以及分裂指数法分析Tet对照射后细胞分裂的影响。结果在Eca-109细胞中,Tet显著增加γ射线的杀伤作用,其增敏比为1.43;在γ射线照射后,细胞明显阻滞于G2期,Tet可以降低这种阻滞。Eca-109细胞在受到γ射线照射后其Cyclin B1与Cdc2蛋白表达水平明显降低,Tet可以逆转γ射线对Cyc-lin B1与Cdc2蛋白的表达的抑制作用。Tet可以促使阻滞于G2期的Eca-109细胞进人M期。结论 Tet能显著增加γ射线对人食管癌细胞的杀伤作用,其作用机制可能与Tet去除放射引起的G2/M期阻滞有关。

山豆根对人食管癌细胞株(Eca-109)杀伤、抑制及脱氢酶类的影响

本文应用杀伤效应、酶活性测定及Fulgen－DNA法显示分裂指数，分析山豆根对体外培养人食管癌细胞株（Eca－109）的作用。结果表明：100mg/ml、200mg/ml浓度对细胞的杀伤能力随药物作用时间延长而增强，50mg/ml浓度维持在3％左右。100mg/ml，200mg/ml实验，在加药第3天对细胞分裂指数抑制率接近或达到100％，50mg/ml实验作用呈负相关。山豆根使谷氨酸脱氢酶，苹果酸脱氢酶和乳酸脱氢酶活性下降，直至阴性反应。

食管癌EC109细胞属人类乳头状瘤病毒18型阳性细胞株

目的:探究食管癌细胞系EC109是否为人类乳头状瘤病毒(HPV)感染。方法:以HeLa细胞为阳性对照,以细胞DNA为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增HPV基因保守序列GP5/GP6基因片段;PCR扩增HPV18 E6和HPV18 E6/E7基因片段;对HPV18 E6/E7 PCR扩增产物片段进行测序;采用逆转录(RT)-PCR扩增HPV18 E6和E7基因片段;利用HPV基因分型芯片对EC109和HeLa细胞进行HPV分型。结果:PCR、RT-PCR和测序结果证明EC109细胞为HPV18阳性细胞;HPV分型芯片结果显示EC109也为HPV18阳性细胞。结论:EC109细胞是属于HPV18亚型感染型细胞。

外源性p53基因转导对食管癌细胞株Eca109的生长抑制

本文首次报道了逆转录病毒载体介导的外源性ｐ５３基困导入对食管癌细胞株Ｅｃａ１０９的生长抑制效应。我们将野生型ｐ５３基因全长编码区克隆进逆转录病毒载体ｐＤＯＲ－Ｎｅｏ中，构建了重组病毒ｐＤＯＲｐ５３。转染Ｂｃａ１０９细胞后，获得Ｇ４１８抗性细胞克隆Ｅｃａ－ｐ５３。细胞生物学行为研究显示：生长曲线压低４２％；ＧＯ／Ｇ＿１期细胞比例显著增加；细胞增殖指数＜ＰＩ＞降低３６．３％；软琼脂中集落形成能力受抑；对裸鼠的致瘤性丧失。结果证明，外源性野生型ｐ５３基因转导，对抑制食管癌细胞的恶性行为具有显著的生物学意义。

微囊藻毒素与甲基硝基亚硝基胍对食管癌EC109细胞株毒性的联合作用

[目的]探讨微囊藻毒素(MC)与甲基硝基亚硝基胍(MNNG)对食管癌EC109细胞株毒性的联合作用。[方法]应用MTT法观察微囊藻毒素LR(MC-LR)(1 nmol/L、10 nmol/L、100 nmol/L、1μmol/L和10μmol/L)和MNNG(5 pmol/L、50 pmol/L、500 pmol/L、5 nmol/L、50 nmol/L、500 nmol/L和5μmol/L)对食管癌EC109细胞株生长抑制率(fa)的影响,利用析因设计方差分析和Chou-Talalay联合指数法(中效原理)分析两毒物的联合作用;应用流式细胞术检测细胞凋亡。[结果]MNNG单独染毒,当浓度达到50 pmol/L及以上时,各组fa均明显高于对照组(均P<0.05);MC-LR单独染毒,fa则先降低后增加,除100 nmol/L组外,其余组与对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05);各浓度MC-LR与MNNG组联合染毒,fa均随着MNNG浓度升高而增加(r值分别为0.961,0.973,0.950,0.980,0.959,0.972,均P<0.01),各浓度MNNG与MC-LR组联合染毒,均随着MC-LR染毒浓度升高fa先降低后升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);析因设计方差分析表明两毒物有交互作用(P<0.01);运用中效原理计算合用指数(CI),当fa=9.4%时,CI=1,两毒物联合呈现相加效应;当fa<9.4%时,CI>1,两毒物联合产生拮抗效应;当fa>9.4%时,CI<1,两毒物联合产生协同效应;流式细胞术检测细胞凋亡结果表明,MNNG与高剂量MC-LR均可诱导细胞凋亡,且高剂量MNNG与MC-LR联合染毒具有协同诱导细胞凋亡的作用。[结论]MC-LR与MNNG联合染毒,低剂量时两者为拮抗效应,高剂量时为协同效应。

三氧化二砷诱导人食管癌Ec109细胞凋亡伴随c-myc基因的降调节

目的 探讨三氧化二砷 (As2 O3)对食管癌 Ec10 9细胞系的生物学效应及细胞和分子机制。方法 通过四氮唑 (MTT)还原法检测三氧化二砷 (As2 O3)对食管癌 Ec10 9细胞系存活率的影响 ,从形态观察、流式细胞仪分析、DNA凝胶电泳、细胞凋亡原位检测 (TU NEL)研究三氧化二砷诱导食管癌 Ec10 9细胞凋亡的情况 ,并以 Western blot检测基因表达。结果 Ec10 9细胞经 As2 O3处理后 ,存活率明显降低。光学显微镜下可见到明显的凋亡细胞 ,在细胞周期 G1期前有低于 2倍体的凋亡峰 ;DNA凝胶电泳显示出典型的凋亡特征 :DNA有规律断裂形成的梯状图谱 ,细胞凋亡原位检测发现 DNA断裂 ,Western blot检测表明 c- myc基因的表达下降。结论 As2 O3能诱导人食管癌Ec10 9细胞凋亡 ,并伴随 c- m yc基因的降调节。

健脾和胃法对食管癌细胞株EC9706移植瘤生长的抑制作用

目的:通过观察健脾和胃法及其代表方六君子汤对裸鼠移植瘤的生长和组织中STAT3通路相关因子和蛋白表达的影响,探讨其治疗食管癌的分子机制。方法:用EC9706细胞皮下注射裸鼠制备移植瘤模型,实验分为:正常空白组(C组)、模型组(M组)、六君子汤组(L组)、抑制剂组(S组)、六君子汤加抑制剂组(L+S组),C、M组为空白对照组,灌服生理盐水和腹腔注射生理盐水;L组灌服六君子汤和腹腔注射生理盐水;S组灌服生理盐水和腹腔注射Stattic工作液;L+S组灌服六君子汤水煎液和腹腔注射Stattic工作液。4周后摘除眼球取血和移植瘤,ELISA检测血清中IL-6、VEGF含量;免疫组化检测移植瘤组织中CD34和VEGF表达;Western blot检测移植瘤组织细胞中JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结果:与模型组比较,六君子汤组肿瘤体积较小(P<0.05);各组移植瘤重量及组织中CD34表达均下降(P<0.05);血清中抑制剂组IL-6含量明显降低(P<0.05),其它各组没有明显差异;仅六君子汤组和抑制剂组中JAK2和STAT3表达下降(P<0.05),抑制剂组中p-STAT3明显降低(P<0.05),其它各组无明显差异。与抑制剂组比较,六君子汤组中CD34表达略高于抑制剂组(P<0.05),其它各组无明显差异;STAT3蛋白表达中六君子汤组表达降低(P<0.05),而联合抑制剂组则明显升高(P<0.05);p-STAT3表达中,六君子汤组和及其联合制剂组均明显升高(P<0.05)。与六君子汤组比较,除STAT3表达在联合抑制剂组表达有所增高(P<0.05)外,其它各组无明显差异。结论:健脾和胃法及其代表六君子汤可以抑制食管癌EC9706细胞裸鼠移植瘤的生长,可能与下调移植瘤中CD34、JAK2、STAT3的表达有关。

尼美舒利对人食管癌细胞Eca-109 COX-2表达及生长的抑制作用

目的研究环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂尼美舒利对人食管癌Eca-109细胞株COX-2表达和细胞增殖及凋亡的影响。方法MTT法测定尼美舒利对人食管癌Eca-109细胞增殖的抑制率;RT-PCR法检测Eca-109细胞COX-2mRNA表达变化;流式细胞仪检测COX-2蛋白表达、细胞周期时相分布及凋亡率的变化;光镜和琼脂糖电泳法进一步观察细胞凋亡。结果尼美舒利对人食管癌Eca-109细胞有较强的抑制作用,有明显的时间和浓度依赖性;呈浓度依赖性下调Eca-109细胞COX-2 mRNA及蛋白表达;可使Eca-109细胞G0/G1期比例增高,S期细胞减少,增殖指数降低,凋亡细胞增多。结论尼美舒利可能通过对COX-2表达的下调而诱导凋亡和细胞周期阻滞,从而抑制人食管癌Eca-109细胞生长。

六君子汤对食管癌细胞株EC9706致血管生成的影响

目的研究六君子汤对食管癌血管生成的影响。方法 MTT法检测六君子汤醇提物对食管癌细胞株EC9706生长抑制作用,收集其500μg/m L质量浓度的EC9706细胞条件培养基用于鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成、人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成的观察。ELISA法检测EC9706细胞和人脐静脉内皮细胞培养基上清中VEGF和IL-6含有量。结果六君子汤醇提物可明显抑制EC9706细胞增殖,具一定剂量依赖性,其IC50值为505.28μg/m L。六君子汤醇提物可减少EC9706细胞条件培养基所致鸡胚绒毛尿囊膜血管生成、人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成。六君子汤醇提物可减少EC9706细胞和内皮细胞IL-6及内皮细胞VEGF分泌。结论六君子汤醇提物可能通过干预EC9706细胞信号通路从而抑制血管生成的效应。

美登木对ECa109食管癌细胞株超微结构的影响

美登木是一种由我国云南植物中提出的抗癌药物。已证实美登木的果实、根和茎的酒精粗提物对KB细胞有明显抑制作用;对小鼠S_(180)、L_(1210)、P_(388)、路易斯肺癌及大鼠瓦克256癌均有效^([1])。我室曾用云南热带植物研究所提供的美登木甲醇部位提取物与美登木茎的中性部位提取物研究了它们对食管癌细胞的作用^([2]),但此药对肿瘤细胞超微结构的改变尚未见于文献报道。现将美登木所致ECa 109食管癌细胞株超微结构变化报道如下。材料和方法细胞及药物剂量食管癌细胞为我室培养的ECa 109细胞株^([3])。培养基成分为80%199培养液、20%小牛血清和青霉素100单位/毫升与链霉素100微克/毫升。

沉默ABCE1基因对人食管癌EC109细胞凋亡、增殖、侵袭及迁移的影响

目的:探讨电转法沉默ATP结合盒转运子E1(ATP-binding cassette protein E1,ABCE1)基因的表达对人食管癌EC109细胞凋亡、增殖、侵袭及迁移的影响。方法:合成靶向ABCE1的siRNA序列(ABCE1-siRNA)以及阴性对照序列(NCsiRNA),电转法转染至EC109细胞,分别形成ABCE1-EC109、NC-siRNA-EC109细胞。RT-PCR、Western blotting检测转染后EC109细胞中ABCE1 mRNA与蛋白的表达情况,流式细胞术检测EC109细胞周期及凋亡,CCK-8法、划痕愈合实验、Transwell法分别检测EC109细胞的增殖、迁移以及侵袭的能力。结果:ABCE1-EC109细胞中ABCE1 mRNA和蛋白表达较NC-siRNAEC109细胞明显降低[(0.47±0.04)vs(0.67±0.05),(0.63±0.09)vs(0.86±0.11);均P<0.05]。与NC-siRNA-EC109细胞相比,ABCE1-EC109细胞的增殖速度明显减慢[(2.20±0.10)vs(2.91±0.13),P<0.05],细胞周期阻滞在G0/G1期细胞数目明显增多[(76.5±3.1)%vs(56.1±2.7)%,P<0.05)];细胞的凋亡率明显升高[(15.46±3.12)%vs(0.54±0.24)%,P<0.01],迁移、侵袭能力均显著下降[迁移:(8.12±0.23)vs(1.91±0.11)μm,P<0.05;侵袭:(42.56±4.68)vs(68.78±6.98)个,P<0.01]。结论:电转法沉默ABCE1基因的表达可促进食管癌EC109细胞的凋亡,抑制其体外增殖、侵袭及迁移。

杨梅素通过抑制能量代谢促进5-氟尿嘧啶对人食管癌细胞EC109的抗肿瘤作用

目的研究杨梅素(MYR)对5-氟尿嘧啶(5-FU)抗肿瘤作用的促进效应,并探讨其潜在机制。方法①人食管癌细胞EC109分别设立细胞对照组、MYR 4.68~300.00μmol·L^(-1)组、5-FU 0.8~48.0μmol·L^(-1)组和5-FU 0.8~48.0μmol·L^(-1)+MYR 75μmol·L^(-1)组,分别孵育24,48和72 h,采用MTT法检测细胞存活抑制率。②EC109细胞分为细胞对照、MYR 75μmol·L^(-1)、5-FU 12μmol·L^(-1)和MYR+5-FU组,孵育48 h,荧光显微镜观察线粒体膜电位(MMP);流式细胞术检测细胞凋亡率、MMP和葡萄糖摄取。③细胞分组为细胞对照组、MYR 75,100和200μmol·L^(-1)组、5-FU 12μmol·L^(-1)组及MYR 75μmol·L^(-1)+5-FU 12μmol·L^(-1)组。细胞能量代谢分析仪每隔5 min实时检测细胞氧消耗速率(OCR)和胞外酸化率(ECAR),检测150 min。结果①MYR 75~300μmol·L^(-1)浓度范围内作用48和72 h,均可显著抑制EC109细胞存活(P<0.01);5-FU 3~48μmol·L^(-1)浓度范围内作用48和72 h,均能抑制食管癌细胞EC109存活(P<0.01);5-FU 0.8~48.0μmol·L^(-1)+MYR 75μmol·L^(-1)组作用48和72 h时,MYR 75μmol·L^(-1)表现出对5-FU的增敏作用,当作用24 h时,MYR则对5-FU表现出拮抗作用。②与细胞对照组相比,MYR 75μmol·L^(-1),5-FU 12μmol·L^(-1)和MYR+5-FU作用EC109细胞48 h,细胞凋亡率均显著升高(P<0.01);与单用组相比,联用组细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。MYR 75μmol·L^(-1)组和5-FU 12μmol·L^(-1)组MMP显著下降(P<0.05);与单用药组相比,联用组MMP显著下降(P<0.01);葡萄糖摄取结果显示,与细胞对照组相比,MYR 75μmol·L^(-1)组细胞葡萄糖摄取显著下降(P<0.01),而5-FU 12μmol·L^(-1)组无明显变化;与单用药组相比,联用组可显著抑制葡萄糖摄取(P<0.01)。③能量分析结果显示,MYR 75,100和200μmol·L^(-1)组OCR和ECAR显著降低(P<0.05);5-FU 12μmol·L^(-1)组细胞OCR显著降低(P<0.05),而ECAR有所升高(P<0.05);与单用药组相比,联用组OCR进一步下降(P<0.05),ECAR无明显变化。结论MYR可促进5-FU对EC109的杀伤作用,其机制可能与MYR抑制细胞酵解和线粒体呼吸水平、抑制肿瘤细胞能量代谢有关。

苦参碱通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导食管癌Ec109细胞自噬

目的探究苦参碱对食管癌Ec109细胞的自噬作用及其机制。方法体外培养食管癌Ec109细胞,分别经不同浓度苦参碱处理后,倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化;四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖抑制率;Western blotting检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白p-mTOR、p-Akt和p-p70S6K的表达;实时荧光定量PCR检测自噬相关基因Beclin1 mRNA的表达。结果倒置显微镜下可见,食管癌Ec109细胞经苦参碱处理后胞体缩小,胞内可发现不均一的细颗粒状物质。不同浓度的苦参碱处理48 h,细胞增殖抑制率随着苦参碱浓度的增加逐渐升高(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,LC3-Ⅱ的表达随苦参碱浓度的升高而增高,但p-mTOR、p-Akt和p-p70S6K的表达均随苦参碱浓度的增高而降低;实时荧光定量PCR结果显示,苦参碱处理使自噬基因Beclin1 mRNA的表达上调。结论苦参碱诱导食管癌细胞自噬可能是通过PI3K/Akt/mTOR信号通路介导的。

斑蝥酸钠对体外培养的人食管癌Eca109细胞中Bcl-2、p53基因表达的影响

目的研究斑蝥酸钠对体外培养的人食管癌Eca109细胞中Bcl-2、p53基因表达的影响。方法采用流式细胞仪检测、分析斑蝥酸钠处理前后人食管癌Eca109细胞中Bcl-2、p53基因表达的变化。结果不同剂量斑蝥酸钠作用24h均可使Bcl-2、p53基因在人食管癌Eca109细胞中的表达下降(p<0.01)。结论斑蝥酸钠可抑制Bcl-2、p53基因在人食管癌Eca109细胞中的表达。

共聚焦定量分析WAF_1-S基因表达对人食管癌细胞系EC109生长的作用

目的:探讨抑癌基因WAF_1-S基因在食管癌细胞中的表达以及对食管癌细胞生长的抑制作用,为食管癌发病机制的研究提供一种新的思路,为食管癌基因治疗提供理论基础。 方法:采用亚克隆技术,将野生型WAF_1-S基因全长,通过双粘端克隆入真核表达载体pcDNA3中,用lipofectamine2000介导的方法转染EC109细胞(人食管癌细胞系)。通过打点杂交观察WAP_1-S基因mRNA在细胞中的表达,用Westem blot及激光共聚焦方法定量分析WAF_1-S基因的蛋白表达产物,MTT及流式细胞仪检测EC109的生长状态,分析WAF_1基因对食管癌细胞株生长的影响。 结果:用内切酶酶切分析证实外源野生型WAF_1_S基因克隆入真核表达载体中,经打点杂交证实外源野生型WAF_1-S基因可以在EC109细胞中表达,通过激光共聚焦分析证实,转染后的食管癌细胞EC109中WAF_1-S的蛋白的表达明显高于对照组(32±15 vs 11±7,P<0.05),对细胞进行周期分析表明,处于G_0～G_1期细胞为0.47～0.65。 结论:通过转染外源野生型WAF_1基因可提高WAF_1基因表达,增加食管癌细胞中P^(21)蛋白的表达量,从而提高WAF_1基因表达,抑制细胞的生长。

沉默单核细胞趋化蛋白-1基因降低人食管癌EC109细胞的迁移及侵袭能力

单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)是白色脂肪细胞分泌的炎症趋化刺激因子,属于趋化因子CC亚族,可促进肿瘤血管形成和细胞外基质降解,从而促进肿瘤细胞的浸润与转移。沉默MCP-1基因可显著抑制恶性肿瘤生长及转移,但其作用的分子机制尚不完全清楚。本研究应用小干扰RNA技术沉默人食管癌EC109细胞中MCP-1表达。细胞划痕试验显示,与对照组相比,沉默MCP-1基因可明显抑制食管癌EC109细胞迁移能力。Transwell侵袭实验显示,沉默MCP-1基因后,EC109细胞侵袭能力降低。Western印迹试验和RT-PCR试验揭示,沉默MCP-1基因后,细胞中MMP-7、MMP-9、TGF-β_1及VEGF表达水平显著下降。研究结果提示,沉默MCP-1基因可通过抑制MMP-7、MMP-9、TGF-β_1及VEGF表达,降低癌细胞迁移及侵袭能力。

蚯蚓纤溶酶增加人食管癌细胞ECA109对放射线敏感性的实验研究

目的:探讨蚯蚓纤溶酶(EFE)对食管癌细胞的放射增敏作用及机制。方法:选取人食管癌细胞株ECA109,采用MTT法观察EFE对细胞的生长抑制作用,克隆形成实验观察EFE对细胞的放射增敏作用,流式细胞术观察EFE对细胞周期分布的影响,RT-PCR法检测EFE对细胞内硒谷胱甘肽过氧化物酶(SeGPx)mRNA表达的影响。结果:EFE对ECA109有生长抑制作用,其作用呈剂量依赖性,IC50为3.8 ukU.ml-1;EFE0.1、0.3 ukU.ml-1的放射增敏比分别为1.37和1.59;EFE作用24 h后,食管癌细胞G2与M期比例明显下降,细胞内SeGPx基因表达明显下调。结论:EFE在体外可抑制ECA109的生长,同时可增加其对放射线的敏感性;放射增敏机制可能与EFE清除细胞G/M期阻滞及下调细胞内抗氧化酶SeGPx mRNA表达有关。

热疗通过提高活性caspase-3的表达促进食管癌EC109细胞凋亡

目的:探讨不同温度热疗诱导食管癌EC109细胞的生长抑制、细胞凋亡及其与天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)蛋白表达变化的关系。方法:采用PCR仪精确控制温度,对食管癌EC109细胞行37℃(对照),43℃,45℃,47℃热疗处理,四甲基偶氮唑蓝(Tetrazolium bromide,MTT)法检测细胞生长抑制率,碘化丙啶(Propidium iodide,PI)/磷脂结合蛋白V(Annexin V)双染流式细胞仪测定细胞凋亡率,蛋白印迹(Western bolt)法检测caspase-3蛋白表达。结果:食管癌细胞在37℃,43℃,45℃处理下,细胞生长抑制率随温度升高而增多,并有显著性差异,43℃细胞凋亡率达到最高,三者差异显著。45℃和47℃生长抑制及凋亡率均无明显差异。总-caspase-3(pro-caspase-3)表达随温度升高而增多,而活性csapase-3(actived-caspase-3)在43℃表达最多。结论:热疗通过提高活性caspase-3表达诱导食管癌EC109细胞凋亡,在43℃凋亡率达到最高。

大蒜素干预下大鼠血清对食管癌EC109细胞凋亡及Survivin表达的影响

目的研究大蒜素干预下SD大鼠血清诱导食管癌EC109细胞凋亡及其对Survivin蛋白表达的影响。方法Ⅰ组:以普通灭活SD大鼠血清培养液培养食管癌EC109细胞;Ⅱ组:以大蒜素干预SD大鼠灭活血清培养液培养食管癌EC109细胞;采用AnnexinⅤ-EGFP/PI双染法和亚倍体峰法应用流式细胞仪检测2组食管癌细胞早期和中晚期凋亡率;Survivin蛋白的表达应用Western blot方法检测。结果Ⅱ组细胞凋亡率明显高于Ⅰ组,差异有统计学意义(P<<0.05);Ⅱ组细胞中Survivin蛋白的表达水平明显低于Ⅰ组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论长期大蒜素干预下SD大鼠血清能促进食管癌EC109细胞的凋亡并抑制Survivin蛋白的表达。