食管鳞状细胞癌外泌体miR-181b-5p通过靶向抑制PTEN促进肿瘤相关巨噬细胞极化

目的:探究食管鳞状细胞癌外泌体miR-181b-5p对M2型巨噬细胞极化的影响及机制。方法:提取并鉴定食管鳞状细胞癌外泌体,qRT-PCR检测miR-181b-5p在食管鳞状癌细胞及其外泌体中的表达。M0型巨噬细胞分为PBS组、HEEC exo组、Eca-109 exo组、miR-NC exo组、miR-181b-5p exo组、miR-NC组、miR-181b-5p mimic组、si-NC组、si-PTEN组、miR-181b-5p exo+PTEN组,qRT-PCR检测各组细胞中CD163、CD206、iNOS、TNF-α表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-181b-5p和PTEN的靶向关系。结果:miR-181b-5p在食管鳞状癌细胞TE-13、TE-12、TE-10、Eca-109、KYSE30及其外泌体中显著高表达(P<0.001)。相比于miR-NC组,miR-181b-5p mimic组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。双荧光素酶报告基因结果显示PTEN为miR-181b-5p的靶基因。相比于si-NC组,si-PTEN组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于PBS组,Eca-109 exo组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于miR-NC exo组,miR-181b-5p exo组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于miR-181b-5p exo组,miR-181b-5p exo+PTEN组CD163和CD206表达显著下调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著上调(P<0.001)。结论:外泌体miR-181b-5p抑制PTEN表达而促进M2型巨噬细胞极化。

上皮细胞转化序列2通过调控p33生长抑制因子1表达影响食管鳞状细胞癌细胞的体外转移活性

目的探讨上皮细胞转化序列2(ECT2)与p33生长抑制因子1(p33ING1)的表达水平对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞转移活性的影响。方法采用免疫组织化学法和免疫印迹法检测食管鳞癌组织和癌旁组织中ECT2和p33ING1的表达情况。将人食管鳞癌细胞系KYSE140细胞分为4组:空白组、阴性对照组(pcDNA 3.1 NC)组、过表达组(pcDNA 3.1 ECT2)和抑制表达组(si ECT2)。采用MTT法和细胞集落形成实验研究细胞的增殖和生长能力,Transwell实验和划痕实验研究细胞的侵袭和迁移能力,并用流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,Western blotting检测ECT2对p33ING1蛋白的影响。结果在食管鳞癌组织中ECT2表达增加,p33ING1表达降低。过表达ECT2能够显著增加KYSE140细胞的生长、集落形成、迁移以及侵袭能力,并能降低KYSE140细胞的凋亡率和p33ING1的表达;此外,抑制ECT2表达后能够逆转上述变化。结论ECT2高表达能够促进食管鳞癌KYSE140细胞的生长、转移,并抑制其凋亡,其机制可能与ECT2能够抑制p33ING1表达相关。

miR-1-3p通过调控STC2抑制人食管鳞状细胞癌细胞的恶性生物学行为

目的探讨miR-1-3p对人食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞的恶性生物学行为的影响及其可能的作用机制。方法利用基因表达数据库(GEO)筛选ESCC中差异表达的miRNA。采用qRT-PCR检测人ESCC细胞KYSE30、KYSE150、KYSE410、KYSE510和Eca109及正常食管上皮细胞HET-1A中miR-1-3p的表达水平。CCK-8试剂盒、划痕愈合和Transwell实验以及流式细胞术分别检测转染miR-1-3p mimic对ESCC细胞增殖、迁移和侵袭、凋亡能力的影响。使用生物信息学工具预测miR-1-3p的靶基因,Kaplan-Meier法分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中STC2表达水平与患者预后的关系。采用FISH检测miR-1-3p的亚细胞定位,双荧光素酶报告基因验证miR-1-3p与STC2的靶向关系。RNA免疫沉淀(RIP)实验检测miR-1-3phe STC2的结合。Western blot法检测转染miR-1-3p mimic对ESCC细胞中STC2及内质网应激相关蛋白p-PERK、p-eIF2α、ATF4表达水平的影响。CCK-8、划痕愈合、Transwell实验和流式细胞术分别检测过表达和敲低STC2对ESCC细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响。结果ESCC细胞中miR-1-3p的表达水平均低于HET-1A细胞(均P<0.05),转染miR-1-3p mimic可抑制ESCC细胞增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.05),促进ESCC细胞凋亡(均P<0.001)。生物信息学工具预测miR-1-3p的靶基因为STC2,ESCC组织中STC2的表达水平高于正常食管上皮组织,与预后呈负相关(均P<0.05)。miR-1-3p位于胞质,并可直接与STC2 mRNA结合。转染miR-1-3p mimic可下调STC2、p-PERK、p-eIF2α、ATF4蛋白的表达水平(均P<0.05)。过表达STC2可促进ESCC细胞增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.05),抑制ESCC细胞凋亡(均P<0.05)。敲低STC2可抑制ESCC细胞增殖、迁移和侵袭能力(均P<0.05),促进ESCC细胞凋亡(均P<0.05)。结论miR-1-3p通过靶向调控STC2抑制ESCC细胞的恶性生物学行为,促进ESCC细胞凋亡,可能是通过抑制内质网应激发挥作用。

术前调强放疗联合新辅助治疗可切除局部晚期食管鳞状细胞癌的疗效分析

目的探讨调强放疗(IMRT)联合特瑞普利单抗和铂类方案治疗可切除局部晚期食管鳞状细胞癌(ESCC)的疗效与安全性。方法收集2019年12月—2022年11月在厦门大学附属中山医院接受新辅助治疗的局部晚期ESCC患者120例,根据治疗方法的不同将120例ESCC患者分为对照组(n=60)和观察组(n=60)。对照组接受特瑞普利单抗联合紫衫醇和卡铂治疗,观察组在此基础上应用IMRT治疗。治疗后评价是否可进行手术,比较两组的R0切除率、病理完全缓解(pCR)率、主要病理反应(MPR)率、客观缓解率(ORR)及疾病控制率(DCR)。观察两组围术期相关指标,术后随访24个月比较两组远期疗效及安全性。结果两组患者的新辅助治疗完成率均达100%,观察组的R0切除率为91.67%,pCR率为40.00%,MPR率为61.67%,ORR为86.67%,DCR为96.67%,均显著高于对照组(P<0.05)。两组在手术时间、术中出血量及术后并发症方面比较差异无统计学意义(P>0.05)。随访24个月后,两组的无进展生存率和总生存率比较差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者发生贫血、恶心、呕吐、白细胞减少等不良反应情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论IMRT联合特瑞普利单抗加紫杉醇加卡铂的新辅助治疗模式可提高局部晚期可切除ESCC的临床疗效,且安全性良好。

血清MMP1和P53自身抗体联合检测对食管鳞状细胞癌的诊断价值

目的:探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)患者血清基质金属蛋白酶1(MMP1)和P53自身抗体表达水平及其联合检测的诊断意义。方法:收集2013年3—9月在汕头大学医学院附属肿瘤医院住院治疗的93例ESCC患者,并以同期90例体检者为正常对照组。应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测两组对象血清MMP1和P53自身抗体的表达水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价诊断效能。结果:血清MMP1含量和P53自身抗体滴度在ESCC组分别为(8.076±5.912)ng/mL和0.291±0.492,正常对照组分别为(4.652±3.346)ng/mL和0.055±0.037,ESCC组均较正常对照组显著升高(均为P<0.01)。ROC曲线分析显示,MMP1诊断ESCC的曲线下面积(AUC)为0.700(95%CI为0.624~0.776),当取最佳诊断截断值7.248 ng/mL时,特异度为83.3%,敏感度为52.7%。P53自身抗体诊断ESCC的AUC为0.713(95%CI为0.638~0.788),诊断截断值为0.080,特异度为83.3%,敏感度为49.5%。两者联合检测诊断ESCC的AUC为0.787(95%CI为0.720~0.854),特异度为83.3%,敏感度为66.7%,优于单独使用MMP1或P53自身抗体。在早期ESCC中,MMP1和P53自身抗体联合检测亦能获得较好的诊断效能,AUC为0.760,95%CI为0.663~0.857,特异度为83.3%,敏感度为66.7%。结论:ESCC患者血清MMP1和P53自身抗体水平均升高,二者联合检测有助于ESCC的早期诊断,可作为ESCC的诊断标志物。

帕博利珠单抗联合化疗治疗晚期不可切除食管鳞状细胞癌的效果

目的探究帕博利珠单抗联合化疗对晚期不可切除食管鳞状细胞癌患者的疗效。方法遴选2019年12月至2022年9月郑州大学第一附属医院收治的晚期食管鳞状细胞癌患者纳入研究,依据治疗方法的不同进行分组,将采用化疗方案(紫杉类+顺铂)治疗的患者纳入化疗组,将采用帕博利珠单抗联合化疗方案的患者纳入免疫联合组,经倾向性评分匹配排除年龄、性别混杂因素,经1:1匹配法两组各纳入34例。比较两组近期实体瘤疗效和生存情况,治疗前后肿瘤标志物[鳞状细胞癌抗原(SCCA)、糖抗原242(CA242)和细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)]、血清可溶性程序性死亡蛋白1/可溶性程序性死亡蛋白配体1(sPD-1/sPD-L1)及人转化生长因子-β1(TGF-β1)水平变化,记录两组药品不良反应。结果免疫联合组疾病客观缓解率(67.65%)高于化疗组(41.18%)(P<0.05),两组疾病控制率(88.24%vs 85.29%)比较差异无统计学意义(P>0.05);免疫联合组总生存期(OS)(11.47±0.33)个月,无病生存期(DFS)(11.03±0.47)个月,1年生存率及无病生存率91.18%、76.47%,化疗组对应为(11.01±0.48)个月、(8.85±1.13)个月、85.29%、61.76%,两组OS比较差异无统计学意义(log rankχ^(2)=0.598,P>0.05),DFS比较差异有统计学意义(log rankχ^(2)=4.216,P<0.05);治疗4个周期后,免疫联合组血清SCCA、CA242和CYFRA21-1水平[分别为(3.14±0.61)ng·mL^(-1),(50.12±6.88)U·mL^(-1),(3.57±0.71)μg·L^(-1)]低于化疗组[分别为(3.81±0.74)ng·mL^(-1),(57.53±7.14)U·mL^(-1),(4.43±0.83)μg·L^(-1)](t=4.074、4.358、4.591,均P<0.05);治疗4个周期后,免疫联合组血清sPD-1/sPD-L1、TGF-β1水平[分别为(0.69±0.07)ng·mL^(-1),(33.47±6.47)ng·mL^(-1)]低于化疗组[分别为(0.75±0.05)ng·mL^(-1),(40.65±7.12)ng·mL^(-1)](t=4.067、4.067,均P<0.05);免疫联合组药品不良反应(胃肠道反应、过敏性皮疹、贫血和肝肾损伤)与化疗组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论帕博利珠单抗联合化疗治疗食管鳞状细胞癌可明显改善肿瘤标志物水平及血清免疫状态。

Ptch2在食管鳞状细胞癌中的表达的研究

目的研究Ptch2在食管鳞状细胞癌中的表达情况。方法选取2012年1月至2022年12月我院收治的食管鳞状细胞癌患者的手术标本113份,将113份食管鳞状细胞癌组织病理标本设为观察组,另留取113份食管鳞状细胞癌旁组织(非食管鳞状细胞癌组织)病理标本设为对照组,用免疫组化检测Ptch2表达率,比较两组的Ptch2表达的差异,分析Ptch2与食管鳞状细胞癌之间的关系。结果观察组Ptch2表达率为6.19%,显著低于对照组的27.43%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Ptch2在食管鳞状细胞癌组织中表达率明显下降。

Smac多肽对食管鳞状细胞癌耐药性调节机制的研究

目的探究Smac多肽(Smac-N7)对食管癌鳞状细胞系Eca-109和紫杉醇(PTX)耐药株(Eca-109/PTX)耐药性的影响和作用机制。方法采用小剂量间歇诱导法建立Eca-109/PTX细胞株,CCK-8法检测PTX对Eca-109和Eca-109/PTX的半数抑制浓度(IC_(50))。使用PTX和Smac-N7分别或联合处理Eca-109或Eca-109/PTX细胞,并将细胞分为:Eca-109组、Eca-109+PTX组、Eca-109+Smac-N7组、Eca-109+PTX+Smac-N7组;Eca-109/PTX组、Eca-109/PTX+PTX组、Eca-109/PTX+Smac-N7组、Eca-109/PTX+PTX+Smac-N7组。采用流式细胞术、试剂盒和Western blot法分别检测各组Eca-109和Eca-109/PTX细胞的凋亡率和细胞中caspase-3活性与Bcl-2、Bax蛋白的表达水平。结果CCK-8法检测结果显示,随浓度的增加,PTX对Eca-109与Eca-109/PTX的生长抑制率均明显增加(P<0.05),且PTX对Eca-109的IC_(50)[(0.08±0.01)μg/mL]显著低于其对Eca-109/PTX的IC_(50)[(2.47±0.11μg/mL)](P<0.01)。与Eca-109组或Eca-109/PTX组相比,Eca-109+PTX组、Eca-109+PTX+Smac-N7组和Eca-109/PTX+Smac-N7组、Eca-109/PTX+PTX+Smac-N7组细胞中Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05),但细胞凋亡率、细胞中caspase-3活性和Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与Eca-109+PTX组或Eca-109/PTX+PTX组相比,Eca-109+PTX+Smac-N7组和Eca-109/PTX+PTX+Smac-N7组细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而细胞凋亡率、细胞中caspase-3活性和Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论Smac-N7可在体外通过促进细胞凋亡来改善Eca-109细胞及其耐药株对PTX的敏感度。

血清NY-ESO-1自身抗体和MMP1联合检测对食管鳞状细胞癌的诊断价值

目的:探讨血清基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP1)和纽约食管鳞状细胞癌抗原-1(New York esophageal squamous cell carcinoma 1,NY-ESO-1)自身抗体联合检测在食管鳞状细胞癌中的诊断意义。方法:应用酶联免疫吸附实验检测120例食管鳞状细胞癌患者和120例正常对照血清中MMP1和NY-ESO-1自身抗体的表达水平,采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评价诊断效能。结果:血清MMP1和NY-ESO-1自身抗体在食管鳞状细胞癌患者中的表达均明显高于正常对照[(8.070±5.738)ng/mL vs(4.331±3.137)ng/mL,Z=6.214,P<0.001;0.463±0.571 vs 0.156±0.086,Z=5.210,P<0.001]。ROC曲线显示,当血清MMP1为最佳诊断临界值10.586 ng/mL时,其在诊断食管鳞状细胞癌的曲线下面积(area under the ROC curve,AUC)为0.732(95%CI:0.671~0.787),敏感度为24.2%,特异度为95.0%。NY-ESO-1自身抗体诊断食管鳞状细胞癌AUC为0.695(95%CI:0.632~0.752),敏感度为33.0%,特异度为95.0%。MMP1和NY-ESO-1自身抗体联合检测诊断食管鳞状细胞癌的AUC为0.800(95%CI:0.744~0.849),敏感度为47.5%,特异度为95.0%。结论:血清MMP1和NY-ESO-1自身抗体联合检测可能有助于提高食管鳞状细胞癌的诊断效能。

DABDAB2相互作用蛋白和相互作用蛋白和β-联蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达联蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的目的探讨食管鳞状细胞癌组织中DAB2相互作用蛋白(DAB2IP)和β-联蛋白(β-catenin)表达情况,并分析其与食管鳞状细胞癌患者临床特征和预后的关系。方法方法收集92例食管鳞状细胞癌患者的食管鳞状细胞癌组织和癌旁正常黏膜组织,另取55例食管上皮内瘤变患者的食管上皮内瘤变组织。采用免疫组化法检测3种组织中DAB2IP和β-catenin表达情况,并分析其与食管鳞状细胞癌患者临床特征的关系。绘制Kaplan-Meier生存曲线,分析DAB2IP和β-catenin表达情况与患者预后的关系。采用Cox回归模型分析食管鳞状细胞癌患者预后的影响因素。结果结果食管鳞状细胞癌组织中DAB2IP阳性表达率低于食管上皮内瘤变组织和癌旁正常黏膜组织,β-catenin阳性表达率高于食管上皮内瘤变组织和癌旁正常黏膜组织,食管上皮内瘤变组织中β-catenin阳性表达率高于癌旁正常黏膜组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。食管鳞状细胞癌组织中DAB2IP和β-catenin表达呈负相关(r=-0.609,P﹤0.01)。不同分化程度、远处转移情况、淋巴结转移情况和TNM分期食管鳞状细胞癌患者的食管鳞状细胞癌组织中DAB2IP阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05);不同分化程度、浸润深度、远处转移情况、淋巴结转移情况和TNM分期食管鳞状细胞癌患者的食管鳞状细胞癌组织中β-catenin阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。DAB2IP阳性表达患者生存情况优于DAB2IP阴性表达患者,β-catenin阴性表达患者生存情况优于β-catenin阳性表达患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。多因素分析结果显示,远处转移、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期和DAB2IP阴性表达均是食管鳞状细胞癌患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。结论结论食管鳞状细胞癌组织中DAB2IP阳性表达率较低,β-catenin阳性表达率较高,二者有可能成为食管鳞状细胞癌临床诊断和预后评估的重要指标。

Versican在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床病理学意义

目的研究Versican在食管鳞状细胞癌组织中的表达,并探讨其临床病理学意义。方法收集郑州人民医院接受食管癌根治手术治疗的47例患者食管鳞状细胞癌组织及癌旁组织,采用免疫组化法及原位杂交法检测Versican的表达情况,分析其与临床病理特征的相关性。结果Versican蛋白及Versican mRNA在食管鳞状细胞癌组织中的表达均高于癌旁组织(P<0.05);Versican蛋白及Versican mRNA在食管鳞状细胞癌组织中的高表达与患者癌组织的浸润深度达外膜或周围组织、淋巴结有转移、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期均有关(P<0.05);Versican蛋白与Versican mRNA在食管鳞状细胞癌组织中的表达有相关性(r=0.530,P<0.05)。结论食管鳞状细胞癌中Versican的表达与浸润、转移相关,可能促进了食管鳞状细胞癌的发生发展。

miR-223-3p与ECT2表达在食管鳞状细胞癌组织中的相关性及与其预后的关系

目的探讨miR-223-3p与ECT2表达在食管鳞状细胞癌中的相关性及与其预后的关系。方法纳入85例食管鳞状细胞癌的石蜡包埋食管鳞状细胞癌组织、相应的正常食管黏膜组织。实时荧光定量PCR检测miR-223-3p与ECT2 mRNA水平,Pearson相关系数分析miR-223-3p与ECT2 mRNA表达水平的相关性。Kaplan-Meier生存分析和Cox比例风险模型分析miR-223-3p、ECT2表达对食管鳞状细胞癌预后的影响。结果ECT2高表达食管鳞状细胞癌患者46例,ECT2低表达食管鳞状细胞癌患者39例。ECT2 mRNA表达水平食管鳞状细胞癌组织高于正常食管黏膜组织,miR-223-3p表达水平食管鳞状细胞癌组织低于正常食管黏膜组织。ECT2表达水平与肿瘤大小、分化程度、TNM分期、血管侵犯相关。miR-223-3p表达水平与肿瘤大小、分化程度、TNM分期、血管侵犯相关。此外,食管鳞状细胞癌中miR-223-3p与ECT2 mRNA表达存在相关性(ρ=-0.5223,P<0.0001),miR-223-3p与ECT2蛋白表达存在相关性(χ^(2)=21.56,P<0.0001)。Kaplan-Meier生存分析显示:TNM分期、淋巴结转移、神经侵犯、miR-223-3p表达水平、ECT2表达水平对食管鳞状细胞癌患者的总生存期有影响。Cox比例风险模型发现TNM分期、淋巴结转移、神经侵犯、miR-223-3p表达水平、ECT2表达水平对总生存期有影响。结论miR-223-3p与ECT2的表达水平在食管鳞状细胞癌中存在相关性。TNM分期、淋巴结转移、神经侵犯、miR-223-3p表达水平、ECT2表达水平可作为ESCC的独立预后因素。

白蛋白结合型紫杉醇联合顺铂在初治局部晚期食管鳞状细胞癌中的应用效果分析

目的 探讨白蛋白结合型紫杉醇联合顺铂治疗方案在初治局部晚期食管鳞状细胞癌中的应用效果。方法 回顾性选取2021年1月—2023年3月阜宁县人民医院肿瘤科收治的62例局部晚期食管鳞状细胞癌患者的临床资料,根据不同的治疗方案分为参照组和治疗组,各31例。参照组接受紫杉醇联合顺铂化疗,治疗组接受白蛋白结合型紫杉醇联合顺铂化疗。比较两组患者疗效、肿瘤标志物、不良反应发生率。结果 治疗组治疗总有效率(83.67%)高于参照组(61.29%),差异有统计学意义(χ^(2)=3.971,P=0.046)。化疗前,两组患者肿瘤标志物水平对比,差异无统计学意义(P>0.05);化疗后,治疗组癌胚抗原、糖类抗原19-9、鳞状细胞癌抗原等肿瘤标志物水平低于参照组,差异有统计学意义(t=5.314、3.880、14.449,P均<0.001)。治疗组肌痛(25.81%)、骨髓抑制(32.26%)的发生率显著低于参照组(51.61%、61.29%),差异有统计学意义(χ^(2)=4.351、5.247,P均<0.05)。结论 白蛋白结合型紫杉醇联合顺铂治疗方案用于初治局部晚期食管鳞状细胞癌中疗效和安全性显著,可降低肿瘤标志物水平,应用价值显著。

食管鳞状细胞癌术后生存状况及预后影响因素分析

目的 通过分析食管鳞状细胞癌的临床和组织病理学特点,了解影响食管鳞状细胞癌患者术后预后的影响因素。方法 采用病例回顾的调查方法登录医院病案管理系统,调阅病案,以病案信息为依据,收集2011年1月—2015年12月期间在某三甲医院收治的721例食管癌患者。根据病例纳入标准,对306例食管鳞状细胞癌术后患者进行随访,共得到有效随访261例,分析生存状况及预后影响因素。结果 本研究261例食管鳞癌术后患者,直至随访截止日期,结局死亡144例(55.17%);生存时间0~84个月,中位生存时间33.00月,平均生存时间36.55月。食管鳞状细胞癌术后预后单因素分析结果显示:年龄、治疗方式、定期复查、淋巴结转移率、TNM分期、病理形态、血红蛋白和血清白蛋白对预后有影响(P<0.05)。多因素分析结果显示年龄、治疗方式、TNM分期和病理形态影响食管鳞状细胞癌术后预后。结论 食管鳞状细胞癌术后生存的影响因素为:年龄、治疗方式、TNM分期和病理形态。年龄越小、进行化疗、病理形态未分化、TNM分期越小的患者具有更长的生存时间。

具核梭杆菌对食管鳞状细胞癌铁死亡相关蛋白表达及预后的影响

目的:探讨具核梭杆菌(Fn)对食管鳞状细胞癌(ESCC)铁死亡相关蛋白缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)表达及预后的影响。方法:将ESCC细胞KYSE30及KYSE150各分为4组:对照组(不感染Fn),Fn感染12、24、48 h组。采用试剂盒检测细胞中活性氧(ROS)与丙二醛(MDA)含量,CCK8法检测顺铂(CDDP)对KYSE30和KYSE150细胞的半数抑制浓度(IC 50),Western blot法检测HIF-1α与GPX4蛋白表达水平。采用RNAscope技术检测222例ESCC及其癌旁正常食管组织中Fn感染情况,采用免疫组化法检测HIF-1α与GPX4蛋白的表达情况。采用Kaplan-Meier法绘制Fn感染阳性和阴性ESCC患者术后生存曲线。结果:Fn感染可诱导KYSE30及KYSE150细胞HIF-1α和GPX4蛋白高表达,提高细胞的氧化应激水平,并降低细胞对CDDP的应答效力,具有时间依赖性(P<0.05)。ESCC组织中Fn感染,HIF-1α及GPX4蛋白表达的阳性率均高于癌旁正常食管组织(P<0.05)。ESCC患者中男性、有吸烟史、有饮酒史、肿瘤低分化、肿瘤浸润深度侵及纤维膜、有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ/Ⅳ期者Fn感染阳性率增加(P<0.05)。Fn感染阳性的ESCC患者术后生存状况较Fn感染阴性者差(P<0.001)。结论:Fn感染可抑制ESCC铁死亡,可能与ESCC患者预后不良有关。

干性相关分子Nanog在食管鳞状细胞癌组织中高表达并促进食管鳞癌细胞的侵袭转移:基于激活TGF-β信号通路

目的 探讨食管鳞状细胞癌(鳞癌)中干性相关分子胚胎干细胞关键因子(Nanog)和侵袭迁移相关分子基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达及其之间的调控关系。方法 运用免疫组织化学技术检测127例食管鳞癌组织和82例癌旁正常组织中Nanog和MMP-2/MMP-9蛋白的表达情况,分析Nanog和MMP-2/MMP-9蛋白的表达水平、相关性及与食管鳞癌患者的临床病理参数和预后之间的关系;采用GEO数据库分析Nanog等干性相关分子主要富集通路;应用TIMER在线网站分析食管癌中TβR1和MMP-2及MMP-9的相关性。在体外运用siRNA转染的方式将食管鳞癌细胞株分为正常对照组、Nanog低表达组,采用划痕实验分析其对食管鳞癌细胞迁移的影响,qRT-PCR及Western blotting检测两组之间TβR1、p-Smad2/3、MMP-2/MMP-9的表达情况。结果 Nanog和MMP-2/MMP-9蛋白在食管鳞癌组织中表达均上调(χ^(2)=70.475,P<0.01;χ^(2)=34.415,P<0.01;χ^(2)=46.605,P<0.01),且呈正相关(r=0.205,P=0.045;r=0.307,P<0.001)。Nanog和MMP-2/MMP-9蛋白表达水平与食管鳞癌的浸润深度相关(χ^(2)=23.9,P<0.01;χ^(2)=6.029,P<0.05;χ^(2)=11.89,P<0.05),有淋巴结转移的样本中,MMP-2/MMP-9蛋白表达水平高于无淋巴结转移的样本(χ^(2)=10.08,P<0.01;χ^(2)=5.731,P<0.05)。MMP-2/MMP-9蛋白表达与食管鳞癌患者的年龄、性别和肿瘤分化程度无相关性(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,Nanog和MMP-2/MMP-9蛋白高表达组的食管鳞癌患者生存时间短于低表达组(P<0.001;P=0.004;P=0.017);生物信息学分析显示,Nanog等干性相关分子主要富集在转化生长因子-β(TGF-β)信号通路,MMP-2/MMP-9与TβR1表达在食管癌中呈正相关关系。体外划痕实验结果显示,Nanog促进食管鳞癌细胞系的迁移;qRT-PCR及Western blotting结果显示,敲低Nanog后,TβR1、p-Smad2/3、MMP-2/MMP-9的表达水平明显降低。结论 Nanog和MMP-2/MMP-9蛋白在食管鳞癌患者组织中高表达且呈正相关,其与食管鳞癌患者的肿瘤浸润深度、淋巴结转移及预后密切相关,且Nanog通过TGF-β信号通路影响MMP-2/MMP-9蛋白的表达。

miR-146b-5p调控CD82介导食管鳞状细胞癌恶性表型

目的探究miR-146b-5p促进食管鳞状细胞癌恶性表型的分子机制。方法选取2020年10月-2021年12月在四川省西南医科大学附属医院行食管癌根治术治疗的38名食管鳞状细胞癌患者的癌组织和癌旁正常组织(NAT)样本,核酸原位杂交法检测miR-146b-5p在食管鳞癌及癌旁正常组织中的表达水平;通过siRNA敲低miR-146b-5p的表达水平,细胞增殖实验、划痕实验检测敲低miR-146b-5p后细胞行为学表型变化;生物信息学分析预测miR-146b-5p的下游靶基因为CD82;免疫印迹法(Western-blot)检测靶基因CD82的表达水平,双荧光素酶报告基因实验确定miR-146b-5p与CD82之间的调控关系。结果核酸原位杂交法检测结果显示,与NAT组织病理评分比较,miR-146b-5p在ESCC组织中的病理评分较高(P<0.05);EdU细胞增殖实验结果显示,与NC组比较,KD组EdU阳性细胞比例显著降低(P<0.05)。细胞划痕实验结果显示,与NC组比较,KD组划痕愈合比例显著下降(P<0.05)。ENCORI数据库预测CD82是miR-146b-5p的下游靶基因;Western-blot实验结果显示,相比NC组,KD组CD82在蛋白水平显著性上调;双荧光素酶报告基因实验结果显示,wt+mimic组荧光强度较mut+mimic组显著性下降(P<0.05)。结论miR-146b-5p通过靶向调控CD82促进食管鳞状细胞癌细胞的迁移,为食管鳞状细胞癌的治疗提供新的靶点。

补体C1s对食管鳞状细胞癌生物学行为的影响

目的:探究补体分子C1s对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖、迁移、黏附以及裸鼠移植瘤生长的影响。方法:利用NCBI-GEO数据库分析ESCC组织和癌旁正常组织(ANTs)中C1S mRNA的表达;采用RT-qPCR和Western blot检测ESCC细胞系中C1s的表达;利用C1s小干扰RNA(siRNA)、C1s短发夹RNA(shRNA)或C1s过表达慢病毒对ESCC细胞进行C1s的敲低或过表达,CCK-8法检测细胞增殖,细胞划痕实验检测细胞迁移,细胞-基质黏附实验检测细胞黏附能力;Western blot检测基质金属蛋白酶MMP1和MMP13表达;裸鼠皮下成瘤实验检测C1s对裸鼠移植瘤生长的影响,免疫组织化学法检测移植瘤中CD34表达,分析肿瘤微血管的形成。结果:ESCC组织中C1S mRNA表达明显高于ANTs,敲低C1s可明显抑制ESCC细胞的增殖、迁移、细胞-基质黏附以及裸鼠移植瘤的生长,而过表达C1S则具有相反的效果;C1s敲低的ESCC细胞TE-1中MMP1和MMP13的表达降低;与对照组相比,C1s过表达组移植瘤中的微血管更加丰富。结论:C1s在ESCC组织中显著上调,并促进ESCC细胞的增殖、迁移、细胞-基质黏附以及裸鼠移植瘤的生长。C1s可能在ESCC发生发展中发挥重要作用。

牙龈卟啉单胞菌通过GARP促进TGF-β/SMAD轴介导食管鳞状细胞癌细胞的上皮间质转化

目的:阐明牙龈卟啉单胞菌(Pg)诱导食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞发生上皮间质转化(EMT)的分子机制。方法:KEGG分析Pg诱导的ESCC差异表达基因富集的生物学通路,WB和/或免疫荧光法检测Pg诱导的ESCC细胞中糖蛋白A重复优势蛋白(GARP)、TGF-β、pSMAD/SMAD、Snail、Oct4和EMT相关分子表达的变化,ELISA检测TGF-β1水平的变化,免疫组织化学法检测ESCC组织中GARP和TGF-β1的表达规律,Transwell实验和动物实验验证Pg对ESCC的促进作用。结果:ESCC细胞感染Pg后,TGF-β、Hippo、PI3K/Akt等信号通路被激活;Pg感染刺激ESCC细胞分泌总TGF-β1和活性TFG-β1的水平升高(均P<0.01),使SMAD2/3磷酸化并发生核转位,诱导N-cadherin、Snail、Oct4等蛋白表达升高、E-cadherin蛋白表达降低,由此促进ESCC细胞的迁移、侵袭和裸鼠皮下移植瘤的生长(均P<0.01)。在ESCC细胞中沉默GARP表达后,逆转了Pg所诱导的上述ESCC细胞表型变化。Pg丰度高的ESCC组织中TGF-β1和GARP蛋白表达高于低丰度的ESCC组织,且Pg丰度与TGF-β1、GARP表达存在正向关联(P=0.0015)。结论:Pg通过GARP激活TGF-β/SMAD轴促进ESCC细胞发生EMT,进而促进ESCC细胞的迁移、侵袭和生长,清除Pg或阻断TGF-β信号转导则可阻断上述Pg对ESCC的促进作用。

治疗前营养状态对接受根治性放疗的老年局部晚期食管鳞状细胞癌患者预后的影响

目的探索治疗前营养状态对接受根治性放疗的老年局部晚期食管鳞状细胞癌患者预后的影响。方法收集2021年5月至2023年1月在江苏省肿瘤医院接受治疗的96例老年局部晚期食管鳞状细胞癌患者作为研究对象,均在治疗前进行了前清蛋白(PAB)、血红蛋白(Hb)、血清白蛋白(ALB)水平检测和营养风险筛查2002(NRS 2002)进行营养风险筛查,经二元Logistic回归分析影响患者预后因素。再根据患者预后分为两组,即预后不良组(死亡,n=32),预后良好组(生存,n=64),比较两组PAB、Hb、ALB水平和NRS 2002评分。经受试者操作特征(ROC)曲线分析PAB、Hb、ALB水平,NRS 2002评分预测价值。结果96例患者治疗前经血清检查,ALB水平(43.86±9.86)g/L,PAB水平(178.95±18.53)mg/L,Hb水平(129.84±15.43)g/L,NRS 2002评分值(3.49±1.86)分。经二元Logistic回归分析,治疗前ALB水平≤44 g/L、治疗前PAB水平≤179 mg/L、治疗前Hb水平≤126 g/L、治疗前NRS 2002评分>3分是影响老年局部晚期食管鳞状细胞癌患者预后因素(P<0.05)。利用Bootstrap法验证回归模型,提示本模型准确性较好(AUC为0.866,95%CI=0.795~0.938)。同时,预后良好组ALB(52.65±8.91)g/L、PAB(189.63±19.12)mg/L、Hb(141.58±17.21)g/L高于预后不良组,NRS 2002(1.55±0.75)分低于预后不良组(P<0.05),经ROC曲线分析,ALB、PAB、Hb、NRS 2002评分预测老年局部晚期食管鳞状细胞癌患者预后的ROC分别为0.836、0.898、0.877、0.914。结论治疗前PAB、Hb、ALB水平和NRS 2002评分能预测老年局部晚期食管鳞状细胞癌患者生存预后情况,通过治疗前检测患者营养状态,能够在改善近期疗效、生存预后中均起到重要作用,利于降低死亡率。