Pim-3基因表达下调及其对食管鳞癌EC9706细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究Pim-3基因的表达下调及其对食管鳞癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:利用Pim-3siRNA转染食管鳞癌EC970细胞,并利用RT-PCR和Westernblot技术检测转染Pim-3siRNA后食管鳞癌EC9706细胞中Pim-3的表达.此外,利用CCK-8试剂盒和流式细胞术分别研究下调Pim-3基因的表达对EC9706细胞增殖和凋亡的影响,进一步利用RT-PCR和Westernblot检测与增殖相关的P2基因,与凋亡相关的Bcl-2、Bax基因的表达.结果:转染Pim-3后,Pim-3基因在食管鳞癌EC9706细胞中的表达明显下调(P<0.05).与未处理组和对照siRNA组相比,Pim-3siRNA组在转染24、48、72、96hEC9706细胞的增殖均明显受到抑制(96h:0.878±0.061vs2.25±0.062,2.219±0.064,均P<0.05).转染48h后Pim-3siRNA组细胞早期凋亡率为19.70%±1.46%,显著高于未处理组和对照siRNA组的早期凋亡率(5.35%±0.80%,5.50%±0.61%,F=195.692,P=0.000).此外,Pim-3表达的下调能引起P21和Bax基因表达的升高(均P<0.05)Bcl-2基因表达的下调(P<0.05).结论:Pim-3可能在食管鳞癌EC9706细胞的增殖和凋亡中发挥重要作用.

siRNA对人食管鳞癌EC9706细胞中桩蛋白表达的影响

目的:探讨小分子干扰RNA(siRNA)对人食管鳞癌EC9706细胞中桩蛋白(paxillin)表达的抑制作用。方法:使用paxillin siRNA转染人食管鳞癌EC9706细胞,以对照siRNA转染组和正常EC9706细胞组为对照,采用免疫细胞化学SP法、Western blot和半定量RT-PCR技术分别检测转染前后上述各组细胞中paxillin蛋白和mRNA的表达。结果:转染paxillin siRNA后,免疫细胞化学结果显示,3组细胞中paxillin siRNA转染组中paxillin蛋白阳性表达细胞数最低,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05);Western blot及RT-PCR结果显示,与正常EC9706细胞组及对照siRNA转染组相比,paxillin siRNA转染组中的paxillin蛋白及mRNA的表达量明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:paxillin siRNA能有效抑制人食管鳞癌EC9706细胞中paxillin基因的表达。

人食管鳞癌EC9706细胞线粒体DNA中ND1基因突变的检测及意义

目的通过对人食管鳞癌EC9706细胞线粒体DNA(mtDNA)中ND1基因进行检测,分析其基因突变的意义。方法培养人食管鳞癌EC9706细胞,提取其mtDNA中的ND1基因,并测序。结果测序发现,人食管鳞癌EC9706细胞mtDNA中ND1基因的3 971处出现点突变,由C突变为T。结论人食管鳞癌EC9706细胞中mtDNA的ND1基因的突变与食管癌发生、发展关系密切。

神经型钙粘素在食管鳞癌组织中的表达及RNAi沉默该基因对EC9706细胞体外侵袭能力的影响

背景与目的:上皮性钙粘附蛋白(E-cadherin)和神经性钙粘附蛋白(N-cadherin)在细胞的迁徙和肿瘤浸润转移方面有着重要的作用。许多研究表明,E-cadherin是作为一种抑癌基因发挥作用的,与之相反,N-cadherin在促进肿瘤的浸润转移方面具有重要作用。本研究探讨N-cadherin在食管鳞癌组织中的表达及其临床病理意义,以及RNA干扰(RNAi)沉默N-cadherin基因表达对人食管癌细胞系EC9706细胞体外侵袭能力的影响。方法:采用免疫组织化学PV法检测62例食管鳞癌组织、31例癌旁不典型增生组织及62例正常食管粘膜组织中E-cadherin、N-cadherin的蛋白表达。通过逆转录病毒介导的RNAi技术沉默EC9706细胞中N-cadherin的表达,观察该细胞体外侵袭能力的变化。结果:正常食管粘膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中E-cadherin的阳性率依次降低,分别为95.2%、71.0%、40.3%;N-cadherin的阳性率依次升高,分别为29.0%、61.3%、75.8%。E-cadherin的阴性率及N-cadherin的阳性率与食管鳞癌的浸润深度、分化程度及淋巴结转移密切相关(P<0.05),二者在食管鳞癌组织中的表达呈负相关关系(r=-0.534,P<0.05)。稳定干扰后的EC9706细胞中N-cadherin的mRNA和蛋白表达水平均下调。Transwell小室体外侵袭实验结果显示,正常对照组的穿膜细胞数为123.4±8.2,而干扰载体组的穿膜细胞数则为49.6±6.8(P<0.05)。结论:食管鳞癌组织中E-cadherin的低表达和N-cadherin的高表达与食管鳞癌的发生、浸润及转移密切相关;RNAi沉默N-cadherin基因表达可以使EC9706细胞的体外侵袭能力降低。

Notch1基因在食管鳞癌细胞株EC9706中的表达及其对细胞凋亡的影响

背景与目的:早期的研究显示,Notch1信号途径与肿瘤的发生密切相关,在细胞的生长、增殖、分化和凋亡中起着十分重要的作用。本研究旨在研究Notch1基因在食管鳞癌EC9706细胞中的表达及其对EC9706细胞凋亡的影响。方法:通过免疫细胞化学方法检测Notch1基因在EC9706细胞中的表达。采用RT-PCR技术扩增Notch1基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-Notch1(命名为pcNICD),转染EC9706细胞,利用RT-PCR及Western blot检测稳定转染pcNICD载体、转染pcDNA3.1空载体及未处理的EC9706细胞中Notch1的表达,另通过流式细胞仪检测未处理、转染pcDNA3.1和转染pcNICD的EC9706细胞的凋亡。结果:EC9706细胞中发现Notch1基因的表达。与未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比,转染pcNICD的EC9706细胞中Notch1基因的mRNA和蛋白表达水平均明显增加,大约增加3倍(P<0.05);但未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞中Notch1的表达差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞检测结果显示,在未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞中,细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05);但与与未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比,转染pcNICD的EC9706细胞转染后24h、48h和72h时细胞凋亡率明显增加(P<0.01)。结论:Notch信号途径的激活引起食管鳞癌EC9706细胞的凋亡,提示Notch1基因有可能成为治疗食管鳞癌的新靶点。

上调stathmin基因表达对食管鳞癌EC9706细胞的作用

目的 构建stathmin基因真核表达载体,研究上调stathmin基因表达对食管癌细胞EC9706的作用.方法 采用RT-PCR扩增stathmin cDNA,克隆至pcDNA3.1（＋）真核表达载体.重组载体经脂质体转染EC9706细胞,G418筛选获得稳定转染细胞株.显微镜观察转染细胞形态学变化,Western印迹法检测转染细胞stathmin蛋白的表达.选取稳定转染的细胞株,采用细胞计数法绘制细胞生长曲线,四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖活性,平板克隆形成实验观察细胞克隆形成,流式细胞仪分析细胞周期,裸鼠移植瘤实验研究转染细胞的成瘤性.结果 RT-PCR扩增获得450 bp的cDNA编码序列;克隆至pcDNA3.1（＋）载体,获得pcDNA3.1-stathmin重组表达载体.Western印迹法证实重组载体上调EC9706细胞stathmin蛋白表达,差异有统计学意义（P＜0.01）.与对照组细胞比较,pcDNA3.1-stathmin转染细胞形态变大、多核、有丝分裂障碍;pcDNA3.1-stathmin转染细胞倍增时间延长（25～28 h）、增殖活性降低、细胞克隆形成率下降（34.5%±6.9%）,细胞分裂阻滞于G2/M期（21.7%±3.4%）,裸鼠体内致瘤性降低,差异均有统计学意义（均P＜0.01）.结论 重组质粒pcDNA3.1-stathmin上调stathmin基因表达能够抑制食管鳞癌EC9706细胞的增殖和致瘤性,stathmin可能成为食管鳞癌患者治疗的理想靶点.

小干扰RNA下调T细胞淋巴瘤侵袭转移诱导因子1表达对食管鳞癌EC9706细胞的影响

目的探讨小干扰RNA（siRNA）下调T细胞淋巴瘤侵袭转移诱导因子1（Tiam1）表达对食管鳞癌EC9706细胞的影响。方法利用Tiam1 siRNA转染食管鳞癌EC9706细胞，采用实时荧光定量PCR和Western blot检测转染后Tiaml mRNA和蛋白的表达，CCK-8试剂盒分析转染后细胞的增殖能力，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况，Western blot检测细胞周期相关蛋白和细胞凋亡相关蛋白的表达。结果未处理组和对照siRNA组EC9706细胞中Tiam1 mRNA的相对表达水平分别为1．00和0．95±0．02，差异无统计学意义（P〉0．05）。Tiaml siRNA转染24、48、72h后，EC9706细胞中Tiaml mRNA的相对表达水平分别为0．30±0．04、0．09±0．01和0．09±0．006，与未处理组比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）。转染Tiaml siRNA 24h后，EC9706细胞中Tiam1蛋白的表达水平（0．11±0．02）低于未处理组（0．44±0．05）和对照siRNA组（0．44±0．04，均P〈0．05）。Tiaml siRNA组、未处理组和对照siRNA组G0／G1期细胞所占比例分别为（54．48±2．14）％、（40．69±1．85）％和（41．78±1．31）％，S期细胞所占比例分别为（27．18±1．65）％、（32．32±1．15）％和（30．35±1．09）％，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。未处理组、对照siRNA组和Tiam1 siRNA组中cyclin D1蛋白的表达水平分别为0．43±0．02、0．41±0．01和0．11±0．02，p27蛋白的表达水平分别为0．10±0．01、0．09±0．02和0．20±0．02，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。未处理组、对照siRNA组和Tiam1 siRNA组中早期凋亡细胞所占比例分别为（10±0．9）％、（10±0．5）％和（27±0．7）％，差异有统计学意义（P〈0．01）。未处理组、对照siRNA组和Tiam1 siRNA组EC9706细胞中Mcl-1蛋白的表达水平分别为0．47±0．12、0．48±0．13和0．16±0．02，Bcl-2蛋白的表达水平分别为0．49±0．08、0．50±0．05和0．04±0．03，caspase-3的活性分别为2．3±0．09、2．3±0．10和16．0±1．50，caspase-9的活性分别为2．3±0．08、2．3±0．11和14．5±0．9，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论Tiam1 siRNA能明显抑制食管鳞癌EC9706细胞的增殖、诱导细胞周期静止和细胞凋亡的发生，这与细胞周期基因（cyclin D1和p27）和细胞凋亡基因（Mcl-1、Bcl-1、caspase-3和caspase-9）的变化密切相关。

CAFs条件培养基影响EC9706细胞能量代谢的分子机制探索

目的通过收集癌相关成纤维细胞(CAFs)的条件培养基,探索CAFs促进EC9706细胞能量代谢的分子机制。方法通过MTT检测细胞活性,以DMEM高糖培养基培养的EC9706作为对照,筛选最适合间接共培养的CAFs条件培养基(CAFM);比色法检测EC9706细胞上清中乳酸及葡萄糖含量;Seahorse系统能量代谢分析系统检测EC9706细胞在DMEM与CAFM中能量代谢情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real time quantitative PCR,RT-qPCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测能量代谢相关分子mRNA及蛋白的表达。结果细胞融合度为50%-60%、70%-80%的CAFs条件培养基(CAFM)组与正常食管成纤维细胞条件培养基(NFM)相比,均有促进EC9706细胞增殖的作用(P<0.01),且在细胞融合度达70%-80%的CAFM各组中,与对照组相比,CAFM含量为60%时,对EC9706细胞的增殖作用显著升高(P<0.01)。与DMEM相比,CAFM可以上调EC9706细胞葡萄糖摄取、上清乳酸含量、基础呼吸值、基础糖酵解、补偿糖酵解(P<0.05),非线粒体耗氧、最大呼吸值、合成ATP耗氧量、备用呼吸能力(P<0.01)。RT-qPCR结果显示,CAFM还可上调EC9706细胞的低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、己糖激酶2(HK2)、单羧酸转运蛋白1(MCT1)(P<0.05),葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、丙酮酸激酶2(PKM2)(P<0.01)mRNA的表达。蛋白免疫印迹法结果显示,与DMEM相比,HK2、PKM2、MCT1、GLUT1的蛋白表达均显著提高(P<0.01)。结论CAFM能够通过促进EC9706细胞HK2、PKM2、HK2、GLUT1、MCT1、MCT4的mRNA和蛋白的表达,促进EC9706细胞的能量代谢。

二氢丹参酮Ⅰ促进人食管鳞癌细胞系EC9706凋亡

目的探讨二氢丹参酮Ⅰ能否通过Wnt/β-catenin信号通路靶向调控食管鳞癌细胞系EC9706细胞增殖、迁移、凋亡等肿瘤细胞生物学特性。方法将EC9706细胞培养于含0、10和30μmol/L的二氢丹参酮Ⅰ溶液中,用CCK-8法检测细胞增殖;划痕试验检测细胞迁移;Western blot检测细胞内β-catenin、cyclin D1和c-myc蛋白表达;流式细胞计量术检测细胞凋亡。结果二氢丹参酮Ⅰ能够有效抑制EC9706细胞的增殖和迁移;二氢丹参酮Ⅰ可下调细胞中β-catenin、cyclin D1和c-myc蛋白的表达(P<0.05);二氢丹参酮Ⅰ可呈剂量依赖性地促进细胞凋亡。结论二氢丹参酮Ⅰ能够抑制EC9706细胞的增殖和迁移,并能促进EC9706细胞凋亡。

健脾和胃法对食管癌细胞株EC9706移植瘤生长的抑制作用

目的:通过观察健脾和胃法及其代表方六君子汤对裸鼠移植瘤的生长和组织中STAT3通路相关因子和蛋白表达的影响,探讨其治疗食管癌的分子机制。方法:用EC9706细胞皮下注射裸鼠制备移植瘤模型,实验分为:正常空白组(C组)、模型组(M组)、六君子汤组(L组)、抑制剂组(S组)、六君子汤加抑制剂组(L+S组),C、M组为空白对照组,灌服生理盐水和腹腔注射生理盐水;L组灌服六君子汤和腹腔注射生理盐水;S组灌服生理盐水和腹腔注射Stattic工作液;L+S组灌服六君子汤水煎液和腹腔注射Stattic工作液。4周后摘除眼球取血和移植瘤,ELISA检测血清中IL-6、VEGF含量;免疫组化检测移植瘤组织中CD34和VEGF表达;Western blot检测移植瘤组织细胞中JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结果:与模型组比较,六君子汤组肿瘤体积较小(P<0.05);各组移植瘤重量及组织中CD34表达均下降(P<0.05);血清中抑制剂组IL-6含量明显降低(P<0.05),其它各组没有明显差异;仅六君子汤组和抑制剂组中JAK2和STAT3表达下降(P<0.05),抑制剂组中p-STAT3明显降低(P<0.05),其它各组无明显差异。与抑制剂组比较,六君子汤组中CD34表达略高于抑制剂组(P<0.05),其它各组无明显差异;STAT3蛋白表达中六君子汤组表达降低(P<0.05),而联合抑制剂组则明显升高(P<0.05);p-STAT3表达中,六君子汤组和及其联合制剂组均明显升高(P<0.05)。与六君子汤组比较,除STAT3表达在联合抑制剂组表达有所增高(P<0.05)外,其它各组无明显差异。结论:健脾和胃法及其代表六君子汤可以抑制食管癌EC9706细胞裸鼠移植瘤的生长,可能与下调移植瘤中CD34、JAK2、STAT3的表达有关。

通幽汤及拆方对食管癌EC9706细胞PI3K/AKT信号通路影响的研究

目的:揭示通幽汤对食管癌抑制作用的细胞内分子机制,确定从功效分类的有效药物及瘀血内结证的分子本质。方法:体外培养食管鳞癌EC9706细胞,通幽汤及活血行气、滋阴养血拆方分别作用于细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化;以MTT法检测细胞抑制率,确定最佳药物浓度和作用时间;western blot法观察PI3K/AKT信号通路各蛋白表达变化情况。结果:通幽汤及活血行气拆方可显著抑制EC9706细胞增殖,48h作用最强,通幽汤全方IC50=1523μg.mL-1,活血行气拆方IC50=1001μg.mL-1;可抑制PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达,作用强弱依次为:活血行气拆方>通幽汤全方>滋阴养血拆方。结论:通幽汤抑制食管癌细胞增殖主要为活血行气类药物,根据"以方测证"理论,瘀血内结证与PI3K/AKT信号通路表达增强有关。

藤梨根提取物与奥沙利铂在诱导人食管癌细胞Ec9706细胞凋亡中的协同作用

目的:观察藤梨根提取物与第三代铂类奥沙利铂(L-OHP)对人食管癌Ec9706细胞株增殖的影响。方法:分别应用藤梨根正丁醇提取物与L-OHP单独应用以及联合应用于人食管癌Ec9706细胞株,并应用MTT法检测食管癌Ec9706细胞的抑制率,并且应用显微镜在镜下观察食管癌细胞株的形态变化;并且对细胞的凋亡率和细胞周期使用流式技术进行检测,且对食管癌细胞Ec9706株应用免疫细胞化学技术检测中细胞株内Bcl-2和Survivin蛋白的表达水平。结果:藤梨根提取物单用、奥沙利铂单用、以及联合应用均可对食管癌细胞Ec9706的增殖起到抑制作用。通过显微镜下观察食管癌细胞株发现Ec9706细胞的形态发生了改变,并且凋亡比率也显著增加;且藤梨根提取物与L-OHP连用后能起到协同增效的作用。而应用藤梨根提取物后食管癌细胞Ec9706中Bcl-2和Survivin蛋白的表达水平均受到了抑制。连用L-OHP后两种蛋白的阳性率表达均进一步降低。结论:藤梨根正丁醇提取物能显著抑制人食管癌细胞Ec9706细胞的增殖并且与L-OHP联用可有协同增效的作用,抑制作用明显增强,可能机制与Bcl-2和Survivin蛋白的下调有关。

组织蛋白酶B特异性siRNA对食管癌EC9706细胞组织蛋白酶B基因表达的影响

目的:探讨小分子干扰RNA(siRNA)对食管癌EC9706细胞组织蛋白酶B(CB)基因表达的影响。方法:设计并用体外转录方法合成针对CB基因的siRNA,转染EC9706细胞(设10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L3个转染浓度),分别培养24h、48h、72h(实验组),采用免疫细胞化学及原位杂交方法检测转染细胞中CB蛋白和mRNA表达的变化,并设正常对照、空白对照、无关对照。结果:不同浓度siRNA转染24h、48h、72hEC9706细胞CB蛋白表达量均较正常、空白及无关对照降低(P<0.05),以转染72h的抑制效应最为明显,但3者相比差异无统计学意义(P>0.05)。3个时间段内随浓度增加siRNA抑制效应增强,3者相比差异有统计学意义(P<0.05),正常对照、空白对照、无关对照均未表现出对CB蛋白表达的抑制效应。转染siRNA后部分细胞形态发生改变。结论:特异性siRNA能有效抑制EC9706细胞中CB蛋白和mRNA表达。

肝素酶特异性RNAi对人食管癌EC9706细胞肝素酶基因表达的影响

目的:探讨RNAi技术对人食管癌EC9706细胞肝素酶(heparanase,Hpa)基因表达的影响。方法:针对Hpa不同基因位点设计合成寡核苷酸,然后转录为小分子干扰RNA(siRNA),分别用浓度为10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L的siRNA经LipofectamineTM2000脂质体介导转染EC9706细胞72h,同时设无关序列组及不转染组。采用完整细胞原位杂交技术观察各组EC9706细胞中Hpa基因的表达。结果:siRNA可有效抑制人食管癌EC9706细胞Hpa基因的表达,以15μmol/L的siRNA作用效应最强,但不同浓度siRNA两两相比,差异均无统计学意义(P>0.05),不同浓度siRNA对Hpa基因表达的抑制效应均显著强于无关序列组及不转染组(P<0.05)。结论:RNAi技术可有效抑制人食管癌EC9706细胞Hpa基因的表达。

六君子汤对食管癌细胞株EC9706致血管生成的影响

目的研究六君子汤对食管癌血管生成的影响。方法 MTT法检测六君子汤醇提物对食管癌细胞株EC9706生长抑制作用,收集其500μg/m L质量浓度的EC9706细胞条件培养基用于鸡胚绒毛尿囊膜的血管生成、人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成的观察。ELISA法检测EC9706细胞和人脐静脉内皮细胞培养基上清中VEGF和IL-6含有量。结果六君子汤醇提物可明显抑制EC9706细胞增殖,具一定剂量依赖性,其IC50值为505.28μg/m L。六君子汤醇提物可减少EC9706细胞条件培养基所致鸡胚绒毛尿囊膜血管生成、人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和小管形成。六君子汤醇提物可减少EC9706细胞和内皮细胞IL-6及内皮细胞VEGF分泌。结论六君子汤醇提物可能通过干预EC9706细胞信号通路从而抑制血管生成的效应。

卡培他滨对食管癌细胞系EC9706细胞毒性和放射增敏作用的研究

目的:探讨卡培他滨对食管癌细胞系EC9706细胞毒性和放射增敏作用。方法:取健康成年家兔1只,以卡培他滨141mg/kg,对其进行灌胃,分别于灌胃前、后2.5～3h,取耳缘静脉血8～10mL,不加抗凝剂,并防止溶血和细菌污染,离心取血清-20℃保存备用;用CCK8分别检测不同量的加药血清和对照血清对食管癌细胞系EC9706细胞毒性,同时观察不同量的加药血清对食管癌细胞系EC9706的放射增敏作用。结果:加药血清对食管癌细胞系EC9706细胞有明显的抑制作用,其抑制作用48h达到高峰,2、4、6、8和10μL血清作用细胞48h后抑制率分别为14.29%、23.96%、50.59%、52.16%和53.96%(P均为0.00),72h其细胞毒性无增加;加药血清孵育2.5h后,在相同放射剂量作用下,不同量血清组的OD值均显著低于对照组(P值均为0.00),其增敏作用无明显的剂量依赖性。结论:卡培他滨对食管癌细胞系EC9706有明显的细胞毒性和放射增敏作用。

启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤对人食管癌EC9706细胞Caspase-3介导的细胞凋亡信号转导的影响

目的:研究启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤对人食管癌EC9706细胞增殖影响,并从Caspase-3介导的细胞凋亡信号转导通路探讨三方作用机制。方法:体外培养食管鳞癌细胞株EC9706细胞,分别加入启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤提取液培养处理细胞,通过MTT染色观察细胞增殖变化,通过Western blot法检测Caspase-3介导的细胞凋亡信号转导通路蛋白表达。结果:启膈散、沙参麦冬汤和通幽汤的IC50值分别是1462、1232、2875μg/m L,均可促进Caspase-3蛋白表达而诱导细胞凋亡,而Cyt.C蛋白表达较弱;启膈散和沙参麦冬汤对FADD、Fas、TNFR1和DR5蛋白表达有不同程度地影响。结论:三方可通过激活Caspase-3诱导细胞凋亡,其中启膈散主要通过非依赖FADD死亡受体途径,沙参麦冬汤主要通过依赖FADD死亡受体途径,通幽汤可能通过其他凋亡蛋白参与的上游信号途径而激活Caspase-3致细胞凋亡。

去甲斑蝥素诱导人食管癌Ec9706细胞凋亡及其可能的机制

目的:研究去甲斑蝥素对人食管鳞癌Ec9706细胞的致凋亡作用及其可能的作用机制,为去甲斑蝥素应用于临床抗癌治疗提供实验依据。方法:不同质量浓度去甲斑蝥素(0、5、10、20、40μg/ml)分别作用Ec9706细胞不同时间(12、24和48 h)后,MTT方法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡及Caspase-3和Survivin蛋白表达的变化。结果:去甲斑蝥素作用后Ec9706细胞呈现不同程度的增殖抑制,而且细胞增殖抑制程度随作用剂量及时间增加不断增强,40μg/ml去甲斑蝥素作用48 h时,Ec9706细胞增殖抑制率达(80.00±2.15)%。去甲斑蝥素显著诱导Ec9706细胞凋亡,其20μg/ml作用48 h时,Ec9706细胞的凋亡率达(38.57±1.76)%。去甲斑蝥素作用后,Ec9706细胞中Caspase-3蛋白水平显著增高,而Survivin蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论:去甲斑蝥素明显诱导食管癌Ec9706细胞凋亡,其作用机制可能与下调细胞Survivin蛋白及上调Caspase-3蛋白表达有关。

不同基因位点的人端粒酶RNA反义寡核苷酸对食管癌EC9706细胞增殖及端粒酶活性的影响

目的:探讨封闭人端粒酶RNA不同基因位点的硫代修饰性反义寡核苷酸(ASODN)对食管癌细胞增殖及端粒酶活性的影响。方法:采用阳离子脂质体介导的方法,将不同浓度(0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L和30μmol/L)的5条ASODN(ASODN1、ASODN2、ASODN3、ASODN4和ASODN5)和无关序列寡核苷酸(N -ODN)分别导入食管癌EC9706细胞中,应用MTT法及端粒酶活性的定性及定量检测法,测定ASODN对食管癌EC9706细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用。结果:5条ASODN和1条N ODN按照N ODN、ASODN4、ASODN5、ASODN2、ASODN1和ASODN3的顺序,对细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用逐渐增高(P<0.05)。结论:封闭hTR功能区的反义寡核苷酸可有效抑制食管癌细胞增殖及端粒酶活性。

全反式维甲酸对食管癌EC9706细胞NDRG1 mRNA和蛋白表达的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对食管癌细胞分化相关基因NDRG1表达的影响。方法:将10μmol/L ATRA作用于人食管癌EC9706细胞,应用免疫组织化学SP法和RT PCR方法分别检测对照组及ATRA作用1d、2d、3d及5d组NDRG1蛋白和mRNA的表达。结果:ATRA作用1d、2d、3d及5d组NDRG1mRNA相对含量分别为1.47±0.18、1.69±0.24、1.72±0.19和1.58±0.25,均高于对照组的1.08±0.10(P<0.05或0.01)。ATRA作用1d、2d、3d及5d组NDRG1蛋白表达积分分别为254±37、277±34、265±30和239±24,均高于对照组的164±29(P<0.01)。结论:ATRA可上调EC9706细胞分化相关基因NDRG1的表达,从而促进其分化。