青少年食蟹猴糖尿病模型的肝脏病理生理学研究

目的通过对胰岛素用量不足条件下链脲佐菌素诱导的青少年食蟹猴1型糖尿病模型肝脏病理生理学的研究,探讨长期高血糖所致青少年食蟹猴肝损伤特点及机制。方法通过静脉注射68 mg/kg的链脲佐菌素,诱导4只3岁的食蟹猴成为1型糖尿病模型,然后经长期的血糖监测和静脉糖耐量实验来评价该模型的可靠性及稳定性,造模4年后,对模型猴进行血生化、PAS染色、苏丹III染色及普通病理和超微病理等指标的检测,另外选取4只健康与模型猴年龄匹配的猴作为正常对照组,同时进行相应的检测。结果与正常对照组比较,糖尿病猴血清学检测指标中总胆汁酸、尿素氮、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、胆碱酯酶、乳酸脱氢酶、总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇明显升高。组织化学染色结果显示,与正常猴比较,糖尿病猴中央静脉区肝实质细胞肿胀,肝细胞PAS染色(糖原染色)加深,苏丹Ⅲ染色(脂肪染色)阳性细胞增多;电镜结果显示糖尿病猴肝细胞内胞质糖原颗粒增多;线粒体电子密度显著增高,结构不清;窦周隙内含有大量脂滴的肝星状细胞明显增多。结论在长期胰岛素用量不足血糖控制不理想的条件下,青少年食蟹猴1型糖尿病模型肝脏特异性的病理改变是肝糖原贮积和含有大量脂滴的肝星状细胞增生,这些病理改变与非酒精性脂肪肝病的病变特点存在显著不同,但其机制目前尚不清楚。

STZ诱导的中老年食蟹猴糖尿病模型的初步分析

目的初步探讨链脲佐菌素(STZ)诱导的中老年食蟹猴糖尿病模型造模前后的体重、血糖和血脂等指标的变化。方法 5只健康中老年食蟹猴,根据年龄分为两组:低剂量组(按体质量计,50 mg/kg STZ)4只和高剂量组(按体质量计,100 mg/kg STZ)1只。通过静脉快速推注STZ的方法来诱导中老年食蟹猴发生糖尿病,造模前后对动物体重、血糖和血脂等指标进行跟踪检测。结果通过静脉快速推注STZ能够在短时间内快速升高血糖并持续保持高血糖的状态,在外源胰岛素注射干预的情况下造模动物最长存活可达233 d,发病过程中出现了"三多一少"的糖尿病典型症状,并伴有高甘油三酯血症的发生。结论尽管与人类糖尿病的病理过程存在一定差异,造模发病较为急促,成模率较高,但STZ静脉注射诱导中老年食蟹猴发生糖尿病能够为人类糖尿病的基础研究及相关药效学评价提供食蟹猴动物疾病模型,仍具有一定的科研应用价值。

不同剂量链脲佐菌素诱导青少年食蟹猴糖尿病模型的特性

2～3岁青少年食蟹猴糖尿病模型是目前非人灵长类胰岛移植实验中最常用的受体.为探讨静脉注射不同剂量链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)对青少年食蟹猴病理生理方面的影响,从而发现最适合2～3岁青少年食蟹猴糖尿病模型的造模剂量,15只2～3岁青少年食蟹猴被分为3组,分别静脉注射60,68和100mg/kg STZ.在注射STZ前后,对实验猴的基础和糖刺激血糖、胰岛素、C肽水平及肝肾功能进行常规定期检测,同时为判断注射STZ后的胰岛损伤情况,于造模后1个月进行胰腺组织活检和胰岛免疫组织化学染色.实验结果显示,注射68和100mg/kgSTZ能够诱导青少年食蟹猴出现持续稳定的高血糖(空腹血糖>11.1mmol/L),并可导致几乎全部胰岛β细胞的丢失.而在注射60mg/kg STZ的2只食蟹猴中,只有1只食蟹猴出现持续性高血糖.此外,在接受3种不同剂量STZ注射后的第1周,3组食蟹猴全部表现出相似的轻微肝肾功能损伤,但在注射STZ后24h,接受100mg/kg STZ注射的食蟹猴的血清总胆汁酸水平明显高于接受68mg/kg STZ注射的食蟹猴(P<0.05).综合上述实验结果,本文证实,静脉注射68和100mg/kgSTZ能稳定安全地诱导出2～3岁青少年食蟹猴糖尿病模型,但为尽量减少造模药物对实验猴肝肾功能的影响,静脉注射68mg/kg STZ可能更适合于诱导2～3岁青少年食蟹猴糖尿病模型.此外,本实验结果还显示,按照体表面积计算STZ的注射剂量可能优于按照公斤体重计算,当注射剂量小于700mg/m2时,STZ不能稳定地诱导该年龄段食蟹猴成为糖尿病模型.

STZ诱导恒河猴糖尿病动物模型的建立

目的复制稳定的链脲佐菌素诱导糖尿病恒河猴动物模型。方法健康恒河猴5只,小剂量(30mg/kg)多次静脉注射链脲佐菌素,分别在注射后2、3个月进行葡萄糖耐量实验并连续观察血糖、胰岛素、C肽的变化。连续观察12个月。结果随着时间推移,动物出现典型的糖尿病症状。3只动物的血糖静脉注射1次后持续10周稳定,另外2只分别进行了第2、3次注射。动物血糖在12个月内平稳上升、胰岛素、C肽分泌持续下降。2个月时葡萄糖耐量减低明显(P<0.01)。结论小剂量多次注射STZ后恒河猴可出现持续、稳定的糖尿病表现,可作为相关研究的动物模型。

特殊染色及免疫组化双重染色在恒河猴糖尿病模型中的应用

目的在链脲佐菌素(STZ)诱导恒河猴糖尿病动物模型基础上,用特殊染色、免疫组化双染方法显示胰腺等组织中的特征性病变。方法健康恒河猴5只,小剂量(30 mg/kg)多次静脉注射STZ,濒死状态时将动物安乐死。取胰腺、心脏、肾脏、脾脏、肝脏、眼球、脑等器官制成石蜡切片,用HE、PAS、Masson、天狼星红和甲苯胺蓝等方法进行特殊染色,用免疫组化双重染色法同时显示胰岛A、B细胞。结果模型动物的胰岛萎缩,数量减少。Masson染色见外分泌部间质内纤维增生。局灶性慢性肾炎,病变区肾间质纤维组织增生,部分肾小球及肾小管萎缩。天狼星红染色见脾脏中央动脉管壁增厚。免疫组化双染见胰岛A胰高血糖素表达增多,胞浆呈棕褐色。B胰岛素表达减少,胞浆粉红色。结论 HE染色结合特殊染色和免疫组化双重染色可较好地对STZ诱导糖尿病动物模型进行组织学评价。

恒河猴糖尿病动物模型血清及组织中细胞因子的变化

目的探讨恒河猴糖尿模型病细胞因子的水平和变化规律。方法健康恒河猴5只,小剂量(30mg/kg)多次静脉注射链脲佐菌素(STZ),血糖稳定后3、9、12和19个月检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。安乐濒死状态的动物,取胰腺、肝脏、肾脏制成石蜡切片,用免疫组化染色法显示组织中IL-6、IL-10、TNF-α的表达,并对结果进行图像分析和统计学处理。结果造模后9个月动物血清中IL-10浓度显著降低(P<0.01)。IL-6、TNF-α水平在采样的各个时间点均显著高于造模前(P<0.01)。胰腺组织中IL-6中等强度着色,对照组弱阳性表达(P<0.05)。对照组IL-10强阳性表达,模型组弱阳性(P<0.01)。模型组TNF-α中等强度表达,对照组弱阳性(P<0.05)。模型组肝脏组织TNF-α中等阳性表达,对照组弱阳性(P<0.05)。结论小剂量多次注射STZ后恒河猴细胞因子的含量及变化与临床类似,可作为相关研究的动物模型。

长期高血糖对1型糖尿病食蟹猴模型肾脏病理学的影响

目的通过建立链脲佐菌素(STZ)诱导的1型糖尿病(T1DM)食蟹猴模型,观察长期高血糖对T1DM食蟹猴肾脏病理学的影响。方法将8只4岁雄性食蟹猴,随机分为对照组和模型组。4只食蟹猴作为对照组,4只食蟹猴通过注射STZ诱导构建T1DM模型作为模型组。运用HE染色、PAS染色观察肾脏病理改变,透射电镜观察肾脏肾小球超微结构,采用形态学计量分析测算肾小球面积、肾小球基底膜厚度、足细胞足突的相对数量以及平均面积。结果与对照组相比,模型组肾脏病理学改变:肾小球面积增大(P<0.01)、基底膜增厚,毛细血管袢受压,内皮细胞窗孔排列紊乱,系膜细胞增生,系膜基质增多、糖蛋白积聚,足突数量减少(P<0.001),足突平均面积减少(P<0.05),足细胞裂孔增宽,融合足突数量增加(P<0.001)。结论长期高血糖可致T1DM食蟹猴模型肾脏病理学改变。

恒河猴糖尿病模型肾脏相关血液、尿液指标的动态观察与分析

目的动态观察小剂量多次注射链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病恒河猴动物模型早期肾脏指标的变化。方法健康恒河猴5只,小剂量(30 mg/kg)多次静脉注射链脲佐菌素(STZ),血糖稳定大于7.0 mmol/L后每个月采集肾脏相关血清生化指标和尿常规。连续观察13个月。结果 5只动物的平均血糖在10w左右达到稳定,造模3个月后血糖值达到8.31±2.31 mmol/L,此后持续平稳上升。总蛋白、球蛋白、甘油三酯持续上升,分别在给药10个月、9个月出现显著性差异(P<0.05)。白球蛋白比值下降,在给药11个月开始出现显著性差异(P<0.05)。糖化血清蛋白(GSP)6个月出现显著性差异(P<0.05),9个月出现极显著性差异(P<0.01)。血糖与TP、GLOB、UREA、CR、Mg2+、GSP呈高度正相关关系,与A/G呈高度负相关关系。结论发现了与人类早期糖尿病肾病相似的血清学、尿液变化,可作为相关疾病发病机制、药效学等研究的可靠模型。

没食子酸氧钒对STZ诱导的糖尿病小鼠的降糖作用研究

为了探究没食子酸氧钒对STZ诱导的糖尿病小鼠的降糖作用,采用链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病小鼠模型。实验动物分为正常组、模型组、阳性组、GAOV高、中、低剂量组以及VOSO4高、中、低剂量组,造模成功后灌胃28d,监测糖尿病小鼠饮食量、饮水量、体重和FBG的变化,测定小鼠血清生化指标(UREA、Cr、ALB、ALT)和血脂四项指标(CHO、TG、LDL-C、HDL-C),计算胰腺、肝、肾、脾等脏器指数,采用SPSS19.0分析软件对实验数据进行单因素方差分析。结果显示,与模型组相比,GAOV组小鼠体重、饮食饮水量、FBG及各血清生化指标、血脂四项指标变化均存在显著性差异(P<0.05)。其中,GAOV中剂量组与模型组有极显著性差异(P<0.01),与阳性组无显著性差异(P>0.05)。综上所述,没食子酸氧钒对STZ诱导的糖尿病小鼠有较好的体内降糖活性,且降糖作用起效快、效果好,为糖尿病药物的开发提供了新的方向。

EGCG抗糖尿病心肌病小鼠心肌组织中氧化应激损伤作用机制的探讨

目的：探讨儿茶素没食子酸酯（EGCG）对糖尿病小鼠高糖诱导的心肌组织氧化应激损伤的影响。方法：采用雄性C57小鼠给予高糖高脂饮食6周后,按70 mg·kg^-1的标准腹腔注射链脲佐菌素（STZ）,连续5 d。空腹血糖（FBG）〉16.7 mmol·L^-1视为造模成功。后随机分为空白组,模型组,EGCG低、中、高剂量组（50,100,200 mg·kg^-1）,N-乙酰半胱氨酸（NAC,100 mg·kg^-1）组,腹腔注射,隔天1次,连续4周。分别测定小鼠体重、心脏质量、心脏质量指数、血糖值;镜下观察心肌细胞及组织病理变化;酶联免疫吸附法（ELISA）检测心肌组织活性氧（ROS）,超氧化物歧化酶（SOD）,丙二醛（MDA）及炎性因子白细胞介素（IL）-1β,IL-6,肿瘤坏死因子（TNF）-α的含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）测定心肌组织中NF-E2相关因子2（Nrf2）介导的抗氧化通路中血红素氧合酶-1（HO-1）和醌氧化还原酶1（NQO1）的表达。结果：与模型组相比,EGCG（100 mg·kg^-1）组能一定程度降低血清中的FBG水平（P〈0.05）;抑制心肌细胞肥大及心肌组织纤维化程度,增强SOD活性,降低MDA,ROS含量（P〈0.05）;降低组织中炎性因子IL^（-1）β,IL-6,TNF-α的含量（P〈0.05）;激活心肌细胞核内Nrf2介导的抗氧化通路,作用优于强抗氧化剂NAC。结论：EGCG对高糖诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,其机制可能与EGCG的抗氧化应激、抗炎作用有关。