香加皮杠柳苷诱导人食管癌细胞凋亡及其作用机制的研究

目的:探讨中药香加皮醇提物杠柳苷诱导人食管癌细胞凋亡及其作用机制。方法:应用MTT法检测香加皮醇提物杠柳苷对食管癌细胞TE-13、Eca-109、TE-1和TE-10增殖的影响,并计算其对食管癌细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50);在光学显微镜下观察经杠柳苷处理后细胞的形态学改变;Wright-Giemsa染色观察Eca-109细胞凋亡的形态学变化;FCM检测杠柳苷对Eca-109细胞凋亡的影响;RT-PCR法检测经杠柳苷处理后细胞凋亡相关基因mRNA表达的改变;caspase-3/7蛋白酶活性检测试剂盒检测细胞caspase蛋白酶活性的变化。结果:香加皮醇提物杠柳苷对人食管癌细胞的增殖具有明显的抑制作用;经杠柳苷处理后,Eca-109细胞出现明显的凋亡形态学变化,与未处理组比较,细胞凋亡率明显上升(P<0.05);经杠柳苷处理后,Eca-109细胞中survivin和bcl-2 mRNA的表达下调(P<0.05),bax mRNA的表达水平升高(P<0.05),xiap、caspase-3和caspase-7 mRNA的表达水平无明显变化,而caspase-3/7蛋白酶活性明显增加(P<0.05)。结论:杠柳苷可明显抑制食管癌细胞的增殖,其作用机制可能是通过下调凋亡抑制基因的表达而诱导细胞凋亡。

香加皮杠柳苷通过溶酶体途径诱导胃癌MGC-803细胞凋亡

目的探讨香加皮杠柳苷(periplocin extracted from cortex periplocae,CPP)是否通过溶酶体途径诱导胃癌细胞凋亡。方法 200、100、50 ng/ml香加皮杠柳苷作用于MGC-803细胞24和48 h后,MTS法检测细胞的增殖情况,用TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测不同浓度香加皮杠柳苷作用于MGC-803细胞24 h后Caspase-3和Caspase-9的表达情况,吖啶橙染色检测溶酶体释放情况,免疫荧光法检测组织蛋白酶B(Cathepsin B)的表达变化情况。结果与空白对照组相比,50、100、200 ng/ml香加皮杠柳苷作用于MGC-803细胞24、48 h后,均具有增殖抑制作用,24 h增殖率分别为[(66.43±1.67)%、(55.39±3.63)%、(37.06±0.57)%vs.(100.14±8.49)%,P均<0.05],48 h增殖率分别为[(38.16±3.26)%、(32.00±1.83)%、(24.75±1.57)%vs.(100.33±8.98)%,P均<0.05]。与空白对照组相比,50、100、200 ng/ml香加皮杠柳苷作用于MGC-803细胞24 h后,细胞凋亡率显著增加,凋亡率为[(28.56±6.96)%、(33.70±4.60)%、(60.42±4.48)%vs.(2.23±1.03)%,P均<0.05],Caspase-3的活性裂解片段和Caspase-9表达量升高,溶酶体膜的完整性被破坏,Cathepsin B由溶酶体释放到细胞质中。结论香加皮杠柳苷可通过溶酶体途径诱导胃癌细胞凋亡。

香加皮杠柳苷通过抑制Wnt/β-catenin信号通路诱导结肠癌细胞SW480凋亡

背景与目的:Wnt/β-catenin信号通路在人类肿瘤尤其在大肠癌的发生发展中起着重要作用。本研究分析了香加皮杠柳苷(periplocin extracted from cortex periplocae,CPP)对人结肠癌细胞SW480增殖的抑制作用,及对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。方法:MTT法检测CPP对SW480细胞增殖的影响,流式细胞技术检测细胞周期的变化和凋亡。Western blot法检测CPP处理组与对照组细胞总蛋白、细胞浆蛋白及细胞核蛋白中β-catenin表达变化,电泳迁移率改变法分析CPP作用后SW480细胞核TCF复合物与其特异性DNA结合序列结合能力变化。半定量RT-PCR法检测CPP作用后细胞中β-catenin、survivin、c-myc和cyclin D1 mRNA的表达。结果:CPP明显抑制SW480细胞增殖(P<0.01),并呈时间和浓度依赖性;0.5μg/mLCPP可将SW480细胞阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡(P<0.05)。CPP作用后SW480细胞总蛋白、胞浆蛋白及细胞核蛋白中的β-catenin表达均明显降低(P<0.01),细胞核中TCF复合物与其特异性DNA结合序列结合能力受到抑制,其下游靶基因mRNA表达水平下降(P<0.01),而β-catenin mRNA表达未见明显改变。结论:CPP可明显抑制SW480细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制与抑制细胞Wnt/β-catenin信号转导通路有关。

香加皮杠柳苷抑制Stat5信号通路诱导SMMC-7721细胞凋亡的实验研究

目的研究香加皮提取物杠柳苷对Stat5信号通路的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制。方法MTT比色法检测细胞增殖活性,流式细胞术观察肿瘤细胞的周期变化和凋亡,western blot法检测杠柳苷作用前后人肝癌细胞株SMMC-7721细胞内Stat5蛋白质表达。结果杠柳苷明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,使细胞周期停滞在G2/M期,并能够诱导SMMC-7721细胞凋亡。杠柳苷作用后,细胞核内的Stat5蛋白量降低而胞浆中的量未见明显改变。结论香加皮杠柳苷能够抑制Stat5信号转导通路,进而抑制SMMC-7721细胞的增殖并诱导其凋亡。

香加皮杠柳苷对MCF-7细胞周期及p21^(WAF1/CIP1)表达的影响

目的研究香加皮杠柳苷(CPP)对人乳腺癌MCF-7细胞周期及p21WAF1/CIP1表达的影响,探讨其抗肿瘤作用及作用机制。方法采用MTT法检测不同浓度CPP(1.25、2.50、5.00、10.00、20.00ng/ml)作用不同时间(24、48、72h)对MCF-7细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞术分析不同浓度CPP(2.50、5.00、10.00ng/ml)分别作用于MCF-7细胞6、12、24、48、72h对肿瘤细胞周期的影响;并采用RT-PCR和免疫细胞化学技术检测细胞周期相关因子p21WAF1/CIP1的表达。结果 CPP能明显抑制MCF-7细胞的增殖,并呈浓度及时间依赖性,作用于MCF-7细胞48h的IC50为(4.88±0.16)ng/ml。流式细胞术结果显示,CPP作用MCF-7细胞24h时,G0/G1期细胞明显增多,而S期和G2/M期细胞显著减少,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),其中5.00ng/ml组G0/G1期细胞由对照组的(49.33±3.25)%升高至(79.47±2.40)%,S期和G2/M期细胞由对照组的(28.47±1.59)%和(22.20±2.09)%分别下降至(10.13±3.26)%和(10.40±1.41)%。经CPP处理的MCF-7细胞中p21WAF1/CIP1mRNA的表达明显增强,p21WAF1/CIP1/β-actin光吸度比值与对照组相比明显增高(P<0.05)。免疫细胞化学结果显示,CPP组MCF-7细胞中p21WAF1/CIP1蛋白的表达随作用浓度的增加而增强,其中10.00ng/ml组肿瘤细胞p21WAF1/CIP1的表达呈强阳性。结论香加皮杠柳苷(CPP)具有显著的体外抗肿瘤作用,且有效剂量很小,其IC50仅为(4.88±0.16)ng/ml。CPP可使MCF-7细胞发生G0/G1期阻滞,并可使细胞周期相关基因p21WAF1/CIP1的mR-NA及蛋白表达增强,提示阻滞细胞周期可能是CPP体外抗肿瘤的作用机制之一。

香加皮杠柳苷对荷瘤小鼠的免疫调节作用

目的:研究香加皮杠柳苷(CPP)对荷瘤小鼠的免疫调节作用及其作用机制。方法:建立BALB/c小鼠H22皮下移植瘤,观察低、中、高剂量CPP(0.25、0.50、1.00mg/kg)对荷瘤小鼠免疫器官的影响,应用流式细胞术检测各组小鼠脾T淋巴细胞亚群的分布,应用MTT法检测ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖活性,用ELISA试剂盒测定各组荷瘤小鼠血清中细胞因子TNF-α、IL-2和IL-12的含量。结果:对照组荷瘤小鼠的胸腺指数及脾脏指数均明显低于未荷瘤正常小鼠(P<0.05),而CPP组荷瘤小鼠的胸腺指数及脾脏指数较对照组明显增高,甚至高于正常对照组(P<0.05)。CPP对荷瘤小鼠体内CD8+T细胞数量无影响,但可明显上调CD3+、CD4+T细胞数及CD4+/CD8+比值,其中CD3+、CD4+细胞百分率与正常小鼠无差别(P>0.05),CD4+/CD8+比值高于正常小鼠(P<0.05)。CPP可明显增强ConA诱导的荷瘤小鼠脾淋巴细胞的增殖能力,SI甚至超过正常对照组(P<0.05)。不同剂量CPP组小鼠血清中TNF-α、IL-2和IL-12水平均较对照组明显增高(P<0.05),并随剂量增加呈升高趋势,至接近或超过正常小鼠水平。结论:CPP可保护荷瘤小鼠的免疫器官不受损害,并可明显提高CD4+T细胞百分率和CD4+/CD8+比值,增强荷瘤小鼠T细胞增殖能力,促进细胞因子TNF-α、IL-2和IL-12的产生,表明CPP具有显著的免疫增强作用。

香加皮杠柳苷对人肺癌QG56细胞抑制作用的研究

目的：研究香加皮杠柳苷（CPP）对人肺癌QG56细胞的抑制作用及其作用机制。方法体外培养人肺癌QG56细胞，设对照组和终浓度为1.25、2.50、5.00、10.00、20.00μg/L的CPP（CPP 1~5）组，每组设3个平行孔，分别培养24、48、72 h。采用MTT法检测CPP对QG56细胞增殖的影响；倒置显微镜观察CPP处理前后细胞形态变化；流式细胞术检测细胞凋亡和周期分布；RT-PCR法检测CPP作用后QG56细胞中凋亡相关基因bax mRNA表达情况；免疫细胞化学法检测CPP对QG56细胞bax蛋白表达的影响。结果随CPP浓度的增加、作用时间的延长，细胞增殖抑制率明显增高。显微镜下可见CPP处理后的QG56细胞变圆，皱缩，呈悬浮状态。随CPP浓度的增加，G0/G1期细胞比例增高，而S期和G2/M期细胞比例减少, QG56细胞凋亡率明显增高。CPP 2组经CPP作用48 h后，细胞凋亡率高于对照组，CPP 3组经CPP作用24 h后，细胞凋亡率均高于对照组，CPP 4组经CPP作用12 h后，细胞凋亡率均高于对照组（均P＜0.05）。CPP 2~4组经CPP作用48 h时QG56细胞中bax mRNA和蛋白的表达明显增强。结论 CPP可通过阻滞细胞周期和诱导凋亡发挥对人肺癌QG56细胞的抑制作用。

香加皮杠柳苷对肺癌A549细胞凋亡及Survivin表达的影响

目的研究香加皮杠柳苷(CPP)对人肺癌A549细胞凋亡及survivin表达的影响,探讨其抗肿瘤作用及作用机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测1.25,2.50,5.00,10.00,20.00 ng·m L-1CPP处理24,48,72 h对人肺癌A549细胞的抑制作用;应用流式细胞术分析不同浓度CPP(2.50,5.00,10.00 ng·m L-1)分别作用于A549细胞6,12,24,48,72 h对细胞凋亡和凋亡率的影响;应用吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)荧光染色法和透射电镜观察CPP处理前后A549细胞凋亡的形态学及超微结构变化;采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测CPP作用后A549细胞中凋亡抑制基因survivin的mRNA表达情况;应用Western blot检测CPP对A549细胞survivin蛋白表达的影响。结果 CPP能显著抑制人肺癌A549细胞的生长,最大抑制率(93.46±2.35)%。流式细胞术结果显示,CPP处理组可见典型的凋亡峰,与对照组比较,A549细胞的凋亡率明显升高(P<0.05)。荧光显微镜下可见CPP处理组A549细胞呈橘红色的凋亡细胞形态。透射电镜下可见经CPP处理的A549细胞体积变小,出现细胞质凝缩,核内染色质凝聚边集于核膜,内质网扩张,细胞质空泡化等凋亡细胞的特征性超微结构改变。RT-PCR结果显示,经CPP处理的A549细胞中survivin mRNA表达降低(P<0.05),10.0 ng·m L-1CPP组survivin mRNA表达由对照组的(0.928±0.016)降至(0.251±0.012);Western blot结果显示CPP组细胞中survivin蛋白表达明显减弱。结论 CPP可诱导人肺癌A549细胞发生凋亡,可通过下调survivin基因的mRNA和蛋白表达而发挥诱导细胞凋亡作用。

香加皮杠柳苷对结肠癌细胞SW480体内外生长的影响

背景与目的:观察香加皮杠柳苷(periplocin extracted fromcortex periplocae,CPP)对人结肠癌细胞SW480体内外生长的抑制作用。材料与方法:应用MTT法检测CPP不同浓度(0.125、0.25、0.5、1.0、2.0μg/ml)处理SW480细胞后,对细胞增殖的影响;并于CPP(0.5μg/ml)处理SW480细胞24 h后用光学显微镜及透射电镜观察细胞凋亡形态学变化;免疫细胞化学检测细胞Survivin蛋白表达变化。采用裸鼠移植瘤模型进行体内移植瘤抑制实验。以上各实验均设立对照组。结果:与对照组比较,CPP对SW480细胞增殖具有明显的抑制作用(P<0.01),并呈剂量和时间依赖效应;CPP处理SW480细胞后,细胞出现典型的细胞凋亡形态学改变;CPP可明显下调SW480细胞survivin蛋白表达阳性率和表达水平(P<0.01);以30 mg/kg CPP对SW480细胞裸鼠移植瘤进行治疗后,荷瘤小鼠的肿瘤重量和体积均被明显抑制,抑瘤率为61.41%(P<0.01)。CPP治疗组小鼠的移植瘤组织出现明显炎性细胞浸润和坏死性变化。结论:CPP对人结肠癌细胞SW480的体内外生长均具有明显抑制作用,其作用机制可能与抑制细胞survivin蛋白表达、诱导细胞凋亡有关。

香加皮杠柳苷联用TRAIL对胃癌SGC-7901和MGC-803细胞的作用及其机制

目的:探讨香加皮杠柳苷(cortex periplocae,CPP)联用肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对胃癌细胞的作用及其机制。方法:人胃癌细胞系SGC-7901、MGC-803培养完成后,采用50、100、200 ng/ml的CPP和1μg/ml的TRAIL单用或联合处理。MTS法检测SGC-7901和MGC-803细胞的增殖情况,流式细胞术检测其凋亡率,Western boltting检测pro-BID、Mcl-1、cleaved caspase-3、DR4、DR5的表达水平。结果:SGC-7901和MGC-803细胞经CPP(50、100、200 ng/ml)和TRAIL(1μg/ml)联合处理24 h后,细胞增殖率明显低于空白对照组和对应的CPP各剂量单独处理组(P<0.05或P<0.01)。SGC-7901和MGC-803细胞凋亡率均明显高于空白对照组和对应的CPP各剂量单独处理组(P<0.05或P<0.01)。SGC-7901和MGC-803细胞中pro-BID、Mcl-1表达水平明显降低(均P<0.05),cleaved caspase-3表达水平明显升高(P<0.05),DR4和DR5受体的表达水平升高(均P<0.05)。结论:CPP协同TRAIL可明显诱导人胃癌SGC-7901和MGC-803细胞凋亡,增强人胃癌细胞对TRAIL的敏感性。

香加皮杠柳苷对SW480细胞在裸鼠体内的成瘤抑制作用及其机制研究

背景与目的:研究香加皮杠柳苷(periplocin extracted from cortex periplocae,CPP)对人结肠癌SW480细胞株在裸鼠体内的成瘤抑制作用及其机制。材料与方法:将SW480细胞经皮下接种Balb/c-nu/nu裸小鼠,构建裸鼠SW480细胞荷瘤动物模型,观察CPP作用后移植瘤体积和重量的变化,HE染色光镜下观察移植瘤组织形态学变化,免疫组织化学方法检测瘤组织内Wnt/β-catenin信号通路中核心成分β-catenin及其下游靶蛋白Survivin和C-myc表达的变化。结果:CPP在体内能明显抑制SW480细胞荷瘤小鼠移植瘤的生长,其肿瘤体积和重量均被明显抑制,抑瘤率为61.41%(P<0.01)。CPP治疗组小鼠的移植瘤组织出现明显炎性细胞浸润和坏死性变化;肿瘤组织内β-catenin、Survivin和C-myc蛋白表达水平明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论:CPP可抑制结肠癌细胞SW480在小鼠体内的增殖,其作用机制可能与Wnt/β-catenin信号分子的表达下调有关。

香加皮杠柳苷对小鼠骨髓瘤细胞增殖、凋亡及移植成瘤的影响及作用机制

目的研究香加皮杠柳苷(CPP)对小鼠骨髓瘤细胞增殖、凋亡及移植成瘤的影响及作用机制。方法通过用不同浓度的香加皮杠柳苷对SP2/0小鼠骨髓瘤细胞及小鼠体内移植瘤进行干预处理,MTT法检测CPP处理的SP2/0小鼠骨髓瘤细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测小鼠骨髓瘤细胞的凋亡率,Western blot检测小鼠骨髓瘤细胞及移植瘤中IL-6和DKK1蛋白的表达水平。结果不同浓度CPP能抑制SP2/0小鼠骨髓瘤细胞增殖,加速SP2/0小鼠骨髓瘤细胞凋亡,在裸鼠体内,不同浓度CPP对抑制骨髓瘤移植成瘤,同时降低骨髓瘤细胞和移植瘤中IL-6和DDK1蛋白的表达水平。结论香加皮杠柳苷能够通过抑制IL-6和DDK1表达,阻断Wnt信号来达到治疗小鼠骨髓瘤的作用,有望成为治疗多发性骨髓瘤及骨髓瘤骨病的新药物。

香加皮杠柳苷对胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响

目的 探究香加皮杠柳苷(CPP)对胶质瘤U251细胞增殖、凋亡和自噬及对磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的影响。方法 将胶质瘤U251细胞分为空白对照组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组、LY294002+高剂量实验组。低、中、高剂量实验组细胞分别用25、50、100 ng·mL^(-1) CPP处理;LY294002+高剂量实验组细胞用2μg·mL^(-1) LY294002+100 ng·mL^(-1) CPP处理。用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖情况;用流式细胞术检测细胞凋亡情况;用蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞增殖、凋亡、自噬及PI3K/Akt信号通路相关蛋白的表达情况。结果 空白对照组和低、中、高剂量实验组细胞抑制率分别为(0.00±0.00)%、(8.12±0.84)%、(25.78±3.68)%和(42.65±5.11)%;细胞增殖核抗原-67(Ki67)蛋白表达水平分别为0.85±0.05、0.69±0.08、0.38±0.06和0.21±0.03;细胞凋亡率分别为(4.68±0.52)%、(13.24±1.47)%、(18.25±2.23)%和(27.47±3.26)%;B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平分别为0.23±0.04、0.42±0.06、0.67±0.07和0.90±0.09;自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1)蛋白表达水平分别为0.43±0.04、0.62±0.07、0.89±0.07和1.13±0.11。低、中、高剂量实验组上述指标与空白对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。高剂量实验组、LY294002+高剂量实验组细胞抑制率分别为(45.23±6.42)%和(29.47±3.47)%;Ki67蛋白表达水平分别为0.22±0.04和0.38±0.05;细胞凋亡率分别为(27.69±3.15)%和(15.37±1.82)%;Bax蛋白表达水平分别为0.87±0.10和0.57±0.05;Beclin1蛋白表达水平分别为1.10±0.13和0.75±0.06。高剂量实验组上述指标与LY294002+高剂量实验组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 CPP可抑制胶质瘤U251细胞增殖,并诱导细胞凋亡和自噬,可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关。

香加皮提取物杠柳苷抑制SMMC-7721细胞Stat3信号通路诱导细胞凋亡的研究

目的研究香加皮提取物杠柳苷对Stat3信号通路的影响,及其诱导细胞凋亡的分子机制。方法MTT比色法检测人肝癌细胞SMMC-7721增殖活性,流式细胞术分析肿瘤细胞的周期变化和凋亡,Western blot检测细胞内Stat3蛋白表达,RT-PCR检测细胞Mcl-1、Survivin和XIAP mRNA的表达。结果杠柳苷可明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,诱导SMMC-7721细胞凋亡,并使细胞周期停滞在G2/M期。杠柳苷作用后,细胞核内Stat3量降低,而细胞质中的量未见明显改变,细胞内Mcl-1、Survivin和XIAP基因的表达明显降低,并呈时间依赖性。结论香加皮提取物杠柳苷通过抑制Stat3信号转导通路和Mcl-1、Survivin和XIAP mRNA的表达,进而抑制SMMC-7721细胞的增殖,诱导其凋亡。

香加皮杠柳苷通过调控circFMN2表达对宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨香加皮杠柳苷(CPP)对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡的影响及其对circFMN2的调控作用。方法 体外培养人宫颈癌细胞HeLa,加入不同剂量的CPP处理细胞,分别将si-NC、si-circFMN2转染至HeLa细胞,分别将pcDNA、pcDNA-circFMN2转染至HeLa细胞后加入CPP处理细胞;采用MTT法检测细胞增殖抑制率;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用qRT-PCR法检测癌旁组织、宫颈癌组织及HeLa细胞中circFMN2的表达量;Western blot法检测Ki-67、Bcl-2、Bax蛋白表达量。结果 CPP可显著提高细胞增殖抑制率、凋亡率及Bax蛋白水平(P<0.05),显著降低Ki-67、Bcl-2蛋白水平(P<0.05),且呈剂量依赖性;与癌旁组织比较,宫颈癌组织中circFMN2的表达水平显著升高(P<0.05);CPP可显著降低circFMN2的表达水平(P<0.05),且呈剂量依赖性;转染si-circFMN2可显著提高细胞增殖抑制率、凋亡率及Bax蛋白水平(P<0.05),降低Ki-67、Bcl-2蛋白水平(P<0.05);转染pcDNA-circFMN2可明显逆转CPP对宫颈癌细胞的增殖和凋亡作用。结论 香加皮杠柳苷可通过抑制circFMN2的表达而抑制宫颈癌细胞增殖并促进细胞凋亡。