香椿子多酚经STAT3/COX-2信号通路对大鼠缺血性脑卒中损伤的保护作用机制

目的探讨香椿子多酚(PTSS)通过信号转导与转录激活因子(STAT)3/环氧化酶(COX)-2信号通路对大鼠缺血性脑卒中损伤的保护作用。方法将75只SD大鼠随机分为NC组、Model组、PTSS组(200 mg/kg PTSS)、白细胞介素(IL)-6组(0.5 mg/kg IL-6抗体)、PTSS+IL-6组(200 mg/kg PTSS和0.5 mg/kg IL-6抗体),每组15只,除NC组外,其他组均利用改良的Longa线栓法构建缺血性脑卒中大鼠模型,成功造模后,进行相应药物处理,NC组、Model组灌胃等体积0.5%羧甲基纤维素钠及尾静脉注射等体积生理盐水,每天1次,连续7 d。末次给药结束后,采用Zea-Longa评分系统评估大鼠神经功能;2,3,5氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测脑梗死体积百分率;苏木素-伊红(HE)染色检测海马CA1区病理变化;试剂盒检测脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;TUNEL染色法检测脑组织神经细胞凋亡情况;Western印迹检测脑组织中p-STAT3、STAT3、COX-2蛋白。结果与NC组相比,Model组脑组织海马CA1区神经元结构严重受损,核变形、萎缩,神经细胞数量减少,细胞排列松散,脑梗死体积百分率、神经功能评分、MDA水平、神经细胞凋亡率、p-STAT3/STAT3及COX-2蛋白表达明显升高,SOD活性明显降低(P<0.05);与Model组相比,PTSS组脑组织海马CA1区病理损伤得到显著改善,脑梗死体积百分率、神经功能评分、MDA水平、神经细胞凋亡率、p-STAT3/STAT3及COX-2蛋白表达水平显著降低,SOD水平显著升高,而IL-6组相应指标与上述相反(P<0.05);与PTSS组比较,PTSS+IL-6组脑组织海马CA1区病理损伤加重,脑梗死体积百分率、神经功能评分、MDA水平、神经细胞凋亡率、p-STAT3/STAT3及COX-2蛋白表达水平显著升高,SOD水平显著降低(P<0.05)。结论PTSS可能通过抑制STAT3/COX-2减轻大鼠缺血性脑卒中损伤。

香椿子多酚对6-OHDA所致帕金森病大鼠模型的抗炎和神经保护作用

目的:观察香椿子多酚(polyphenols from toona sinensis seeds,PTSS)抑制神经炎症反应,对黑质多巴胺能神经元的保护作用。方法:脑立体定向注射6-羟多巴胺(6-OHDA)至右侧纹状体,制备帕金森病(Parkinson’s disease,PD)大鼠模型。将成模大鼠随机分为模型组和PTSS组,另10只正常大鼠设为对照组,PTSS组每日PTSS灌胃2 ml,另外两组大鼠等体积量生理盐水灌胃,1/d次,连续30 d。免疫组织化学法观测大鼠黑质多巴胺能(酪氨酸羟化酶TH阳性)神经元、星形胶质细胞(GFAP阳性)、小胶质细胞(CD11b阳性)形态和数量变化。RT-PCR和Western Blot分别检测黑质肿瘤坏死因子(TNF-α)和环氧化酶-2(COX-2)在mRNA和蛋白水平上的变化。结果:免疫组织化学结果显示,与对照组比较,模型组和PTSS组大鼠黑质TH阳性细胞数量显著下降、黑质CD11b和GFAP免疫反应阳性细胞数量明显增多(P<0.05)。中脑黑质TNF-α和COX-2蛋白含量显著升高;RT-PCR检测TNF-αmRNA和COX-2 mRNA表达量的结果与Western Blot一致。与模型组比较,PTSS组大鼠旋转圈数明显减少(P<0.05)、黑质TH阳性细胞数量显著增多,CD11b、GFAP阳性细胞数量明显下降,TNF-α和COX-2阳性表达光密度值降低;黑质中TNF-α和COX-2蛋白含量及其mRNA表达量显著下降。结论:PTSS能够抑制胶质细胞活化,减轻神经炎症,有效保护黑质DA能神经元。

大孔树脂静态吸附香椿子多酚的热力学与动力学特征

目的研究大孔树脂静态吸附香椿子多酚的热力学与动力学特征。方法福林酚法测定香椿子多酚含有量,考察大孔树脂(DM130、AB-8、HPD400、HPD450、HPD-826)的吸附效果,绘制等温线、动力学的静态吸附曲线。结果HPD400大孔树脂的吸附符合Freundlich、Langmuir方程,为吸热、熵增、可逆和自发进行的吸附,可用准二级动力学方程表示吸附动力学规律,其主要速控步骤为液膜扩散,吸附活化能为0.937 k J/mol。结论 HPD400大孔树脂对香椿子多酚有较好的吸附性能。

香椿子中多酚类成分体外抗氧化作用研究

[目的]研究香椿子[Toona sinensis(A.Juss)Roem]多酚的体外抗氧化作用。[方法]采用还原K3Fe(CN)6法对香椿子总多酚提取物的还原力进行测定,并测定香椿子多酚对feton反应产生的羟基自由基(.OH)、邻苯三酚自氧化产生的超氧阴离子自由基(O2-.)及Fe2+诱发卵黄低密度脂蛋白(LDL)多不饱和脂肪酸(PUFA)过氧化产生的烷氧基(LO.)和烷过氧基(LOO.)的清除作用,来研究香椿子多酚的体外抗氧化作用。[结果]香椿子多酚具有良好的还原能力,对羟基自由基(.OH)、超氧阴离子自由基(O2-.)、烷氧基(LO.)和烷过氧基(LOO.)均有明显的抑制作用,且呈一定的量效关系。香椿子多酚清除自由基能力比抗坏血酸弱,但是总还原能力强于抗坏血酸。[结论]香椿子多酚体外有明显的抗氧化作用。

香椿子多酚通过p38 MAPK通路抑制6-OHDA诱导的神经炎症反应

目的:研究香椿子多酚(PTSS)通过调节p38促分裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路抑制神经毒素6-羟多巴胺(6-OHDA)所诱导的PC12细胞帕金森病(PD)模型的神经炎症反应。方法:将PC12细胞分为四组:对照组、模型组(6-OHDA 100μmol/L)、PTSS低剂量组(6-OHDA+PTSS 100μmol/L)、PTSS高剂量组(6-OHDA+PTSS 200μmol/L)。倒置显微镜下观察各组PC12细胞形态学的变化;采用细胞计数CCK-8法检测细胞活性;免疫细胞化学染色法和Western Blot检测诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2(COX-2)、核因子κB p65(NF-κB p65)、p38 MAPK和p-p38 MAPK的表达变化。结果:(1)细胞形态观察显示:与对照组相比,6-OHDA模型组细胞胞体出现空泡,皱缩变形颜色暗淡,部分细胞折光性增高,细胞死亡数目明显增多,细胞聚集成片。PTSS低剂量组,细胞状态明显改善。(2)模型组PC12细胞活力显著降低,而PTSS能有效抑制PC12细胞活力的降低(P<0.05),PTSS低剂量组比高剂量组改善效果更为显著(P<0.05)。(3)与对照组比较,模型组细胞iNOS、COX-2、NF-κB p65、p38 MAPK和p-p38 MAPK表达明显升高,而PTSS组上述分子表达明显降低。结论:PTSS可有效逆转6-OHDA导致的PC12细胞损伤,其机制可能与下调p38 MAPK信号通路从而抑制神经炎症反应有关。

香椿子多酚通过抑制P38MAPK信号通路减轻帕金森病大鼠的神经炎症反应

目的探讨香椿子多酚(PTSS)对帕金森病(PD)大鼠神经炎症的抑制作用及机制。方法成年雄性SD大鼠单侧纹状体内注射6-疑多巴胺(6-OHDA)造模。造模成功大鼠随机分为模型组、PTSS处理组,另设一组正常大鼠为对照组,每组10只。30 d后,采用阿朴吗啡(APO)腹腔注射诱导大鼠的旋转行为,检测各组大鼠的行为改变。免疫组织化学染色法观测各组大鼠黑质酪氨酸務化酶(TH)阳性的多巴胺(DA)能神经元、钙离子结合接头蛋白分子l(Ibal)阳性的小胶质细胞、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)阳性的星形胶质细胞形态和数量变化;免疫组织化学染色法检测黑质诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、核因子KBp65(NF-KBp65)、P38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和磷酸化的p38MAPK(p-p38MAPK)的表达;Western blot法检测大鼠黑质TH、GFAP、p38MAPK、p-p38MAPK蛋白水平。结果PTSS处理组大鼠的旋转圈数较模型组明显减少。模型组大鼠损毁侧黑质TH阳性细胞较对照组显著减少,PTSS处理后,TH阳性细胞数量以及蛋白表达明显增加。与对照组相比,模型组大鼠损毁侧黑质Ibal、GFAP、iNOS、NF-kB、p38MAPK和p-p38MAPK蛋白含量显著增加。PTSS处理后,上述蛋白的表达均明显减弱,蛋白含量显著降低。结论PTSS通过抑制p38MAPK信号通路,减少炎症因子的表达,对PD大鼠DA能神经元起保护作用。

香椿子多酚通过JNK通路抑制6-羟多巴胺诱导PC12细胞炎症损伤

目的研究香椿子多酚(PTSS)通过c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路调节神经毒素6-羟多巴胺(OHDA)诱导的PC12细胞炎症损伤。方法将PC12细胞分为对照组、模型组(6-OHDA 100μmol/L)、PTSS组(6-OHDA+PTSS 100μmol/L)。在倒置显微镜下观察各组PC12细胞的形态学变化;采用细胞计数试剂盒(CCK)-8检测细胞活性;免疫细胞化学染色法和Western印迹检测JNK、p-JNK、炎症因子白细胞介素(IL)-1β和IL-6的表达变化。结果细胞形态观察结果显示,对照组细胞数量多,形态良好。与对照组比较,6-OHDA作用24 h后,模型组PC12细胞数量明显减少,聚集成团。而PTSS作用12 h后,PTSS组细胞数量较模型组多,形态明显好于模型组。CCK-8法显示,与对照组相比,模型组细胞活力显著降低(P<0.05),PTSS组细胞活力明显上升(P<0.05)。与对照组比较,模型组PC12细胞JNK、p-JNK、IL-1β和IL-6的含量均明显提高(P<0.05),而PTSS组上述蛋白及因子的含量均显著下降(P<0.05)。结论 PTSS可通过抑制JNK通路的信号分子及其下游炎症因子对抗6-OHDA诱导的PC12细胞的神经炎症反应。

响应面优化香椿子多酚清除亚硝酸盐及动力学初步研究

目的:研究模拟胃环境下香椿子多酚清除亚硝酸盐条件及初步动力学。方法:在单因素实验基础上选取不同因素与水平,根据中心组合实验设计,采用响应面分析法,确定影响清除率因子;对香椿子多酚与茶多酚清除动力学曲线进行数学模型拟合。结果:所得响应面优化清除条件为胃蛋白酶浓度3.75 mg/m L,反应时间107.03 min,多酚浓度0.58 mg/m L,此时清除率为93.23%;香椿子多酚与茶多酚清除动力学曲线符合Logistic模型及零级动力学方程。结论:香椿子多酚在模拟胃环境下对亚硝酸盐具有较高清除作用,为下一步开发应用香椿子多酚提供理论基础。

香椿子总多酚对糖尿病小鼠的降血糖作用

目的:研究香椿子总多酚对糖尿病小的降血糖作用。方法:一次性ip链脲佐菌素制造糖尿病模型。将香椿子总多酚分低、中、高剂量组(60,801,00 mg·kg-1)连续ig 14 d,第15 d用葡萄糖氧化酶法测空腹血糖,同时测定多酚对正常小鼠血糖影响。糖尿病小鼠处死后取脏器,测定小鼠脏器指数、肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)含量变化。结果:香椿子总多酚能降低链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠的血糖,对正常小鼠血糖没有降低作用。香椿子多酚能降低糖尿病小鼠肝脏脏器指数(P<0.05),降低肝脏MDA含量(P<0.05),增加SOD活性(P<0.05)。结论:香椿子多酚对链脲佐菌素所致糖尿病模型小鼠有降血糖作用。

香椿子多酚对糖尿病大鼠的降血糖作用研究

目的:研究香椿子多酚对链尿佐菌素诱导的糖尿病大鼠的降血糖作用。方法:一次性腹腔注射链尿佐菌素(55mg/kg)造模。将造模成功大鼠随机分为模型组、香椿子多酚高剂量75mg/kg、低剂量组45mg/kg、格列本脲组10mg/kg,另取8只作为正常组,每天灌胃1次,连续14天。测定大鼠体重、进食量、进水量;第15天处死后取其血清和胰腺组织标本。用葡萄糖氧化酶法测空腹血糖(FBG);放免法测定血清胰岛素含量(INS);同时测定大鼠血清SOD、MDA、NO含量;采用胰腺组织切片HE染色。结果:与模型组相比,香椿子多酚(754、5 mg/kg)够改善糖尿病大鼠症状,对糖尿病大鼠体重没有显著增高;降低7天及14天FBG;降低MDA、NO含量,提高SOD含量;改善大鼠胰岛形态。香椿子多酚75mg/kg能提高INS。结论:香椿子多酚能降低血糖水平,提高胰岛素含量,其机制可能与抗氧化作用及胰岛细胞保护作用有关。

香椿子多酚对糖尿病大鼠早期肝损伤保护作用

目的:观察香椿子多酚(TSTP)对链脲佐菌素(STZ)诱导的大鼠糖尿病早期肝损伤的保护作用。方法:一次性ip链脲佐菌素(55 mg·kg-1),造模72 h后禁食不禁水,用血糖仪检测,空腹血糖大于11.1 mmol·L-1为造模成功大鼠。将造模成功大鼠随机分为模型组、香椿子多酚高、低剂量组(75,45 mg·kg-1)、格列本脲组(10 mg·kg-1),另取8只作为正常组,每天ig1次,连续14 d。第15 d处死后取其血清和肝脏。血清测空腹血糖(FBG),谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST);取肝脏测定脏器指数,肝脏石蜡切片,做HE染色。结果:香椿子多酚能降低大鼠空腹血糖,高、低剂量组7 d血糖分别为(11.79±2.75),(12.55±3.35)mmol·L-1,与模型组(15.53±2.33)mmol·L-1比较血糖降低(P<0.05),14 d血糖分别为(10.18±2.34),(11.80±2.74)mmol·L-1,与模型组(15.57±2.69)mmol·L-1比较差异有显著性(P<0.01);不能降低血清ALT及AST含量;香椿子多酚高剂量组大鼠肝脏脏器指数为(3.616±0.358),与模型组比较显著降低(P<0.05),改善大鼠肝脏形态。结论:香椿子多酚对糖尿病大鼠早期肝脏损伤具有一定的保护作用。

香椿子总多酚对心肌缺血再灌注大鼠的保护作用

目的:观察香椿子总多酚对心肌缺血再灌注大鼠的保护作用。方法:50只SD大鼠随机分成假手术组:冠脉下穿线不结扎+0.5%羧甲基纤维素钠、模型组:冠脉下穿线结扎+0.5%羧甲基纤维素钠、香椿子总多酚低剂量(XD,50 mg·kg-1)+冠脉下穿线结扎、中剂量(XZ,100 mg·kg-1)+冠脉下穿线结扎、高剂量(XG,200 mg·kg-1)+冠脉下穿线结扎组,各组均ig给药。采用左冠状动脉前降支结扎30 min再灌120 min的方法复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。再灌注结束时取血清,测定血清中磷酸肌酸激酶(CK)、肌钙蛋白I(cTnI)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的水平。取出心脏,自结扎线以下平行均匀切成5片,用1%氯化三苯基四氮唑(TTC)浸染15 min,计算心肌梗死程度。结果:与模型组相比,香椿子总多酚处理组能有效降低心肌缺血再灌注大鼠血清中CK,cTnI,MDA的水平,增加SOD活力,减轻心肌梗死程度。结论:香椿子总多酚对心肌缺血再灌注大鼠具有一定的保护作用。

基于炎症反应的香椿子总多酚抗大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制研究

目的:观察香椿子总多酚对大鼠心肌缺血再灌注急性炎症的影响。方法:50只SD大鼠随机分成假手术组(冠脉下穿线不结扎+0.5%羧甲基纤维素钠)、模型组(冠脉结扎+0.5%羧甲基纤维素钠)、香椿子总多酚低剂量(XD,50 mg.kg-1+冠脉结扎)、中剂量(XZ,100 mg.kg-1+冠脉结扎)、高剂量(XG,200 mg.kg-1+冠脉结扎)组,各组均ig给药。采用左冠状动脉前降支结扎30 min再灌120 min的方法复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。以ST抬高作为结扎成功的标志,以ST段逐渐回落、梗死性Q波出现作为再灌注成功的标志。再灌结束后行腹主动脉取血,分离血清,测定血清中白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。取左心室缺血区组织10 mg用RT-PCR测定核因子κB(NF-κB)p65 mRNA的表达水平,其余心肌组织做病理切片,并在光镜下观察左心室心肌组织的形态学变化。结果:模型组大鼠血清IL-6含量为(638.88±188.94)ng.L-1,XD,XZ,XG组与模型组相比,血清IL-6含量显著下降,分别为(491.58±142.59),(306.85±80.60),(246.11±71.64)ng.L-1。模型组大鼠血清TNF-α含量为(216.23±58.67)ng.L-1,XD,XZ,XG组大鼠血清TNF-α水平与之相比显著降低,分别为(148.24±36.30),(157.62±52.06),(144.10±36.64)ng.L-1。模型组大鼠心肌组织中NF-κBp65/β-actin为0.61±0.05,香椿子总多酚给药组大鼠NF-κB p65/β-actin与之相比显著降低,分别为0.53±0.08,0.45±0.13,0.38±0.11。香椿子总多酚组与模型组相比,大鼠心肌细胞的形态学损伤较轻。结论:香椿子总多酚能够减轻大鼠心肌缺血再灌注急性炎症,对其产生一定的保护作用。

香椿子总多酚对佐剂型关节炎大鼠的治疗作用

目的研究香椿子总多酚(TSTP)对佐剂型关节炎大鼠的治疗作用。方法 6周龄Wistar大鼠50只,SPF级,随机分为5组,每组10只:正常组、模型组、雷公藤甲素组、TSTP低剂量组和TSTP高剂量组。正常组在左后肢足垫部皮下注射0.1 mL生理盐水,其余组在左后肢足垫部皮下注射0.1 mL弗氏完全佐剂(Freund's complete adjuvant,FCA)诱导建立大鼠佐剂型关节炎模型。大鼠致炎后第8天开始灌胃治疗,正常组和模型组均给予0.5%羧甲基纤维素钠(10 mg·kg-1)、雷公藤甲素组给予雷公藤甲素(20 mg·kg-1)、TSTP低剂量组给予TSTP(35 mg·kg-1)、TSTP高剂量组给予TSTP(70 mg·kg-1),1次·d1,连续灌胃21 d。大鼠于致炎前(d0)、致炎后第4,8,12,16,20,24,28天(d4,d8,d12,d16,d20,d24,d28)分别在足容积测量仪上测定右侧(非致炎侧)足容积,d4,d8,d12,d16,d20,d24,d28与d0足容积的差值即为该时大鼠足趾肿胀度。最后一次灌胃结束2 h后,处理大鼠,同时摘取胸腺和脾脏组织并称重,计算胸腺指数和脾脏指数。并于踝关节上方0.5 cm剪取踝关节,采用苏木精-伊红染色法制作病理组织切片,观察形态学的相关改变。结果与模型组比较,TSTP降低了脏器指数、足跖肿胀度的水平,差异有统计学意义(P<0.05)。与雷公藤组相比,TSTP高剂量组脏器指数、足跖肿胀度无明显差别;与TSTP高剂量组相比,TSTP低剂量组脏器指数、足跖肿胀度较高(P<0.05)。结论 TSTP高,低剂量各组均能够减轻佐剂关节炎大鼠的足趾肿胀度、降低脾脏指数和胸腺指数,改善踝关节病理组织形态。TSTP对佐剂型关节炎大鼠具有一定的治疗作用。