香烟水溶性提取物对大鼠心肌线粒体的毒性

观察香烟水溶性提取物(CSE)和尼古丁对大鼠心肌线粒体的损伤作用.大鼠心肌线粒体分别与CSE或尼古丁于37℃温孵60min,结果表明,CSE明显降低线粒体细胞色素C氧化酶(COX)活性,呈剂量依赖性.但是ATPase活性不受影响.在线粒体呼吸活性受到抑制的同时,过氧化指标无明显变化.CSE对6.5mmol/L钙离子引起的线粒体肿胀反应具有抑制作用,但可加剧250mmol/L钙离子诱导的线粒体肿胀反应.维生素C对CSE造成的线粒体损伤无保护作用.未见尼古丁对体外大鼠心肌线粒体有毒性.CSE对心肌线粒体的损伤可能是由于它对呼吸酶活性的直接抑制作用而与氧自由基机制无关.尼古丁可能不是CSE损伤大鼠心肌线粒体的毒性成分.

miRNA-218通过靶向BRD4对香烟烟雾提取物诱导的COPD气道上皮细胞凋亡的调控作用

目的探讨miR-218通过靶向BRD4对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的慢性阻塞性肺疾病(COPD)时气道上皮细胞凋亡的调控作用。方法将人肺支气管上皮细胞BEAS-2B分为正常对照(NC)组、CSE组、miR-NC+CSE组、miR-218+CSE组、si-NC+CSE组、si-BRD4+CSE组、miR-218+pcDNA-NC+CSE组和miR-218+pcDNA-BRD4+CSE组。通过对不同组细胞中miRNA、蛋白及炎症因子的检测和双荧光素酶报告基因实验共同验证miR-218对BRD4的靶向作用。结果与NC组比较,CSE组BEAS-2B细胞miR-218表达降低,细胞凋亡率、BRD4、Cleaved-caspase-3、IL-6和TGF-β1表达显著增加(均P<0.05)。与miR-NC+CS组比较,miR-218+CSE组BEAS-2B细胞凋亡率、Cleaved-caspase-3、IL-6和TGF-β1表达显著降低(均P<0.05);与si-NC+CSE组比较,si-BRD4+CSE组上述指标表达显著降低(P<0.05);与miR-218+pcDNA-NC+CSE组比较,miR-218+pcDNA-BRD4+CSE组上述指标表达显著增加(P<0.05)。结论miR-218通过靶向BRD4可抑制CSE诱导的气道上皮细胞凋亡,miR-218可能是慢性阻塞性肺疾病的潜在治疗靶点。

基于“雅解理论”探讨雅解益栽(心)方药物血清对CSE诱导VEC-304细胞损伤的影响

目的:观察香烟提取物(CSE)诱导血管内皮(VEC)-304的存活率、细胞增殖抑制率的变化,测定细胞裂解液的抗氧化能力,检测细胞相关凋亡蛋白的表达,探讨雅解益栽(心)方药物血清对CSE诱导的VEC-304细胞损伤的影响。方法:采用CSE复制VEC-304细胞损伤模型,雅解益栽(心)方含药血清倍比稀释后分为3个剂量干预组(体积分数10%),采用MTT、TUNEL、DNA ladder、免疫组化以及Western Blot等方法,检测雅解益栽(心)方药物血清对CSE诱导的(VEC)-304细胞损伤的影响。结果:CSE可诱导细胞凋亡,其机制与其引发细胞氧化应激反应有关;诱发细胞Caspase-3、Bax、NF-κb表达上调,Bcl-2、p53下调,而致细胞凋亡。雅解益栽(心)方干预组细胞SOD、GSH-px、GSH含量比空白对照组高,MDA及NOS比空白对照组低;而Caspase-3、Bax、NF-κb表达下调,Bcl-2、p53表达上调。并有一定的量效依赖关系。结论:CSE能诱导VEC-304细胞凋亡,雅解益栽(心)方药物血清有明显的抗氧化作用,能抑制细胞凋亡,从而具有解烟毒作用。

甲基强的松龙对香烟烟雾提取物诱导A549细胞I-κBα的影响

目的：观察香烟烟雾提取（CSE）诱导人类怖泡Ⅱ型上皮细胞A549后Ⅰ-κBα的变化及甲基强的松龙（Mp）对其的影响。方法：体外培养A549细胞系，根据条件不同将其分为3组：（1）对照组：无血清DMEM处理。（2）CSE组：10％浓度CSE处理。（3）CSE＋Mp组：CSE刺激后加入0．015％甲基强的松龙处理。于不同时间段收集各组细胞裂解物后，应用免疫印迹法（Western blot）、酶联免疫法（ELISA）观察Ⅰ-κBα的变化。结果：对照组无变化，CSE组Ⅰ-κBα从处理后15min开始后减少，30min后消失，CSE＋Mp组Ⅰ-κBα在15～30min内始终有本底表达，3组间Ⅰ-κBα蛋白的表达水平差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：甲基强的松龙能使CSE刺激后A549细胞Ⅰ-κBα蛋白表达增加。

采用三维模型探索香烟烟雾提取物(CSE)对A549细胞的影响

本研究采用D-型和L-型自组装短肽作为纳米纤维支架材料进行细胞三维培养体系平台,探索香烟烟雾提取物(CSE)诱导人类Ⅱ型肺泡上皮(A549)细胞氧化损伤后,考察其细胞行为在二维和三维微环境下的差异。A549细胞分别在二维和三维环境中用不同浓度的CSE溶液诱导24 h、48 h或72 h之后,进行细胞增殖活力,乳酸脱氢酶(LDH),细胞周期,细胞凋亡检测,以及运用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)和4',6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐(DAPI)染色观察A549细胞形态。结果表明,与二维环境相比,在三维环境中细胞活力更高,LDH释放量较少,细胞凋亡减少。细胞的周期分布检测表明,随着CSE浓度的增大,发生G1期阻滞;当15%,50%CSE作用时,与二维环境相比,三维培养环境中的G1期细胞比例更低,G2期和S期更高,G1期阻滞减弱。上述结果均表明D-型和L-型肽手性自组装短肽能够构建出适于A549细胞生长、增殖的三维微环境,并能模拟细胞胞外基质,对细胞形态、增殖、周期及凋亡等有重要影响。

香烟烟雾提取物对MIN6细胞JNK及p38MAPK表达影响

目的探讨体外香烟烟雾提取物(CSE)对胰岛MIN6细胞形态及活力的影响,及对胞内丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号转导通路ERK、JNK、p38MAPK表达的影响。方法体外培养MIN6细胞至生长对数期后,设不同浓度CSE(20、50、100和200μg/m L)实验组,同时设对照组,48 h后,镜下观察MIN6细胞形态学改变,并应用CCK-8法检测CSE对MIN6细胞的增殖抑制率;同时应用蛋白印迹法(WB)检测细胞内ERK、JNK、p38M APK蛋白及磷酸化程度。结果与对照组比较,100和200μg/m L剂量下的细胞形态出现明显异常,胞核固缩,细胞呈梭形样改变;与对照组比较,MIN6细胞活力出现下降,20、50、100、200μg/m L各组细胞活力分别为(97.32±2.67)%、(94.67±5.33)%、(87.71±12.3)%和(74.23±25.8)%;与对照组相比,ERK、JNK、p38MAPK蛋白表达变化不大,但随着CSE剂量的增加,p-JNK和p-p38MAPK磷酸化程度明显增加(与对照组相比,P<0.05),并呈一定的剂量-效应关系。结论 CSE能够导致M IN6细胞形态异常、抑制其细胞增殖活力,其机制可能与JNK和p38MAPK信号通路的激活相关。

基于TLR4/NF-κB通路探讨石斛多糖改善CSE诱导的人支气管上皮细胞炎性损伤

目的:探讨石斛多糖对香烟烟雾提取物(CSE)损伤的人支气管上皮细胞(16HBE)的炎症因子分泌及TLR4/NF-κB通路活性的影响。方法:体外培养16HBE细胞,设置空白组、CSE损伤组、CSE+石斛多糖组(100、200、400 mg·L^(-1)),CCK-8法检测细胞活力,显微镜观察细胞状态,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞培养上清中白细胞介素(IL)-8、IL-1β、IL-4、IL-13、转化生长因子(TGF)-β含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB(NF-κB)及IL-4 mRNA的相对表达量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测白细胞介素-4受体(IL-4R)、TLR4、髓系分化初级反应蛋白88(MyD88)、NF-κB、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)及核蛋白NF-κB(NEs-NF-κB)蛋白相对表达量,免疫荧光法检测NF-κB核转位水平。结果:与空白组比较,CSE损伤组细胞存活率降低,细胞皱缩,细胞培养上清中IL-8、IL-1β、IL-4、IL-13、TGF-β含量明显增加(P<0.05,P<0.01),TLR4、MyD88、NF-κB、p-NF-κB、NEs-NF-κB、IL-4表达水平显著升高(P<0.01),NF-κB入核现象明显;与CSE损伤组比较,石斛多糖各剂量组细胞存活率显著升高,细胞状态恢复,IL-8、IL-1β、IL-4、IL-13、TGF-β含量及TLR4、MyD88、NF-κB、p-NF-κB、NEs-NF-κB、IL-4表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),NF-κB入核明显减少。结论:石斛多糖对CSE诱导的16HBE细胞损伤具有明显的保护作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路活性有关。