香烟烟雾溶液作用下大鼠淋巴细胞的氧化应激反应

目的 以细胞内活性氧自由基 (ROS)水平、DNA损伤、脂质过氧化物 (LPO)水平以及超氧化物歧化酶 (SOD)活力为指标 ,研究细胞在香烟烟雾溶液作用下产生的氧化应激反应。方法 以PBS作吸收液 ,用大包氏管收集香烟主流烟雾 ,将香烟烟雾溶液 (CSS)分别以 0、1× 10 - 3、2× 10 - 3、4× 10 - 3、8× 10 - 3、12× 10 - 3、16× 10 - 3支 ml的浓度作用于大鼠淋巴细胞。用 2′ ,7′ 二乙酰二氯荧光素 (DCFH DA)测定细胞内ROS水平 ,用彗星试验检测细胞DNA损伤 ,同时检测细胞内SOD活力和LPO水平。结果 2× 10 - 3支 ml以上剂量组二氯荧光素 (DCF)荧光强度、彗星尾长以及LPO水平均显著高于对照组 ,且随剂量增加而增加。 16× 10 - 3支 ml组SOD活力显著低于对照组。与对照组相比 ,1× 10 - 3支 ml组LPO水平显著降低、SOD活力则显著增高。结论 CSS达到一定剂量时使细胞内ROS水平增高 ,引起细胞DNA损伤和脂质过氧化 ,高剂量时SOD活力降低 。

铬盐与香烟烟雾溶液对A549细胞毒性和DNA断裂的影响

目的 研究重铬酸钾和香烟烟雾溶液 (CSS)对A5 49细胞的细胞毒性和DNA损伤的联合作用。方法 应用四甲基偶氮唑盐法和单细胞凝胶电泳法检测了重铬酸钾和CSS联合处理对A5 49细胞的细胞毒性以及DNA链的断裂损伤。结果 低浓度重铬酸钾 (0 2～ 0 6μmol/L)与高浓度CSS(10支 /L)联合作用促进了细胞的增殖 ,高浓度重铬酸钾(5 4～ 16 2 μmol/L)与高浓度CSS联合作用表现为明显的细胞毒性。重铬酸钾 (0 2、0 6和 1 8μmol/L)或CSS(0 1、0 2、0 5支 /L)单独处理均可诱导DNA断裂 ,存在一定的剂量 -反应关系。在重铬酸钾的 0 6μmol/L时 ,随CSS(0 1、0 2、0 5支 /L)浓度的升高 ,A5 49细胞DNA链断裂程度逐渐增加。结论 重铬酸钾和CSS对A5 49细胞均有细胞毒性和DNA损伤作用。重铬酸钾和CSS联合处理诱导A5 49细胞DNA链断裂 ,并显著高于两者单独处理引起的DNA链断裂作用。

香烟烟雾溶液对人淋巴细胞的损伤及修复

目的 了解香烟烟雾溶液作用于人淋巴细胞后DNA的损伤及修复状况。方法 以 8× 10 - 3 支 /ml香烟烟雾溶液作用于正常人淋巴细胞 ,用彗星试验检测 0 ,0 5,1,2 ,3 ,4,5,6h时点细胞的DNA损伤状况。结果 与 0h组相比 ,2h至 6h组彗星尾长均显著增长 (P <0 0 0 1) ,3h达到最长 ,之后逐渐降低 ,但到 6h未恢复至正常水平。结论 香烟烟雾溶液能直接引起人淋巴细胞的DNA损伤 。

基于Toll样受体4/核因子κB通路观察香烟烟雾溶液刺激对人支气管上皮样细胞相关基因表达的影响

目的 观察Toll样受体4(TLR4)基因沉默或过表达后香烟烟雾溶液(CSE)对人支气管上皮样细胞(16HBE)相关基因表达的影响。方法 2020年8—12月,用常规培养的人支气管上皮样细胞16HBE作为空白对照组,实验设干扰小RNA(siRNA)TLR4-1组(hs-TLR4-si-1+16HBE)、siRNA TLR4-2组(hs-TLR4-si-2+16HBE)、siRNA TLR4-3组(hs-TLR4-si-3+16HBE),另设阴性对照组(NC+16HBE),实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)筛选TLR4基因最佳沉默效果;自制CSE作用于16HBE,实验设常规培养的16HBE作为空白对照组、CSE组(CSE+16HBE)、siRNA TLR4组(CSE+hs-TLR4-si-2+16HBE)、siRNA TLR4-NC组(CSE+NC+16HBE)、Lv-TLR4组(CSE+Lv-TLR4+16HBE)、Lv-TLR4-NC组(CSE+Lv-TLR4-NC+16HBE),qRT-PCR检测TLR4、核因子κB(NF-κB)以及黏蛋白MUC5AC、MUC7、MUC8基因mRNA的表达。结果 与空白对照组相比,siRNA TLR4-2组TLR4 mRNA表达显著降低(1.00±0.22比0.47±0.04,P<0.05),因此选择hs-TLR4-si-2作为TLR4基因沉默的最佳siRNA。与空白对照组相比,CSE组TLR4(1.00±0.09比1.81±0.18)、NF-κB(1.00±0.04比1.65±0.11)、MUC5AC(1.00±0.12比2.09±0.24)、MUC7(1.00±0.20比2.21±0.26)、MUC8(1.00±0.11比1.75±0.06)mRNA表达均升高(均P<0.05);与CSE组相比,CSE+siRNA TLR4组TLR4(1.81±0.18比1.43±0.17)、NF-κB(1.65±0.11比1.12±0.05)、MUC5AC(2.09±0.24比1.38±0.13)、MUC7(2.21±0.26比1.46±0.30)、MUC8(1.75±0.06比1.23±0.03)mRNA表达均降低(均P<0.05),CSE+Lv-TLR4组TLR4(1.81±0.18比2.42±0.06)、NF-κB(1.65±0.11比1.94±0.07)、MUC5AC(2.09±0.24比2.56±0.19)、MUC7(2.21±0.26比2.72±0.33)、MUC8(1.75±0.06比2.10±0.10)mRNA表达均升高(均P<0.05)。结论 TLR4/NF-κB信号通路与CSE所产生的气道炎症有关,且其下游相关基因及黏蛋白表达受TLR4基因调控,TLR4的过度表达会加重CSE导致的气道炎症及慢性阻塞性肺疾病(COPD),抑制TLR4/NF-κB信号通路可在一定程度上减轻CSE所导致的气道炎症及COPD。

香烟烟雾水溶液对小草鱼急性毒性试验的研究

用毒理学方法测定香烟烟雾水溶液(water-soluble contents of cigarette smoke,WSCCS)对小草鱼的TLM24,用TLM24的WSCCS对小草鱼进行急性毒性试验并观察鳃丝组织切片,了解WSCCS对小草鱼的急性毒性作用。结果表明,香烟烟雾水溶液对小草鱼有较强的急性毒性作用,WSCCS对小草鱼的半致死浓度为0.4支/L。急性中毒小草鱼出现跳跃、侧翻、反应迟钝、丧失平衡力及死亡的现象,鳃丝排列不规则,发生弯曲。

香烟烟雾水溶液对雄果蝇生育力的影响

[目的]探讨香烟烟雾对雄果蝇生育力的影响。[方法]将野生型黑腹果蝇用含不同浓度香烟烟雾水溶液的培养基培养,然后使之与处女蝇交配,统计其蛹的发生量。[结果]随着香烟烟雾水溶液的浓度的增加,雄果蝇生育力降低。[结论]不同浓度香烟烟雾水溶液对雄果蝇的生育力有显著影响。

香烟烟雾水溶液诱导大蒜根尖细胞产生微核

为了探究香烟烟雾水溶液对大蒜根尖细胞遗传物质的影响,通过常规的微核技术观察了香烟烟雾水溶液不同浓度和不同时间处理下根尖细胞中微核的形态和数量。结果表明:在0.5~8支/m L的浓度范围内,大蒜根尖细胞的微核率随着浓度的增加而不断上升,差异极显著(P<0.01);在12~36 h处理时间范围内,微核率随着处理时间的增长呈现先升高后降低的趋势;当处理时间为12和24 h时,微核率随着浓度的增加而明显上升,而当处理时间为36 h时,微核率随着浓度的增加呈现先升后降的趋势;香烟烟雾水溶液的浓度和处理时间与微核的产生显著正相关,烟雾浓度对大蒜根尖细胞微核产生的贡献更大;试验组的细胞微核率均极显著高于空白对照组(P<0.01),微核指数均大于3.5,属于重度损伤。上述结果表明,香烟烟雾水溶液在较低的浓度(0.5支/m L)和较少的处理时间(12 h)就对植物遗传物质产生严重损伤。

维生素C对香烟烟雾的氧化应激作用的影响

目的 了解维生素C(VC)对香烟烟雾溶液 (CSS)作用下的大鼠淋巴细胞产生氧化应激的影响。方法 将香烟烟雾溶液作用于经VC预处理的大鼠淋巴细胞 ,用 2’ ,7’ -二乙酰二氯荧光素 (DCFH -DA)检测细胞内活性氧自由基 (ROS)水平 ,用彗星实验评价DNA的损伤状况 ,同时检测细胞内超氧化物歧化酶 (SOD)活性和脂质过氧化物(LPO)水平。结果 8× 10 -3 支 /mlCSS作用下大鼠淋巴细胞内ROS和LPO水平增高 ,DNA损伤增强 ,SOD活性降低。用 5 0 μmol/LVC干预后 ,与相应非干预组相比细胞内ROS和LPO水平降低 ,DNA损伤减轻 ,SOD活性增强 ,且均有显著性差异。结论 5 0 μmol/LVC能保护大鼠淋巴细胞 ,减轻CSS导致的氧化应激。

香烟烟雾水溶性提取物对肝细胞线粒体的损伤

目的探讨香烟烟雾水溶性提取物(CSW)对L-02肝细胞线粒体结构与功能的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)检测CSW处理L-02肝细胞24h后的生存率,以确定后续试验CSW染毒浓度为0、8×10-3、16×10-3、32×10-3、64×10-3支/ml培养基。CSW染毒处理L-02肝细胞24h后用MTT法检测线粒体总酶活力抑制率,荧光分光光度法检测线粒体膜通透性转运孔(PTP)开放度与细胞线粒体膜电位(ΔΨm)的变化,透射电子显微镜观察细胞线粒体形态学变化。结果8×10-3、16×10-3、32×10-3、64×10-3支/ml4个不同浓度处理组CSW对L-02肝细胞具有一定的细胞毒性,其细胞生存率随CSW处理浓度的增高而降低,且二者呈明显负相关(相关系数r=-0.957);线粒体PTP开放程度则随CSW浓度的增高而增加,32×10-3支/ml及其以上CSW浓度组开放度与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);线粒体总酶活力与细胞线粒体膜电位(ΔΨm)随CSW浓度的增加而下降,二者分别在8×10-3、16×10-3支/ml及其以上CSW浓度组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。透射电子显微镜观察线粒体形态发生显著改变即表现为肿胀、空泡变性、膜和嵴破损。结论香烟烟雾水溶性提取物可对L-02肝细胞线粒体的结构与功能造成一定程度损伤。

千金苇茎汤含药血清对香烟烟雾暴露小鼠脾Naive T细胞Th17/Treg分化及Notch通路表达的影响

目的旨在实验观察千金苇茎汤(Phragmitis Decoction,PD)大鼠含药血清对香烟烟雾水溶液处理的小鼠脾Naive T细胞分化Th17/Treg平衡及Notch信号通路表达的影响。方法将雄性健康SD大鼠30只随机分为A和B组(生理盐水5 ml/kg·bw)、C组(100 mg/kg·bw乙酰半胱氨酸)、D组(10 g/kg·bw PD血清)、E组(5 g/kg·bw PD血清)、F组(2.5 g/kg·bw PD血清),每日灌胃2次,连续3 d。末次给药1 h后,股动脉取血制备含药血清,高效液相色谱法(HPLC)含药血清浓度。用免疫磁珠分选C57BL/6雌性健康小鼠脾Naive T细胞,通过细胞培养后将其分为6组,分别标记为空白组(接受体积无药血清DMEM培养)、模型组(接受5.0%香烟烟雾水溶液的DMEM培养)、西药血清干预组(接受含乙酰半胱氨酸血清培养)、PD高剂量血清干预组(接受含高剂量PD血清培养)、千金苇茎汤中剂量血清干预组(接受含中剂量PD血清培养)、PD低剂量血清干预组(接受含低剂量PD血清培养)。流式细胞技术检测各组Naive T细胞Th17/Treg数量及比率变化。Western blot检测Naive T细胞Notch、Jagged-1、Jagged-2、Delta-like-1、Delta-like-3和Delta-like-4等蛋白表达。采用ELISA法检测各组中Naive T细胞培养液IL-17、IL-6、IL-10和TGF-β的含量。结果PD高剂量血清干预组及西药血清干预组Th17细胞相对数量明显低于模型组(P<0.05),PD高剂量血清干预组Th17细胞相对数量明显低于西药组(P<0.05)。PD高和中剂量血清干预组及血清西药干预组Treg细胞相对数量明显高于模型组(P<0.05)。PD高剂量血清干预组Delta-like-1、Delta-like-3和Delta-like-4表达明显低于模型组(P<0.05),PD高剂量血清干预组Jagged-1和Jagged-2的表达水平明显高于模型组(P<0.05),也明显高于西药血清干预组(P<0.05)。PD高和中剂量血清干预组及西药血清干预组的IL-17表达明显低于模型组(P<0.05);PD高和中剂量血清干预组IL-17表达明显低于西药血清干预组(P<0.05)。PD高剂量血清干预组IL-6表达明显低于模型组(P<0.05);PD高和中剂量血清干预组TGF-β表达低于模型组(P<0.05)差异均有统计学意义,各组IL-10表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论PD具有防治香烟烟雾暴露引起的免疫损伤作用,发现其治疗机制可能是抑制Notch信号通路的激活,具体表现为通过下调该通路中相关受体、配体等蛋白的表达来调节小鼠NaiveT细胞向Th17/Treg的分化平衡,并能抑制IL-17、IL-6和TGF-β等炎性因子表达。

环境卫生与监测

052230使用染发剂与血液系统肿瘤关系的病例-对照研究；052231西安市男性吸烟、饮酒与食管癌关系的Meta分析；052232戒烟与糖尿病的关系；052233香烟烟雾溶液对人淋巴细胞的损伤及修复；052234某沿海地区男性公务员吸烟／饮酒与高血压检出情况分析；

六价铬与烟溶液反应诱导质粒DNA单链断裂

目的 研究六价铬化合物 (Cr6+)和烟溶液 (CSS)对pUC118质粒DNA的损伤作用。方法 应用质粒松弛法和电子顺磁共振波谱法检测了重铬酸钾 (K2 Cr2 O7)和CSS反应对DNA的断裂损伤及诱导损伤的原因。结果 K2 Cr2 O7和CSS可协同诱导DNA单链断裂 ;而K2 Cr2 O7(0 .5mmol/L)或CSS(2 μl)单独作用都仅诱导极少的DNA断裂 ;当CSS的量 (2 μl)不变 ,随K2 Cr2 O7浓度的升高 (0 .12 5～ 2 .0 0 0mmol/L) ,DNA单链断裂数逐渐增加。·OH清除剂可有效地抑制Cr6+和CSS协同产生的·OH。