大萼香茶菜甲素通过线粒体途径诱导HL-60白血病细胞凋亡

目的:观察大萼香茶菜甲素(macrocalyxinA,MA)体外诱导HL-60细胞凋亡,并探讨其作用机制。方法:不同浓度的MA与HL-60细胞进行培养,采用MTT比色法观察其对HL-60细胞增殖的抑制作用;细胞形态学、DNA含量、DNA梯度电泳及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记和Ho-echst 33258荧光染色等分析其促细胞凋亡效应;流式细胞术和RT-PCR分别检测Bcl-2、Bax、P53、Fas、线粒体膜蛋白(Apo2.7)、线粒体跨膜电位(ΔΨm)与Bcl-2、Bax、P53、caspase-3 mRNA变化水平,研究其促凋亡机制。结果:MA呈现作用时间和剂量依赖性地抑制HL-60细胞增殖和活力;HL-60细胞经MA作用后,Wright-Giemsa染色和Ho-echst荧光染色后细胞出现典型的凋亡小体,细胞阻滞于G0/G1期,DNA片段化,亚二倍体明显增高,Annexin-V/PI标记升高;MA诱导HL-60细胞凋亡过程中,Bcl-2、Fas、P53表达无明显变化,Bax、线粒体膜蛋白(Apo2.7)、caspase-3表达显著增加,Bax/Bcl-2比值升高,ΔΨm下降。结论:MA能抑制HL-60细胞增殖和细胞活力、诱导细胞凋亡,其机制通过上调Bax基因和Bax/Bcl-2比值,使线粒体膜电位下降、膜通透性增高,最终使caspase-3激活而促进凋亡。

香茶菜甲素酯对依赖钙调素的环核苷酸磷酸二酯酶的抑制作用

香茶菜甲素酯是香茶菜甲素的一种新的衍生物。研究发现该化合物能明显抑制CaM激活的PDE活性,其IC_(50)为75μmol/L。抑制动力学测定表明它以非竞争方式拮抗CaM对PDE的活化。CaM荧光测定显示,香茶菜甲素酯可以降低ca^(2+)诱导的CaM酪氨酸荧光强度,提示它可能通过改变Ca^(2+)—CaM构象而抑制CaM—PDE。

大萼香茶菜甲素对多发性骨髓瘤细胞株U266体外作用的研究

目的:观察大萼香茶菜甲素(macrocalyxin A,MA)体外对多发性骨髓瘤细胞株U266增殖、凋亡的作用,并初步探讨其机制。方法:以不同质量浓度的(2、4、8μg/mL)MA体外作用于U266细胞,运用细胞计数、PI染色、MTT比色法体外观察MA对U266细胞增殖抑制作用;采用细胞形态观察、Annexin V/PI双染色和DNA亚二倍体检测方法研究MA诱导U266细胞凋亡作用;用Western免疫印迹法检测β1、β1i、β2、β2i、β5、β5i、NF-κB、IκB-α蛋白表达。结果:MA抑制细胞增殖;MA可促进细胞凋亡,细胞瑞氏染色后出现典型的凋亡小体;AnnexinV+/P I-表达升高;亚G1峰显著增加;在Western免疫印迹中β2、β1i、β5i、NF-κB随着药物作用浓度的增高表达逐渐降低,而IκB为增高趋势,β1、β2、β2i无明显变化。结论:MA在体外对U266细胞增殖有明显抑制作用,并诱导细胞调亡。

香茶菜甲素体外抗菌活性研究

香茶菜是近几年国内外药物研究者极为重视的有开发价值的植物。目前国外对香茶菜的研究,以日本学者E.Fujita为首,已开发研究了药物专利达7～9种(有抗癌、抗菌、抗真菌、抗溃疡等)。国内自1975年从河南医学科学研究所研究冬凌草素开始,到目前成为商品药上市的有2～3种。 1985年,我所从湖南香茶菜提取了多种有效成分。本文报道香茶菜甲素对常见的革兰氏阳性、阴性菌、特别是痢疾杆菌体外抗菌作用。

大萼香茶菜甲素对白血病细胞株Kasumi-1体外作用的研究

目的:观察大萼香茶菜甲素(macrocalyxin A,MA)体外对Kasumi-1细胞增殖、分化、凋亡的作用。方法:以不同质量浓度的(4、8、12、16μg/mL)MA体外作用于Kasumi-1细胞,运用细胞计数、MTT比色法检测细胞生长抑制率;细胞形态学、细胞免疫表型CD11b、CD13检测研究细胞分化;细胞形态学、Hoechst 33258荧光染色、DNA梯度电泳观察细胞凋亡;DNA亚二倍体及Annexin-V/PI双标记检测细胞凋亡率;质谱分析技术检测用药前后细胞小分子蛋白变化。结果:MA对Kasumi-1细胞有明显的抑制增殖作用,呈现作用时间和剂量的量效关系。较低浓度MA可以诱导细胞分化,CD11b表达明显上升,且有剂量量效关系;高浓度促进细胞凋亡,细胞瑞氏染色后出现典型的凋亡小体,亚G1峰显著增加,Annexin-V+/PI-表达升高,Hoechst33258荧光染色出现凋亡特征性改变,琼脂糖电泳观察到DNA"梯状条带"。质谱分析显示,药物作用组与空白组对照分析出现13个差异蛋白峰,质荷比集中在1053-8581之间。结论:MA能抑制Kasumi-1细胞增殖,促进细胞分化,诱导细胞凋亡的作用。

大萼香茶菜甲素体外诱导白血病细胞株HL-60的分化和凋亡

目的研究大萼香茶菜甲素(macrocalyxin A,MA)抑制白血病细胞株HL-60增殖,诱导细胞分化和凋亡作用,并对其作用机制进行初步探讨。方法将不同浓度的MA与HL-60细胞在体外培养,台盼蓝染色、MTT比色法观察对HL-60细胞增殖的抑制作用;细胞形态学、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记和Hoechst 33258荧光染色等分析细胞凋亡;通过细胞表面抗原CD11b、CD13、CD14,NBT试验和细胞形态学检测MA对HL-60细胞的分化作用;流式细胞术检测Bcl-2、Bax、P53、Fas和线粒体膜蛋白、线粒体跨膜电位(ΔΨm)的表达变化。结果MA呈时效及量效性地抑制HL-60细胞的增殖和活力,8μg/ml MA作用HL-60细胞24～72 h后,MTT法检测24h、48 h、72 h的细胞增殖抑制率分别为(52.9±0.3)%、(70.0±1.0)%和(75.3±1.2)%,均显著高于对照组(P【0.01);24h、48 h、72 h的IC50分别为8.76、7.17、7.14μg/ml;HL-60细胞经MA作用后,大部分细胞阻滞于G0/1期,出现典型的细胞形态改变,经4～20μg/ml的MA作用后,SubG1由(2.85±1.6)%上升至(51.7±5.9)%,与对照组(1.74±0.5)%相比具有显著性差异(P【0.05),Annexin-V/PI标记升高,Hoechst33258染色后的凋亡细胞的特征性改变等均表明MA能诱导HL-60细胞凋亡;HL-60细胞经4～8μg/ml MA作用24h后,细胞发生部分分化,细胞表面CD11b表达增加,NBT阳性细胞增多。MA诱导HL-60细胞凋亡和分化过程中,Bcl-2表达无变化,但Bax表达显著增加,Bax/Bcl-2的比值升高,Fas、P53表达无变化。随MA作用的浓度增加,线粒体膜电位(ΔΨm)下降、而线粒体膜蛋白表达显著升高。结论MA能抑制HL-60细胞增殖和细胞活力、诱导HL-60细胞向粒系分化、促进细胞凋亡,其机制与上调bax基因和bax/bcl-2比值、提高线粒体膜通透性与下调线粒体膜电位等有关。

大萼香茶菜甲素对白血病细胞株Kasumi-1体外作用的研究

目的观察大萼香茶菜甲素(macrocalyxin A,MA)体外对Kasumi-1细胞增殖、分化、凋亡的作用。方法以不同质量浓度的(4、8、12、16μg/ml)MA体外作用于Kasumi-1细胞,运用细胞计数、MTT比色法检测细胞生长抑制率;细胞形态学、细胞免疫表型CD11b、CD13检测研究细胞分化;细胞形态学、Hoechst33258荧光染色、DNA梯度电泳观察细胞凋亡;DNA亚二倍体及annexin-V/PI双标记检测细胞凋亡率;质谱分析技术检测用药前后细胞小分子蛋白变化。结果MA对Kasumi-1细胞有明显的抑制增殖作用,呈现作用时间和剂量的量效关系.较低浓度MA可以诱导细胞分化,CD11b表达明显上升,且有剂量量效关系.高浓度促进细胞凋亡,细胞瑞氏染色后出现典型的凋亡小体,亚G1峰显著增加,annexin-V+/PI-表达升高,Hoechst33258荧光染色出现凋亡特征性改变,琼脂糖电泳观察到DNA"梯状条带"。质谱分析显示,药物作用组与空白组对照分析出现13个差异蛋白峰,质荷比集中在1053-8581之间。结论MA能抑制Kasumi-1细胞增殖,促进细胞分化,诱导细胞凋亡的作用。

白柔毛香茶菜甲素的化学结构

从白柔毛香茶菜(Isodon albopilosus)的嫩茎叶分离到1种新二萜,经光谱解析配合衍生物制备,证明其结构为7α,12α,14β-三羟基-18-乙酰氧基-对映贝壳杉-16-烯-15-酮,命名为白柔毛香茶菜甲素。

大萼香茶菜甲素A通过抑制蛋白酶体诱导多发性骨髓瘤细胞株U266凋亡

本研究探讨大萼香茶菜甲素A(macrocalyxin A,MA)体外对多发性骨髓瘤细胞株蛋白酶体抑制作用及其诱导凋亡的分子机制。以不同浓度(2、4、8μg/ml)的MA体外作用于U266细胞,用Hochest染色法和Annexin V/PI双染色观察MA诱导U266细胞凋亡作用;用Western blot检测泛素、蛋白酶体19S亚基S6'亚单位和蛋白酶体20S亚基中β1、β1i、β2、β2i、β5、β5i亚单位,以及BAD、BCL-2、FAS、FAS-L、MAPK、PARP、Pro-caspase 3、cleavedcaspase 3蛋白的表达。结果表明,随着MA作用时间的延长和剂量的增加,Hoechst 33258染色的细胞内出现致密颗粒或块状的荧光颗粒,Annexin V+/PI-细胞和总凋亡细胞(Annexin V+/PI-和Annexin V+/PI+)增加;MA可使U266细胞内泛素化水平增高,抑制20S蛋白酶体亚单位β1i、β2、β5i、和19S蛋白酶体泛素识别亚基S6'表达。与此同时,BCL-2、MAPK、PARP、pro-caspase 3表达随着药物作用浓度的增高而下调,BAD、FAS、FAS-L、cleaved-caspase 3表达则增加。结论:大萼香茶菜甲素A具有抑制蛋白酶体的作用,线粒体凋亡和死亡受体途径有可能参与MA诱导细胞的凋亡。

香茶菜甲素乙酰化物对缺血再灌注损伤的作用

实验观察离体大鼠工作心脏停灌注４０ｍｉｎ再灌注２５ｍｉｎ后，发现其心肌超微结构严重损伤，乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）及丙二醛（ＭＤＡ）生成量明显增加。同时发现香茶菜甲素乙酰化物可降低心肌超微结构的损伤程度，减少ＬＤＨ及ＭＤＡ的生成量。

鄂西香茶菜甲素作为抗肿瘤先导物的发现与抗肿瘤活性验证

采用反向预测和分子对接技术,评价鄂西香茶菜甲素成为抗肿瘤先导物的可行性。在反向预测的基础上,利用网络药理学技术构建"疾病-化合物-靶点-通路"网络。结果显示,鄂西香茶菜甲素预测靶点中有39个与肿瘤密切相关,参与调节细胞凋亡、细胞周期、肿瘤转移等多种细胞活动,并可调节雌激素信号转导途径和炎症应答。采用Discovery Studio 2020软件进行分子对接及TOPKAT毒性预测;鄂西香茶菜甲素与肿瘤相关靶点ABL1、ESR1、SRC、BCL-XL的结合亲和力均强于冬凌草甲素,且其致突变性、啮齿动物致癌性、大鼠口服LD50毒性均小于冬凌草甲素;进而,采用体外实验证实了鄂西香茶菜甲素的抗肿瘤活性,并初步探讨了其作用机制。结果显示,鄂西香茶菜甲素在细胞毒、抑制细胞集落形成和诱导凋亡方面均优于冬凌草甲素。鄂西香茶菜甲素有望成为新的抗肿瘤先导物,具有较大的研究前景。且鄂西香茶菜素对雌激素信号转导通路调节作用的预测结果值得进行深入研究,为其抗肿瘤作用机制的研究提供新视角。

乙酰香茶菜甲素抗心肌缺血再灌注损伤作用

用麻醉大鼠缺血４０ｍｉｎ，再灌注３０ｍｉｎ所致的心肌缺血再灌注损伤模型，观察了乙酰香茶莱甲素（ＤＡＡ－Ａ）对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。ＤＡＡ－Ａ能提高缺血及再灌期左室收缩压（ＬｖＳＰ）及±ｄｐ／ｄｔｍａｘ，降低再灌注所致心律失常发生率，降低血浆中磷酸肌酸激酶（ＣＰＫ）、丙二醛（ＭＤＡ）、血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）的水平，缩小心肌梗塞面积。结果提示：ＤＡＡ－Ａ对心肌缺血再灌注损伤有明显保护作用，其机制与抗脂质过氧化损伤有关．

双乙酰香茶菜甲素抗离体大鼠工作心脏缺血再灌注损伤的作用

目的：观察双乙酰香茶菜甲素（ＤＡＡＡ）对心肌缺血再灌注损伤的作用．方法：离体大鼠心脏停灌４０ｍｉｎ，再灌２５ｍｉｎ，造成心肌缺血再灌注损伤模型．结果：ＤＡＡＡ０１３，０２５，０５０ｍｍｏｌ·Ｌ－１对再灌注所致心功能低下有心脏保护作用，降低室颤发生率及乳酸脱氢酶（ＬＤＨ），丙二醛（ＭＤＡ）的生成量．ＤＡＡＡ０２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１改善心肌超微结构．结论：ＤＡＡＡ抗心肌缺血再灌注损伤的作用与其抗脂质过氧化损伤有关．

大萼香茶菜甲素对HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的探讨大萼香茶菜甲素（macrocalyxinA，MA）对白血病细胞系HL-60细胞增殖、分化和凋亡的影响，并对其作用机制进行初步探讨。方法用不同浓度的MA处理HL-60细胞，锥虫蓝染色、MTT比色法观察对HL-60细胞增殖的影响；以细胞形态学、DNA含量及细胞周期分析、Annex—in—V／PI双标记和Hoechst33258荧光染色等分析细胞凋亡；通过细胞表面抗原CD11b、CD13、CD14，NBT试验和细胞形态学检测MA诱导HL-60细胞的分化作用；用流式细胞术检测Bcl-2、Bax、P53、Fas表达和线粒体膜蛋白、线粒体跨膜电位（△ψm）的变化。结果HL-60细胞经MA作用后，MA呈时效及量效性地抑制HL-60细胞增殖，24、48、72h的IC50值分别为8．76、7．17、7．14μg/ml；形态学出现典型的凋亡细胞特征，亚G1期细胞和Annexin—V／PI标记阳性细胞显著升高；细胞发生部分分化，CD11b表达增加，NBT阳性细胞增多；MA诱导HL-60细胞凋亡和分化过程中，Bcl-2、Fas、P53表达无明显变化，Bax、线粒体膜蛋白表达显著增加，Bax／Bcl-2比值升高，线粒体膜电位（△ψm）下降。结论MA能抑制HL-60细胞增殖、诱导HL-60细胞向粒系分化、促进细胞凋亡，其机制与上调bax基因和bax／bcl-2比值、提高线粒体膜通透性和下调线粒体膜电位等有关。

大萼香茶菜甲素对急性早幼粒细胞性白血病细胞体外作用的影响

目的:观察大萼香茶菜甲素(Macrocalyxin A,MA)体外对急性早幼粒细胞性白血病(NB4细胞)增殖抑制、诱导凋亡及诱导分化的作用,并探讨其作用机制。方法:将不同浓度MA在体外与NB4细胞共同培养,采用细胞计数、MTT细胞活性检测体外观察MA对NB4细胞增殖抑制作用;采用细胞形态观察、Hoechst33258荧光染色、DNA亚二倍体检测和Annexin V/PI双染色方法研究MA诱导NB4细胞凋亡作用;采用细胞形态学观察、NBT试验、细胞免疫表型CD11b检测等方法研究MA诱导NB4细胞分化作用;采用流式细胞技术分析凋亡调控基因Bcl-2、bax、bad、Fas、p53表达情况和线粒体膜蛋白、线粒体跨膜电位(△ψm)的改变探讨MA体外诱导NB4细胞凋亡和分化机制。实验设置空白对照和全反式维甲酸(ATRA)阳性对照。结果:不同浓度MA在体外对NB4细胞增殖有明显抑制作用,呈现剂量和时间的量效关系;较低浓度MA作用48h后可以诱导NB4细胞分化,较高浓度MA则显著地促进细胞凋亡;在凋亡调控基因中,Bcl-2、Fas表达无明显改变,bax、bad、Bcl-2/bax、p53随着药物作用浓度的增高表达逐渐增高;线粒体膜蛋白Apo2.7随着药物作用浓度和作用时间的增加表达逐渐增高,线粒体膜电位则逐渐下降。结论:MA在体外能明显抑制NB4细胞增殖,诱导细胞分化;一定浓度药物能够通过bax、bad等凋亡调控基因作用于线粒体诱导细胞凋亡。

鄂西香茶菜甲素立体、区域和化学选择性转变成冬凌草甲素

本文报道首次将鄂西香茶菜甲素(3)用立体、区域和化学选择性的反应转变成冬凌草甲素(oridonin,1),7步反应总产率为9％.

唇形科香茶菜属植物香茶菜研究进展

香茶菜主要含有二萜类及三萜类化学成分,具有抗菌、消炎、抗肿瘤及解热镇痛等药理活性。近年来,不少学者对不同产地香茶菜进行有效成分及药理活性等方面研究,本文从香茶菜化学成分、质量控制方法、药理活性等方面对资料进行系统归纳总结,为进一步合理开发利用香茶菜提供科学依据。

拟缺香茶菜的化学成分研究

目的研究拟缺香茶菜Rabdosia excisoides的化学成分。方法利用硅胶柱色谱法进行分离和纯化,通过谱学分析鉴定单体化合物结构。结果从拟缺香茶菜分离鉴定2个化合物,化合物Ⅰ命名为拟缺香茶菜甲素(excisoidesinA);化合物Ⅱ鉴定为齐墩果酸。结论化合物Ⅰ为首次发现的新二萜成分。