一株香蕉枯萎病菌拮抗菌的筛选鉴定及盆栽防治效果

[目的]从香蕉根际土壤等材料中分离筛选获得对香蕉枯萎病菌有抑制作用的拮抗菌,为香蕉枯萎病生物防治提供理论基础及菌株资源。[方法]采用稀释平板分离法,从香蕉枯萎病罹病土壤、桑蚕和发酵藻等材料中分离得到微生物,再分别采用平板划线法和单孢分离法对细菌、真菌进行分离和纯化,以香蕉枯萎病菌亚热带4号生理小种(Foc STR4)为靶标菌,采用平板对峙法进行拮抗菌的筛选试验,对抑制效果最好的菌株进行基因测序鉴定、生理生化指标测定;以只接种Foc STR4为对照进行防治香蕉枯萎病的盆栽试验。[结果]从罹病的香蕉根际土壤中筛选得到1株对Foc STR4有明显抑制效果的拮抗细菌TU3-1,抑制率为56.18%,在试验中发现TU3-1对香蕉炭疽病菌等其他13种供试植物病原菌有抑制作用,其中对香蕉炭疽病菌的抑制效果最好,抑制率为75.99%。盆栽试验结果显示,与只接种Foc STR4处理相比,对香蕉枯萎病的防治效果为51.81%。经基因测序、序列比对和生理生化实验观测,TU3-1菌株被鉴定为贝莱斯芽孢杆菌属(Bacillus),该菌株为革兰氏阳性菌,厌氧性,可水解淀粉和纤维素,产生氨气和蛋白酶,最适宜培养基为PDA培养基,最适培养温度为30℃,最适生长pH为7。[结论]筛选鉴定得到1株对Foc STR4抑制率为56.18%、对香蕉枯萎病防治效果为51.81%的拮抗细菌TU3-1,被鉴定为B.velezensis,TU3-1对其他10种植物病原真菌及3种植物病原细菌也有抑制作用,表现出广谱抑菌活性,可进一步开发作为生防菌种质资源。

3株内生菌对棉花枯萎病菌拮抗效果研究

[目的]探究3株棉花内生菌对棉花枯萎病菌的拮抗效果。[方法]以棉花枯萎病菌为试材,采用平板对峙法将3株内生菌菌悬液、上清液、菌挥发物分别对峙棉花枯萎病菌研究3株内生菌拮抗效果。[结果]3株内生菌菌悬液对棉花枯萎病菌的拮抗效果为O>T>DG3-1;3株内生菌上清液对棉花枯萎病菌的拮抗效果为T>O>DG3-1;3株内生菌菌挥发物对棉花枯萎病菌拮抗效果为DG3-1>T>O。并对抑制过的枯萎病菌菌丝形态进行显微观察,结果显示,菌丝出现空腔、断裂以及细胞壁部分溶解。重新培养抑制过的枯萎病菌,枯萎病菌可以正常生长,但生长较慢。[结论]3株内生菌对枯萎病菌生长有不同程度的影响。

石榴枯萎病菌拮抗菌株T9的分离及鉴定

[目的]石榴枯萎病是由甘薯长喙壳菌(Ceratocystis fimbriata Ellis.et Halsted)引起,对石榴有严重危害的土传病害。利用拮抗微生物抑制病原菌的繁殖是石榴枯萎病绿色防控的有效手段。通过筛选具有对石榴枯萎病原菌产生拮抗效果的微生物,研究其抑制菌作用,以期为石榴枯萎病生物防控提供菌种资源。[方法]从石榴的根际土壤中分离出真菌,根据产孢量、生长速率、拮抗系数及平板对峙结果进行筛选,对防效较好的真菌根据形态学和分子系统学进行鉴定,通过盆栽试验评估其对石榴枯萎病的防治效果。[结果]能有效抑制石榴枯萎病菌菌丝的生长的菌株T9经鉴定为非洲哈茨木霉菌(Trichoderma afroharzianum),盆栽防治效果最高可达71.35%。[结论]该菌株展现出了对石榴枯萎病的生物防治效果,具有应用价值。

物理诱变技术在提升有益微生物拮抗香蕉真菌病原菌方面的研究进展

香蕉真菌性病害是香蕉生产中的主要病害之一,可严重阻碍香蕉产业的可持续发展。而生物防治技术,尤其是利用生防菌的策略,为该问题提供了一个可持续的解决方案。尽管生物防治具有潜在的应用前景,但生防菌在田间的有效定殖和稳定防病能力仍是挑战。本研究聚焦于物理诱变技术对生防菌的改良效果,旨在提升其对香蕉真菌性病原的拮抗能力。利用物理诱变技术对生防菌株进行诱变改良可显著提高生防菌对寄主的定殖能力和病害的防治效果。为了明确物理诱变技术对提升生防菌田间防效的作用,本文综合分析了不同物理诱变技术的类型、作用机理以及它们在提升生防菌拮抗真菌病原体中的应用。同时,文中还探讨了突变菌株筛选与鉴定的方法,并对比了各技术的优缺点。特别指出了传统物理诱变技术在控制突变方向、提高效率及稳定性方面的局限,并提出了离子束、脉冲强光和空间诱变等新型物理诱变技术的潜在优势。通过归纳现有研究和展望未来发展方向,本文旨在为物理诱变技术在增强生防菌对植物病害防治效果的应用提供理论依据,并对其在未来香蕉真菌性病害管理中的应用潜力进行展望。

香蕉抗枯萎病株系内生菌的分离鉴定及抑菌促生效果

【目的】筛选和鉴定从威廉斯香蕉抗枯萎病株系根、球茎及假茎分离得到的可抑制香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense,Foc)内生菌,研究其抑菌促生效果。【方法】通过16S rRNA基因序列测定和生理生化试验,对香蕉抗枯萎病株系内生菌进行种类鉴定和系统发育分析;通过平板对峙试验检测各菌株的抑菌能力,探究拮抗菌分泌抑菌相关活性物质的种类;采用盆栽试验对香蕉抗枯萎病株系内生菌进行生防功能和促生功能的分析,筛选出生防性能优良且兼具促生效果的内生菌,并在大田试验中验证。【结果】分离获得13株代表菌株,其中8株对枯萎病1号生理小种(Foc 1)具有抑菌活性,7株对枯萎病4号生理小种(Foc 4)具有抑菌活性;综合盆栽试验和大田试验中代表菌株的防治效果及促生能力,筛选出贝莱斯芽孢杆菌XG1028、变栖克雷伯氏菌XQJ0301和暹罗芽孢杆菌XG0103共3株具备高抑菌活性以及促生能力的生防菌株。【结论】本研究筛选出的3株菌株丰富了抗香蕉枯萎病微生物种质资源,为防治香蕉枯萎病寻找安全、环保的新型生物防治剂提供参考。

响应面优化法提高吸水链霉菌株5-4拮抗香蕉枯萎病菌活性

为提高吸水链霉菌Streptomyces hygroscopicus菌株5-4的抑菌活性,以拮抗香蕉枯萎病菌(Foc TR4)的抑菌率为响应值,采用响应面三步法对菌株5-4的发酵条件进行优化,并测定观察其对Foc TR4病菌分生孢子萌发和菌丝生长的影响。结果表明,发酵条件优化后,吸水链霉菌株5-4的最优发酵培养条件为可溶性淀粉21.51 g/L,NaCl 4.73 g/L,接种量3.22%。该条件下菌株5-4发酵提取物500μg/mL处理对Foc TR4病菌的抑菌率大幅提高,抑菌率达到88.36%,比优化前的抑菌率54.96%提高60.77%;校正孢子萌发抑制率达到100%,比优化前的63.62%提高57.18%,且提取物处理的Foc TR4病菌的菌丝出现明显分叉、增生、肿大等现象。

梨火疫病菌拮抗菌株组合的亲和力及其防病效果测定

为获得对梨火疫病菌(Erwinia amylovora)抑菌活性高、防病效果好的拮抗菌组合,以实验室前期从香梨酵素液中分离初筛出的E.amylovora拮抗细菌菌株为材料,采用对峙培养法检测菌株之间的亲和性,打孔-抑菌圈法测定复配组合菌株的抑菌活性。对筛选出相容性良好,对E.amylovora抑菌作用强的拮抗细菌组合通过喷施香梨离体花序和盆栽杜梨苗评价其对梨火疫病的防病效果。结果显示:筛选出相容性良好的3个拮抗细菌组合FX1-FJ20、FX74-FN12和FX70-FX43,其复配比例为1∶1的组合菌体发酵液和组合除菌发酵液的抑菌率均达到83%以上,明显高于单一菌株。3个拮抗细菌组合菌体发酵液和组合除菌发酵液对香梨花腐的3~7 d的平均预防型防效分别为56.26%~73.16%和72.02~82.66%;对杜梨苗的7~15 d的预防型防效分别为67.38%~77.73%和71.78%~80.11%,治疗型防效分别为64.53%~75.01%和69.09%~79.03%。组合菌的防效均较单个菌株提高,组合菌除菌发酵液的防效优于组合菌菌体发酵液,预防型防效优于治疗型防效。综合防效试验结果可见,拮抗菌组合FX74-FN12的防效最佳,其菌体发酵液和除菌发酵液对香梨花腐3~7 d的预防型防效分别为73.16%、82.66%,比单菌株的平均防效分别增加12.90%和22.40%;对杜梨苗的7~15 d的平均预防型和治疗型防效分别达到75.00%和79.00%以上,比单菌株的平均防效分别增加15.12%和11.02%,对梨火疫病具有较好的生防潜力。

荧光假单胞菌YG-1对烟草根黑腐病菌的体外拮抗

为丰富烟草根黑腐病菌高效拮抗菌资源,从玉溪烟草种植区根际土壤中分离烟草根黑腐病高效拮抗菌,结合生理生化特性和16S rDNA序列分析鉴定高效拮抗菌,测定菌株发酵液挥发性物质及发酵液粗提物对根黑腐病菌的拮抗活性。结果表明,筛选得到的12株拮抗菌中YG-1表现出最强的拮抗活性,经生理生化特性和16S rDNA序列分析鉴定为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluroescens)。菌株YG-1发酵液挥发性物质可有效抑制烟草根黑腐病菌的生长,使菌丝扭曲畸形,并且降低产孢量,经GC-TOF-MS测定,YG-1发酵液含有酸、醛、酯以及一些含硫化合物,其中酸类物质和含硫化合物抑菌效果强。菌株YG-1发酵液粗提物能破坏烟草根黑腐病菌孢子质膜,当粗提物质浓度为0.25 mg/mL时,孢子失膜率达55.42%,同时检测到有明显的离子和核酸渗漏。拮抗菌YG-1具备开发为生防菌剂的潜力。

拮抗香蕉枯萎病菌的红树林土壤放线菌筛选与分子鉴定

香蕉枯萎病是目前香蕉产业面临的毁灭性病害,已成为香蕉生产和研究领域最为关注的热点。为发掘香蕉枯萎病的生防菌资源,利用从广西北部湾海域红树林根际土壤中分离得到的129株放线菌,以广西普遍发生且危害严重的香蕉枯萎病菌4号生理小种(FOC4)为供试菌,采用平板对峙法初筛和牛津杯法复筛筛选拮抗菌株,经初筛获得具有明显抑菌效果的放线菌12株。经复筛、反复转接和对峙培养,筛选出拮抗效果好、抑菌活性稳定的菌株8株。通过16S rRNA基因序列分析发现,除BBWM160归属小单胞菌属菌株外,其余7株均属链霉菌属菌株。

一株滁菊枯萎病拮抗菌的筛选及生防效果的研究

筛选出滁菊枯萎病病原菌的拮抗菌株,可为滁菊枯萎病的防治提供菌株资源。使用连作滁菊根际土壤作为供试土壤分离微生物,经过CAS培养基和平板对峙试验筛选出产铁载体拮抗菌株。共分离纯化出183株细菌分离株,通过CAS培养基筛选出77株具有产铁载体功能的菌株,与尖孢镰刀菌平板对峙试验复筛出5株拮抗菌。其中TZ-8抑菌率为59.68%,且具备固氮、解磷、解钾和分泌IAA的能力,鉴定表明该菌株为越南伯克霍尔德氏菌(Burkholderia vietnamiensis)。侵染试验表明该菌株能够有效抵御病原菌侵染植物组织,盆栽试验表明该菌株对滁菊枯萎病具备良好的生防效果。通过侵染试验和盆栽试验验证拮抗菌株对滁菊枯萎病具有一定的防治效果,可纳入滁菊枯萎病生防菌剂的菌株资源库。

5株拮抗细菌对香蕉枯萎病菌的抑制作用

从香蕉园或者其他果园的土壤中分离获得5株对香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f. sp.Cubense)具有抑制作用的拮抗菌,并对其抑菌效果和和机制进行了测定.结果表明,测试的5株拮抗菌d4、d5、d6、B3和p与香蕉枯萎病菌对峙培养5d后,在平板上产生明显的抑菌带,抑菌带宽度为16.5～20.5mm;培养10d后,仍然保持稳定的抑菌效果;5株拮抗菌发酵原液对孢子萌发具有显著的抑制作用,抑制率为90.49%～97.18%;拮抗菌对病菌的作用机制表现为对菌丝的消融、菌丝细胞的泡囊化、抑制病菌分生孢子的萌发、孢子芽管的扭曲.

拮抗细菌对香蕉枯萎病菌的离体抑菌活性研究

通过平板对峙培养，筛选出对香蕉枯萎病菌有拮抗作用的细菌6株：B05、B23、B44、B105、B133和B146，测定其抑菌带宽度达10～15mm。拮抗细菌的发酵液对病菌菌丝生长的抑制率为83．71％～88．76％，而经高温灭活的发酵液对病菌菌丝生长的抑制率为16．85％～33．48％；拮抗菌的非挥发性代谢产物对病菌菌丝生长的抑制率为74．72％～87．36％；挥发性代谢产物对病菌菌丝生长的抑制率为15．30％～37．64％。拮抗细菌发酵液在一定浓度范围内均能有效地抑制病菌孢子萌发，且浓度越高，抑制能力越强。拮抗菌株B05抑菌作用最稳定、抑菌活性最高，菌株B44抑制孢子萌发效果最好。

拮抗香蕉枯萎病菌的解淀粉芽孢杆菌LX1菌株的鉴定及其抗菌蛋白基因的克隆

收集海南不同盐碱地的土样进行拮抗香蕉枯萎病菌的微生物分离,对具有较强抑菌作用的菌株进行形态特征、生理生化和分子鉴定,并克隆其抗菌蛋白基因。结果分离到1株具有较强抑制香蕉枯萎病菌能力的细菌LX1,经鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。抑菌实验发现LX1菌株的发酵上清液中粗蛋白有一定的抑菌作用,经过Sephacryl S-200HR柱层析、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析分离纯化了其中抑菌作用最强的抗菌蛋白。质谱鉴定结果表明,抗菌蛋白与B.amyloliquefaciens FZB42内切葡聚糖酶同源性最高。根据质谱结果克隆了该抗菌蛋白的编码基因,该基因的核苷酸和氨基酸序列与B.amyloliquefaciens FZB42的内切葡聚糖酶的核苷酸和氨基酸序列同源性分别达99%和100%。拮抗香蕉枯萎病菌的芽孢杆菌LX1可作为潜在的防治香蕉枯萎病的的生防制剂,其抗菌蛋白基因也可通过遗传工程应用于香蕉枯萎病的防治。

抗香蕉枯萎病菌拮抗菌的鉴定及其定殖

通过逐步提高药物浓度方法，获得了抗利福平400μg／ml、对香蕉枯萎病菌拮抗活性稳定的T2WF和W10标记菌株。初步确定两菌株为芽孢杆菌属细菌。采用灌根接种法，在香蕉苗根际土和香蕉苗体内定殖结果表明，拮抗菌液接种浓度为5×10^4cfu／ml，两菌株均可从香蕉根际土和香蕉体内分离到，并在香蕉体内定殖和传导。在香蕉根际土、根部、球茎和假茎中，T2WF标记菌的菌量高峰分别出现在接种后5、5、11和3d，分别为707、437、273、117cfu／mg；而W10标记菌的菌量高峰分别出现在接种后5、3、5和5d，分别为784、260、253、110cfu／mg。两菌株在香蕉根际土和香蕉体内1～15d的消长动态均有一个共同的“由升到降”趋势。从数量和数量变动幅度上看，香蕉根部的菌量明显高于茎部的菌量。

香蕉枯萎病菌拮抗菌株的筛选

从香蕉健株根际土壤中分离到130个菌株,采用平板对峙生长法,筛选出对香蕉枯萎病菌4号生理小种有拮抗作用的菌株35个。经室内复筛试验有16个菌株对枯萎病菌抑菌带的宽度达6～11 mm,拮抗系数大于2.0,其中有7个菌株拮抗作用稳定。盆栽试验结果表明：拮抗菌FB5、T2WF、W10、WDWS和FB2培养液在接种病菌液后50 d的防治效果可达81％以上；拮抗菌FB5、T2WF、T2WC和W10培养液对香蕉苗生长有一定的促进作用。

一株对香蕉枯萎病菌具有良好拮抗作用的菊欧氏杆菌

在香蕉枯萎病重病园区,从生长正常香蕉假茎内分离获得一株细菌E353菌株。经对峙培养、孢子萌发抑制测定,E353对香蕉枯萎病菌菌丝生长、孢子萌发具有良好抑制效果。盆栽试验表明,E353活菌培养液(750ml/株)浸根处理,对香蕉枯萎病的防效为60.67%。经形态学、生理生化和16S rDNA序列比对,将E353鉴定为菊欧氏杆菌Erwinia chrysanthemi。

1株香蕉枯萎病菌拮抗菌鉴定及抑菌效果

为进一步明确菌株LP-03的生防效果和分类地位,根据菌株形态特征、培养特征结合生理生化特征以及16S rDNA序列比对和分析对菌株进行鉴定;以香蕉枯萎病菌1号小种(Fusarium oxysporum f.sp.cubense,FOC 1)为指示菌,采用平板对峙法测定菌株抑菌谱,采用菌丝生长抑制法和孢子萌发法测定其抑菌效果。经鉴定,该菌株为类植物乳杆菌(Lactobacillus paraplantarum),其对供试的12种植物病原真菌都有明显的抑菌效果,具有广谱抗菌性,尤其对香蕉枯萎病菌1号小种效果显著,抑菌带达到20.4 mm;对香蕉枯萎病菌菌丝生长和孢子萌发都有显著的抑制效果,在含有10%该菌株发酵液原液的培养基上香蕉枯萎病菌菌丝体不能生长,对菌丝体生长抑制率达到100%,菌株的LB发酵液对孢子萌发抑制率达到72.62%。

香蕉枯萎病菌和芦笋茎枯病菌的拮抗放线菌筛选与鉴定

从江西井冈山地区采集的土壤样品中分离获得76株放线菌,通过对峙培养法筛选出菌株S15对香蕉枯萎病菌Fusarium oxysporum、芦笋茎枯病菌Phomopsis asparagi有强抑制作用,该菌培养滤液对稻瘟病菌Magnaporthe oryzae、番茄灰霉病菌Botrytis cinerea、大豆炭疽病菌Colletotrichum truncatum、水稻纹枯病菌Rhizoctonia solani、柑橘炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides、香蕉黑星病菌Cladosporium cucumerinum、番茄早疫病菌Alternaria solani、黄瓜炭疽病菌Colletotrichum orbiculare、玉米大斑病菌Setosphaeria turcica等多种重要的植物病原真菌也均有较强的抑制作用,拮抗谱较宽。根据其形态特征、培养特性、生理生化特性和16S rDNA序列同源性分析,S15被鉴定为链霉菌属波卓链霉菌Streptomyces bottropensis。

香蕉枯萎病菌4号小种拮抗细菌的筛选与鉴定

为了筛选出对香蕉枯萎病菌具有拮抗作用的生物防治细菌菌株,从香蕉根际土中分离得到87株细菌菌株,采用平板对峙法,筛选出7株对香蕉枯萎病菌4号生理小种具有拮抗作用的菌株,并进行了抑制枯萎病菌4号小种菌丝生长和孢子萌发的试验。结果显示,拮抗菌株255、D5、F2、ZK11、214、215、252的发酵液对菌丝具有显著抑制效果,抑菌圈直径17.90～22.88 mm,并能使病菌菌丝产生畸形或泡囊状;对孢子萌发的抑制率64.40%～80.50%。通过对3株抑菌作用不同的拮抗菌株的16S rDNA鉴定和生理生化特性鉴定,结果显示,拮抗菌株255、D5和F2分别被初步鉴定为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)和地衣芽孢杆菌(Bacillus licheni-formis)。

拮抗香蕉枯萎病菌的海洋细菌TC-1发酵条件优化

通过对6种培养基进行筛选得到海洋拮抗细菌TC-1在BPDB培养基发酵的无菌发酵液对香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)的抑菌活性最好。在BPDB培养基基础上,通过正交试验优化培养基成分及用量,得到最佳配方为马铃薯200 g,牛肉膏20 g,葡萄糖20 g,玉米粉7 g、蛋白胨7 g,蒸馏水1 000 mL,pH自然;通过正交试验对发酵条件的装瓶量、培养温度、初始pH、发酵时间和转速5个因素进行了优化,得到最优发酵条件为:装瓶量20%,培养温度27℃,初始pH自然,发酵时间72 h,摇床转速200 r/min;在最佳培养基和最佳发酵条件下,TC-1的无菌发酵液抑菌圈直径为24.3 mm,与优化前抑菌圈直径20.7 mm相比,抑菌活性提高了17.4%。