黄瓜花叶病毒香蕉株系衣壳蛋白转基因烟草的研究

构建了侵染香蕉的黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）两个株系（ＢＳ和ＨＩ）的衣壳蛋白（ＣＰ）基因的植物表达载体，并通过农杆菌共培养法和基因枪法，分别将两个株系的ＣＰ基因转化入了两种烟草植株。其ＣＰ基因转化频率及植株再生率研究结果表明，农杆菌共培养法比基因枪法、土耳其烟比本生烟、农杆菌１：１０倍稀释液比培养原液和１：１００倍稀释液，具有更高的转化频率和植株再生能力。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和ＰＣＲ一Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｏｌｔ检测ＣＰ基因整合研究结果表明，在两株系ＣＰ基因转化的各１２株烟草中，各有９株含有各自的ＣＰ基因。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｏｌｔ分析表明，在各７株转基因植株中，各有５株具有各自ＣＰ基因的ｍＲＮＡ的转录。ＤＡＳ一ＥＬＩＳＡ检测表明，各５株转基因植株中都含有各自株系不等量表达的ＣＰ。用ＨＩ株系进行攻击接种表明，具有ｍＲＮＡ转录和翻译的两株系的各５株转基因植株都显示了较高的抗病水平。

黄瓜花叶病毒香蕉株系的衣壳蛋白基因克隆和序列分析

对侵染香蕉的黄瓜花叶病毒广东３个株系的衣壳蛋白（ＣＰ）基因，进行了克隆和序列分析。以提纯病毒ＲＮＡ为模板，应用ＲＮＡ反转录酶（ＡＭＶ）合成ＣＰ基因ｃＤＮＡ，再用ＴａｑＤＮＡ聚合酶进行ＰＣＲ扩增。通过常规基因克隆法将扩增的ＣＰ基因克隆入载体，选取每一株系的ＣＰ基因与载体表达方向相同和相反的各一个克隆，进行插入片段的全序列分析。结果表明，每一重组克隆测序长约７５０个核苷酸，任一株系其插入方向相反的两个重组克隆，其测定的序列完全互补；ＣＰ基因长６５７个核苷酸，可编码２１８个氨基酸。３个株系ＭＭ、Ｂ和ＣＳ间核苷酸序列同源率为％。６５％－９７．１１％，其中，田与ＣＳ关系紧密，而与ＭＭ关系稍远。３个株系与其它ＣＭＶ株系相比较，显示了与ＣＭＶ亚组Ⅰ相比与亚组Ⅱ有较紧密的同源关系。序列分析结果表明：广东３个分离物可划分为３个不同的株系。

黄瓜花叶病毒香蕉株系(CMV-Xb)RNA3 cDNA的克隆和序列分析

通过RT PCR方法 ,设计两对引物 ,克隆了黄瓜花叶病毒香蕉株系 (CMV Xb)RNA3 ,并进行了核苷酸和蛋白质水平上的分析。结果表明Xb株系RNA3全长 2 2 0 5nt,具有两个蛋白编码阅读框架 (ORF) ,其中 5’端 (97～ 936nt)编码一个 2 79aa的 3a蛋白 ;3’端 (12 2 5～ 1871nt)编码一个 2 18aa的CP蛋白。 5’非编码区域为 96nt;基因间隔区 (IR)长2 88nt;3’NR含有 32 4nt。通过与亚组Ⅱ其它株系RNA3核苷酸和所编码产物推导的氨基酸序列分析发现 ,亚组Ⅱ株系无论在编码区还是非编码区的核苷酸同源性都相对较高 ;亚组Ⅱ株系在进化过程中具有连续性。