香蕉炭疽菌rDNA ITS区的分子鉴定与检测

香蕉炭疽病菌(Colletotrichum musae)是一种引起香蕉采后病害的最重要病原,本研究用真菌18S^28S间的内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)通用引物18SF和28SR扩增香蕉炭疽菌和其它外群真菌的基因组DNA,扩增出约510 bp的片段;通过克隆测序香蕉炭疽菌的ITS全序列并与GenBank中炭疽菌属其它种的ITS序列比对,设计出香蕉炭疽菌的特异性引物ColM1和ColM2。用此特异引物可以从香蕉炭疽菌株中扩增出382 bp的特异性片段,而其余20个参试菌株和香蕉组织的PCR反应结果为阴性,灵敏度实验证明可以检测到目标DNA的浓度为0.1 pg。该方法可用于快速、准确和灵敏地检测香蕉炭疽菌,为快速监测组织中有无香蕉炭疽病菌潜伏侵染与及早采取防治措施提供积极的指导意义。

海藻蛋白质提取物对香蕉炭疽菌的抑制作用

以香蕉炭疽菌(Gloeosporium musarum)为作用靶标,测定了8种海藻的硫酸铵分级盐析蛋白对其菌丝生长和分生孢子萌发的作用效果.发现8种海藻的不同蛋白质组分对香蕉炭疽菌菌丝生长和分生孢子萌发的作用效果不同,其中有些蛋白质组分能抑制菌丝生长;有些能抑制其分生孢子的萌发,使其萌发率降低,并对孢子萌发的芽管长度、着生位置、芽管数产生影响.表明海藻中存在对香蕉炭疽菌具有抑制作用的蛋白质组分.

香蕉炭疽菌菌株亲缘关系的RAPD分析

应用筛选的8个Operon随机引物对供试菌株的DNA进行扩增，所产生的RAPD图谱揭示了香蕉炭疽菌具有丰富的种内遗传多样性。UPGMA聚类分析的结果表明：26个香蕉炭疽菌被分为两个与地理来源相关的RAPD聚类群，它们分别由广东菌株和海南菌株为主组成。在两个香蕉菌群的外侧，两个胶胞炭疽菌菌株聚为一个小的外群。这些结果表明香蕉炭疽菌存在有与地域相关的种下类群分化。

韭菜汁对香蕉炭疽菌的抑制作用研究

配制不同浓度的韭菜汁,通过香蕉炭疽菌离体接种平板试验和香蕉活体接种试验,研究韭菜汁对香蕉炭疽菌的抑制效果。结果表明,在离体接种平板试验中,不同浓度的韭菜汁处理均对香蕉炭疽菌有抑制作用,且浓度越大,其抑制病菌孢子萌发与菌丝开始扩展的天数越多,当浓度≥20%时,韭菜汁可以使香蕉炭疽菌完全失去活性,不能萌发;在活体接种试验中,各浓度韭菜汁处理均能抑制接种的催熟香蕉在20℃条件下香蕉炭疽病的发病率,其中浓度为20%韭菜汁的抑制效果好于其他浓度的处理,抑菌率达61.2%。

根癌农杆菌介导的香蕉炭疽菌转化

利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的转化方法,以香蕉炭疽菌(Colletotrichum musae)的分生孢子为受体,pTHPR1为双元载体,成功实现了植物病原真菌香蕉炭疽菌的遗传转化.在诱导培养基pH 5.6、乙酰丁香酮200μg/mL、共培养时间24 h等适宜条件下,最高转化率可达260个转化子/106个孢子.对转化子的PCR检测表明,T-DNA已整合到香蕉炭疽菌的基因组中,转化子的遗传表现稳定.

内生枯草芽孢杆菌B215对香蕉炭疽菌抑制作用初探

对香蕉内生枯草芽孢杆菌菌株B215的对峙培养和菌体代谢物的活性测定。结果表明B215对香蕉炭疽病原真菌具有较强的拮抗作用,对峙培养明显抑制靶标菌菌丝向四周均匀扩展,抑菌带宽度0.4cm,菌株滤液的EC50值达4.99%。

香蕉炭疽菌拮抗生防菌株的筛选及鉴定

从香蕉组织中分离筛选到18株在平板上对香蕉炭疽菌孢子有明显抑菌活性的菌株,将这18株菌分别与香蕉炭疽菌共同接种到香蕉果指上进行活体防效复筛,发现与清水对照组相比较,AcT-02、AcT-07、AcT-09、AcT-11、AcT-13共5株细菌均表现出显著的防治效果,防效分别为49.77%±4.20%、47.87%±8.97%、63.82%±3.16%、68.15%±2.48%和73.85%±2.39%,香蕉病情指数显著降低;将该5株菌进行香蕉自然发病的防效试验,发现只有AcT-13菌株具有显著防治效果,其病情指数为18.67%,比对照降低了13%,将AcT-13进行形态学观察、生理生化特性测定以及分子学序列分析,初步将AcT-13菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens。

海南省潜伏香蕉果实的炭疽菌对特克多的抗药性

对来自海南省13个地区的67个Colletotrichum musae（Berk. & Curt.）Arx菌株进行抗药性检测，所测菌株均表现出敏感，即未产生特克多抗药性。室内采用高浓度特克多和90～95%致死剂量紫外光进行抗性诱导，获得的抗性菌株均能在1000g/ml特克多的PDA培养基上生长，但EC50值相差很大，最高达130g/ml，而最低为0.87g/ml。抗性菌株对多菌灵和甲基托布津均表现正交互抗药性。连续无毒培养10代后，所有菌株仍可在5g/ml特克多的培养基上生长，表现抗性遗传稳定。抗性菌株的产孢能力和致病力与敏感菌相比并没有下降，表现很高的适应能力。

枯草芽孢杆菌B68对香蕉果实潜伏炭疽菌的抑制作用

用枯草芽孢杆菌B68作用于香蕉果实潜伏炭疽菌，测定其抑菌效果和抑菌机制，结果表明，对峙培养7d后在平板上产生明显的抑菌带，其宽度为0．5～1cm，培养10d后仍然保持稳定的抑菌效果；B68无菌滤液对病菌菌丝生长和孢子萌发都具有显著的抑制作用，且浓度越高，抑制能力越强。无菌滤液对病菌菌丝的作用机制表现为对菌丝的消融、菌丝细胞的泡囊化；抑制病菌分生孢子的萌发，使芽管扭曲。

海南省香蕉果实潜伏炭疽菌生物学特性研究

从海南 13个地区分离获得的 17个 Colletotrichum musae分离菌系经测定 ,无论是菌丝生长还是孢子萌发均以 30℃为适温 ,p H值 6～ 7为最佳条件 ;菌丝生长的最佳碳源是葡萄糖 ,而孢子萌发最佳碳源则是蔗糖 ,5种碳源都可提高孢子萌发率 ;自然光照 ( 12 h光暗交替 )最有利于菌丝生长 ,30min紫外照射可使分生孢子致死。 17个菌系菌落形态特征、菌丝体生长速率和致病力均有很大差异 ,其中以屯昌 3、文昌 4、琼山 1和万宁 1等菌系的菌丝生长快 ,而临高 1、昌江 3和昌江 6则最为缓慢。

香蕉采后炭疽病生防菌的多重筛选研究

为获得防治香蕉炭疽病的拮抗菌并客观评价其防病潜力,研究了香蕉炭疽病生防菌的多重筛选方法。试验从不同来源的样品中分离得到997株微生物,经初筛获得具有拮抗作用的菌株280株;从中选取20株拮抗菌进行多重筛选测试。结果表明:拮抗菌对香蕉炭疽病菌菌丝生长、孢子萌发和对蕉果病斑的抑制能力的强弱次序均不相同,且有4株在平皿内能表现抑菌作用的拮抗菌处理蕉果后,炭疽病的发病指数反而升高。因此,单靠一种筛选途径来评价拮抗菌的生防潜力不够客观,多重筛选的方法更有利于获得具有不同防病机制的优良生防菌株。

阴香内生细菌YX6的鉴定及对香蕉炭疽病的防效

香蕉炭疽病是我国香蕉采后贮藏、运输、销售过程中发生的主要病害之一,为筛选出对其有较好防治效果的生防菌,本文以香蕉炭疽菌(Colletotrichum musae)为靶标菌,利用平板对峙生长法从阴香体内分离到一株对香蕉炭疽菌拮抗作用较强的菌株YX6,利用常规方法结合16S r DNA序列分析对该菌株进行了鉴定,并测定了其对感病香蕉的防病效果。结果表明:菌株YX6的皿内拮抗活性达53%,菌株鉴定为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus),经测定该菌株发酵液及其滤液对感病香蕉果实均有显著的防病效果,防效分别为51.35%和45.95%。

6种杀菌剂对香蕉采后炭疽病防治效果研究

[目的]测定6种杀菌剂对香蕉炭疽菌的抑制率和防治效果。[方法]采用菌丝生长速率测定法，测定6种杀菌剂对香蕉炭疽菌的平板抑制率；同时配制终浓度为5、10、50、100、200mg／L施保功进行药效试验。[结果]在PSA平板中，施保克、施保功对香蕉炭疽菌的抑制效果最好，抑制率可达到100％，好生灵的抑制效果最差。施保功浓度梯度防治效果检验中，施保功浓度为200mg／L时，防治效果就可达到100％。[结论]施保功对香蕉炭疽病的防治效果最好，且使用浓度为100-200mg／L。

生防放线菌CY-14的鉴定及其发酵液对香蕉炭疽病的防治效果

香蕉炭疽病是由香蕉炭疽菌Colletotrichum musae侵染引起的,是香蕉采后贮藏、运输和销售过程中发生的主要病害之一,严重影响中国香蕉的北运和出口。从土壤中分离到1株对香蕉炭疽菌具有拮抗作用的放线菌CY-14,通过形态特征、培养特性、生理生化特性和16S rDNA序列分析对该菌株进行了初步鉴定,并对其发酵液进行了活性评价。结果表明：经初步鉴定,该放线菌为链霉菌属Streptomyces sp.;其发酵液稀释10倍对香蕉炭疽菌的抑制率达92.5%,同时对其他8种植物病原真菌均具有较强的抑菌活性,抗菌谱较广;其发酵液热稳定性较好,经100℃处理2 h后,体积分数为10%的发酵液对香蕉炭疽菌的抑制率为55.7%,发酵液稀释1 000倍后仍可完全抑制香蕉炭疽菌的孢子萌发;CY-14纯发酵液对香蕉炭疽病具有一定的防效,与对照药剂1 000 mg/L百菌清的防效相当。菌株CY-14作为香蕉炭疽病的生防放线菌,具有发现新型抗生素或者活性化合物的潜能,可对其进行深入的研究。

阴香叶提取物的抑菌活性初步研究

用不同溶剂对阴香[Cinnamomum burmanii (Nees) Bl] 叶进行提取,以生长速率法测定了提取物对植物病原真菌的抑菌作用。结果表明:阴香叶的氯仿提取物的抑菌活性最好;氯仿提取物对西瓜枯萎菌、芒果炭疽菌、香蕉枯萎菌和香蕉炭疽菌的EC50分别是0.3193mg/ml、0.1552mg/ml、0.0226mg/ml、0.019 2 mg/ml,其中提取物对香蕉炭疽菌的毒力最高,值得进一步研究。

茶树油对2种农业致病菌的抑菌效果

茶树油具有良好的抑菌能力,在果蔬天然保鲜杀菌剂的开发中具有良好的应用前景。采用滤纸扩散法测定不同浓度的茶树油对香蕉炭疽菌和芒果炭疽菌的离体抑制效果。结果显示,茶树油对这2种菌都具有良好的抑菌效果,且浓度增加,抑菌作用逐渐增强,对芒果炭疽菌和香蕉炭疽菌的EC50分别为339.13和143.10μL/L。

9种湘西植物甲醇提取物的抗真菌活性

以植物病原真菌荔枝霜疫霉菌（Peronophthora litchii）、稻瘟菌（Magnaporthe grisea）和香蕉炭疽菌（Colletotrichum musae）为供试菌，对采自湖南湘西地区的9种植物甲醇提取物的抗真菌活性进行了测试．结果表明，在0．01g/mL的条件下，荔枝草（Salvia pleseian）提取物对荔枝霜疫霉菌菌丝生长的抑制率为84．15％，对稻瘟菌和香蕉炭疽菌的抑制率也分别达到74．85％和64．84％；对稻瘟菌抑制率较高的植物分别是豆薯子（Pachyrhizus erosus）（90．41％）、荔枝草（74．85％）和泽漆草（Euphorsia helioscopia）（66．32％）．