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定点突变法确定人体CYP2A6和CYP2A13香豆素代谢的关键氨基酸
被引量:
2
1
作者
何晓阳
孙莉
+1 位作者
SHEN Jian
洪钧言
《中山大学学报(医学科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期126-131,共6页
【目的】通过比较人体主要尼古丁代谢酶CYP2A6和CYP2A13野生型及突变体酶蛋白对香豆素7-羥化反应的催化动力学特征,确定影响两者催化活性差异的关键氨基酸残基,提供建立评估人群尼古丁代谢酶基因多态性与吸烟行为及癌症易感性生物标记...
【目的】通过比较人体主要尼古丁代谢酶CYP2A6和CYP2A13野生型及突变体酶蛋白对香豆素7-羥化反应的催化动力学特征,确定影响两者催化活性差异的关键氨基酸残基,提供建立评估人群尼古丁代谢酶基因多态性与吸烟行为及癌症易感性生物标记的依据。【方法】运用定点突变和Sf9昆虫杆状病毒蛋白表达体系产生CYP2A6和CYP2A13在300,301以及369位点氨基酸互换的突变体蛋白质,测定系列香豆素浓度下的各个酶蛋白对香豆素7-羥化的催化反应活性,获得动力学参数并与野生型酶蛋白进行比较分析。【结果】与野生型CYP2A6相比较,其Ile300→Phe突变体催化效率(Kcat=Vmax/Km)显著下降而Gly301→Ala突变体催化效率显著上升(1.64和8.02相对于野生型3.56,P<0.01)。与之相对应,CYP2A13的Phe300→Ile突变体催化效率则明显上升而Ala301→Gly突变体催化效率显著下降(1.03和0.06相对于野生型的0.27,P<0.05)。这些酶催化特性的改变,主要是由于Vmax的改变所致。369位的氨基酸残基,无论是Ser还是Gly对CYP2A6或CYP2A13的香豆素7-羥化反应催化活性均无明显的影响。【结论】300和301位的氨基酸是影响CYP2A6及CYP2A13对香豆素7-羥化反应催化活性的关键残基,而369位氨基酸不影响此活性。
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关键词
CYP2A6
CYP2A13
点突变
香豆素代谢
关键氨基酸
下载PDF
职称材料
HPLC柱后光衍生荧光法测定中药饮片中黄曲霉毒素残留量
被引量:
27
2
作者
郝爱鱼
赵丽元
+4 位作者
刘英慧
王戈
金红宇
毕秀玲
门启鸣
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期2203-2207,共5页
目的:采用免疫亲和净化HPLC柱后紫外光化学衍生荧光检测法研究中药饮片中黄曲霉毒素测定的加样回收率,考察该方法在中药饮片黄曲霉毒素残留测定中的可行性,评价120批中药饮片的污染状况,总结污染规律。方法:样品经溶剂提取、免疫亲和柱...
目的:采用免疫亲和净化HPLC柱后紫外光化学衍生荧光检测法研究中药饮片中黄曲霉毒素测定的加样回收率,考察该方法在中药饮片黄曲霉毒素残留测定中的可行性,评价120批中药饮片的污染状况,总结污染规律。方法:样品经溶剂提取、免疫亲和柱净化后由HPLC柱后光衍生荧光检测法测定其中黄曲霉毒素残留量,对每种饮片进行4μg.kg-1(以黄曲霉毒素B1计)的加样回收率考察。结果:黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的最低检测限分别为0.44,0.12,0.41,0.16 pg;线性范围分别为1.74~218.0,0.50~62.17,1.63~203.1,0.62~61.94 pg(r﹥0.9999)。所考察饮片中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2总回收率和B1回收率均在60%~120%之间的占87%;被污染的批次占9.2%,其中污染程度超过目前中国药典限度的占6.7%。结论:免疫亲和净化HPLC柱后光衍生荧光检测法具有方法简便,衍生反应稳定,灵敏度高,重现性好,反应系统污染少的优点,适合于大多数中药饮片的黄曲霉毒素检测;种子类被污染的程度严重,应扩大该类中药的监测范围。
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关键词
黄曲霉毒素
二呋喃
香豆素
类
代谢
产物
中药饮片毒性成分
高效液相色谱
光衍生
免疫亲和柱
回收率
安全监测
原文传递
题名
定点突变法确定人体CYP2A6和CYP2A13香豆素代谢的关键氨基酸
被引量:
2
1
作者
何晓阳
孙莉
SHEN Jian
洪钧言
机构
深圳大学生命科学院
桂林医学院组织胚胎学教研室
Aventis制药公司
新泽西医科牙科大学公共卫生学院/环境与职业健康研究所
出处
《中山大学学报(医学科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期126-131,共6页
基金
美国NIH课题
文摘
【目的】通过比较人体主要尼古丁代谢酶CYP2A6和CYP2A13野生型及突变体酶蛋白对香豆素7-羥化反应的催化动力学特征,确定影响两者催化活性差异的关键氨基酸残基,提供建立评估人群尼古丁代谢酶基因多态性与吸烟行为及癌症易感性生物标记的依据。【方法】运用定点突变和Sf9昆虫杆状病毒蛋白表达体系产生CYP2A6和CYP2A13在300,301以及369位点氨基酸互换的突变体蛋白质,测定系列香豆素浓度下的各个酶蛋白对香豆素7-羥化的催化反应活性,获得动力学参数并与野生型酶蛋白进行比较分析。【结果】与野生型CYP2A6相比较,其Ile300→Phe突变体催化效率(Kcat=Vmax/Km)显著下降而Gly301→Ala突变体催化效率显著上升(1.64和8.02相对于野生型3.56,P<0.01)。与之相对应,CYP2A13的Phe300→Ile突变体催化效率则明显上升而Ala301→Gly突变体催化效率显著下降(1.03和0.06相对于野生型的0.27,P<0.05)。这些酶催化特性的改变,主要是由于Vmax的改变所致。369位的氨基酸残基,无论是Ser还是Gly对CYP2A6或CYP2A13的香豆素7-羥化反应催化活性均无明显的影响。【结论】300和301位的氨基酸是影响CYP2A6及CYP2A13对香豆素7-羥化反应催化活性的关键残基,而369位氨基酸不影响此活性。
关键词
CYP2A6
CYP2A13
点突变
香豆素代谢
关键氨基酸
Keywords
CYP2A6
CYP2A 13
site-directed mutagenesis
coumarin 7-hydroxylation
key amino acid
分类号
Q510.1 [生物学—生物化学]
下载PDF
职称材料
题名
HPLC柱后光衍生荧光法测定中药饮片中黄曲霉毒素残留量
被引量:
27
2
作者
郝爱鱼
赵丽元
刘英慧
王戈
金红宇
毕秀玲
门启鸣
机构
大连市食品药品检验所
中国食品药品检定研究院
出处
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期2203-2207,共5页
基金
"十一五"国家科技支撑计划(2008BAI55B02)
大连市科技计划基金项目(2011E15SF121)
文摘
目的:采用免疫亲和净化HPLC柱后紫外光化学衍生荧光检测法研究中药饮片中黄曲霉毒素测定的加样回收率,考察该方法在中药饮片黄曲霉毒素残留测定中的可行性,评价120批中药饮片的污染状况,总结污染规律。方法:样品经溶剂提取、免疫亲和柱净化后由HPLC柱后光衍生荧光检测法测定其中黄曲霉毒素残留量,对每种饮片进行4μg.kg-1(以黄曲霉毒素B1计)的加样回收率考察。结果:黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的最低检测限分别为0.44,0.12,0.41,0.16 pg;线性范围分别为1.74~218.0,0.50~62.17,1.63~203.1,0.62~61.94 pg(r﹥0.9999)。所考察饮片中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2总回收率和B1回收率均在60%~120%之间的占87%;被污染的批次占9.2%,其中污染程度超过目前中国药典限度的占6.7%。结论:免疫亲和净化HPLC柱后光衍生荧光检测法具有方法简便,衍生反应稳定,灵敏度高,重现性好,反应系统污染少的优点,适合于大多数中药饮片的黄曲霉毒素检测;种子类被污染的程度严重,应扩大该类中药的监测范围。
关键词
黄曲霉毒素
二呋喃
香豆素
类
代谢
产物
中药饮片毒性成分
高效液相色谱
光衍生
免疫亲和柱
回收率
安全监测
Keywords
aflatoxins
difurocoumarines metabolites
prepared traditional Chinese medicine toxic ingredients
HPLC
photochemical derivation
immunoaffinity column
recovery
safety monitoring
分类号
R917 [医药卫生—药物分析学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
定点突变法确定人体CYP2A6和CYP2A13香豆素代谢的关键氨基酸
何晓阳
孙莉
SHEN Jian
洪钧言
《中山大学学报(医学科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2009
2
下载PDF
职称材料
2
HPLC柱后光衍生荧光法测定中药饮片中黄曲霉毒素残留量
郝爱鱼
赵丽元
刘英慧
王戈
金红宇
毕秀玲
门启鸣
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
27
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