香鱼(Plecoglossus altivelis)排卵后卵内油球、酶活、丙二醛及受精率、孵化率的变化

以香鱼卵母细胞为研究对象,采用观察卵内油球、有关酶的活力、以及卵的受精率和孵化率等变化的方法,研究了香鱼卵母细胞长时效演化的相关机理,结果表明,随着香鱼卵在腹腔内保存时间的延长,卵内油球从0h的油球直径≤10μm,且均匀分布,逐渐融合增大,至108h增大到120μm,油球数仅有5—6个。同时,SOD、POD的活力及MDA含量均呈先升后降的变化趋势,最大峰值分别出现在60h、36h和24h。随着油球和酶活的变化,卵子质量逐渐下降,表现为受精率和孵化率的降低:排卵后24h、48h、72h、96h的受精率分别为94.37%、88.19%、50.20%、10.83%,孵化率分别为85.78%、68.14%、25.54%、0.53%。

香鱼(Plecoglossus altivelis Temmincket Schlegel)海水养殖的初步研究

在水泥池中进行香鱼海水养殖试验,试验香鱼在海水中养殖80d,香鱼的平均体重在试验开始时为7.14g,结束时平均体重35.52g,养殖成活率68.9%,饲料系数2.36。海水水温超过25℃则香鱼出现严重的病害并大量死亡。

香鱼(Plecoglossus altivelis)的人工繁殖及胚胎发育

在上海地区首次对香鱼进行了人工繁殖试验，并对亲鱼培育过程中采取的遮光诱导、海水刺激等方法作了探讨。试验结果表明，在人工控制条件下，香鱼性腺发育正常，催产率１００％；在水温１６．５℃～１８．０℃、盐度５‰的流水环境中，经１０ｄ左右仔鱼大量出膜；出膜后第４天开始摄食；仅靠卵黄，仔鱼能存活１周左右，体长为７ｍｍ。

香鱼(Plecoglossus altivelis)NFκB抑制因子α基因PaIκBα克隆及表达

核转录因子κB抑制因子α(IκBα)是NFκB/IκB信号传导通路的重要成员,参与机体抗细菌感染等多种免疫反应,可通过蛋白质间的相互作用结合核转录因子NFκB,从而调控生物体多种免疫基因表达。该研究采用RACE技术从香鱼中克隆得到核转录因子κB抑制因子PaIκBα基因的cDNA全长序列(1341bp,GenBank Accession No.JN801027),开放阅读框ORF为936bp,编码311个氨基酸,5'非编码区为64bp,3'非编码区为341bp。生物信息学分析表明,香鱼IκBα蛋白的序列中包含5个保守的锚蛋白重复序列,N末端含有信号诱导蛋白,C末端含有PEST序列。同源性比对结果表明,香鱼IκBα蛋白与胡瓜鱼IκBα的同源性最高,为95%;其次是大西洋鲑、虹鳟、尼罗罗非鱼和鳜鱼等,同源性分别为76%、75%、70%和68%。系统进化树分析表明,香鱼IκBα蛋白与胡瓜鱼、虹鳟、尼罗罗非鱼、鳜鱼和大西洋鲑等亲缘关系最近。RT-PCR分析表明,PaIκBα基因在香鱼肝脏、肾脏、脾脏和鳃中表达水平较高,其次是肠、脑和肌肉,在心脏中表达极少。嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophil)感染香鱼后,PaIκBα基因表达增强,感染24h达最大值,表明PaIκBα基因在香鱼受到嗜水气单胞菌刺激的免疫过程中可能发挥着重要作用。

香鱼(Plecoglossus altivelis)肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因的分子克隆、鉴定及免疫相关性表达

肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)是TNF超家族成员之一,在动物机体抵抗细菌和病毒入侵时发挥重要作用。本研究基于香鱼(Plecoglossus altivelis)单核/巨噬细胞转录组数据库,获得了香鱼TNF-α基因(Pa TNF-α)全长c DNA序列。Pa TNF-α由1932个核苷酸组成,包含一个大的开放阅读框,编码235个氨基酸,预测分子量为26.4 k Da。氨基酸序列多重比对分析表明,Pa TNF-α具有TNF超家族的特征序列、1个TACE酶切位点和1个保守的二硫键,与虹鳟(Oncorhynchus mykiss)TNF-α同源性最高,为53.4%;系统进化树分析表明,鱼类TNF-α形成一个大簇,Pa TNF-α与虹鳟TNF-α进化相关性最高。实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)结果显示,Pa TNF-αm RNA在头肾中表达量最高;鳗弧菌(Vibrio anguillarum)感染后香鱼肝、脾、头肾和外周血细胞中Pa TNF-αm RNA表达量显著上调;香鱼单核/巨噬细胞经鳗弧菌、LPS和poly(I:C)处理后,Pa TNF-αm RNA表达量显著上调。原核表达了Pa TNF-α成熟肽,并制备了抗血清。Western blot分析表明,鳗弧菌感染后香鱼血清和单核/巨噬细胞上清中的Pa TNF-α表达量含量也显著增加。综上,香鱼TNF-αm RNA及蛋白的表达与病原体感染密切相关,为深入研究鱼类TNF-α的生物学功能及其在病原体感染中的作用机制提供理论基础。

香鱼(Plecoglossus altivelis)CC型趋化因子受体3(CCR3)基因的分子鉴定及其对鳗弧菌感染响应的研究

CC趋化因子受体3(CCR3)是CC型趋化因子的受体,属于G蛋白耦联受体(GPCRs)家族成员,与过敏等多种炎性疾病密切相关。为探讨香鱼CCR3(PaCCR3)在响应鳗弧菌感染时的表达变化,从转录组测序数据中获得了PaCCR3基因全长cDNA序列。序列分析表明,PaCCR3具有7次跨膜结构,与胡瓜鱼CCR3氨基酸序列同源性最高(84.6%)。系统进化树分析表明,哺乳类、两栖类和鱼类CCR3单独成簇,鱼类CCR3形成一个大簇;PaCCR3与胡瓜鱼CCR3进化相关性最高。实时荧光定量PCR结果显示,PaCCR3基因mRNA在单核/巨噬细胞(MO/MФ)中表达量最高;鳗弧菌感染后肝、脾和头肾中PaCCR3基因mRNA表达量显著上调;且香鱼MO/MФ经鳗弧菌体外刺激后,PaCCR3基因mRNA的表达量显著上调。Western blot分析表明经鳗弧菌体外刺激后,香鱼MO/MФ中PaCCR3蛋白的表达量也显著增加。综上,PaCCR3基因mRNA及其编码蛋白响应于病原体感染而被诱导表达。研究结果首次揭示了香鱼CCR3基因mRNA及蛋白的表达响应于鳗弧菌侵染,它可能通过介导MO/MФ的功能活性参与免疫应答,可为深入探究鱼类CCR3的功能及作用机制提供新的切入点。

香鱼(Plecoglossus altivelis)养殖群体遗传多样性的AFLP分析及性别特异性分子标记筛选

采用扩增片段长度多态性(AFLP)技术分析了香鱼(Plecoglossus altivelis)养殖群体的遗传多样性,并筛选性别特异性分子标记。结果表明,15对选扩引物组合共扩增到889个位点,其中多态性位点380个,多态率为42.74%;群体Nei氏遗传多样性指数为0.1454,Shannon氏指数I为0.2174。香鱼养殖群体的遗传多样性较丰富,处于中等偏上水平。仅引物组合E-ATG/M-CTG扩增到1条雄性特异性条带,长度为139bp。以该雄性特异性AFLP条带的DNA序列为模板,设计1对特异的PCR引物并在10尾已知性别的香鱼(雌雄各5尾)中扩增检验,结果显示5尾雄鱼均可扩增到目的条带而5尾雌鱼均无扩增。表明该序列是雄性特异性分子标记,可用于鉴别香鱼的遗传性别,并为香鱼的性别决定机制和性别控制研究奠定基础。

香鱼(Plecoglossus altivelis)精子的超微结构及其与鲤形目及鲑形目其他鱼类精子结构的比较研究

为了解香鱼(Plecoglossus altivelis)精子的形态结构特点,采用扫描和透射电镜技术观察了香鱼精子的超微结构,并与鲤形目及鲑形目其他鱼类精子结构进行了比较。结果表明,香鱼精子由头部、中段和尾部组成,全长约23.5μm。头部呈弹头形,由细胞核外包质膜构成,长约1.8μm、宽约0.8μm;细胞核从后端中央向前深凹至核的近前端,形成植入窝,使核呈倒U字形,核的前端无顶体;植入窝内有中心粒复合体及小段起始的鞭毛,中心粒复合体由近端中心粒和远端中心粒(基体)组成,两者之间夹角约135o。中段为"半袖套"结构,长约0.5μm,其内部为一较大的"半套筒"形线粒体。鞭毛起始于远端中心粒,由轴丝及外包轴丝的质膜组成,轴丝为典型的"9+2"微管结构;鞭毛两侧有质膜向外突起形成侧鳍。研究显示,香鱼精子与典型的鲤形目(Cypriniformes)鱼类精子卵圆形或圆球形头部及细胞核、不对称的袖套及尾部鞭毛无侧鳍等结构特征不同,也与鲑形目(Salmoniformes)鱼类精子卵圆形或椭圆形头部及马蹄形或浅U形细胞核、两中心粒相互平行或垂直、袖套结构完整等结构特征不同。香鱼精子结构具有种的特异性。

香鱼(Plecoglossus altivelis)铁蛋白的分子鉴定、表达及功能研究

铁蛋白(Ferritin,Fer)是一类广泛存在于生物体内、并与铁代谢密切相关的铁储存蛋白。本研究通过香鱼(Plecoglossus altivelis)单核/巨噬细胞转录组测序获得铁蛋白亚基基因(Pa Fer)c DNA全序列,结果显示,Pa Fer由943个核苷酸组成,开放阅读框为531bp,编码176个氨基酸,预测相对分子质量为20.4k Da,等电点为5.46。氨基酸序列多重比对结果显示,Pa Fer具有保守的铁蛋白样双铁结构域,与虹鳟(Oncorhynchus mykiss)和大西洋鲑(Salmo salar)Fer M亚基(Fer-M)同源性最高,均为92%;系统进化树分析表明,Pa Fer与胡瓜鱼、大西洋鲑和虹鳟的Fer-M聚为一个小簇,与虹鳟Fer-M进化相关性最高。实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q PCR)结果表明,Pa Fer m RNA主要在香鱼脾脏中表达量最高,肾脏、鳃、脑和心脏中次之;鳗弧菌(Vibrio anguillarum)感染后,香鱼肝脏、脾脏和肾脏等组织中Pa Fer m RNA表达显著上调。原核表达了Pa Fer重组蛋白(r Pa Fer),r Pa Fer以包涵体形式表达,镍柱亲和层析纯化重组蛋白,尿素梯度透析法复性r Pa Fer。铁螯合实验结果显示,当r Pa Fer浓度为4μg/m L时,螯合铁的能力最大,为43.96%。抑菌实验结果表明,r Pa Fer对鳗弧菌、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)和创伤弧菌(Vibrio vulnificus)的最小抑菌浓度分别为1.5625、25.0和100.0μg/m L。综上,Pa Fer与香鱼抗病原感染的免疫反应紧密相关,可能通过调控铁代谢参与鱼类抵抗微生物的宿主自身免疫过程。本研究为进一步研究鱼类Fer的功能及在病原菌感染免疫中的分子机制奠定基础。

香鱼(Plecoglossus altivelis)JNK1基因克隆及其在成熟卵过熟进程中的表达变化

c-Jun氨基端激酶(c-Jun N-terminal kinases,JNKs)是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedprotein kinase,MAPK)蛋白超家族成员之一,参与细胞骨架构建、细胞凋亡等多种细胞活动。本研究克隆了香鱼(Plecoglossus altivelis)JNK1基因cDNA序列,并检测了其成熟卵在排入体腔保存不同时间(0-96h)的过熟过程中JNK1基因的表达变化。结果显示,香鱼JNK1基因cDNA序列全长1670bp,含一个长度1155bp的开放读码框,编码384个氨基酸,预测蛋白分子质量约44.2kDa、理论等电点6.61。氨基酸序列多重比对显示硬骨鱼类中JNK1氨基酸序列高度保守,香鱼与黄鳝的JNK1序列相似性最高(97.6%)。系统进化树分析显示各种脊椎动物的JNK1、JNK2、JNK3分别聚为一簇;本研究获得的香鱼JNK1位于JNK1大簇中并与黄鳝JNK1优先相聚,表明二者进化关系较近。RT-PCR检测结果显示健康香鱼JNK1基因在脑和性腺中高表达,肝和鳃中无表达。实时荧光定量PCR检测显示香鱼成熟卵JNK1基因的表达变化与卵的受精率、孵化率随保存时间延长而降低之间存在相关性:成熟卵随保存时间的延长JNK1表达量逐渐升高、在48h时达到峰值(24h、48h时的表达量分别为0h时的1.49倍和2.55倍),在此期间卵有较高的受精率和孵化率(48h时分别为88.99%和67.32%);保存时间继续延长时卵内JNK1基因都处于高表达水平,72h和96h时的表达量分别为0h时的2.32倍和1.53倍,而卵的质量也在保存超过48h后急剧下降(72h时受精率和孵化率分别为50.2%和25.54%)直至基本失去受精、孵化能力(96h时受精率和孵化率分别为10.83%和0.54%)。综上,香鱼JNK1基因表达上调与香鱼成熟卵的过熟凋亡过程密切相关,为深入研究香鱼JNK1基因的功能及卵过熟机制提供了基础资料。

北方内陆水库网箱养殖香鱼(plecoglossus Altivelis)试验

采用活水运输,在石梁河水库网箱养殖香鱼,4只网箱养殖香鱼的密度分别为2500尾、2000尾、1500尾、1500尾,通过对养殖网箱的饵料管理、水质调控、病害防治等,香鱼苗运输14h,运输成活率100%;每只网箱产平均规格81g/尾的商品鱼分别为52.5kg、43.3kg、100.2kg、102.6kg;养成成活率分别为39.2%、47.5%、89.4%、92.6%;养成的平均饵料系数为1.75。

香鱼(Plecoglossus altivelis)脾脏酪氨酸激酶SYK的鉴定及其介导的MAPK信号通路研究

脾脏酪氨酸激酶(SYK)是一种非受体型酪氨酸激酶(non-receptor tyrosine kinase,NRTK)。在哺乳动物中,SYK是重要的细胞信号通路接头分子,其在免疫细胞活化,胞外刺激的信号转导和病原体识别等多种生命过程中扮演重要角色,然而在鱼类中却鲜有报道。本研究以香鱼(Plecoglossus altivelis)为研究对象,探讨了其SYK(PaSYK)在应对病原微生物感染及在活化免疫信号通路中的作用。我们克隆获得了香鱼SYK的cDNA序列,并利用多重序列比对、构建进化树等生物信息学方法分析PaSYK的进化地位;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法分析PaSYK在健康组织及鳗弧菌(Vibrio anguillarum)感染后的表达变化;亚细胞定位检测PaSYK在HEK293T细胞的分布情况;在香鱼头肾单核/巨噬细胞(Monocyte/macrophage,MO/MΦ)中过表达PaSYK,研究其对炎症细胞因子表达的调控作用并在HEK293T细胞及香鱼头肾MO/MΦ中研究PaSYK对MAPK信号通路的活化作用。多重序列比对结果显示,SYK的蛋白质序列和结构域在进化过程中是高度保守的。系统进化树结果表明,PaSYK与河鳟的亲缘关系密切。RT-qPCR结果表明,SYK基因mRNA在检测的所有组织中均有表达,鳗弧菌感染后免疫相关组织中PaSYK表达量均上调。此外,PaSYK能显著诱导香鱼头肾MO/MΦ中促炎因子TNF-α和IL-1β的表达,但对抑炎因子TGF-β和IL-10的表达起到略微的抑制作用。Western blot结果证明PaSYK可以激活MAPK信号通路。综上所述,SYK分子在进化上高度保守,香鱼SYK与其哺乳动物中的同源物具有保守的功能,均能活化MAPK信号通路并在炎症反应中发挥作用。

香鱼(Plecoglossus altivelis)致病性类志贺邻单胞菌的分离与生化药敏鉴定

香鱼(Plecoglossus altivelis)是名贵洄游性鱼类,由于高密度养殖等因素导致病害频发。2021年7月强台风“烟花”过境后浙江省宁海县养殖香鱼暴发体表溃烂病,死亡严重。病鱼皮肤、肌肉溃烂并伴有周围皮肤充血。组织切片观察显示病鱼患处肌纤维断裂,周围红细胞、炎性细胞浸润;鳃丝和鳃小片中红细胞增多;肝细胞核呈空泡,部分细胞核染色质边集;脾脏内红细胞数量减少,部分白细胞聚集;肠黏膜上皮细胞脱落。从患病香鱼肠中分离到一株菌(编号NH21),其菌落低突、边缘光滑表面湿润,该菌株为革兰氏阴性菌,菌体呈短杆状、端圆。经生化特性和16S rDNA序列分析鉴定NH21菌株为类志贺邻单胞菌(Plesiomonas shigelloides)。用该菌株对健康香鱼进行回归感染后,人工感染香鱼呈现与本次体表溃烂病香鱼相似的症状,经计算NH21菌株对香鱼的半致死剂量(LD_(50))为2.51×10^(7) CFU/mL。25种抗生素的药敏试验显示NH21菌株对阿奇霉素、头孢氨苄、新生霉素、多黏菌素B、头孢西丁、呋喃唑酮6种抗生素敏感。从NH21菌株中检出了毒力基因9个、耐药基因8个。综合分析表明,分离得到的类志贺邻单胞菌NH21菌株是本次宁海县香鱼体表溃烂病的病原菌,研究结果为香鱼出现类似病症的预防和治疗提供了基础资料。

香鱼（Plecoglossus altivelis）

（1）养殖意义及其主要优点：香鱼肉质细嫩，味道鲜美，其脊背上有一条满是香脂的腔道，具有浓厚的诱人香味，深受消费者青睐，素有“淡水鱼之王”美称，是近年来人工养殖的珍稀新品种。

水利建设对辽东半岛香鱼Plecoglossus altivelis的影响

辽东半岛水利建设造成洄游型香鱼资源下降，并在碧流河水库、转角楼水库形成了陆封型香鱼。陆封型香鱼发生了①个体小型化：体长和体重由洄游型香鱼的２０─２５ｃｍ（平均２２．６ｃｍ），１５０─２５０ｇ（平均２０４ｇ），分别下降到１０─１８ｃｍ（平均１３．６ｃｍ），和１３─７３ｇ（平均３６．５ｇ）。②性状变异：洄游型香鱼体长为体高的３．７─４．７倍，为头长的４．５─５．３倍，而陆封型香鱼体长为体高的４．３─６．５倍，为头长的３．９─４．３倍。③怀卵量减少，产卵期提前：洄游型香鱼怀卵量为１．０─８．５万粒（平均３．１万位）．产卵盛期为９月底至１０月上旬，而陆封型香鱼的怀卵量为０．３２─０．６１万粒（平均０．４０万粒），产卵盛期为９月上旬至下旬，提前２０ｄ左右。

复方香鱼口服液对炎症大鼠、小鼠的影响及机制研究

目的:通过对复方香鱼口服液、鱼腥草提取液、三叶香茶菜提取液抗炎作用的药效学比较,探求二药配伍作用依据。方法:采用二甲苯致小鼠耳肿胀、角叉菜胶致大鼠足肿胀、脂多糖诱导产生小鼠急性炎症三种炎症模型,以肿胀抑制率、肿胀度、细胞因子IL-17F、IL-1β、TNF-α、IL-6、SOD、MDA含量和脏器指数为指标,评估其抗炎活性。结果:复方香鱼口服液高、低剂量组均可明显抑制二甲苯引起的小鼠耳肿胀(P<0.01或P<0.05),抑制角叉菜胶所致的大鼠足肿胀(P<0.01或P<0.05),降低血清MDA、IL-1β、IL-17F和肝组织匀浆TNF-α、IL-6含量(P<0.01或P<0.05);同等剂量组间比较,复方香鱼口服液对小鼠耳肿胀及大鼠足肿胀度的抑制作用优于鱼腥草提取液和三叶香茶菜提取液(P<0.01或P<0.05)。结论:鱼腥草和三叶香茶菜配伍而成的复方香鱼口服液,抗炎作用显著强于其组成中的单味药,而降低MDA、IL-17F、IL-1β、TNF-α、IL-6水平可能是其抗炎的主要机制。

饵料系列对香鱼(Plecoglossus altivelis Temminck et Schlegel)人工育苗成活率、畸形率和白化率的影响

通过同一饵料系列(轮虫、卤虫无节幼体、桡足类、颗粒配合饲料)中不同的轮虫投喂时间,桡足类、颗粒配合饲料的比例,比较研究香鱼人工育苗的成活率、畸形率、白化率等育苗效果,以完善香鱼全人工批量育苗工艺。试验表明,在香鱼人工育苗仔稚鱼培育早期延长轮虫的投喂时间到15日龄可提高育苗的成活率及苗种规格;增加桡足类投喂量、减少颗粒配合饲料的投喂或采用研制全价的颗粒配合饲料有助于降低苗种的白化率;苗种的畸形与卵质有直接的关系,但同时与饵料、水质条件等因素有关。

香鱼(Plecoglossus altivelis Temminck et Schlegel)的生物学特征及其养殖技术探讨

香鱼是一种优良的养殖品种,本文作者较详细介绍了香鱼的生物学特性及其养殖技术,其内容包括:香鱼生物学特性、香鱼养殖、香鱼食法及鱼病防治等。

香鱼“浙闽1号”养殖新技术

香鱼“浙闽1号”是由宁波大学海洋学院李明云教授带领的团队,与福建宁德众合农业发展有限公司合作,以采捕自浙江宁海凫溪的野生香鱼为基础群体,应用群体选育技术,经十余年连续7代选育而获得的香鱼新品种。该品种具有生长速度快、雌性占比高、外观好、抗病力强等优点。

日本香鱼(Plecoglossus altivelis Temminck et Schlegel)生产及其病害防治技术研究

香鱼是重要的养殖经济鱼类,本文作者详细概述日本香鱼养殖生产的现状、香鱼全雌化生产技术以及香鱼病害防治技术的研究,内容较翔实,对香鱼养殖生产单位有一定的参考作用。