马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种real-time PCR检测方法的建立与应用

本研究建立了一种特异性实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,real-time PCR)检测方法,根据模式菌株马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种ZW3的16S rDNA序列和全基因组序列设计筛选特异性引物,采用SYBR Green I荧光染料建立real-time PCR方法,并对方法的特异性、灵敏度、重复性和混合体系等进行检测。结果表明,本研究所建立的方法特异性强、灵敏度高、重复性好,建立real-time PCR的标准曲线,其决定系数R2为0.965,具有良好的线性关系,且在马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种及混合体系中可以特异性检出。综上,本研究建立的real-time PCR法可以快速、准确地检测马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种,为马乳酒样乳杆菌的特异性定性定量检测提供了一种新的方法。

1株马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌致病性分析

国内鲜有马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)相关报道,本研究对1株新疆马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌的致病性进行评估,以期为马乳源金黄色葡萄球菌的相关研究提供基础数据。使用选择性培养基从新疆健康马乳中分离金黄色葡萄球菌,然后通过生化鉴定和分子鉴定方法对金黄色葡萄球菌进行鉴定。对所获得的金黄色葡萄球菌进行多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)、spa分型、药物敏感性检测、生物被膜形成能力、溶血活性、毒力基因检测、小鼠皮肤脓肿和致病性试验。再对分离株进行小鼠细胞的黏附、侵袭和胞内增殖试验,以评估其致病性。结果显示,从马乳中分离得到1株PVL+ST22型金黄色葡萄球菌(1/65,1.5%),spa分型为t304。仅对青霉素耐药,无生物被膜形成能力,但携带9种毒力基因(sec、seg、seh、tsst-1、hla、hlb、clfA、clfB和cna),并且具有溶血活性。小鼠皮肤脓肿和致病性试验表明,其可导致小鼠形成皮肤脓肿,并且在高剂量感染时可导致小鼠死亡。ST22型金黄色葡萄球菌可在小鼠巨噬细胞中黏附(4.26%)、侵袭(6.45%)和胞内增殖,并可造成细胞凋亡。综上,马乳源PVL+ST22型金黄色葡萄球菌具有较强的致病力,可能在宿主致病和公共卫生安全等方面存在隐患。

马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种ZW3的毒理学安全性评价

为评估马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种ZW3食用安全性及健康风险,对ZW3进行系统的体外和体内毒理学实验,包括SD大鼠急性经口毒性实验、细菌回复突变实验、小鼠骨髓细胞微核实验和仓鼠卵巢细胞染色体畸变实验。急性经口毒性实验表明:ZW3的LD50大于10.0 g/kg体重;细菌回复突变实验结果显示:ZW3对5株测试菌株无诱变特性,在小鼠骨髓细胞微核实验中ZW3不会导致哺乳动物嗜多染红细胞含微核细胞率增加;仓鼠卵巢细胞染色体畸变实验结果表明:ZW3的不同剂量组中染色体异常细胞和染色体畸变率均与阴性对照组无明显差异。综合评价,马乳酒样乳杆菌马乳酒样亚种ZW3属于实际无毒级,并且不存在遗传毒性、致突变和致癌性。

1株马乳酒样乳杆菌的分离鉴定及益生特性研究

【目的】从新疆克州地区传统发酵马奶酒中分离既有抗菌活性又有抗氧化活性的乳酸菌,继而获得能用于微生态制剂开发的优良菌株。【方法】采用MRS固体培养基进行乳酸菌分离培养,筛选优势菌株,观察菌体形态学特征,并通过16S rRNA基因序列分析进行分子鉴定。研究菌株的生长曲线、产酸能力、耐酸能力、耐胆盐能力和抑菌能力,通过检测菌株耐H_(2)O_(2)能力及菌株发酵液、无细胞提取物、菌体混悬液的DPPH自由基清除率、超氧阴离子清除能力、羟自由基清除能力等相关指标来评价菌株体外抗氧化功能,并通过药敏试验和小鼠饲喂试验评估菌株的安全性。【结果】试验筛选出1株菌落形态圆形、白色半透明、边缘不整齐的革兰氏阳性菌,将其命名为JK-24,经16S rRNA克隆测序鉴定该菌株为马乳酒样乳杆菌(Lactobacillus kefiranofaciens)。在6~18 h,D_(600 nm)值增长速度较快,进入对数生长期,JK-24发酵液pH下降明显;JK-24在pH 2.5~6.5范围内均能生长,能耐受0.3%胆盐;发酵液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为15和20 mm,具有良好抑菌活性;能耐受浓度为3.0 mmol/L的H_(2)O_(2),且在H_(2)O_(2)浓度为1.0和2.0 mmol/L时对菌株生长有促进作用;JK-24发酵液和无细胞提取物的DPPH自由基清除率、超氧阴离子清除能力和羟自由基清除能力均显著高于MRS培养基(P<0.05);对青霉素等19种抗生素敏感;灌胃JK-24对小鼠生长性能和脏器系数均无显著影响(P>0.05),血液学参数均处于正常范围内,体内脏器无眼观病理变化。【结论】本试验分离到的马乳酒样乳杆菌JK-24安全、无致病性,具有良好的抑菌和抗氧化等益生特性,可作为生物饲料添加剂的菌种来源。

马乳源大肠杆菌的毒力基因检测和耐药性分析

[目的]了解新疆伊犁地区某马场乳源大肠杆菌的毒力基因携带情况和药物敏感性。[方法]对采集到的85份马乳进行大肠杆菌的分离纯化、染色镜检、特异性基因phoA的扩增和16S rDNA测序;采用K-B纸片扩散法药敏试验分析马乳源大肠杆菌的耐药性;采用PCR技术检测马乳源大肠杆菌携带的毒力基因、耐药基因及鉴定其所属系统发育群,对大肠杆菌进行生物被膜形成能力检测。[结果]从85份马乳中分离得到6株大肠杆菌,其中3株为A群,3株为B1群;6株大肠杆菌均对青霉素和替米考星耐药;均携带ibeB、yijP、mat、sodA和csgA毒力基因;均未检测到耐药基因;有4株具有生物膜形成能力。[结论]对新疆伊犁地区某马场马乳源大肠杆菌进行初步的毒力基因检测和耐药性分析,发现其对青霉素和替米考星耐药严重,并携带多种毒力基因,具有一定的潜在致病风险。

马乳和驴乳中营养成分及加工技术研究进展

马乳及驴乳作为特色乳之一,具有较高的营养价值及功能特性,受到消费者的关注。然而,马乳及驴乳中溶菌酶、乳铁蛋白等特征性活性成分对热处理、酸碱等敏感,在产品加工方面有待进一步研究。因此,本文对比分析了马乳、驴乳与母乳、牛乳中营养成分的差异及生物活性功能,对目前马乳及驴乳的加工处理技术研究进行系统的评价,为马乳及驴乳产品加工和品质调控提供参考。

产马乳酒乳杆菌马乳酒亚种ZW18益生基因分析

产马乳酒乳杆菌马乳酒亚种(Lactobacillus kefiranofaciens subsp.kefiranofaciens)作为新食品原料具有很多益生特性,该研究利用全基因组测序对产马乳酒乳杆菌马乳酒亚种ZW18基本特征和益生功能基因进行全面分析。结果表明,该菌株由一个环状染色体和两个质粒组成,全长约2.4 Mbp,有更多独特基因和特性。通过数据库注释可得菌株ZW18具有较好的生存能力与稳定性,且对碳水化合物利用能力强,保证了菌体细胞的物质基础和能量供给。该菌株基因组中含有与抵抗氧化应激、耐酸耐胆盐、黏附和聚集、免疫、细菌素等相关的基因,与硫胺素、核黄素等多种维生素及赖氨酸、蛋氨酸等人体所需氨基酸合成相关基因,表明其具有多种潜在益生特性,为进一步深入研究与应用提供基础数据。

采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱法检测及分析鲜马乳中挥发性芳香成分

【目的】比较和研究新疆不同地区鲜马乳中的挥发性芳香成分,为新疆马乳及制品的产业化发展和相关研究提供科学依据。【方法】以新疆伊犁、阿勒泰、塔城三地的鲜马乳为研究对象,采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用技术分析新鲜马乳中挥发性芳香成分。【结果】在鲜马乳中检测出32种挥发性香气成分,伊犁地区鲜马乳中芳香成分21种,阿勒泰地区17种,塔城地区21种;三地共有挥发性香气成分11种,包括辛酸乙酯、辛酸甲酯、癸酸乙酯等3种酯类,辛酸、癸酸、己酸、壬酸、月桂酸这5种酸类,以及1,3-二叔丁基苯、2,4-二特丁基苯酚、二甲基砜。【结论】鲜马乳中的挥发性芳香成分均以酯类和酸类为主,酯类成分中辛酸甲酯、辛酸乙酯、癸酸乙酯为主;酸类成分以辛酸和癸酸为主。这些挥发性香气成分之间的叠加、协同、抑制等作用,使得鲜马乳具有区别于牛乳、驼乳等鲜乳的香气。

酸马乳发酵过程中乳酸菌与酵母菌生长的相互影响

研究新疆酸马乳中乳酸乳球菌WLB5、干酪乳杆菌MLS5与马克思克鲁维酵母菌WWMJ1间的相互作用。结果表明:在酸马乳发酵过程中,马克思克鲁维酵母菌WWMJ1可以促进干酪乳杆菌MLS5的生长,干酪乳杆菌MLS5对马克思克鲁维酵母菌WWMJ1的生长有抑制作用,乳酸乳球菌WLB5能促进马克思克鲁维酵母菌WWMJ1的生长。乳酸乳球菌WLB5和干酪乳杆菌MLS5混合发酵有助于提高酸马乳中乳酸菌总活菌数。本研究可为酵母菌在发酵乳制品中的应用及开发新型乳制品提供一定参考。

混合菌种发酵酸马乳的降血脂功能研究

为研究混合菌种发酵酸马乳的降血脂作用,采用混合菌种发酵酸马乳对小鼠进行实验,研究其对高脂模型小鼠体重、血脂水平、脏器指数和动脉硬化(AI)指数的影响。结果表明,混合菌种发酵酸马乳中、高剂量能够显著降低高血脂症小鼠TC、TG、LDL-C、AI水平(p<0.05),显著升高HLD-C水平(p<0.05),并且能降低小鼠体重和肝脏指数,说明混合菌种发酵酸马乳对实验性高脂血症小鼠具有降低血脂的作用,对高脂血症及动脉粥样硬化具有一定的预防作用。

关于制定生马乳和马乳粉地方标准的研究

新疆是我国养马大省(区),马乳资源丰富。制定生马乳和马乳粉食品安全地方标准,有利于规范马乳市场、化解牧(农)企矛盾,对加强质量监管,保障消费者身体健康和生命安全,维护企业、牧民和消费者的合法权益,促进新疆马产业健康稳定发展具有重要意义。本文综述了生马乳和马乳粉的理化指标,实测了生马乳和马乳粉的化学成分、理化指标和必需脂肪酸占总脂肪酸的比例,分析比较了马乳及马乳粉和牛、羊、驼乳及其乳粉的区别,并对生马乳和马乳粉食品安全地方标准中理化指标提出了具体建议。

响应面法优化酸马乳发酵工艺的研究

以酸马乳中乳酸菌活菌数为评价指标,研究了不同发酵条件对酸马乳中乳酸菌活菌数的影响,在单因素的基础上采用响应面试验优化酸马乳的发酵工艺条件。结果表明,酸马乳最佳发酵条件为:干酪乳杆菌∶乳酸乳球菌∶酵母菌=1∶1∶2,接种量6%,发酵时间48 h,发酵温度32℃,不添加蔗糖。在此最佳条件下,酸马乳中乳酸菌活菌数对数值可达8.673 9,酵母菌活菌数对数值为7.628 4,酸度6.34g/L,酒精度1.2%vol。

新疆、内蒙古地区马乳及发酵酸马乳中氨基酸分析与营养评价

为探讨我国西部牧区(新疆、内蒙古)马乳与传统发酵酸马乳的氨基酸组成及营养评价,在新疆、内蒙古两地主要牧区采集马乳及传统发酵酸马乳共40份,采用氨基酸自动分析仪和高效液相色谱法测定乳中游离氨基酸和水解氨基酸的组成与含量,并进行差异性分析和营养评价。结果表明:新疆、内蒙古地区马乳氨基酸总量无显著差异(P>0.05),两地马乳经发酵后游离氨基酸含量普遍显著升高(P<0.05),且生成了包括γ-氨基丁酸、β-氨基异丁酸、γ-羟基赖氨酸等在内的多种具有特殊生理活性的氨基酸;新疆马乳经发酵后甜味氨基酸含量明显升高,呈味氨基酸总含量明显高于鲜马乳(P<0.05),发酵对马乳风味改进贡献明显;新疆、内蒙古马乳及酸马乳的必需氨基酸指数均大于95,两地发酵后的酸马乳各营养评价指标均高于鲜马乳。

益生菌Lactobacillus casei Zhang在马乳中发酵特性及人工消化液耐受性研究

将益生菌L．casei Zhang以2．0×10^7cfu／g的接种量接种在马乳中进行发酵，测定其发酵特性及28d贮藏期间人工消化液的耐受性。结果表明，在发酵结束（pH4．5）时，活菌数较接种时增加了1．11个对数单位。在28d贮藏期间，发酵马乳样品pH降低了0．35个单位，滴定酸度增加了16°T，活菌数保持在10^8cfu／g以上。贮藏28d后，发酵马乳样品中L．casei Zhang在pH2．5和2．0人工胃液消化3h后，其存活率分别为100．6％和46．22％，又经人工肠液消化8h后，存活率分别降为74．83％和11．04％。L.casei Zhang保持良好的贮藏稳定性及较好的人工消化液耐受性，显示了其应用于发酵乳制品中良好的潜力。

中心组合设计优化合生元酸马乳中乳酸菌的生长

为了研究四种不同低聚糖对合生元酸马乳中乳酸菌生长的影响,通过单因素实验筛选出促进酸马乳中乳酸菌生长的3种低聚糖,并运用中心组合实验及响应面分析,优化了3种低聚糖的最佳添加量。结果表明：3种低聚糖的最佳添加量为：低聚半乳糖1.30%（W/V）、低聚异麦芽糖0.80%（W/V）、低聚木糖0.40%（W/V）,在最优条件下合生元酸马乳中乳酸菌活菌数可达到（5.97±0.16）×10^8 CFU/mL,比优化前提高了70.57%。

一株马乳酒样乳杆菌胞外多糖的理化性质

ZW3胞外多糖是由分离自西藏开菲尔粒中的马乳酒样乳杆菌马乳酒亚种ZW3分泌产生,文中针对此多糖进行了理化特性的分析与表征。实验中,傅立叶变换红外光谱表明此多糖存在羧基、羟基和酰胺基,与典型的异型多糖结构相一致。气相色谱分析表明此多糖仅由半乳糖和葡萄糖构成。ZW3胞外多糖絮凝能力与黄原胶相似,比瓜尔胶的絮凝能力要强。相对于商业用途亲水胶体黄原胶、瓜尔胶和刺槐胶来说,ZW3胞外多糖具有更强的乳化能力,因此它具有作为商业用乳化剂的潜力。以上特性表明ZW3胞外多糖在工业应用方面特别是食品工业上拥有广阔的前景。

马乳及乳产品利用

分析了马乳的成分,系统阐述了马乳的营养特点及马乳产品的利用现状;展望了马乳及乳产品的利用前景。

马乳酒样乳杆菌(Lactobacillus kefiranofaciens)合成开菲尔多糖培养基组成的优化

研究了发酵培养基组成对Lactobacillus kefiranofaciens的菌体生长以及合成开菲尔多糖(Kefiran)的影响。通过比较L. kefiranofaciens利用各种糖类和麦芽汁的发酵情况,发现麦芽汁最利于菌体生长及发酵产糖;各种氮源对L. kefiranofaciens发酵影响不同,其中以酵母粉最好,采用一品鲜酵母粉发酵的最佳浓度为10%;正交实验和RSA方法确定对发酵影响显著的三个无机盐是MnSO4.4H2O、MgSO4.7H2O和KH2PO4,最佳用量为0.2g/L,1g/L,4g/L,此时发酵获得开菲尔多糖产量为2.6±0.05g/L。L. kefiranofaciens发酵生产开菲尔多糖96h时可达到最佳发酵结果。

新疆马乳葡萄中多酚氧化酶性质的研究

采用分光光度法,研究了不同pH值、温度和底物浓度对新疆马乳葡萄多酚氧化酶的活力的影响,利用高压液相色谱法对新疆马乳葡萄中的酚类物质进行了定性分析。结果表明,PPO的最适pH值为6.0,最适温度为19℃,在该条件测得Km=14.5 mmol/L,Vm=1.380 D/min。马乳葡萄中酚类物质以绿原酸的含量最多。

乌鲁木齐市达坂城区奶马养殖户调研和马乳成分测定

调查乌鲁木齐市达坂城区某养马专业户的奶马养殖和经营情况,测定了生马乳的化学成分和钙、磷、钠含量,并针对马乳生产和销售中出现的问题提出意见和建议。