含马兜铃酸的中药现状及相关问题思考

马兜铃酸的安全性问题引起国际社会的广泛关注。我国是中药资源大国,马兜铃科马兜铃属和细辛属中药材均含有马兜铃酸类成分,这引起了人们对使用含马兜铃酸中药安全性的担忧。研究者从不同角度回答了马兜铃酸的安全风险问题,国家也出台了多项措施控制马兜铃酸的安全风险。从化学、毒性、检测等多方面系统综述了含马兜铃酸中药的现状并提出了合理化建议,可为其进一步研究和科学监管提供参考。

超高效液相-质谱法测定滴通鼻炎水中马兜铃酸Ⅰ、Ⅱ的含量

目的测定滴通鼻炎水中马兜铃酸Ⅰ、马兜铃酸Ⅱ的含量,为其质量控制提供借鉴。方法采用超高效液相-质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定滴通鼻炎水中马兜铃酸Ⅰ、马兜铃酸Ⅱ的含量。色谱柱采用Waters-ACQUI UPLC HSS T3 C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.8μm),采用乙腈为流动相A,0.1%甲酸含1 mmol·L^(-1)乙酸铵溶液为流动相B,梯度洗脱,电喷雾离子源(ESI),正离子多反应监测模式,以标准曲线法计算含量。结果17批滴通鼻炎水中有9批样品未检出马兜铃酸Ⅰ(检出限0.13 pg),8批样品中检出马兜铃酸Ⅰ,含量在0.41~3.60 ng·mL^(-1)。所有样品中均未检出马兜铃酸Ⅱ(检出限0.41 pg)。结论建立了UPLC-MS/MS同时测定滴通鼻炎水中马兜铃酸Ⅰ、马兜铃酸Ⅱ含量的方法,该方法专属性强、灵敏度高、重复性好,可为滴通鼻炎水中马兜铃酸Ⅰ、马兜铃酸Ⅱ的质量控制提供参考。

超高效液相色谱串联质谱法测定木香马兜铃中马兜铃酸Ⅰ及马兜铃酸Ⅱ的含量

目的:建立测定木香马兜铃中马兜铃酸Ⅰ(AA-Ⅰ)及AA-Ⅱ含量的超高效液相色谱-质谱法。方法:色谱柱为Agilent Poroshell SB-C18(100 mm×2.1 mm,2.7μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液(含5 mmol·L^(–1)甲酸铵),梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(–1),柱温35℃,离子源为电喷雾离子源,扫描方式为正离子扫描,多反应离子监测模式。结果:AA-Ⅰ在质量浓度为1.036~207.310 ng·mL^(–1)时与峰面积线性关系良好(r=0.9995);AA-Ⅱ在质量浓度为1.1~110.0 ng·mL^(–1)时与峰面积线性关系良好(r=0.9991);AA-Ⅰ的定量限、检测限分别为0.3287、0.0986 pg;AA-Ⅱ的定量限、检测限分别为0.6506、0.1952 pg;AA-Ⅰ的精密度、稳定性、重复性试验RSD均小于5.0%;AA-Ⅱ的精密度、稳定性、重复性试验RSD均小于5.0%;AA-Ⅰ的平均加样回收率为92.50%,RSD为4.3%;AA-Ⅱ的平均加样回收率为104.97%,RSD为3.7%。15批木香马兜铃药材中1批未检出AA-Ⅰ,8批未检出AA-Ⅱ,其余批次的AA-Ⅰ质量分数为5.94×10^(–4)~2.86 mg·g^(–1),AA-Ⅱ质量分数为0.09~0.50 mg·g^(–1)。结论:所建立的方法专属性强、快速、灵敏,可用于木香马兜铃中AA-Ⅰ及AA-Ⅱ的含量测定。

马兜铃酸致肝癌的客观性研究与思考

目的通过梳理马兜铃酸致肝癌的客观性研究,提出风险防控策略。方法简述马兜铃酸致肝癌的研究进展,阐明马兜铃酸与肝癌相关性再研究的科学意义,梳理本课题组关于马兜铃酸致肝癌的客观性、真实性、系统性研究内容,提出含马兜铃酸中药的防控策略。结果与结论马兜铃酸与肝癌发生缺乏相关性;提出含马兜铃酸中药及制剂安全用药的风险防控策略:明确风险获益比,综合分析药品研究数据做出监管决策;针对不同风险水平患者采取分级管理措施;建立科学认知和精准评价使用中药的新方法,健全安全性质量控制制度。

UPLC-MS/MS检测伤痛宁片中5个马兜铃酸成分

目的:测定伤痛宁片中马兜铃酸类成分的含量。方法:采用超高效液相色谱-质谱法测定伤痛宁片中马兜铃酸Ⅰ、马兜铃酸Ⅱ、马兜铃酸Ⅲa、马兜铃酸AA-Ⅳa、马兜铃内酰胺Ⅰ的含量。采用Agilentporoshell C18(100 mm×2.1 mm,2.7μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱;电喷雾正离子模式,多反应监测,进样量为1μL,以基质标准曲线外标法计算伤痛宁片中5个马兜铃酸成分含量。结果:18批样品中检出马兜铃酸Ⅰ质量分数为0.01~0.05 mg·kg^(–1),马兜铃酸Ⅱ和马兜铃酸Ⅲa未检出,马兜铃酸AA-Ⅳa质量分数为0.26~1.00 mg·kg^(–1),马兜铃内酰胺Ⅰ质量分数为0.40~2.17 mg·kg^(–1)。结论:建立的含量测定方法,可为伤痛宁片及含马兜铃酸中药制剂的临床应用和安全监管提供参考。

UPLC-MS/MS测定双辛鼻窦炎颗粒中马兜铃酸Ⅰ和马兜铃酸Ⅱ的含量

目的:同时测定双辛鼻窦炎颗粒中马兜铃酸Ⅰ和马兜铃酸Ⅱ的含量,为其质量控制提供参考。方法:采用超高效液相色谱-质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定双辛鼻窦炎颗粒中马兜铃酸Ⅰ和马兜铃酸Ⅱ的含量。采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(含1 mmol·L^(–1)乙酸铵,B)为流动相梯度洗脱,电喷雾离子源,正离子扫描,多反应监测模式,以标准曲线法计算样品中马兜铃酸Ⅰ和马兜铃酸Ⅱ的含量。结果:12批双辛鼻窦炎颗粒中9批样品未检出马兜铃酸Ⅰ(检出限0.13 pg),3批样品检出马兜铃酸Ⅰ,质量分数为14.62~25.82 ng·g^(–1)。所有样品均未检出马兜铃酸Ⅱ(检出限0.44 pg)。结论:建立的UPLC-MS/MS同时测定双辛鼻窦炎颗粒中马兜铃酸Ⅰ和马兜铃酸Ⅱ含量的方法,专属性强、灵敏度高、重复性好,可为双辛鼻窦炎颗粒中马兜铃酸Ⅰ和马兜铃酸Ⅱ的质量控制提供参考。

UPLC-MS/MS同时测定通迪胶囊中的马兜铃酸Ⅰ和马兜铃酸Ⅱ

目的:建立通迪胶囊中马兜铃酸Ⅰ(AA-Ⅰ)和AA-Ⅱ的超高效液相色谱-质谱法。方法:采用Shiseido Shim-pack velox C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),以乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(含甲酸铵,B)为流动相梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(–1),采用多反应监测,AA-Ⅰ以m/z 358.9→298.0(定量)和m/z 358.9→296.0(定性)为监测离子对;AA-Ⅱ以m/z 329.0→268.0(定量)和m/z 329.0→294.0(定性)为监测离子对,建立了液相色谱-质谱法检测方法,并对样品进行分析。结果:AA-Ⅰ在1.0524~420.9600 pg、AA-Ⅱ在1.002~100.200 ng时与峰面积线性关系良好(r>0.999),加样回收率分别为97.63%、92.34%,RSD分别为2.24%、1.49%,15批样品中AA-Ⅰ和AA-Ⅱ的质量分数分别为3.760~20.790、0.010~0.156μg·g^(–1)。结论:该方法灵敏、快速、准确、专属性强,可用于测定通迪胶囊中AA-Ⅰ和AA-Ⅱ的含量,可为通迪胶囊用药安全提供参考。

UPLC-MS/MS同时测定京制咳嗽痰喘丸中马兜铃酸Ⅰ、Ⅱ的含量

目的:建立超高效液相色谱-质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定京制咳嗽痰喘丸中马兜铃酸Ⅰ、Ⅱ的含量方法。方法:采用Agilent Poroshell SB-C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.7μm),以甲醇(A)-5 mmol/L甲酸铵(含0.1%甲酸),(B)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为30℃,进样量为1μL。质谱采用电喷雾离子源(ESI),正离子模式下多反应监测(MRM),标准曲线法测定。结果:马兜铃酸I和马兜铃酸Ⅱ分别在1.052 4~210.48 pg(R^(2)=0.998 1,n=6)、1.002~100.2 pg(R^(2)=0.999 9,n=6)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为96.09%(RSD=2.08%)和88.05%(RSD=2.64%)。结论:该方法简便、灵敏、专属性好,可用于京制咳嗽痰喘丸马兜铃酸Ⅰ、Ⅱ的含量测定。

UPLC-MS/MS法检测正天胶囊中马兜铃酸类成分

目的建立测定正天胶囊中马兜铃酸类成分的分析方法。方法采用Dikma Endeavorsil C18(1.8μm,2.1 mm×100 mm)色谱柱,以乙腈和0.1%甲酸-5 mmol甲酸铵溶液为流动相,梯度洗脱,电喷雾正离子(ESI+),多反应监测(MRM),进样量为5μL,测定正天胶囊中马兜铃酸Ⅰ、马兜铃酸Ⅱ、马兜铃酸Ⅲa、马兜铃酸Ⅳa、马兜铃内酰胺Ⅰ的质量分数。结果10批样品中检出2种马兜铃酸类物质,质量分数分别为马兜铃酸Ⅳa 0.15~1.03 mg/kg、马兜铃内酰胺Ⅰ0.40~1.51 mg/kg。结论本研究建立的正天胶囊中马兜铃酸质量分数测定方法,可为正天胶囊及含马兜铃酸中药制剂的临床应用和安全监管提供参考。

超高效液相色谱串联质谱法测定复方胃痛胶囊中马兜铃酸Ⅰ、马兜铃酸Ⅱ的含量

目的建立UPLC-MS/MS同时测定复方胃痛胶囊中马兜铃酸Ⅰ和马兜铃酸Ⅱ含量的方法。方法采用Agilent Poroshell SB-C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.7μm);流动相为乙腈和含5 mmol/L甲酸铵的0.1%甲酸溶液,梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为30℃;采用三重四级杆质谱检测器,电喷雾离子源(ESI)正离子模式下多反应监测(MRM)模式进行质谱检测。结果马兜铃酸Ⅰ和马兜铃酸Ⅱ分别在1.05~210 ng/mL(r=0.9996)和1.00~200 ng/mL(r=0.9998)有良好的线性关系。马兜铃酸Ⅰ的回收率为95.90%,RSD为2.11%;马兜铃酸Ⅱ的回收率为93.22%,RSD为1.17%。马兜铃酸Ⅰ的定量限为0.3 pg、检出限为0.1 pg;马兜铃酸Ⅱ的定量限为0.7 pg、检出限为0.2 pg。结论该方法专属性好,灵敏度高,准确可靠,能够用于测定复方胃痛胶囊中马兜铃酸Ⅰ和马兜铃酸Ⅱ的含量。

醒脑再造丸中马兜铃酸Ⅰ的含量测定

目的建立醒脑再造丸中马兜铃酸Ⅰ的含量测定方法,进行产品质量安全控制。方法样品经甲醇提取、中性氧化铝柱吸附、甲醇洗脱杂质,以含5%甲酸的甲醇解吸附马兜铃酸Ⅰ,之后采用高效液相色谱法、紫外检测器进行含量测定。结果马兜铃酸Ⅰ对照品浓度在0.10~20.06μg/mL范围内线性关系良好(r≥0.9998),平均回收率分别为76.2%、105.8%、87.7%;该方法的重复性良好[共测定6次,相对标准偏差(RSD)≤3.9%],检出限为1μg/g(0.0001%)。3批样品均未检出马兜铃酸Ⅰ。结论该方法专属性好、准确可靠、灵敏度高,可用于醒脑再造丸中马兜铃酸Ⅰ的限量检查,对产品质量安全控制具有重大意义。

UPLC-MS/MS测定九味羌活颗粒中7个马兜铃酸类成分

目的:采用超高效液相色谱-质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定九味羌活颗粒中7个马兜铃酸类成分的含量。方法:采用Shim-pack Velox PFPP色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),以1 mmol·L^(–1)甲酸铵溶液(含0.05%甲酸,A)-甲醇(B)为流动相梯度洗脱。体积流量为0.4 mL·min^(–1),柱温为40℃,进样量为1μL,电喷雾离子源,多反应监测模式。结果:7个马兜铃酸类成分线性关系良好,r均≥0.997,加样回收率为86.5%~112.2%;检出限为0.05~0.31 ng·mL^(–1),定量限为0.18~1.04 ng·mL^(–1)。对3个企业8批样品进行测定,结果检出马兜铃酸Ⅳa、马兜铃内酰胺的质量分数分别为0~0.417、0.021~0.173μg·g^(–1)。结论:该方法重复性好、灵敏度高,可用于九味羌活颗粒中马兜铃酸类成分的测定。

111例马兜铃酸肾病调查分析

目的分析含有马兜铃酸成分的药物引起马兜铃酸肾病的临床特点和规律。方法回顾性研究111例服用含马兜铃酸成分的药物致肾损害患者的临床资料,分析马兜铃酸肾病的临床特点、服药及治疗方法等。结果111例患者中,女性多于男性(2.58∶1),大于50岁的101例(90.99%);年龄(63.70±11.67)岁;平均用药时间(8.08±6.94)年;涉及冠心苏合丸和龙胆泻肝丸共106例(95.50%);血肌酐升高108例,尿素氮升高106例,血红蛋白降低103例,多见低比重尿、轻中度蛋白尿和潜血;B超检查示肾脏均不同程度受损。肾脏病理活检为肾小管损害。多数患者起病隐匿,进展程度不一,与年龄、服药时间不成正比,临床上肾功能呈进行性损害,多数不可逆、预后较差。结论肾损害患者个体差异较大,肾损伤与服用马兜铃酸药物时间长短、剂量不平行;马兜铃酸肾病进展迅速,且停止服用含马兜铃酸药物后病情依然进展。加强药物警戒工作,实施早期的诊断和有效的干预,有助于减少马兜铃酸肾病的发生,延缓其发展。

急性马兜铃酸I中毒小鼠肾小管上皮细胞损伤变化

为连续观察急性马兜铃酸I (Aristolochic Acids I, AAI)中毒时小鼠肾脏病理学改变,本实验将40只KM小鼠分为5组:对照组、AAI暴露2、4、6、8天组,AAI组小鼠以5 mg/kg/2d AAI灌胃模拟急性马兜铃酸肾病(Aristolochic Acid Nephropathy, AAN),使各组小鼠AAI累积剂量分别为5、10、15、20 mg/kg。分别于AAI暴露2、4、6、8天处死,检测其肾功能指标肌酐(Creatinine, Cre)和尿素氮(Blood Urea Nitrogen, BUN),并观察肾脏病理学改变。结果显示,与对照组相比,AAI各组小鼠Cre和BUN均呈剂量依赖性上升,Cre于第6、8天具有显著性差异(P P < 0.05)。AAI组小鼠主要病理变化为肾小管上皮细胞顶端微绒毛脱落、细胞水肿、坏死脱落。本研究发现暴露于AAI的小鼠肾小管损伤程度与AAI累积剂量呈正相关。

急性马兜铃酸肾病小鼠C-Myc和Cyclin D1的表达变化

为探索急性马兜铃酸肾病(Aristolochic Acid Nephropathy, AAN)过程中细胞损伤后的再生与修复,本实验将40只KM小鼠分为5组:对照组、AAI暴露2、4、6、8天组,AAI组小鼠以5 mg/kg/2d AAI灌胃模拟AAN,使各组小鼠AAI累积剂量分别为5、10、15、20 mg/kg。分别于AAI暴露2、4、6、8天处死,观察肾脏病理学改变,并进行免疫组化染色观察C-myc和Cyclin D1蛋白表达情况。结果显示,与对照组相比,AAI组小鼠C-myc于第2天开始下降,第4天、6天、8天上升;Cyclin D1于AAI暴露第2天、4天下降,第6天、8天升高。本研究可得出结论暴露于AAI的小鼠C-myc和Cyclin D1蛋白表达随AAI累积剂量增加呈“先降后升”趋势。

基于非靶向代谢组学技术探讨Yes相关蛋白1改善马兜铃酸I诱导小鼠肝损伤的机制

目的基于非靶向代谢组学技术探讨Yes相关蛋白1(YAP1)改善马兜铃酸I(Aristolochic acid I,AAI)诱导小鼠肝损伤的机制。方法随机选取8只3周龄雄性肝细胞特异性Yap1基因敲除(基因型为Yap1^(Flox/Flox),Albumin-Cre,简称Yap1^(LKO))小鼠作为Yap1^(LKO)+AAI组,8只Yap1Flox对照小鼠作为Yap1^(Flox)+AAI组。2组小鼠均按照2.5 mg·kg^(-1)·d^(-1)剂量腹腔注射AAI,连续14 d。采用鼠尾PCR法鉴定基因型;微板法测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;HE染色法观察肝脏组织病理变化;免疫组织化学法测定肝组织中YAP1蛋白表达情况。采用非靶向代谢组学方法分析肝脏组织差异代谢物,利用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术分析样品,通过主成分分析(PCA)、偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)筛选差异代谢物,利用HMDB数据库、METLIN数据库对代谢物进行鉴定,通过KEGG数据库对差异代谢物进行通路富集分析。结果(1)AAI诱导14 d,Yap1^(LKO)小鼠的体质量增长低于Yap1^(Flox)小鼠,但差异无统计学意义(P>0.05)。在第14天,与Yap1^(Flox)+AAI组比较,Yap1^(LKO)+AAI组小鼠血清中的ALT、AST酶活性明显升高(P<0.05),肝脏组织病理损伤明显加重。Yap1^(Flox)小鼠肝脏有YAP1蛋白阳性表达,而Yap1^(LKO)小鼠无YAP1蛋白阳性表达。(2)通过代谢组学分析共筛选出139种显著变化(VIP>1且P<0.05)的差异代谢物,与Yap1^(LKO)+AAI组小鼠相比,Yap1Flox+AAI组小鼠的62种肝脏代谢物上调,包括胆碱、牛磺酸、亚牛磺酸、α-亚麻酸、桐油酸、鹅去氧胆酸等;77种代谢物下调,包括甘油磷酸胆碱、L-磷脂酰胆碱、L-谷氨酰胺、L-丝氨酸、L-谷胱甘肽、5-甲硫腺、苯丙氨酸、6-磷酸葡萄糖、乳酸、尿酸苷等。KEGG富集通路主要有胆碱代谢、甘油磷脂代谢、胰岛素抵抗、谷胱甘肽代谢等。结论肝细胞特异性Yap1基因敲除加重了AAI诱导的小鼠肝脏损伤,YAP1通过上调胆碱、牛磺酸等不饱和脂肪酸,参与调控胆碱代谢、甘油磷脂代谢等,从而改善AAI诱导的小鼠肝损伤。

UPLC-MS/MS测定3种川芎茶调类制剂中马兜铃酸Ⅰ的含量

目的:建立超高效液相色谱-质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定川芎茶调丸、川芎茶调丸(浓缩丸)、川芎茶调颗粒中马兜铃酸Ⅰ的含量,对不同剂型中马兜铃酸Ⅰ的含量进行比较。方法:采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm);以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^(–1),电喷雾离子源,多反应监测,选择m/z 359.0→298.1和359.0→296.1离子对进行监测,对精密度、稳定性、重复性等进行验证的同时,对3种剂型共48批样品进行测定。结果:马兜铃酸Ⅰ在质量浓度为2.96~295.82 ng·mL^(–1)时与峰面积线性关系良好,r均大于0.999,平均回收率分别为93.36%、85.08%、90.13%,RSD分别为10.04%、6.04%、11.85%,定量限为0.0406~0.1577μg·g^(–1)。结论:该方法准确度、精密度、稳定性、线性关系良好,适用于川芎茶调类制剂中马兜铃酸Ⅰ的检测和分析;对于含有马兜铃酸类毒性成分中药的中药制剂更宜采用非原粉入药的方式。

马兜铃属(Aristolochia)植物的化学成分

马兜铃属(Aristolochia)植物全世界约有200种,有37种进行过化学成分研究。自该属植物中得到并签定的化学成分有140种,分别属于马兜铃酸类及其衍生物、生物碱类、萜类及甾体化合物、黄酮类、苯丙素酚类和其它类化合物。本文介绍了这些化合物的名称、结构式及存在的植物等。重点介绍了植物界中罕见的含硝基菲类有机酸(马兜铃酸类)及其衍生物,并指出这类化合物结构规律性。在马兜铃属植物中以马兜铃酸A、B、C、D(aristolochic acid A、B、C、D)、马兜铃内酰胺(aristololactam)、木兰碱(magnoflorine)、β-谷甾醇(β-sitosterol)及尿囊素(all-antoin)分布较普遍,尤以马兜铃酸A存在最广泛。

马兜铃属(Aristolochia L)药用植物研究概况

总结了常见马兜铃属药用植物的化学成分及生物活性研究情况。

中药材(饮片)中马兜铃酸的含量分析及初步风险评估

目的分析中药材(饮片)中马兜铃酸类成分的含量特征,并开展初步风险评估。方法基于近10年的文献数据,从分布情况、相关性、样品差异等角度,分析了12个品种478批中药材(饮片)中马兜铃酸类成分的含量特征。按照危害识别、危害特征描述、暴露评估和风险描述的步骤,明确了计算公式和具体参数,采用靶标危害系数法对细辛中马兜铃酸Ⅰ的安全风险进行评估。结果12个品种478批中药材(饮片)中共检出25种马兜铃酸类成分,整体含量马兜铃酸Ⅰ最高,马兜铃内酰胺F1最低,部分成分含量之间存在相关性。含马兜铃酸的药用植物的果实中马兜铃酸类成分远高于其他部位,各药材经炮制后马兜铃酸含量显著降低。按法定用药部位统计,各品种中马兜铃酸I和马兜铃酸П含量存在显著性差异,朱砂莲最高,鱼腥草最低。风险评估结果显示,11批细辛药材中有1批样品中马兜铃酸Ⅰ的靶标危害系数(THQ)大于1,提示其用药存在安全风险。结论获得的中药材(饮片)中马兜铃酸类成分的含量现状和建立的风险评估方法,可为含马兜铃酸中药材(饮片)的质量控制和安全用药提供参考。