马兜铃水提物在大鼠体内代谢产物的定性分析

目的基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF-MSE),定性分析马兜铃水提物(AFE)和马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)大鼠体内马兜铃酸类物质(AAs)代谢产物的差异。方法该实验选取SD大鼠,分别连续灌胃给予AFE(110 g·kg^(-1)·d^(-1))和AAⅠ(5 mg·kg^(-1)·d^(-1))5 d,收集血清、尿液和粪便。采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相甲醇(含0.01%甲酸+5 mmol·L^(-1)乙酸铵,A)-水(含0.01%甲酸+5 mmol·L^(-1)乙酸铵,B)梯度洗脱(0~1.0 min,10%B;1.0~7.0 min,10%~75%B;7.0~7.2 min,75%~95%B;7.2~10.2 min,95%B;10.2~10.3 min,95%~10%B;10.3~12.0 min,10%B),流速0.3 mL·min^(-1)。电喷雾离子源(ESI)正离子模式采集,扫描范围m/z 100~1200。结合UNIFI 1.9.4.053系统,采用Pathway-MSE定性分析鉴定生物样品(血清、尿、粪便)中AAs原型和相关代谢产物的种类,平行比较AFE组和AAⅠ组亚急性毒性实验中大鼠体内代谢产物的异同。结果与AAⅠ组比较,AFE组血清、尿液与粪便生物样品中分别鉴定出6、10和13个共有代谢产物,以及14、20和30个特有代谢产物。主要AAs成分均遵循去甲基化、硝酸还原和结合等代谢过程。与AAⅠ组的平行比较分析显示,AFE组血清中AAⅠ原型成分和生物样品中多数AAⅠ代谢产物[AAⅠa、马兜铃内酰胺Ⅰ(ALⅠ)a、7-OHALⅠ及其结合型衍生物等]表达量均明显升高(P<0.05,P<0.01),AFE组粪便中ALⅠ的代谢产物表达量显著低于AAⅠ组(P<0.01),AFE组尿液和粪便中还鉴定出多种AAⅠ组未发现的ALⅠ外排代谢产物。结论AFE中AAs成分均显示出与AAⅠ成分相近的体内代谢规律,但马兜铃中多种AAs成分共存可能会影响AAⅠ的代谢,通过增加AAⅠ与ALⅠ代谢外排,从而达到减小不良反应作用。