基于AQP8和线粒体细胞凋亡途径相关性探讨马兰草乙醇提取物对活化的大鼠肝星细胞HSC-T6体外增殖和凋亡的影响

目的研究马兰草乙醇提取物在体外对转化生长因子-β1(TGF-β1)活化的大鼠肝星形细胞(HSC-T6)增殖、凋亡及基于AQP8蛋白靶点调控活化的HSC-T6细胞线粒体凋亡途径的影响,探究该药抗肝硬化腹水的作用机制。方法体外培养HSC-T6,用TGF-β1刺激24 h后,用不同浓度的马兰草乙醇提取物体外干预12、24、36、48 h,用MTT法检测马兰草乙醇提取物对活化HSC-T6存活率的影响,流式细胞术检测HSC-T6细胞凋亡和细胞线粒体膜电位的影响,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测AQP8mRNA的表达水平,Western Blot检测AQP8、Cty-C的蛋白表达。结果阴性对照组相比,各组OD值和细胞存活率均有下降,基质对照组的凋亡率下降(P<0.05),其余各组的凋亡率均有所上升(P<0.05),基质对照组和马兰提取物组(20、40μg/mL)的AQP8mRNA的表达水平明显上升(P<0.05);与基质组相比,大黄素各剂量组和马兰乙醇提取物各剂量组的细胞存活率均呈时间/剂量依赖性下降,大黄素组的早期凋亡有所上升(P<0.05),马兰提取物各剂量组各时期的凋亡增加的同时呈剂量依赖性升高(P<0.05),且线粒体细胞膜电位呈剂量依赖性显著下降(P<0.05)。Western Blot检测结果显示,Cty-C和AQP8的表达趋势一致,大黄素组的表达较较阴性对照组和基质对照组均有明显增多(P<0.05),马兰提取物组(40μg/mL)的表达量最多(P<0.05)。结论马兰草乙醇提取物在体外可抑制活化的HSC-T6增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与激活线粒体细胞凋亡途径和上调AQP8表达有关。