远程二维NMR用于马尾杉碱M的结构测定

华南马尾杉]phlegmariurus fordii(Baker)Ching]为石杉科（Huperizaceae)新品种植物，从中分得一个新的生物碱，为无色针晶，定名为马尾杉碱M（Phlegmariuine-M)。根据质谱（M^+300)及元素分析，确定其分子式为C17H20N2O3。通过紫外、红外，^1H和^13C NMR谱图分析，发现其结构与最近文献报道的福定碱或石杉碱甲相类似，均含相同的氨基、α-双氢吡啶酮环、环内和环外双键，但马尾杉碱M缺少一个10－甲基，而多一个羰基和一个氧乙基。据此推测，其结构如1所示，该碱的^1H和^13C NMR信号指定结果见表1，但是，马尾杉碱M的7－H和12－C的化学位移（分别为δ4.83和δ163.78ppm）与石杉碱甲的（分别为δ3.56和δ143.3ppm）相差甚远，为了进一步阐明该碱的化学结构，本文采用普通的和远程的^13C-^1H COSY二维NMR新技术进行了研究，所得结果与1相符合。

粗糙马尾杉的驯化栽培

【目的】探索粗糙马尾杉人工栽培的可能性，为其持续开发利用提供参考依据。【方法】将野外收集的粗糙马尾杉种质资源种植于简易大棚内，分析不同栽培基质、光照和施肥方式对其生长的影响。【结果】在木糠、松树皮、椰糠、泥炭土4种栽培基质中，以疏松透气、保水性好、具有一定营养成分的泥炭土的栽培效果较优，有利于茎的生长伸长，茎和茎粗生长量均显著高于其他3种栽培基质（P〈0．05），分别为6．1cm和6．2nllTl，新抽生茎数为3．6条。在自然光照、遮光率30％遮阳网、遮光率70％遮阳网条件下，以70％遮光率处理最适宜粗糙马尾杉植株生长，其茎生长量、茎粗和新生茎数均最佳，分别为6．6cm、7．5mm和3．5条；而太阳光直照下可引起植株叶片枯死或全株死亡。适当施用MS无机营养液或1％氮磷钾复合肥液均可明显促进粗糙马尾杉植株生长，叶面喷施效果优于根施；其中以5xMS溶液叶片喷施效果最佳，其茎生长量、茎粗和新抽生茎数均高于其他3个处理，分别增加O．8～3．6cm、0．4～1．0mm和0．3～1．7条。【结论】有利于粗糙马尾杉驯化生长的适宜条件为：以泥炭土为基质并在70％遮光率的遮阳网大棚内进行盆栽。

中国马尾杉属(石杉科)的两个组

本文记述了中国产马尾杉属Phlegmariurus (Herter)Holub的两个组 ,即龙骨组 (新组合 )sect.Cari naturus (Herter)H .S.KungetL .B .Zhang和马尾组sect.Phlegmariurus。确认这两组在中国共 8种 ,分别编写了两组的分种检索表及各种的地理分布 ,并提出一个新异名 :Ph .cancellatusvar.minor( =Ph .cancel latus) .

云南马尾杉的化学成分研究

从蕨类植物云南马尾杉(Phlegmariurus yunnanensis)地上部分通过溶剂提取、硅胶柱层析、SephadexLH-20柱层析和反相柱层析等方法分得5个化合物.利用现代波谱法结合理化分析对提纯的化合物进行结构鉴定.首次从云南马尾杉中分离得到1个生物碱lycoposerramineH、4个serratene型三萜:serratenediol-3-acetate、serratenediol、lycocryptol和serratriol..

HPLC法测定蛇足石杉及闽浙马尾杉不同部位的石杉碱甲含量

蛇足石杉Huperzia serrata（Thumb.）Trey.及闽浙马尾杉P.minchegensis Ching同属于石杉科植物,其含有的石杉碱甲（Huperzine A）,在临床上用于治疗记忆障碍及老年性痴呆[1-2]。我们采用HPLC法测定蛇足石杉及闽浙马尾杉不同部位的石杉碱甲含量,为石杉碱甲药物资源的开发利用提供实验依据。

中国马尾杉属新分类群

本文发表了马尾杉属新分类群,即龙岩马尾杉Phlegmariurus longyangensis C.Y.Ma,sp.nov.;狭叶马尾杉P.mingcheensis Ching var.angustifolius C.Y.Ma,var.nov.;矮小马尾杉P.nanus C.Y.Ma,sp.nov.

高效液相色谱法测定土家药马尾杉(有柄马尾杉)中石杉碱甲的含量

目的采用高效液相色谱法测定土家药马尾杉（有柄马尾杉）中石杉碱甲的含量。方法采用ZORBAXSB-C18色谱柱（150mm×4．6mm，5μm），流动相为0．02mol．L-1磷酸二贰钠溶液-乙腈（91．88．2），检测器波长310nm，柱温22℃，流速1．0ml／min。结果石杉碱甲在0．04～0．24μg之间与峰面积呈良好线性关系（r=0．99989），平均回收率为98．34％，平均含量为0．028％。结论本测定方法快速、易行、准确，可用于土家药马尾杉（有柄马尾杉）中石杉碱甲的质量控制。

石杉科植物粗糙马尾杉孢子的电镜特征

目的:本试验通过对粗糙马尾杉孢子进行电镜扫描及透射,为粗糙马尾杉孢粉学及形态鉴定提供依据。方法:对孢子进行电镜扫描及透射观察。结果:发现粗糙马尾杉孢子四面体型,辐射对称,三裂缝,突起,外壁孔穴纹饰,近极面具浅圆凹状四分体痕,远极面具孔穴,偶见乌氏体颗粒,孔穴与四分体痕界限明显,孢壁分为外层和内层等特征。结论:以上实验结果可作为粗糙马尾杉的鉴别依据,对揭示孢子纹饰和孢壁的形成有重要的意义,并为孢粉学和系统学研究提供基础资料。

长柄石杉与有柄马尾杉内生真菌的分离与初步鉴定

对长柄石杉和有柄马尾杉的内生真菌进行分离与鉴定。共分离纯化到17株真菌,其中从长柄石杉植株内分离出12株真菌,有柄马尾杉植株内纯化分离出5株真菌,分别隶属于青霉属、被孢霉属、木霉属、枝氯霉属、生赤壳属、曲霉属、希金氏指行霉、肉座菌属、赤霉属、球座菌属等10个属,其中长柄石杉与有柄马尾杉二者共有的为青霉属。

中国马尾杉属的药用植物

本文报道了国产马尾杉属药用植物的分类、分布和药用价值,可供药用的马尾杉属植物有10种,主要分布于秦岭以南各省(区),其中华南马尾杉、闽浙马尾杉、柄叶马尾杉、美丽马尾杉的资源比较丰富。

闽浙马尾杉内生真菌Hypoxylon investiens NX9的次级代谢产物与乙酰胆碱酯酶抑制活性

研究闽浙马尾杉内生真菌炭团菌Hypoxylon investiens NX9的次级代谢产物及其对乙酰胆碱酯酶的抑制活性.将菌株H.investiens NX9进行液体发酵20 L,用乙酸乙酯萃取得到4.448 g有机粗提物,采用色谱技术从中分离到6个萘酮衍生物和1个倍半萜类化合物,根据核磁波谱数据分别鉴定为(S)-regiolone (1)、3,4-dihydro-3,6,8-trihydroxy-3-methyl-naphthalenone (2)、xylarenone (3)、(3S,4R)-3,4-dihydro-3,4,5-trihydroxynaphthalen-1(2H)-one (4)、4,5-dihydroxy--tetralone (5)、3,4-dihydro-3,4,8-trihydr-oxy-1-naphthalenone (6)和xylaranol B (7).乙酰胆碱酯酶抑制实验显示化合物3具有一定的活性,ρIC50为5.23 mg·mL^-1.研究表明以药用植物的内生菌为资源,是发现活性药物的一条有效途径.

马尾杉属植物石松生物碱和serratane型三萜及其生物活性研究进展

马尾杉属植物(石杉科)作为发现明星分子石杉碱甲的同科石杉属民间草药千层塔(即蛇足石杉)的近缘植物,具有重要的研究价值。我国马尾杉属植物共21种,其中仅8种植物的化学成分得到了不同程度的研究。石松生物碱和serratane型三萜为该属植物特征性次生代谢产物。到目前为止,已从中共分离得到78个具有多种结构类型的石松生物碱,以及26个serratane型三萜。体外活性测试表明,部分化合物具有较好的抗乙酰胆碱酯酶和一定的抗肿瘤活性。针对马尾杉属植物这2类特征化学成分及其生物活性的研究(1971年至2016年2月)进行总结和评述。总体上来讲,该属植物相较于其他石松蕨类植物代谢产生出新化合物(包括新骨架)的机率较高,但到目前为止对其研究尚不够深入,绝大多数种的化学成分及其生物活性还无人涉足,亟待深入系统研究。

中国马尾杉属(石松科)的分类修订

马尾杉属植物因含治疗阿尔茨海默症的特效药成分石杉碱甲而具有重要的经济价值和保护价值,全属为国家重点保护植物。该文基于形态学、生态学和地理学等证据,对中国分布的马尾杉属植物进行了分类修订,承认我国有马尾杉属植物21种,将该属植物划分为4个单系的组,即金丝条马尾杉组(Sect.Fargesiani X. C. Zhang&R. H. Jiang, sect. nov.)、喜马拉雅马尾杉组(Sect.Hamiltoniani C. Y. Yang, emend. X. C. Zhang&R. H. Jiang)、马尾杉组(Sect.Phlegmariurus)和粗糙马尾杉组[Sect.Squarrosurus(Herter) X. C. Zhang&R. H. Jiang, comb.&stat. nov.],并将Huperzia medogensis、Phlegmariurus austrosinicus、P.changii、P.nylamensis、P.cancellatus var.minor、P.qiongzhongensis和P.shangsiensis的名称作为异名处理。

闽浙马尾杉内生真菌分离纯化及产石杉碱甲菌株LC-MS/MS筛选

目的通过组织块分离法从闽浙马尾杉中分离内生真菌,利用LC-MS/MS筛选产石杉碱甲的内生真菌。方法将采集到的新鲜植物闽浙马尾杉进行表面灭菌消毒及将植物的根际土壤稀释,接种于含有3%的链霉素的PDA平板培养基上,挑取尖端菌丝进行分离、纯化和保藏;通过石杉碱甲菌株LC-MS/MS法对分离到的内生真菌进行快速的筛选,筛选出产石杉碱甲的内生真菌。结论通过组织块及稀释平板法从闽浙马尾杉植物中分离到306株内生真菌,其中根(G)8株,茎(J)65株,叶(Y)173株,茎尖(M)60株。通过LC-MS/MS筛选法共筛选到产石杉碱甲菌株15株,其中根(G)0株,茎(J)2株,叶(Y)11株,茎尖(M)2株。

龙骨马尾杉环阿屯醇合成酶(HcCAS1)基因的克隆和生物信息学分析

目的:对大伸筋草的原植物龙骨马尾杉Huperzia carinata环阿屯醇合成酶(cycloartenol synthase,CAS)基因HcCAS编码区进行克隆及序列分析。方法:根据本实验室已报道的龙骨马尾杉转录组高通量测序结果分析获得1条具有环氧角鲨烯环化酶保守结构域的CAS基因序列,采用RT-PCR技术,以龙骨马尾杉根、茎、叶混合样品总RNA为模板克隆得到龙骨马尾杉HcCAS基因的编码区序列,并对HcCAS蛋白进行理化性质、蛋白二级结构及三维结构预测分析。结果:序列分析表明,所克隆的HcCAS基因编码区开放阅读框(open reading frame,ORF)长为2 274 bp,编码757个氨基酸残基,命名为HcCAS1(GenBank登陆号JN790125)。结论:该研究在国内外首次获得龙骨马尾杉HcCAS基因的编码区序列,为进一步研究HcCAS蛋白在石杉科植物甾醇合成途径中的功能及酶活性位点的鉴定奠定基础。

华南马尾杉生物碱成分的研究

目的 :研究石杉科华南马尾杉 [Phlegmariurusfordii(Baker)Ching]中的生物碱成分。方法 :应用多种色谱技术对华南马尾杉总碱部分进行分离纯化 ,依据四大光谱数据解析鉴定化合物结构。结果 :从华南马尾杉中分得 1个单体生物碱。结论 :该化合物为一个新结构生物碱 ,命名为异福定碱 (isofordine)。

龙骨马尾杉PcFPS1基因克隆及序列分析

目的对龙骨马尾杉Phlegmariurus carinatus法呢二磷酸合成酶(Farnesyl diphosphate synthase,FPS)基因PcFPS1编码区进行克隆及序列分析。方法根据已获得的龙骨马尾杉转录组数据,从中获得1条编码FPS的转录本,采用RT-PCR方法获得PcFPS1的编码区序列,并对PcFPS1蛋白进行理化性质、蛋白二级结构及三维结构预测分析。结果序列分析表明,所克隆的PcFPS1基因编码区长为1 119 bp,编码372个氨基酸残基,PcFPS1与挪威云杉Picea abies的FPS具有70%的序列相似性。生物信息学预测PcFPS1蛋白基本不含跨膜区,具有萜类合酶保守结构域,不含信号肽。结论首次获得龙骨马尾杉PcFPS1基因的编码区序列,为进一步研究PcFPS1在石杉科植物萜类及甾醇类化合物生物合成途径中的功能及鉴定酶活性位点奠定基础。

龙骨马尾杉PcHDR1基因克隆及序列分析

该研究采用RT-PCR方法对龙骨马尾杉Phlegmarirus carinatus(Desv.)Ching 1-羟基-2-甲基-2-(E)-丁烯基-4-焦磷酸还原酶[1-hydroxy-2-methyl-2-(E)-butenyl 4-diphosphate reductase,HDR]基因Pc HDR1的编码区进行克隆并利用生物信息学方法进行序列分析。根据实验室已获得的龙骨马尾杉转录组数据,从中获得1条编码HDR的转录本,采用RT-PCR方法获得该基因的全长c DNA序列,所克隆的Pc HDR1基因编码区长为1 437 bp,编码478个氨基酸残基,Gen Bank登录号为JQ957845。Pc HDR1与银杏Ginkgo biloba的HDR序列同源性最高,达78%。生物信息学预测Pc HDR1蛋白没有跨膜区,具有Lyt B保守结构域,不含信号肽。该研究克隆并获得了龙骨马尾杉Pc HDR1基因的编码区序列,并对其编码的蛋白进行了序列分析及结构域预测,为进一步研究HDR的功能奠定基础。

马尾杉内生真菌分离及其抑菌活性研究

分离马尾杉内生真菌,并筛选其具抑菌活性菌株。用组织块分离法分离纯化菌株,通过形态学观察对其进行初步鉴定,以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌,采用对峙法进行抑菌活性筛选。实验分离获得马尾杉内生真菌28株,其中叶4株,叶鞘12株,茎9株,根3株。革兰氏染色结果表明,28株菌中,17株菌的菌丝染色呈紫色(60.71%),11株菌染色呈红色(39.29%),各菌的菌丝形态和孢子形态各异。抑菌实验结果表明所得28株马尾杉内生真菌,有11株至少能对1种指示菌有抑菌作用,占总分离菌株的39.29%,其中3株对金黄色葡萄球菌有较强的抑菌活性。马尾杉中存在大量的内生真菌,有些内生菌能产生抑菌活性代谢产物,可以进一步对这些代谢产物开展研究,为微生物药物资源的开发提供前期的物质基础。

HPLC法测定6种石杉科植物中石杉碱甲的含量

目的 测定 6种石杉科植物中石杉碱甲的含量。方法 用 2 %酒石酸溶液提取总碱 ,HPL C法测定 ,外标法定量。结果 石杉碱甲在所测定的 5种石杉科植物蛇足石杉、皱边石杉、四川石杉、金丝条马尾杉、柳杉叶马尾杉中均有较高分布 ,分别达到 0 .0 4 81% ,0 .0 5 79% ,0 .0 70 6 % ,0 .0 345 % ,0 .196 1% ,在闽浙马尾杉中含量较少 ,仅为0 .0 0 6 1%。结论 方法简便、准确 。