马氏珠母贝酶解产物品质改良工艺优化

为了得到最佳酶解液呈味特性,以马氏珠母贝酶解产物(EHP)为研究对象,以感官评价、氨基酸态氮含量和挥发性物质为指标,通过单因素试验优化品质改良工艺。结果显示,原料经漂烫处理后,制备的EHP经美拉德反应(蔗糖8%、温度100℃、30 min,pH 7)改良、酵母脱腥(添加量0.5%,40℃,60 min)和气味掩盖法(蒜、姜提取物添加量2%,比例为1∶3)等处理后得到改良后的酶解产物(I-EHP)。与改良前的酶解产物相比,改良后的酶解产物感官评分由17分上升至19.4分,氨基酸态氮由99 mg/100 g下降至74 mg/100 g,游离氨基酸总量下降了49.85%,但鲜味氨基酸增加了7.23%,与电子舌结果相符;气相色谱-质谱联用(GC-MS)结果表明,改良后的酶解产物香气物质种类由72种升至99种,与电子鼻结果相符。因此,优化后的改良工艺有助于改善酶解产物品质。

珍珠贝外套膜酶解产物促进皮肤创伤愈合效果研究

为进一步拓宽马氏珠母贝(Pinctada martensii)的高值化利用途径,文章探讨了马氏珠母贝外套膜酶解产物体外抗菌活性、促凝血作用以及对小鼠软组织开放性创伤愈合效果。结果表明,珍珠贝外套膜酶解产物具有一定的促凝血作用,但对13种测试菌无抑制作用;涂抹给药6 d后,给药组小鼠的创伤愈合率显著高于阴性对照组(P<0.05),与阳性对照组无显著差异(P>0.05);给药组的第14天愈合率达100%,疤痕缩小率显著高于阴性对照组(P<0.05)。生化指标测试结果显示,与2个对照组相比,马氏珠母贝外套膜酶解产物能够抑制炎症因子IL-6生成;与阴性对照组相比,其可极显著促进IL-10分泌;与阴性对照组相比,给药组皮肤组织中FGF-2含量无显著性差异(P>0.05),阳性对照组EGF含量显著高于其他组(P<0.05);而TGF-β和CCND1含量均显著高于阴性对照组(P<0.05)。综上,马氏珠母贝外套膜酶解产物具有一定促凝血、抑制炎症作用并促进生长因子分泌,从而加快小鼠软组织开放性创伤愈合,对浅表瘢痕增生具有一定的抑制作用。

马氏珠母贝肉酶解产物ACE抑制活性的研究

利用胰酶、枯草杆菌中性蛋白酶,在50℃、pH为7.0～8.0,m(贝肉)∶V水=1∶3的条件下,对马氏珠母贝肉进行双酶水解4h制备得到酶解产物及残渣。利用Alcalase2.4L、胃蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶对残渣进行再次酶解。结果表明:残渣蛋白质含量按干基计达54.2%;Alcalase 2.4L、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶对残渣的酶解效果较好;残渣的木瓜蛋白酶酶解产物ACE抑制活性较强;马氏珠母贝肉酶解产物清除自由基活性较强的组分分子量为944u,残渣木瓜蛋白酶酶解产物清除自由基活性较强的组分分子质量在1300～259u。

马氏珠母贝酶解产物清除自由基活性的研究

利用胰酶、枯草杆菌中性蛋白酶,在50℃、pH为7.0～8.0、料水比1:3的条件下,对马氏珠母贝肉双酶水解4h制备得到酶解产物及残渣。利用Alcalase2.4L、胃蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶对残渣进行再次酶解。结果表明:Alcalase2.4L、复合蛋白酶对残渣的酶解效果较好;残渣的复合蛋白酶酶解产物自由基清除活性较强;马氏珠母贝肉酶解产物清除自由基活性较强的组分分子量在1910u～944u之间,残渣复合蛋白酶酶解产物清除自由基活性较强的组分分子量在3472u～834u之间。

马氏珠母贝肉酶解产物清除自由基活性的研究

对马氏珠母贝肉的风味酶酶解产物对超氧阴离子自由基、羟自由基及DPPH·的清除效果进行了研究。结果表明,马氏珠母贝肉酶解产物对三种自由基均有一定的清除活性,量效关系明显;其清除O2-·、·OH、DPPH·三种自由基的IC50分别为1·513、1·423、2·618mg/mL,清除自由基能力总体高于牡蛎和海湾扇贝提取物。

马氏珠母贝肉酶解条件优化及其产物活性分析

【目的】优化超声波辅助酶解马氏珠母贝肉工艺条件,并对酶解产物进行自由基清除活性分析,为马氏珠母贝肉的高值化利用提供参考依据。【方法】以马氏珠母贝肉为原料,采用单因素及响应面试验分析酶解温度、加酶量、超声功率和酶解时间对珠母贝肉蛋白质水解度的影响,确定最佳工艺参数,并测定酶解产物对羟基自由基(·OH)、超氧自由基()及DPPH自由基(DPPH·)的清除能力。【结果】影响马氏珠母贝肉酶解效果的4个因素主次顺序为:超声波功率>加酶量>酶解温度>酶解时间,其中酶解温度、加酶量和超声波功率影响极显著(P<0.01),酶解时间及加酶量与超声波功率的交互作用影响显著(P<0.05)。马氏珠母贝肉最佳超声波辅助酶解条件为:酶解温度48℃、加酶量2200 U/g、超声波功率13%(总输出功率900 W)、酶解时间12 min,在此条件下的蛋白质水解度为21.937%,与预测值(22.140%)的相对误差为0.92%。酶解产物对·OH、和DPPH·的清除能力随酶解产物质量浓度的增加而增强,当质量浓度为2.0 mg/m L时,清除率分别为68.85%、83.62%和82.36%。【结论】优化得到的超声波辅助酶解马氏珠母贝肉工艺参数准确可靠,酶解时间显著缩短,酶解产物具有明显的清除自由基活性,可作为具有抗氧化作用的保健食品、保健酒等产品的优质原料。

马氏珠母贝肉酶解产物对SD大鼠生化指标的影响研究

以马氏珠母贝肉为研究对象,采用正交实验对其酶解条件进行优化,并测定其酶解产物对SD大鼠血清生化指标的影响。结果表明:马氏珠母贝肉酶解的最优条件是酶用量0.6%、温度70℃、时间35min、pH8.0,在此条件下马氏珠母贝肉蛋白质水解度高达54.79%。马氏珠母贝肉酶解产物的调配试剂注射使SD大鼠血清中前白蛋白、载脂蛋白A1显著上升(p<0.05),谷丙转氨酶、谷草转氨酶、载脂蛋白B、肌酸激酶MB型同工酶、超敏C反应蛋白、葡萄糖、间接胆红素显著下降(p<0.05),结合相关研究结果,推测出马氏珠母贝肉酶解产物有保肝、保心血管的功效。

马氏珠母贝肉酶解产物的抗酒精性肝损伤作用

为探究马氏珠母贝肉酶解产物(Enzymatic hydrolysate from Pinctada martensii,EP)对酒精性肝损伤(Alcoholic liver damage,ALD)的保护作用,该研究将EP超滤分级为截留分子量>10 kD(EP-Ⅰ)、3~10 kD(EP-Ⅱ)和<3 kD(EP-Ⅲ)3个组分,检测其体外抗肝损伤活性及对ALD小鼠肝保护作用的影响。体外试验结果显示,EP-Ⅲ可显著激活体外乙醇脱氢酶(ADH)活性(P<0.01),3个超滤组分均具有一定的体外抗氧化能力且EP-Ⅲ>EP-Ⅱ>EP-Ⅰ;动物试验结果显示,与模型对照组相比,各超滤组分均能够显著降低小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活力、小鼠肝脏指数及肝脏中丙二醛(MDA)和甘油三酯(TG)含量,同时显著增强小鼠肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)、乙醇脱氢酶(ADH)和乙醛脱氢酶(ALDH)活力,提高肝脏中的谷胱甘肽(GSH)含量。综上,马氏珠母贝肉酶解超滤组分对急性ALD具有一定的辅助保护作用,其中EP-Ⅲ的保护作用效果最佳,其机制可能与加快机体乙醇代谢和减缓乙醇对机体造成的氧化损伤相关。

马氏珠母贝肉酶解蛋白抗疲劳功能的初步研究

目的对马氏珠母贝肉酶解动物蛋白(enzymatic hydrolyzed animal protein,EAP)的抗疲劳功能进行初步研究。方法小鼠负重游泳实验和力竭游泳运动实验,检测小鼠负重游泳时间,力竭运动后肝糖原和血清尿素氮的含量。结果3种剂量的EAP均能不同程度地延长小鼠负重游泳时间,有效降低力竭运动后小鼠肝糖元的消耗和血清尿素氮含量。结论EAP具有明显的抗疲劳功能。

酶解马氏珠母贝肉制备降血压肽工艺条件优化

以马氏珠母贝(Pinctada martensii)肉为原料,选用6种蛋白酶在各自适宜的条件下进行酶解,采用HPLC法分析酶解产物对血管紧张素转换酶(ACE)的抑制活性(IP),筛选出碱性蛋白酶为其制备的最佳酶种类,并确定了水解度为21%时,产物具有较好的抑制活性。在此基础上,分别考察了加酶量,底物浓度,酶解温度及pH对水解度的影响。结果表明:当加酶量为0.175 g/L,底物浓度为35 g/L,温度为45℃,pH为9.5,水解时间240 min为酶解最适宜工艺条件。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子质量分布,表明酶解产物中主要为14.4 ku以下的多肽分子。

酶解制备马氏珠母贝肉ACEIP的工艺研究

以ACE抑制率为评价指标,确定蛋白酶对马氏珠母贝肉(Pinctada martensii)水解条件。六种蛋白酶中水解效果较好的酶种为胃蛋白酶。正交试验确定的水解条件为:在pH2．2、温度39℃、酶浓度3%、水解6．0h、底物浓度12%。在该条件下水解,水解液ACE抑制率可以达到81．70%,IC_(50)值为1．323mg/ml。

合浦珠母贝肉酶解产物的抗氧化稳定性与功能特性

酶解合浦殊母贝内蛋白制备抗氧化肽的粗提产物，以合浦珠母贝清除DPPH自由基、OH自由基、超氧阴离子能力变化为指标，测定其抗氧化稳定性和功能特性。化学稳定性包括受温度、贮藏浓度、pH、不同干燥方式的影响，生物稳定性为胃肠道消化耐受度，以及功能特性包括乳化性、吸水保湿能力和吸油能力。结果表明：合浦珠母贝酶解产物具有较弱的耐热性，低温条件下最佳贮藏浓度为10－50mg／mL，在碱性环境中8h会丧失活性，而冷冻干燥较有利于保持其抗氧化活性。产物还含有较强的乳化性和吸油吸水保湿能力，但在模拟胃肠道消化过程中活性保持较差，这些性质均有利于其在化妆品中的应用，而不适用于口服抗氧化功能食物药物，将为其后续相应的工业化应用提供依据。

冻藏对水煮及酶解马氏珠母贝肉提取物呈味特性的影响

为了探究冻藏对水产品呈味物质含量和整体呈味特征的影响,以冻藏前后的马氏珠母贝肉为原料,分别采用水煮、酶解两种方式制备新鲜、冷冻贝肉提取物;利用电子舌测定不同提取物整体滋味轮廓差异,并结合人工感官评定评价整体呈味特征;测定了不同提取物的基本成分、游离氨基酸、呈味核苷酸、有机酸和有机碱含量,并通过滋味活性值评价这些呈味物质对提取物滋味的贡献。电子舌味觉特征检测结果表明:新鲜贝肉水煮提取物甜味最强,强于冷冻贝肉水煮提取物;鲜味、甜味和丰富度是新鲜贝肉酶解提取物的重要味觉特征,其中甜味值和丰富度值高于冷冻贝肉酶解提取物。电子舌主成分分析结果显示,新鲜贝肉酶解提取物最接近谷氨酸钠的呈味特征。人工感官评定结果显示,冷冻贝肉提取物较新鲜贝肉提取物甜味和鲜味强度减弱,酸味更突出,并带有刺激性。呈味物质含量测定结果显示:新鲜贝肉水煮提取物中甘氨酸和5′-一磷酸腺苷的含量较冷冻贝肉水煮提取物分别增加了19.30 g/kg、302.60 mg/100 g;新鲜贝肉酶解提取物中谷氨酸和琥珀酸含量高达27.60 g/kg、1352.70 mg/100 g,显著高于冷冻贝肉酶解提取物(P<0.05)。冻藏处理会导致马氏珠母贝肉提取物中鲜味物质和甜味物质含量降低,苦味物质含量增加,提取物鲜美味感减弱。

蛋白酶水解马氏珠母贝肉对镉解离效果的研究

为了考查蛋白酶水解马氏珠母贝肉过程中对镉解离效果的影响,从木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、精制中性蛋白酶、胃蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶5种蛋白酶中筛选镉解离效果最好的酶,分别进行单一酶解试验和双酶复合酶解试验。以镉解离度和水解得率为指标,利用响应面法优化酶解条件。结果表明:枯草杆菌蛋白酶为最适蛋白酶,镉的解离度为75.57%,胰蛋白酶的效果次之,镉解离度为70.66%。用枯草杆菌蛋白酶进行单一酶解试验,最佳的酶解条件为时间5h,温度65℃,添加量4 700U/g,液固比5∶1(V∶m),pH值7.5时,水解得率为87.43%,酶解镉解离度达到81.87%;用枯草杆菌蛋白酶与胰蛋白酶以活力比为3∶1组合,水解效果和镉解离度均最好。双酶复合酶解优化试验得到的最佳水解条件为时间5h,温度50℃,添加量5 700U/g,pH值7.0,液固比4∶1(V∶m),水解得率为90.93%,镉解离度达到85.52%,比单一酶酶解效果更好。

马氏珠母贝酶解蛋白粉营养组成及其对斑马鱼学习记忆能力的影响

【目的】分析马氏珠母贝酶解蛋白粉(Enzymolysis protein powder of Pinctada martensii,EPP)营养组成,并探讨EPP改善自然衰老斑马鱼学习记忆能力的功效及其可能的作用机制。【方法】采用国标法测定EPP营养组成。18月龄斑马鱼分模型组和实验组,另取6月龄斑马鱼作对照组,实验组饲喂EPP[3 g/(kg•d)]30 d,其它组喂食正常饲料,通过T迷宫试验观察各组斑马鱼学习记忆能力,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测鱼脑组织中炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-10含量及脑源性神经营养因子(Brain derived neurotrophic factor,BDNF)水平。【结果】EPP含有质量分数78.28%的蛋白质,富含谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、亮氨酸、精氨酸等氨基酸,其钙、铁、锌元素含量较高。与模型组相比,EPP可以显著提高实验组斑马鱼觅食成功率及右臂游动路程占比(P<0.05),降低潜伏期;与模型组相比,EPP可以降低实验组斑马鱼脑组织炎症因子IL-1β、TNF-α含量(P<0.05),分别降低了3.18、2.77 pg/mg,同时提高其BDNF的水平(P<0.05),提高了54.99 pg/mg,但对IL-10含量无显著影响(P>0.05)。【结论】EPP具有改善自然衰老斑马鱼学习记忆能力的功效,其机制与EPP缓解大脑的炎症状况、提高脑源性神经营养因子水平有关。

陶瓷膜微滤对马氏珠母贝肉酶解液理化特性的影响

以马氏珠母贝肉蛋白酶解液为原料,考察200 nm陶瓷膜微滤处理对酶解液色值、澄清度、蛋白质含量和分子量分布的影响。结果表明,200 nm陶瓷膜微滤处理可以改善酶解液的色值和澄清度,可以完全截留分子量15000 u以上的蛋白,能够截留绝大部分分子量10000 u以上的多肽,而分子量小于5000 u的多肽在透过液中得到了有效的富集。

混合发酵对马氏珠母贝酶法提取物滋味成分的影响

采用高效液相色谱、氨基酸自动分析仪等方法分析了马氏珠母贝酶解液和发酵后的马氏珠母贝酶解液的主要呈味物质甜菜碱、氨基酸、乳酸、琥珀酸、核苷酸及其关联化合物、糖原、无机离子K+、Na+、PO43-、Cl-,并对主要呈味物质含量作比较。结果表明:经混合发酵后,氨基酸和琥珀酸含量增加,甜菜碱、核苷酸及其关联化合物和糖含量减少,无机离子含量相差不大,整体风味得到了改善。

珍珠贝水解肽的制备、氨基酸组成及抗炎活性

目的:高值化利用马氏珠母贝肉生物活性成分及马氏珠母贝肉抗炎活性肽。方法:以马氏珠母贝肉为原料,以水解度(DH)为指标,通过单因素试验和响应面试验优化珍珠贝水解肽工艺制备,并对珍珠贝水解肽的氨基酸组成和抗炎活性进行评价分析。结果:中性蛋白酶为最适酶,酶解最优工艺条件为料液比1∶1 (g/mL),酶解温度46.3℃,酶解时间1.4 h,酶底比0.3%,此时水解度为22.88%,与理论值无显著差异,回归模型可靠。酶解物中必需氨基酸含量达19.84%,疏水性氨基酸含量占比21.19%,带正电荷氨基酸含量为10.46%。在LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7抗炎模型中,珍珠贝水解肽在0~4.0 mg/mL的质量浓度范围内无细胞毒性且有利于巨噬细胞增殖。质量浓度为2.0 mg/mL时,珍珠贝水解肽可有效抑制NO的产生,以及细胞炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的生成,NO抑制率达到70.00%,TNF-α、IL-6和IL-1β抑制率分别达到83.01%,85.04%,83.11%。结论:珍珠贝水解肽的氨基酸种类齐全,其能有效抑制RAW264.7巨噬细胞NO及细胞炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的产生,表现出良好的抗炎活性。

马氏珠母贝肉提取物对小鼠急性酒精性肝损伤的影响

【目的】探讨马氏珠母贝(Pinctada martensii)肉提取物对小鼠急性酒精性肝损伤(alcoholic liver disease,ALD)的解酒护肝作用。【方法】采用碱溶酸沉法提取贝肉蛋白质,酶解超滤后制备截留分子质量为<3 ku(F-Ⅰ)、3~8 ku(F-Ⅱ)、>8 ku(F-Ⅲ)的超滤组分,同时采用水提法制备马氏珠母贝肉全脏器水提物。以急性酒精性肝损伤小鼠为模型,以小鼠血清生化指标(谷丙转氨酶ALT、谷草转氨酶AST)、肝脏生化指标(超氧化物歧化酶SOD、谷胱甘肽GSH、甘油三酯TG、丙二醛MDA、乙醇脱氢酶ADH和乙醛脱氢酶ALDH)和肝脏病理切片为指标评价各提取物对急性酒精性肝损伤的改善作用,并对抗肝损伤活性较高组分进行氨基酸含量测定及质谱结构鉴定。【结果】与模型组相比,贝肉蛋白酶解超滤组分和水提物组均能极显著降低小鼠血清中ALT和AST活性(P<0.01),降低肝脏中MDA、TG含量(P<0.05),显著提高小鼠肝脏中SOD、GSH含量(P<0.05)、ADH、ALDH活性(P<0.01),改善肝脏组织的病理状况,缓解细胞坏死、炎症等病理状态。氨基酸检测结果显示,F-Ⅰ组分及水提物中氨基酸组成全面,水提物中牛磺酸含量是F-Ⅰ组分的2倍左右。质谱结果表明F-Ⅰ组分、水提物分别包含15、20种主要肽片段。【结论】马氏珠母贝肉蛋白酶解超滤组分和水提物对急性ALD具备保护作用,其中F-Ⅰ组分、水提物效果更佳,其改善机制与增强机体抗氧化能力、促进乙醇代谢能力有关。

响应面法优化马氏珠母贝肉酶解工艺参数

采用响应面法确定枯草杆菌中性蛋白酶提取马氏珠母贝肉有效成分的最佳条件,使用二次回归正交旋转组合设计研究固液比(Z1)、酶解温度(Z2)与酶解时间(Z3)3个因素对蛋白质水解度(Y)的影响,3因素按5水平进行编码,其真实值按预实验结果进行设定。结果显示:用酶量按5600u添加每克贝肉蛋白质时,优化的酶解参数为固液比1∶1、温度47.8℃、酶解时间5h,在此条件下,蛋白质的水解度为37%,与模型的预测值37.213%接近。