马破伤风免疫球蛋白F(ab′)_2及其临床应用前景

破伤风在现今医疗条件下的死亡率仍高达10%。长期以来,破伤风防治主要依赖破伤风抗毒素(TAT),后者主要含有马破伤风免疫球蛋白F(ab′)2和特异性抗体免疫球蛋白G(IgG)。经过多年的工艺改进,新制品马破伤风免疫球蛋白F(ab′)2因提高了可中和破伤风毒素的有效成分F(ab′)2的含量,同时降低了会引起过敏反应的主要成分IgG的含量、使不良反应发生率降低,具有良好的临床应用前景,是TAT的升级换代制品。

马血清破伤风抗毒素与马破伤风免疫球蛋白F(ab′)_2过敏反应比较

目的比较马血清破伤风抗毒素(TAT)与马破伤风免疫球蛋白F(ab′)2的过敏反应情况。方法将400例开放性外伤患者根据投硬币法随机分为TAT组和马破伤风免疫球蛋白F(ab′)2组(简称马破组)。TAT组190例,皮试阴性者128例,阳性者57例,强阳性5例。马破组210例,皮试阴性者182例,阳性者27例,强阳性1例。结果 TAT组皮试阳性率30%,皮试阳性者过敏率43.86%,皮试阴性者过敏率3.91%,总过敏率16.22%。马破组皮试阳性率12.86%,皮试阳性者过敏率7.41%,皮试阴性者无过敏病例,总过敏率0.96%。两组皮试阴性者发生过敏反应比较,P=0.013<0.05;两组皮试阳性者发生过敏反应比较,χ2=6.477,P=0.011<0.05,差异有统计学意义。两组总过敏率比较,χ2=25.927,P=0.000<0.01,有显著统计学意义。结论注射TAT者过敏反应较多,注射马破伤风免疫球蛋白F(ab′)2者过敏反应极少。用马破伤风免疫球蛋白F(ab′)2替代TAT,能减少过敏反应的发生,降低安全隐患。

追风败毒散治疗马破伤风

追风败毒散是原治疗人破伤风的临床经验方,笔者用于治疗马破伤风效果显著,深得体会;现将原方、治疗经过及体会介绍于下,供同行参考。

马破伤风免疫球蛋白F(ab′)_2皮试判断标准及脱敏注射法的探讨

目的探讨马破伤风免疫球蛋白F(ab′)2皮试结果判断标准和注射方法。方法将300例急诊外伤患者随机分为传统组(n=140)和改进组(n=160),分别用不同的判断标准和注射方法进行对照研究。结果传统组阳性91例(65%),改进组7例(4.38%),两组间比较差异具有显著统计学意义(P<0.01);两组脱敏后传统组出现14例过敏反应,改进组出现1例过敏反应。结论改进后的马破伤风免疫球蛋白F(ab′)2皮试的判断标准和脱敏注射方法较传统方法阳性率大幅度降低,阳性者中过敏反应极低,而且该法省时、安全、有效、患者痛苦小。

马破伤风免疫球蛋白F(ab′)_2中稳定剂甘氨酸的测定

目的 建立柱前衍生化高效液相色谱法,测定马破伤风免疫球蛋白F （ab’）2中稳定剂甘氨酸的含量为该药品的安全性检测提供方法.方法 样品经柱前衍生化处理后,以SepaxGp-C18色谱柱为分析柱,柱温为37℃;流动相A为0.01 mol·L^-1的醋酸钠溶液,流动相B为乙腈-水（80∶20）,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1;检测波长为254 nm.结果 甘氨酸在2.506～200.456 μg·mL^-1浓度范围内线性关系良好（r=0.9999）,检测限为0.5 ng,定量限为1.0 ng,回收率为98.3％（n=9,RSD=1.5％）.结论 本文建立的方法可用于马破伤风免疫球蛋白F （ab’）2中甘氨酸的含量测定,可作为该药品的安全性监测方法之一.

马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)致迟发性变态反应1例

1病例介绍患者,女,39岁,体质量65 kg.因外伤于2014年9月8日19:00来我院急诊科就诊,清创后遵医嘱行马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)(上海赛伦生物技术有限公司,批号:20140302,规格:0.75 mL:1500 U)皮试,皮试前患者否认过敏史,30 min后观察皮试结果为阴性,即按医嘱于手臂三角肌皮下注射马破伤风免疫球蛋F(ab')21500 U,经观察30 min患者无不适后让其离院.

低pH孵放病毒灭活处理对马破伤风免疫球蛋白F(ab')_2质量的影响

目的考察低pH孵放病毒灭活处理对马破伤风免疫球蛋白F(ab')_2质量的影响。方法取马破伤风免疫球蛋白F(ab')_24份,分别调整pH至3.8、4.1、4.4及6.5,于(25±1)℃条件下放置21 d后取样测定抗体效价、聚合物(二聚体、多聚体)及F(ab')_2含量,评估低pH孵放病毒灭活法对上述质量指标的影响;以1 mL/瓶的规格分装经低pH孵放病毒灭活处理的马破伤风免疫球蛋白F(ab')_2,于(25±1)℃条件下存放6个月,定期取样并进行抗体效价、聚合物(二聚体、多聚体)及F(ab')_2含量检测,评估其稳定性。结果马破伤风免疫球蛋白F(ab')_2经低pH孵放病毒灭活后,其抗体效价、聚合物(二聚体、多聚体)及F(ab')_2含量未发生明显变化;样品于(25±1)℃条件下存放6个月后,抗体效价和F(ab')_2含量均符合《中华人民共和国药典》2015版(三部)的要求。结论低pH孵放病毒灭活法适用于马破伤风免疫球蛋白F(ab')_2病毒的灭活。

马破伤风病诊断与综合防治

破伤风(Tetanus)属于临床常见的一类疾病,主要是因为通过外伤损伤而导致的破伤风梭菌在伤口内进行繁殖,然后不断分泌毒素,产生急性中毒。由于病原微生物属于一种厌氧菌,在生长繁殖过程中大多数处于细窄的伤口中,感染后会进一步产生肌肉痉挛及神经反射程度提高的现象,其兴奋性会明显提升。马破伤风病的发生风险相对较高,对马的健康情况产生严重威胁。但这一疾病大多数都是可防可控的,早期发现并进行诊断治疗,能较好改善这一疾病的预后,保障动物健康,避免产生经济损失。需充分认识马破伤风病的临床诊断和相应的病因表现,以便更好地开展后续防治工作。

马破伤风免疫球蛋白F(ab')_2中磷酸三丁酯残留量的测定

目的建立柱前衍生化气相色谱法,测定马破伤风免疫球蛋白F（ab＇）2中灭活剂磷酸三丁酯的含量,为该药品的安全性检测提供方法。方法样品经柱前衍生化处理后,以DB-FFAP毛细管柱（25 m×0.320 mm,0.50μm）为分析柱,柱温：140℃,气化室温度：190℃,火焰离子化检测器温度：210℃,气相色谱法检测。结果磷酸三丁酯在1.48∽11.48μg/m L浓度范围内线性关系良好（r=0.999 9）,检测限0.518 ng,定量限为1.48 ng,回收率为93.9%（n=9,RSD=2.7%）。结论本文建立的方法可用于马破伤风免疫球蛋白F（ab＇）2中磷酸三丁酯的含量测定,可作为该药品的安全性监测方法之一。

马破伤风鉴别诊断与治疗

马破伤风是由破伤风杆菌感染并在深部创伤组织内部产生大量外毒素而引发的一种人畜共患的中毒性传染性疾病。在马养殖中,如果体表存在很深伤口,破伤风杆菌会寄生在伤口深处,在无氧条件下大量繁殖,并产生大量外毒素。马体表皮肤存在外伤、阉割不当、分娩或者各种外科手术消毒不严格,很容易引发感染。该文主要分析马破伤风杆菌流行诊断及治疗措施。

1例马破伤风免疫球蛋白发生过敏反应的护理

马破伤风免疫球蛋白（TAT）是用破伤风类毒素免疫马血浆经物理,化学方法精制而成的,是一种特异抗体。能中和患者体液中的马破伤风病毒素。并用于预防和治疗破伤风被动免疫注射。我院注射室平均每天要接受二十几例马破伤风免疫球蛋白肌内注射的患者。

马破伤风鉴别诊断与治疗讨论

破伤风是一种中毒性传染病,主要是通过破伤风梭菌分泌的外毒素引发的疾病,人类和牲畜的伤口若是感染破伤风梭菌,尤其是马在分娩、阉割或者是出现外伤而进行外科手术的过程中感染这种毒素将会直接散发发病。本文主要就马破伤风鉴别诊断和治疗进行分析和探讨。

56例马破伤风免疫球蛋白皮试阳性分析

目的:探讨马破伤风免疫球蛋白注射液临床皮试方法及结果。方法:用药前以拟马破伤风免疫球蛋白药物原液用生理盐水稀释10倍对1092例患者进行皮试,观察皮试结果和用药后不良反应。结果:马破伤风免疫球蛋白注射液经1092例患者临床皮试观察,皮试阳性率5.13%,患者脱敏注射后未发生药物不良反应。结论:马破伤风免疫球蛋白药物皮试阳性率不容忽视,应加强医疗安全意识,避免医患纠纷。

免疫亲和层析法对马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)中猪细小病毒的去除效果评价

目的评价马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)的免疫亲和层析纯化工艺对猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)的去除效果.方法分别采用首次装填和重复使用100次的层析柱,对3批中试规模生产的中间品进行缩小规模的层析工艺去除病毒效果评价.将PPV指示病毒加至层析前的料液中,分别于层析纯化上样前、流穿、洗脱、在位清洗阶段取样进行病毒滴度检测.结果新装填的免疫亲和层析柱对PPV的去除效果符合要求,洗脱液病毒平均降低量≥4.30 lgTCID_(50)/0.1 ml.免疫亲和层析柱重复使用100次,对PPV的去除效果仍符合要求,洗脱液病毒平均降低量≥4.33 lgTCID_(50)/0.1 ml.结论马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)的免疫亲和层析纯化工艺具有良好的PPV去除效果,层析柱重复使用100次与首次使用的病毒去除效果无明显差别.

层析法纯化马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)的质量研究

目的 建立一种在现行硫酸铵盐析工艺基础上,采用疏水层析和离子交换层析制备马破伤风免疫球蛋白F(ab’)_(2)的层析纯化工艺,以进一步提高该类产品的纯度及比活性,改善其安全性。方法 通过3种不同工艺(传统硫酸铵工艺、传统硫酸铵工艺+一步阴离子交换层析、传统硫酸铵盐析+疏水层析+阴离子交换层析)纯化制备马破伤风免疫球蛋白F(ab’)_(2),然后检测各产物的比活性、纯度、聚合物含量等。结果 采用硫酸铵盐析工艺结合疏水层析和离子交换层析制备的马破伤风免疫球蛋白F(ab’)_(2),比活性均>100 000 IU/g,分子排阻高效液相色谱法检测F(ab’)_(2)含量>97.0%,完整IgG和聚合物含量之和降至0.5%以下,产品质量大幅提升。结论 建立的马破伤风免疫球蛋白F(ab’)_(2)的层析纯化工艺能有效地提高该类产品的纯度、比活性等关键质量,改善产品的安全性,且工艺可控性较好,易于生产放大,适用于马破伤风免疫球蛋白F(ab’)_(2)的规模化生产。

SPE-HPLC法测定马破伤风免疫球蛋白F(ab')_2中Triton X-100残留量

目的：建立固相萃取高效液相色谱（SPE-HPLC）法测定马破伤风免疫球蛋白F（ab’）2中灭活剂Triton X-100的残留量。方法：采用Oasis固相萃取小柱对样品进行预处理,以水和5%甲醇为淋洗剂,以甲醇为洗脱剂,收集甲醇洗脱物用于HPLC分析。采用ZORBAX Extend-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm,5μm）,流动相为甲醇-水（80∶20）,流速1.0 mL·min-1,检测波长230 nm,柱温30℃,进样量10μL。结果：Triton X-100浓度在0.56～55.34μg·mL-1范围内,与峰面积线性关系良好（r=0.9998）;检测限（S/N=3）为2.03 ng,定量限（S/N=10）为4.06 ng;提取回收率为91.8%。结论：本方法操作简便、准确、重复性好,可用于Triton X-100的残留量测定。

马血清破伤风抗毒素与马破伤风免疫球蛋白F(ab′)2引起的皮肤迟发型变态反应临床分析

目的观察马血清破伤风抗毒素(TAT)和马破伤风免疫球蛋白F(ab′)2注射后引起的皮肤迟发型变态反应,总结患者的临床特征与处理方法。方法回顾性分析2008—2020年门诊与住院治疗的181例注射TAT或马破伤风免疫球蛋白后出现皮肤迟发型变态反应者的临床资料。结果所有患者注射TAT或马破伤风免疫球蛋白前均行皮试检查,阴性171例(94.47%),阳性10例(5.53%,行脱敏注射)。181例中男118例,女63例,年龄11~68岁,病程1~7 d,潜伏期4~14 d。注射TAT(130例)和马破伤风免疫球蛋白(51例)两组患者的临床表现无显著差异,以荨麻疹样皮疹为主,12例注射部位发生浸润性红斑,其中10例伴有全身荨麻疹。181例中皮疹泛发全身者163例(90.06%),伴有胸闷、发热等系统症状者56例(30.94%),其中15例(26.79%)既往有过敏史,6例症状较重的患者无过敏史。34例(18.78%)出现白细胞计数升高、C反应蛋白升高或尿隐血、尿糖等异常中的单一或多项。抗组胺药与糖皮质激素治疗有效,疗程3~10 d,转归良好。结论TAT或破伤风免疫球蛋白皮试阴性或脱敏治疗的患者仍有可能出现皮肤迟发型变态反应,且以荨麻疹样皮疹为主。

人破伤风免疫球蛋白与马血清破伤风抗毒素在急诊临床应用的研究

凡外伤、烧伤、交通事故等创伤患者,为预防破伤风＂感染＂常规都要注射破伤风抗毒素（TAT）。TAT在应用中皮试阳性出现率高,注射后过敏反应时常发生[1]。国外20世纪60年代开始应用人破伤风免疫球蛋白（TIG）,极少有过敏现象发生[2]。人破伤风免疫球蛋白（TIG）在国内已广泛应用于临床。我科于2006年3月开始应用人破伤风免疫球蛋白至2011年06月对门诊急诊外伤8000例患者当中应用TAT和TIG进行了对比研究,现将对比研究结果报告如下：

马血清破伤风抗毒素与人破伤风免疫球蛋白的过敏反应比较

目的比较马血清破伤风抗毒素(TAT)与人破伤风免疫球蛋白(TIG)的过敏反应。方法将578例开放性外伤患者根据用药不同分为两组:TAT组326例,皮试阴性直接注射者155例,皮试阳性脱敏注射者171例;TIG组252例。结果 TAT皮试阳性率52.5%,TAT皮试阴性直接注射者过敏率5.81%,TAT皮试阳性脱敏注射组过敏率6.43%,TIG组无过敏者。结论注射TAT过敏反应者较多,注射TIG过敏反应者极少。用TIG替代TAT,能减少过敏反应的发生,减少安全隐患。

免疫亲和层析法制备马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)

目的采用免疫亲和层析法纯化制备马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)。方法破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)免疫马血浆经胃酶消化、加温变性、硫酸铵盐析、明矾吸附、超滤,获得破伤风抗毒素;再经CNBr activated Sepharose 4FF介质偶联TT制成的亲和层析柱纯化,获得马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)。检测其蛋白质含量、分子大小分布、纯度、效价、比活性,并与破伤风抗毒素进行比较。将马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)置(25±2)℃分别保存1、2、3、6个月,测定效价。结果与破伤风抗毒素比较,马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)的蛋白质含量平均值由45.6 mg/mL下降至20.03 mg/mL,降低了56%;F(ab')2含量变化较小,聚合物含量由2.92%下降至1.22%,降低了59%;纯度略有降低;效价平均值由2533 IU/mL升高至3733 IU/mL,提高了47%;比活性平均值由55563 IU/g升高至186277 IU/g,提高了335%。加速稳定性试验6个月,马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2)效价及F(ab')2含量均在合格范围之内。结论采用免疫亲和层析方法制备了高效价及高比活性的马破伤风免疫球蛋白F(ab')_(2),且稳定性良好。