马腺疫链球菌的分离鉴定与疫苗的研制

为了有效控制马腺疫的发病,通过无菌采集病马脓液进行细菌分离、纯化,生化鉴定和16SrDNA测序分析。结果表明:共分离、鉴定出5株马链球菌马亚种,1株马链球菌兽疫亚种,1株金黄色葡萄球菌;分离株均具有较高致病性;制备的灭活疫苗能够有效地预防马腺疫的发病。

新疆伊犁地区马鼻肺炎、马腺疫、马流产沙门菌病的血清学调查

为了解新疆伊犁地区的马鼻肺炎、马腺疫及马流产沙门菌病的流行现状和特点,本研究从新疆伊犁地区养马最为集中的10个乡镇和3个国有马场采集了818份血清样品。分别采用ELISA法和微量凝集法进行马疱疹病毒(EHV)、马腺疫链球菌(S.equi)和马流产沙门菌(S.abortus)的抗体检测,并应用统计学方法从年龄、性别、地域及养殖规模等方面对影响这3种病感染的风险因素进行了分析。检测结果显示该地区EHV抗体阳性率为28.85%,S.equi抗体阳性率为24.69%,S.abortus抗体阳性率为25.31%。性别和年龄对马鼻肺炎感染影响显著(p<0.05)。地域和年龄对马链球菌抗体阳性率的影响显著(p<0.05);地域对马流产沙门菌抗体阳性率的影响显著(p<0.05)。马疱疹病毒(EHV)和马腺疫链球菌(S.equi)的混合感染率较高。本研究为新疆地区马的这3种传染病有效防控提供了调查数据。

马腺疫链球菌的分离与鉴定

新疆伊犁马的主要繁育基地在昭苏马场,随着自治区大畜牧业的发展,确定了＂以马产业为主导产业＂的发展战略,重点发展养马业和马产品的综合产业。随着马产业的迅速发展,马腺疫又重新抬头,不仅阻碍了马驹的生长发育,还影响着马匹的美观,甚至导致死亡。

马流产沙门菌鞭毛蛋白FliC对马腺疫链球菌SeM蛋白免疫效应分析

为研究马流产沙门菌(Salmonella abortus equi)鞭毛蛋白FliC对马腺疫链球菌(Streptococcus equi subsp.equi)SeM蛋白免疫效果的增强效应,为马腺疫新型高效疫苗的研发奠定基础。本研究构建并诱导表达了FliC,经亲和层析纯化目的蛋白,Western blot检测其免疫原性。将该纯化后FliC与SeM蛋白联合免疫C57BL/6小鼠,免疫后对小鼠进行抗体水平、抗体类型和攻毒保护力的检测。结果表明,成功表达、纯化了FliC重组蛋白,SDSPAGE电泳检测显示该蛋白质为52ku。抗体分型检测结果显示产生的抗体主要以IgG1为主;免疫30d后FliC+SeM免疫组的攻毒保护率为87%,高于SeM免疫组的保护率67%。马流产沙门菌来源的鞭毛蛋白FliC能够增强SeM蛋白的免疫保护效果,该结果为进一步更好地利用SeM蛋白奠定了基础。

马腺疫链球菌FNE基因的克隆及原核表达

采用PCR方法从马腺疫链球菌新疆分离株中扩增FNE基因片段,克隆至pMD19-T载体。利用分子生物学软件分析测序结果,将FNE截短基因亚克隆至原核表达载体pET-30a中,转化到大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)感受态细胞,以IPTG诱导FNE重组蛋白的表达,用SDS-PAGE和Western blot法分析蛋白表达及其反应原性。序列分析显示,其与GenBank收录的马腺疫链球菌4047(登录号YP002747216)核苷酸序列和氨基酸序列同源性均为99%。采用PCR法扩增到675bp的FNE截短基因片段构建重组表达载体获得重组蛋白,经SDS-PAGE分析在46ku处出现明显条带,Western blot分析显示具有反应原性。成功克隆和表达了马腺疫链球菌的FNE截短基因,为重组FNE蛋白亚单位疫苗的研制奠定了基础。

驴源马腺疫链球菌的分离与鉴定

目前,关于马腺疫链球菌感染驴的报道较少。本研究从山东省某驴场的2只病驴颌下淋巴结肿胀化脓液中分离出2株病原菌,经染色镜检、生化试验和16S rDNA的PCR测序鉴定,确定该病原菌为马链球菌马亚种。采用纸片扩散K-B法,对分离菌进行药敏试验,发现其对恩诺沙星、氯霉素、环丙沙星、头孢噻肟和美罗培南高度敏感。本研究为驴感染马链球菌马亚种的诊断与防治提供了参考。

马腺疫

马腺疫（俗称槽结）是马链球菌马亚种引起的散发性或地方流行性的马属动物急性接触性传染病。各种年龄马都可发病，以1岁左右的幼驹最易感染。该病最早由Jordanus Ruffus在1251年的兽医科学杂志上报道，以发热、上呼吸道粘膜卡他性化脓性炎症、颌下淋巴结急性化脓性炎症为典型症状。该病呈世界性分布并造成了很大的经济损失。

青海毛驴马腺疫病原菌的分离鉴定

从发生腺疫的青海毛驴中采集样品进行染色镜检、分离纯化、PCR鉴定,并对纯化后的菌株进行药敏试验。研究结果表明:美兰染色结果观察到长链状球菌;5%绵羊血平板培养出现透明的露珠样小菌落,且呈现β型溶血;PCR鉴定为马链球菌马亚种;药敏试验表明马链球菌马亚种对β内酰胺类抗生素敏感。

马腺疫链球菌的特性鉴定

马腺疫链球菌(Strepococcus equi) 是马驹腺疫的病原体,从病马的下颌淋巴结化脓灶及上呼吸道分泌物中分离得到。本鉴定所收集的21个马腺疫链球菌菌株,来源于我国北方牧区马场的病马。

一例马腺疫病的防治体会

2013年12月10日,黑龙江某地一小型马场,有4匹幼驹同时出现体温升高,达39℃～40℃,呼吸喘粗,50～80次/min,心跳加快,80～110次/min,结膜潮红,鼻粘膜红肿,呈现卡他性炎症,流浆液性鼻液,颌下淋巴结肿胀化脓.根据上述症状及实验室检验,确诊为马腺疫.

中西结合治疗马腺疫

马腺疫中兽医称之为槽结，是马类家畜的一种急性传染病。其主要特征为鼻、咽、喉粘膜发生卡他性炎症，颌下淋巴结急性肿胀、化脓。近年来，笔者以中西结合法治疗１０８例，治愈１０５例，治愈率９７．３％。１流行特点本病是由马腺疫链球菌随病马或带菌马的鼻液和排出的脓...

中西医结合治疗马腺疫

中西医结合治疗马腺疫陈旭东（甘肃省武山县农牧局７４１３００）马腺疫中兽医称槽结，是马、骡、驴的一种急性传染病。主要特征为鼻、咽粘膜发生卡他性炎症，颌下淋巴结急性肿胀化脓。半岁至两岁的幼驹多发，影响生长发育，应引起高度重视。笔者２８年来采用中西医结合法...

马腺疫链球菌fneB基因LAMP检测方法的建立及应用

为了建立快速简便的fneB-LAMP检测法用于马腺疫病原马链球菌马亚种(S.equi)的检测,本试验采用恒温水浴进行LAMP扩增,建立可视化fneB-LAMP检测方法。结果显示:对大肠埃希菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球、蜡状芽孢杆菌和克雷伯杆菌5种菌与标准S.equi菌株检测,只能够检测出标准阳性菌株;对新疆昭苏县3个马场临床检查疑似马腺疫的鼻拭子和脓汁共40份样品进行fneB-LAMP检测,其中有7株分离菌呈阳性;与普通PCR检测方法相比,LAMP检测方法灵敏度为8×10^(-6)μg/μL,较普通PCR方法高;该方法在粗提模板的情况下只需简单的恒温仪器反应1 h可得到可视化的检测结果。本试验成功建立了马腺疫病原靶向fneB基因LAMP检测的方法,能够快速准确的检测出S.equi,为今后快速诊断马腺疫疾病提供参考。

中西医结合治疗马腺疫

马腺疫俗称喷喉,中兽医称槽结或喉骨肿,是马、骡、驴一种急性传染病。病原体是马腺疫链球菌,病原体通常随着病马或带菌马的鼻液及破溃的脓汁排出,污染周围的环境,经污染的饲料、饮水、饲养管理用具等而由消化道传染。马腺疫病马在咳嗽、喷嚏时,也可通过飞沫经呼吸道感染。本病一旦流行,多数幼驹相继发病,不仅损耗人力和物力,而且影响幼畜的生长发育,必须引起养畜户和畜牧兽医工作者的高度重视。

中西药结合治疗马腺疫临床案例分析

本文对新疆伊犁昭苏县某马场的2例马腺疫进行病案分析,采用临床检查和实验室诊断技术对其进行确诊,应用中药透脓散和西药抗生素相结合方式治疗患马,治疗效果显著。本研究结果为今后马腺疫临床诊断和防治提供依据。

新疆4县马腺疫链球菌血清抗体检测与分析

为了解新疆养马集中县域马腺疫链球菌的感染情况及流行特点,在新疆特克斯县、昭苏县、富蕴县和吉木乃县采集2 549份马血清样品,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测马血清中的马腺疫链球菌抗体。结果表明,被检样品的马腺疫链球菌抗体平均阳性率为23.93%,昭苏县及特克斯县的血样中马腺疫链球菌抗体阳性率较高,分别为30.30%和26.64%,吉木乃县抗体阳性率为4.34%。结果表明,新疆不同地区马腺疫链球菌血清抗体阳性率差异显著（P〈0.05）,抗体阳性率随马匹年龄的增长不断提高,0~1岁马抗体阳性率最低（P〈0.01）,马腺疫链球菌抗体阳性率性别差异不显著（P〉0.05）。

马腺疫链球菌GAPDH重组蛋白的表达及其免疫保护效果的研究

为制备马腺疫链球菌(Streptococcus equi subspecies equi)GAPDH蛋白的多克隆抗体,研究其免疫保护作用。以S.equi分离株为研究对象,利用PCR技术扩增其GAPDH基因并构建原核表达质粒,转化至大肠杆菌。诱导表达重组蛋白,对纯化后的蛋白进行SDS-PAGE及Western blotting分析。以纯化后的GAPDH重组蛋白免疫小鼠,用酶联免疫吸附法、攻击保护试验检测其免疫效果。结果显示,成功构建了pET-28a-GAPDH原核表达载体,纯化获得30 kDa重组蛋白。该蛋白质能特异性识别该菌抗血清,诱导小鼠产生较高水平的特异性抗体IgG,在初次免疫后第45天,抗体水平效价可达1∶24 300,攻击保护率可达87.5%。该GAPDH重组蛋白具有良好的免疫原性和免疫保护效果。

马腺疫链球菌SrtA的表达及其免疫原性评价

旨在表达马腺疫链球菌(Streptococcus equi subsp.equi)的SrtA蛋白并分析其免疫效果。以该菌基因组为模板,用PCR方法扩增SrtA基因,构建重组质粒pET-28a-SrtA,诱导表达SrtA,并以纯化蛋白免疫小鼠,间接ELISA检测小鼠血清中抗体水平效价及抗体亚型。首次免疫后第45天,对免疫小鼠用S.equi攻毒,测定免疫保护力、菌体载量和脾细胞表面CD4^+T和CD8^+T分子的表达,并对脏器进行病理组织学观察。结果表明,成功表达了SrtA蛋白,SDS-PAGE显示该蛋白分子量为27 kDa。初次免疫45 d后,小鼠血清抗体效价达1∶218 700,抗体亚型以IgG1和IgG2b为主;脾淋巴细胞中CD4^+T和CD8^+T细胞表达量升高;攻毒保护率可达75%;SrtA免疫可降低攻毒小鼠肺、脾、肝、肾组织的荷菌量。SrtA免疫可诱导小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答。