马钱子苷通过肠道菌群和神经肽抑制OVX小鼠骨量丢失的机制探讨

目的观察马钱子苷(Loganin)干预去卵巢(OVX)小鼠骨量、肠道菌群及神经肽的变化。方法28只雌性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组(SHAM)、OVX组、Loganin低剂量组(Loganin-L)和Loganin高剂量组(Loganin-H),每组7只。Loganin-L组和Loganin-H组在OVX基础上分别予Loganin 5 mg/(kg·d)和20 mg/(kg·d)灌胃,SHAM组和OVX组灌胃等量蒸馏水,每日1次,持续12周。实验结束后处死取材,Micro-CT检测左侧股骨BMD、BV/TV、Tb.N及Tb.Sp;ELISA法检测血清中CTX、TRAP、P1NP、TNF-α、IL-6、IL-10、LPS、CGRP、SP、VIP、NPY水平;16 S rRNA高通量测序技术检测粪便中肠道菌群多样性与差异性。结果OVX组BMD、BV/TV、Tb.N、P1NP、IL-10、CGRP、SP、VIP、NPY较SHAM组显著降低(P<0.05,P<0.01),Tb.Sp、CTX、TRAP、TNF-α、IL-6、LPS显著增高(P<0.05,P<0.01)。Loganin-L组BMD、BV/TV、Tb.N、P1NP、IL-10、CGRP、SP、VIP、NPY较OVX组有升高趋势(P>0.05),Tb.Sp、CTX、TRAP、TNF-α、IL-6、LPS有降低趋势(P>0.05)。Loganin-H组BMD、BV/TV、Tb.N、P1NP、IL-10、CGRP、SP、VIP、NPY较OVX组显著增高(P<0.05),Tb.Sp、CTX、TRAP、TNF-α、IL-6、LPS显著降低(P<0.05)。在门水平,与SHAM组相比,OVX组Firmicutes/Bacteroidota(F/B)率显著降低(P<0.05),Loganin-L组F/B率较OVX组有升高趋势(P>0.05),Loganin-H组F/B率显著升高(P<0.05);在属水平,OVX组norank-f_Muribaculaceae丰度较SHAM组显著增加(P<0.05),Lactobacillus丰度显著减少(P<0.05);较OVX组,Loganin-L组norank-f_Muribaculaceae丰度有降低趋势(P>0.05),Lactobacillus丰度有升高趋势(P>0.05),Loganin-H组norank-f_Muribaculaceae丰度显著减少(P<0.05),Lactobacillus丰度显著增加(P<0.01)。结论Loganin呈剂量依赖性抑制OVX小鼠骨量丢失,其机制可能是通过调节肠道菌群中norank-f_Muribaculaceae和Lactobacillus丰度、增加神经肽含量及降低炎症反应实现的。

马钱子苷抑制CXCL12/CXCR4信号通路对腰椎间盘突出症大鼠疼痛反应的影响

目的探讨马钱子苷(loganin)调控CXC趋化因子配体(CXCL12)/CXC趋化因子受体4(CXCR4)信号通路对腰椎间盘突出症(LDH)模型大鼠疼痛反应的影响。方法将50只大鼠按随机数字表法抽取10只为假手术组(Sham组),其余大鼠建立LDH大鼠模型,将模型大鼠随机分为Model组、CXCR4拮抗剂组(AMD3100组,鞘内注射20μg)、马钱子苷组(5 mg/kg,腹腔注射)、马钱子苷(5 mg/kg,腹腔注射)+CXCL12组(鞘内注射250 ng),每组10只。按照药物分组干预后,分别检测大鼠热撤足反应潜伏期与机械性撤足阈值,HE染色观察脊髓背角组织形态学变化,采用酶联免疫吸附试验检测脊髓背角组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平,免疫荧光染色检测小胶质细胞激活情况,Western blot检测CXCL12/CXCR4通路相关蛋白表达。结果与Sham组比较,Model组脊髓背角组织损伤严重,大鼠热撤足反应潜伏期、机械性撤足阈值降低,脊髓背角组织小胶质细胞及TNF-α、IL-1β、IL-6、CXCL12、CXCR4、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(caspase-1)蛋白表达水平升高(P<0.05);与Model组比较,AMD3100组与马钱子苷组脊髓背角组织病理损伤减轻,大鼠热撤足反应潜伏期、机械性撤足阈值升高,脊髓背角组织小胶质细胞及TNF-α、IL-1β、IL-6、CXCL12、CXCR4、NLRP3、caspase-1蛋白表达水平降低(P<0.05);CXCL12可削弱马钱子苷对LDH大鼠疼痛反应的改善作用(P<0.05)。结论马钱子苷可改善LDH大鼠疼痛反应,可能与其抑制CXCL12/CXCR4信号通路活性有关。

双波长高效液相法同时测定双香排石颗粒中的马钱子苷、当药苷、断氧化马钱子苷、迷迭香酸和木通苯乙醇苷B

目的建立高效液相双波长切换法同时测定双香排石颗粒中马钱子苷、当药苷、断氧化马钱子苷、迷迭香酸和木通苯乙醇苷B的含量。方法采用Alltima C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;以乙腈-甲醇（1∶3）（A）-0.1%磷酸溶液（B）为流动相进行梯度洗脱;柱温为35℃;流速为1.0 ml/min;进样量为20μl;马钱子苷、断氧化马钱子苷和当药苷检测波长为240 nm,迷迭香酸和木通苯乙醇苷B检测波长为330 nm。结果马钱子苷、当药苷、断氧化马钱子苷、迷迭香酸和木通苯乙醇苷B在给定浓度范围内线性范围分别为5.91~118.20μg/ml（r=0.9995）、4.10~82.00μg/ml（r=0.9991）、8.13~162.60μg/ml（r=0.9993）、12.57~251.40μg/ml（r=0.9998）和4.95~99.00μg/ml（r=0.9997）,线性关系良好;平均加样回收率（n=6）和RSD值分别为96.88%（1.31%）、99.09%（1.47%）、98.29%（1.59%）、98.82%（1.42%）和97.51%（0.86%）。结论本文建立的双波长HPLC方法同时测定双香排石颗粒中马钱子苷、当药苷、断氧化马钱子苷、迷迭香酸和木通苯乙醇苷B含量。方法灵敏度高、简便、准确、重现性好,为评价双香排石颗粒质量控制提供可靠方法。

龙胆药材中龙胆苦苷和马钱子苷酸含量的测定及其指纹图谱研究

To develop a HPLC-DAD-ESI-TOF/MS analysis method for the determination of gentiopicroside and loganic acid in Radix gentianae samples and for the research of their fingerprints.The samples were extracted using ASE for 10 min under 100 ℃ and 9.65 MPa,and divided into water phase and chloroform phase and analyzed them with HPLC-DAD-ESI-TOF/MS method respectively.Based on this method,the HPLC fingerprints of Radix gentianae were established.Comparing the spectrogram and mass spectrum of the chromatogram peak with the reference value,three compounds in water phase were identified as gentiopicroside,asafetida acid and loganic acid.There is no report of the compounds in chloroform phase.The content of gentiopicroside and loganic acid in samples of different groups were determined,separately.The fingerprints were compared by the software of the similarity evaluation system for chromatographic fingerprint.The water phase fingerprint congruence coefficients of samples from six different areas were above 0.90,however,the chloroform phase fingerprint congruence coefficients were within 0.62-0.99.This method can be used for determination of potent component in Radix gentianae and its quality control.Radix gentianae from different producing areas have the largest diversities,and the diversities embodied in the content of chloroform phase compounds.

MEKC和MEEKC两种模式测定龙胆中龙胆苦苷和马钱子苷酸的含量

目的建立胶束电动毛细管色谱(MEKC)和微乳液毛细管电动色谱(MEEKC)分析龙胆药材中龙胆苦苷和马钱子苷酸含量的方法。方法采用加速溶剂萃取法(ASE)对龙胆药材进行提取,萃取温度:100℃,压力:9.65MPa,萃取时间:10min。采用未涂层熔融石英毛细管(内径75μm,有效长度50cm)。分别考察了两种分离模式下电泳介质的构成和电泳过程中的各操作参数对样品分离过程的影响,优化了MEKC和MEEKC的分析条件,在各自对应的缓冲液体系下,MEKC和MEEKC分离电压分别为30和22kV,柱温均为25℃,检测波长均为238nm。结果在选定的工作条件下,龙胆苦苷和马钱子苷酸与其他组分达到了基线分离,两种成分的浓度与其响应信号值之间具有较好的线性相关性,加标回收率在96.3%～105.1%之间,检测限均低于10mg·L-1,对6处不同产地的龙胆药材进行了分析,并对测定结果进行了t检验,结果表明,两种模式下,测定结果之间不存在显著性差异,而不同产地的龙胆药材的龙胆苦苷和马钱子苷酸含量之间存在较大差异。结论本方法简便,准确,快速,重现性较好,可用于龙胆药材有效成分的含量测定和质量控制。

大孔吸附树脂分离纯化龙胆药材中龙胆苦苷和马钱子苷酸的研究

目的:建立利用大孔吸附树脂对龙胆药材中龙胆苦苷和马钱子苷酸进行富集和分离纯化的方法。方法:采用加速溶剂萃取法对龙胆药材中两种有效成分进行高效提取,比较了D301,AB-8,D101,XDA-1四种大孔树脂对龙胆苦苷和马钱子苷酸的吸附性能,最终确定采用D301型大孔对脂对二者进行富集吸附,对其工艺参数进行优化,全程采用高效液相色谱进行目标化合物浓度检测。结果:化优后的工艺参数为:上样浓度:0.2 g/mL,最大上样量:0.25 g龙胆药材/g树脂,最佳静态吸附时间:8 h,采用8%和55%的乙醇溶液对龙胆苦苷和马钱子苷酸分别进行洗脱;龙胆苦苷和马钱子苷酸分别富集在8%和55%的乙醇洗脱液中,洗脱液浓缩后冷冻干燥,可得到纯度分别为74.3%和80.9%的粗产物,龙胆苦苷和马钱子苷酸的回收率分别为70.11%和67.82%。结论:此法效率较高,操作简便,即可用于实验室制备少量的难以购置的标准品,也可进行放大研究,用于工业生产。

动态轴向压缩色谱制备高纯度断氧化马钱子苷的研究

目的:本研究旨在建立动态轴向压缩色谱法分离制备高纯度断氧化马钱子苷的方法。方法:金银花70%乙醇提取液先经大孔吸附树脂除杂富集后,采用动态轴向压缩色谱柱分离,以正相硅胶为填料,二氯甲烷-甲醇系统为洗脱剂,对断氧化马钱子苷进行精制纯化,分别运用HPLC、1H-NMR、13C-NMR和HR-ESI-MS对断氧化马钱子苷进行含量测定和结构表征。结果:产品经分析确定为断氧化马钱子苷,质量分数达98.76%。结论:采用动态轴向压缩工业色谱法制备断氧化马钱子苷的方法操作简便、快速、高效,为制备高纯度的断氧化马钱子苷提供了一条新途径。

药用植物盆架树中的马钱子苷及其衍生物(英文)

从药用植物盆架树 (WinchiacalophyllaA .DC .)的茎皮中分离得到 4个环烯醚萜苷类化合物 ,其结构经现代波谱技术鉴定为马钱子苷、 7 O 甲酰基马钱子苷、 6′ O 甲酰基马钱子苷和 6′ ,7 O 二甲酰基马钱子苷 ,其中后 3个化合物为新化合物。

UPLC法测定山茱萸中的莫诺苷和马钱子苷

目的建立一种同时测定山茱萸中莫诺苷和马钱子苷的UPLC法。方法采用超高效液相色谱仪。色谱柱为Waters Acquity UPLC BEH C18(50mm×2.5mm,1.7μm);检测波长:240nm;流动相:乙腈(A)-1mL·L-1甲酸水溶液(B);采用梯度洗脱;流速:0.3mL·min-1;柱温:30℃。结果该色谱条件下,山茱萸中各组分的分离满足分析要求,莫诺苷和马钱子苷的线性回归方程分别为y=241.65x+27.59,r=0.999 66和y=192.39x-31.96,r=0.999 89;莫诺苷和马钱子苷在0.112 5~1.80和0.087 5~1.40μg范围内峰面积与进样量线性关系良好;测得陕西佛坪山茱萸中莫诺苷和马钱子苷的含量分别为16.53±0.89和6.81±0.32mg·g-1。结论该方法高效、快速,适合山茱萸中莫诺苷和马钱子苷的含量分析;陕西山茱萸中有效成分的含量远高于《中国药典》规定,品质优异。

马钱子苷对神经干细胞的增殖、存活和分化的调节作用

为探讨不同浓度的马钱子苷对神经干细胞的增殖、存活和分化的调节作用及其相关分子机制,本实验从成年小鼠大脑中分离培养了神经干细胞,用不同浓度的马钱子苷进行干预,观察马钱子苷对神经干细胞增殖、存活和分化的影响。结果显示:成年小鼠神经干细胞在含有中、高浓度马钱子苷的增殖培养基中培养5 d和7 d后,神经球数量和直径与对照相比显著增加(P<0.05);中、高剂量的马钱子苷能够促进神经干细胞的有丝分裂,低剂量马钱子苷处理显著促进神经干细胞发生分化(P<0.01),并增加神经元和星形胶质细胞的数量及比例(P<0.01);中、高剂量马钱子苷抑制神经干细胞分化(P<0.05),高剂量的马钱子苷使得神经元的数量减少(P<0.05)。研究结果表明,高浓度的马钱子苷能够促进神经干细胞存活,并通过促进神经干细胞有丝分裂来提高其增殖能力;低浓度的马钱子苷促进神经干细胞分化,有利于神经再生和少突胶质细胞再生。研究结果为神经干细胞治疗中枢神经系统疾病的研究奠定了理论和实验基础。

马钱子苷对小胶质细胞活化的抑制作用

为探讨不同浓度的马钱子苷对小胶质细胞活化的抑制作用及其相关分子机制,分离培养了小鼠原代小胶质细胞,用不同浓度的马钱子苷(50、100、200μmol/L)预处理后,利用脂多糖(lipopolysacharide,LPS)诱导其活化。观察马钱子苷对LPS诱导的小胶质细胞活化、炎症因子释放以及NF-κB信号通路的影响。结果显示:与对照组相比,LPS组小胶质细胞胞体膨大,分泌大量炎症细胞因子,且NF-κB核转移程度增加(P<0.05),小胶质细胞呈明显的M1型活化状态;低、中、高浓度的马钱子苷干预后,小胶质细胞的细胞总面积和细胞核面积显著减少(P<0.05);中、高浓度的马钱子苷能使TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达水平降低(P<0.05);中浓度的马钱子苷下调TNF-α和IL-1β的蛋白质水平(P<0.05);此外低、中、高浓度的马钱子苷可以抑制小胶质细胞内iNOS表达和NF-κB信号通路激活。上述结果表明,马钱子苷可明显抑制小胶质细胞活化,减少炎症因子释放,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。这为马钱子苷应用于神经炎症的预防和治疗奠定了理论基础。

山茱萸活性成分马钱子苷对超负荷运动大鼠心肌细胞焦亡的保护作用

本研究旨在探讨山茱萸中的活性成分马钱子苷是否对超负荷运动引起的心肌细胞焦亡具有保护作用。本研究采用递增负荷游泳法建立了超负荷运动诱导的心肌损伤大鼠模型,并将大鼠分为多个实验组,分别灌胃不同剂量的马钱子苷。通过心功能参数的检测、血清心肌损伤指标的测定和心肌组织氧化应激指标的测量,研究发现马钱子苷能够显著改善超负荷运动诱导的心肌损伤大鼠的心功能,减轻心肌损伤,并抑制心肌组织的氧化应激反应。进一步的组织学染色和RT-qPCR分析结果显示,马钱子苷可以剂量依赖性地抑制超负荷运动诱导的心肌细胞焦亡,降低TUNEL阳性率和Bax转录水平,并升高Bcl-2转录水平。通过Western blot实验,本研究证实马钱子苷可抑制超负荷运动诱导的心肌损伤大鼠心肌组织中NLRP3炎症体相关蛋白(NLRP3,cleaved caspase-1,ASC,IL-1β和IL-18)的表达水平。本研究结果初步表明,山茱萸中的活性成分马钱子苷对超负荷运动引起的心肌细胞焦亡具有显著的保护作用,可能通过抑制细胞焦亡和减轻氧化应激反应来改善超负荷运动诱导的心肌损伤。

山茱萸中马钱子苷的研究进展

山茱萸为常用中药,具有补益肝肾、涩精固脱等功效。马钱子苷作为山茱萸中环烯醚萜类的主要成分,具有免疫调节、抗休克等作用。综述了山茱萸中马钱子苷的提取、分离、鉴别、测定方法及其药理作用、药代动力学等方面的研究进展。

马钱子果化学成分研究

自中药马钱子果实中分得6个化合物，经IR、NMR、EIMS及UV等光谱分别鉴定为：士的宁（Ⅰ）、番木鳖次碱（Ⅱ）、马钱子苷（Ⅲ）、熊果酸（Ⅳ）、豆甾醇糖苷（Ⅴ）和羊齿烯酸（Ⅵ）。其中Ⅴ、Ⅳ和Ⅵ为首次从马钱子中得到。

油橄榄果提取物体外降脂活性成分筛选及作用机制探究

目的 探究油橄榄果提取物体外降脂活性物质基础,并初步探讨活性成分在体内的降脂作用机制。方法 建立17个油橄榄果提取物样品高效液相色谱(high performance liquid chromatography, HPLC)叠加图谱,以牛磺胆酸钠结合能力评价各样品的降脂活性,通过建立样品共有峰与降脂活性的谱效关系,筛选潜在的降脂活性成分;并应用计算机虚拟筛选技术预测靶蛋白,结合分子对接预测其作用靶点,初步研究其降脂机制。结果 17个油橄榄果提取物样品均具有不同程度降脂能力,峰P6、P10、P13、P14、P15、P17、P19和P20为潜在的降脂活性成分,其中P6和P13鉴定为羟基酪醇和断氧化马钱子苷,二者分别与多不饱和脂肪酸脂氧合酶ALOX15和钠/葡萄糖共转运蛋白1的残基存在氢键、疏水相互作用及静电相互作用,进而发挥结合抑制作用。结论 油橄榄果提取物中活性成分不仅能通过与牛磺胆酸钠结合,而且还能与靶蛋白结合发挥降脂作用,具有多成分、多靶点、多途径的特点,本研究结果可为后续研究提供理论依据。

喜树CaSLS基因的克隆、表达分析和功能鉴定

对喜树碱合成途径中的关键酶——裂环马钱子苷合酶(CaSLS)的编码基因序列进行扩增,通过基因表达量分析和酵母异源表达进行功能鉴定。该基因大小为1575 bp,共编码524个氨基酸,编码蛋白理论分子质量为59.88 ku。构建表达质粒pESC-Leu2d-CaCPR1-CaSLS转入酵母菌株,通过HPLC-MS检测酵母提取物发现,CaSLS成功将底物马钱子苷和马钱子酸催化形成裂环马钱子苷和裂环马钱子酸,说明CaSLS基因表达的酶蛋白具有生物活性和催化功能。q-RT-PCR结果表明,CaSLS基因在植物体内的表达量呈明显的组织特异性和时空特异性,在嫩叶中表达量最高,在老茎中表达量最低,推测其主要在嫩叶中发挥作用。

六味地黄丸主要血中移行成分对培养大鼠成骨细胞促增殖作用的研究

目的:阐明六味地黄丸主要血中移行成分对培养大鼠成骨细胞促增殖作用。方法:将六味地黄丸主要血中移行成分以适当浓度添加到大鼠成骨细胞培养液中,用MTT法测定细胞的增殖速度。结果:六味地黄丸主要血中移行成分莫诺苷、獐牙菜苷、马钱子苷的混合物各剂量组均明显表现出对大鼠成骨细胞的促增殖作用。结论:初步确定六味地黄丸主要血中移行成分莫诺苷、獐牙菜苷、马钱子苷是其治疗骨质疏松的药效物质基础。

正交法优选山茱萸抗衰老有效部位的提取工艺

目的以马钱子苷和莫诺苷为指标,优化山茱萸抗衰老有效部位的提取工艺。方法采用L9(34)正交法设计实验,考察乙醇浓度、乙醇用量、回流次数、回流时间等4个因素对指标值的影响。结果最佳提取工艺为:用80%乙醇,12倍量,回流提取2次,每次60 min。结论正交实验法用于优选山茱萸抗衰老有效部位提取工艺简便易行。

寿胎丸提取液透过妊娠大鼠胎盘屏障的药物成分研究

目的:对不同孕期妊娠大鼠给予寿胎丸提取液(STW),采用HPLC研究STW透过胎盘屏障的药物成分。方法:早、中、晚孕期Wistar大鼠灌胃STW,连续给药5天后,取母体血浆(母血)、脐静脉血及胚胎组织,用HPLC法检测其中所含药物成分。结果:在实验剂量下,各孕期1h母血中均检测到马钱子苷和槲皮苷,12h母血、脐静脉血及胚胎组织中均未检测到待测成分。结论:实验剂量下,STW的药物成分未透过胎盘屏障,提示妊娠期应用寿胎丸不会造成胎儿的宫内暴露。

热毒宁注射液与两种常用溶媒配伍后9种成分稳定性研究

目的考察热毒宁注射液与两种常用溶媒配伍后制剂中绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、断氧化马钱子苷、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C等9种成分的稳定性,为临床用药提供实验依据.方法：将热毒宁注射液分别与5%葡萄糖注射液和0.9%氯化钠注射液按50∶250的比例配伍,考察0～6 h内配伍药液中9种成分含量变化情况.结果与结论：热毒宁注射液与5%葡萄糖注射液和0.9%氯化钠注射液配伍6 h内,其中9种成分均稳定.