基于RNA杂交的马铃薯纺锤块茎类病毒检测芯片

报道了一种检测植物类病毒RNA的新方法———RNA杂交芯片技术,即将cDNA芯片技术与RNA斑点杂交技术相结合,将马铃薯样品的总RNA直接固定在玻片上,用荧光标记制备检测马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)的特异探针,探针与芯片杂交后分析杂交信号以确定相应的样品有无PSTVd侵染.参照膜杂交的方法,确定了RNA芯片的制备条件,并用以检测了马铃薯样品的PSTVd侵染情况,检测结果与RT-PCR结果相符,阳性产物经克隆测序证实为PSTVd.

马铃薯纺锤块茎类病毒RT-PCR检测及全序列分析

根据马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)基因序列设计合成引物,以感病组织和健康组织总RNA为模板,经RT PCR法扩增出全长的cDNA片段,结果从感病组织中扩增出与预期的360bp大小的目标片段,而健康组织无此扩增产物;将其克隆到质粒pGEM T载体上,进行全序列分析。结果表明,与国内外的报道相比较,核苷酸同源率高达98%以上。PCR产物克隆作为RT PCR反应的阳性对照,解决了毒源保存和传播的问题,为进一步进行抗PSTVd基因工程研究打下了良好基础。

马铃薯纺锤块茎类病毒检测技术比较与选择

马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)是威胁我国马铃薯生产的重要病害之一,目前有多种技术可应用于PSTVd的检测,如生物学方法、电子显微镜技术、往返聚丙烯酰胺凝胶电泳(R-PAGE)、核酸斑点杂交(NASH)、RT-PCR和FQ RT-PCR。这些方法各有利弊,互相补充,构成了PSTVd的检测技术体系。日常工作中,应根据自身条件及目的等科学地选择适宜的检测技术,确保脱毒种薯/种苗的质量。

往复双向电泳法(R-PAGE)检测马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)核酸制备的改进

双向往返电泳(R-PAGE)法是检测马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)的有效手段,本试验通过对该方法中马铃薯纺锤块茎类病毒核酸提取步骤的改进,提高了核酸纯度,使检测结果更为准确、清晰,且灵敏度高。

马铃薯纺锤块茎类病毒对马铃薯育种工作的影响

简要介绍了马铃薯纺锤块茎类病毒（Potato spindle tuber viroid,PSTVd）的危害和发生情况,重点阐述了PSTVd对马铃薯育种工作的影响,并针对该问题进行了分析,最后提出了一些建议,如做好隔离防护,彻底进行PSTVd检验,对环境及器具进行消毒处理以及实生种子经贮藏3~5年后再播种。

用聚合酶链式反应(PCR)检测马铃薯纺锤块茎类病毒

用DNA合成仪合成两个马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid, PSTVd)特异性引物,从感病的马铃薯块茎组织的核酸抽提液中,用反转录酶合成PSTVd eDNA,然后用PCR法进行扩增,扩增产物用电泳检测,建立了用PCR法检测PSTVd的新方法。结果表明,该方法特异性强,灵敏度可达0.15pg,比现有其它检测方法高,而且样品用量少。

以马铃薯ND2mRNA为内对照双重RT-PCR法检测马铃薯纺锤块茎类病毒

根据马铃薯纺锤块茎类病毒（PSTVd）基因序列设计特异引物，采用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术进行PSTVd检测研究,为避免由于提取的RNA降解或者RT-PCR反应质量不高所造成的假阴性问题，在检测过程中引入马铃薯线粒体NADH脱氢酶ND2亚基基因mRNA为内对照。

马铃薯纺锤块茎类病毒RT-qPCR检测技术体系的建立

马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTVd)是马铃薯生产中的一种重要病害,目前主要通过使用脱毒种薯及隔离措施来防控,探索高效、灵敏、特异性强的检测技术对于防治该病害具有重要意义。设计了3组引物,1条探针,从3组引物中筛选出最优组合,并以他们为引物,以PSTV 251T为探针,利用5′FAM、3′TAMRA标记,建立了PSTVd的RT-qPCR检测技术体系。利用该检测体系成功地检测了22份马铃薯样本。与灵敏度相对较高的RT-PCR技术相比,该检测技术体系的检测灵敏度又提升了100~1000倍。

类病毒在花卉类种子组织内分布的检测

花卉研究所松下阳介研究员以番茄花芽形成组织中两种类病毒的分布差异为主题,报告了其研究结果。1类病毒是病原由马铃薯纺锤块茎类病毒（PSTVd）侵染马铃薯种子内部的胚珠等生殖器官可推测,PSTVd病毒不仅污染番茄种子的表面,甚至还可侵入到种子内部组织。有关PSTVd导致园艺花卉种子病害已有报道,期待本文对花卉种子类病毒的侵染分布研究及其检测技术的开发有所帮助。