马链球菌马亚种8组分融合蛋白的表达及小鼠免疫效果的评价

马腺疫是由马链球菌马亚种(S.equi)引起的急性接触性马属动物传染病,严重影响幼驹的生长发育。我国尚无预防该病的有效疫苗,也缺乏S.equi动物感染和免疫保护模型。为在原核系统中表达马链球菌马亚种(S.equi)的多组分融合蛋白,并评价其对小鼠的免疫保护效果,本研究以S.equi HLJ2018株DNA为模板,分别经PCR扩增其cne、eag、SclC、SclI、SclF、eq5、eq8和ideE基因,并分别克隆至pGEX-6p-1载体中,构建表达这8个蛋白的重组质粒并分别经PCR和测序鉴定。通过在各基因之间引入蛋白接头Gly-Gly-Gly编码基因序列并利用同源重组技术依次串联该8个基因,得到融合基因se8,利用其构建重组质粒pET-28a-SE8(His标签)及pGEX-6p-1-SE8(GST标签),均经PCR和测序鉴定后,将这两个表达SE8及分别表达该8个蛋白的重组质粒分别转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后采用亲和柱层析法纯化,采用SDS-PAGE检测各蛋白的表达及纯化效果;采用western blot检测各蛋白的反应原性。SDS-PAGE结果显示,获得分子量约181 ku的His标签融合8组分重组蛋白SE8(His-SE8)、204 ku的GST标签融合8组分重组蛋白SE8(GST-SE8)及8个单组分重组蛋白,且上述蛋白均以可溶性形式表达;Western blot结果显示,8个单组分重组蛋白均能够与自然感染S.equi的马阳性血清反应,His-SE8能够与自然感染S.equi的马阳性血清反应,GST-SE8能够与感染S.equi小鼠的阳性血清反应。上述结果表明,8个单组分重组蛋白及SE8均获得了表达,且纯化效果和反应原性均较好。以纯化的His-SE8(100μg)添加明矾佐剂后免疫小鼠,利用间接ELISA(iELISA)分别检测免疫后小鼠血清中9种重组蛋白的特异性抗体及His-SE8特异性抗体亚型水平;免疫后28 d,以10倍最小完全致死剂量(MLD)的S.equi攻击小鼠后评价His-SE8的免疫保护效果,连续14 d每天监测小鼠临床症状、体质量变化和存活率。iELISA结果显示,His-SE8免疫组小鼠可产生该9种蛋白的特异性抗体,其中EQ5、EQ8和CNE的抗体水平较高,SclF、SclI和IdeE的抗体水平较低,SclC、EAG和His-SE8的抗体水平居中,且His-SE8特异性IgG1水平极显著高于IgG2a和IgG2b水平(P<0.0001);免疫保护实验结果显示,攻菌后3 d免疫组小鼠临床症状缓解,其体质量在攻菌后4 d~8 d恢复正常,存活率达100%;对照组小鼠体质量持续下降,且攻菌后7 d内全部死亡。上述结果表明,His-SE8具有较强的免疫调节和免疫原性,能够诱导小鼠产生高水平的体液免疫应答,具有良好的免疫保护效果。本研究为马腺疫亚单位疫苗的研究提供了参考依据。

马链球菌马亚种FNEB蛋白的截短表达及其免疫保护性研究

为研究马链球菌马亚种FNEB蛋白的免疫保护性,本研究采用PCR方法从马链球菌马亚种新疆分离株中扩增FNEB基因部分片段,克隆于原核表达载体p ET-30a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,以IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和western blot分析显示,重组蛋白大小约60 ku,具有良好的抗原性。将纯化的重组蛋白免疫小鼠后,以马链球菌马亚种新疆分离株进行攻毒,结果显示该重组蛋白对免疫组小鼠具有保护力,保护率为65%。本研究克隆了马链球菌马亚种的FNEB截短基因并表达了相应重组蛋白,免疫小鼠后能够提供较好的保护,为重组FNEB蛋白亚单位疫苗的研制奠定基础。

马链球菌马亚种新疆株SeM基因的克隆及序列差异分析

为研究马链球菌马亚种新疆株SeM基因的分子特征,分析新疆地区马链球菌马亚种的分子流行特征以及为马腺疫的防治提供依据,对分离并鉴定的5株马链球菌马亚种提取基因组、扩增并克隆其SeM基因（GenBank登录号分别为：KJ486792、KJ486793、KJ486794、KJ486795、KJ486796）,采用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行疏水性、抗原性及三级结构分析,并与Genbank登录菌株的SeM基因序列进行系统进化分析和比较。克隆获得的SeM基因长度为1 530bp,包含1个1 527bp的完整开放阅读框,编码509个氨基酸;新疆分离株SeM基因与Genbank登录分离株SeM基因同源性为98.0%~99.4%。结果表明,新疆分离株KJ486793、KJ486796与美国分离株亲缘关系较近,属同一个进化分支,另外3株新疆分离株KJ486792、KJ486795、KJ486794构成一个独立分支。

马链球菌马亚种新疆分离株XZ1SeM蛋白表达和免疫原性分析

为研究马链球菌马亚种新疆分离株XZ1SeM重组蛋白的免疫生物学功能,评价其作为抗原开展研制马链球菌疫苗的价值。采用PCR方法从马链球菌马亚种扩增其SeM基因,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,诱导表达并用纯化的重组蛋白作免疫原免疫小鼠,分析比较重组蛋白免疫后小鼠抗体水平及对小鼠的免疫保护力。结果表明,纯化得到64ku的SeM重组蛋白,且该蛋白可与马链球菌马亚种阳性血清发生特异性反应。间接ELISA检测的抗体效价高达1∶128 000,具有良好的免疫原性,免疫小鼠攻毒结果显示重组蛋白免疫对小鼠有良好的保护效果。

马链球菌马亚种与马链球菌兽疫亚种联合免疫小鼠效果分析

为比较与评价马链球菌马亚种ZZM3-M株和马链球菌兽疫亚种ZZM2-S株联合免疫效果,本研究选取ZZM3-M株和ZZM2-S株分离菌株作为免疫原菌株,对两株菌灭活并免疫昆明白小鼠,通过对小鼠抗体效价、抗体分型检测、攻毒保护力、菌体载量及病理组织学观察实验评价联合免疫后的保护效果。结果显示,ZZM3-M+ZZM2-S联合免疫组及ZZM3-M、ZZM2-S单独免疫组均可诱导特异性抗体产生,且联合免疫组抗体效价可达1∶8100,联合免疫组对ZZM3-M和ZZM2-S的免疫保护率分别为90%和100%,优于这两种菌株单独免组,联合免疫诱导的抗体亚型以IgG1为主,菌体载量检测显示联合免疫组可有效减少脏器的损伤,病理组织学观察显示联合免疫可显著减轻改善这两种菌引起的病理损伤。

马链球菌马亚种3种抗原蛋白对小鼠免疫的免疫原性分析

旨在对比研究马链球菌马亚种(Streptococcus equi subsp.equi,S.equi)3种不同抗原蛋白——分选酶A(sortase A,SrtA)、M蛋白(SeM)及IgG结合蛋白(EAG)的免疫原性及免疫保护效果,本研究以表达并纯化的SrtA、SeM及EAG 3种蛋白单独及联合免疫小鼠,免疫后检测了血清抗体效价、抗体亚型、攻毒保护率,以real-time PCR定量检测免疫相关分子,并对攻毒后的肝、脾、肺、肾荷菌量进行检测和病理组织学观察。结果显示:联合免疫组诱导产生的抗体效价及IgG、IgG1和IgG2b的抗体水平均高于各种蛋白单独免疫组,SrtA诱导的IgG2a抗体水平高于SeM和EAG免疫组;攻毒保护力、荷菌量及病理组织学观察结果表明,联合免疫组优于SeM和EAG免疫组;免疫相关分子的荧光定量PCR检测结果显示,SrtA诱导的MHCⅠ、TCR、TLR 2、TLR 3及TLR4的转录水平显著高于SeM、EAG免疫组和对照组,3种抗原联合免疫可显著提高MHCⅠ分子及TLR 3分子的转录水平。综上表明,SrtA具有较强的免疫调节和诱导能力,3种蛋白联合免疫可诱导产生较高的免疫水平和良好的免疫保护效果。该结果为马腺疫亚单位疫苗的研究提供了理论参考和试验基础。

马链球菌马亚种新疆株ZX表面蛋白的提取及免疫原性分析

为研究马链球菌马亚种新疆分离株ZX表面蛋白的免疫原性,用化学法提取该菌的表面蛋白,用SDSPAGE检测提取的表面蛋白,并将提取的表面蛋白与该菌免疫实验兔后产生的抗体及康复马血清反应,利用Western-blotting和ELISA试验分析其免疫原性。结果表明,SDS-PAGE电泳可检测到分子量为45,34,33,30,27,20,16kDa 7条主蛋白带。提取的7条蛋白带多数可与全菌免疫兔的抗体及康复马体内的抗体发生特异性的结合。用提取蛋白和全菌包被ELISA对马血清的检测表明,二者的阳性吻合率在86.0%。表明提取的表面蛋白具有理想的免疫原性。

金银花、连翘及其药对对马链球菌马亚种耐药基因和毒力基因的影响

【目的】研究金银花、连翘及金银花-连翘药对(金银花-连翘1∶1)对北疆地区携带fneB毒力基因的马链球菌马亚种(Streptococcus equi subsp.equi,SEE)耐药基因和毒力基因的影响。【方法】首先对1 g/mL的金银花、连翘及金银花-连翘药对(金银花-连翘1∶1)水提物进行中药配比浓度梯度试验,然后与携带fneB毒力基因的L1菌株、lytA+fneB+ply毒力基因的D1菌株和qnrA+bla_(TEM)+fneB基因的Y1菌株3种SEE菌株共培养,检测中药对SEE菌株耐药基因bla_(TEM)、qnrA及毒力基因ply、fneB的影响;将192只SPF级昆明小鼠均分为16组:空白对照组(生理盐水)、金银花组、连翘组、金银花-连翘1∶1组、阴性对照组(Y1、L1和D1菌株组)及3种菌株分别与金银花、连翘和金银花-连翘1∶1共培养组,各组药物或菌液经腹腔注射0.5 mL进行小鼠体内抑菌试验,检测药物对小鼠的致病性和fneB毒力基因的影响。【结果】中药最适配比浓度为中药水提物∶THB培养基∶待测菌液(D_(600 nm)值均为0.6)为1000μL∶500μL∶20μL;与中药水提取物共培养的3株SEE菌株均未检出耐药基因和毒力基因,且菌株形态结构均未发生改变。小鼠致病性试验结果显示,阴性对照组的小鼠成活率分别为16.7%、8.3%和0;而L1+连翘、L1+金银花共培养组小鼠存活率分别为83.3%、75.0%,金银花-连翘1∶1药对与3株SEE菌株共培养组小鼠成活率分别为41.7%、16.7%、50.0%;小鼠病理解剖结果显示,除接种SEE菌株的小鼠肝脏肿大淤血、边缘钝圆外,其余各组肝脏均正常。小鼠体内fneB毒力基因检测结果显示,Y1+金银花、Y1+连翘、Y1+金银花-连翘1∶1、L1+金银花、L1+金银花-连翘1∶1、D1+金银花、D1+连翘、D1+金银花-连翘组均携带fneB毒力基因,L1+连翘组未检出fneB毒力基因,表明小鼠体内SEE菌株有重新获得fneB毒力基因的能力,出现菌种反毒复壮,其机制有待进一步研究。【结论】金银花、连翘及金银花-连翘药对能够减弱SEE菌株的毒力基因和耐药基因,从而对马腺疫疾病的防治具有指导意义,为减抗、替抗提供理论支撑。

马链球菌马亚种新疆株ZX表面蛋白对小鼠免疫效果评价

为探索马链球菌马亚种新疆分离株提取的表面蛋白的免疫效果,用化学法提取马链球菌马亚种分离菌株表面蛋白,将该蛋白免疫昆明系小鼠并检测抗体,第二次免疫后用同源菌株攻击。结果表明,提取的表面蛋白具有良好的免疫原性,能诱导小鼠产生特异性抗体,且表面蛋白免疫小鼠后抗体的效价高于灭活全菌,对小鼠的免疫保护率也高于灭活全菌组,可达到83.3%。

新疆地区3株驴源马链球菌马亚种新SeM基因型的鉴定与进化分析

从新疆地区某驴养殖场获得了3株驴腺疫链球菌分离株HTP133、HTP123和HTP232。为了解这3株驴腺疫链球菌的生物学特性和确定其分子分型,本研究对其进行了生化特性、药敏特性的检测,对16S rRNA进行序列对比分析,并利用PCR扩增SeM等位基因和测序鉴定其基因型。研究结果表明3株分离菌均为马链球菌马亚种。药敏试验结果显示,分离菌均对阿莫西林、氨苄西林和庆大霉素等18种药物敏感,对青霉素、头孢呋辛耐药。16S rRNA分析结果显示分离菌株归属于该菌16S rRNA进化群的Ⅰ群,且在V1-V5可变区有明显的序列特征,且与JQ726493株进化关系较近。SeM等位基因测定后鉴定了2个新SeM基因型,分别为SeM 210(HTP232)和SeM 211(HTP 133、HTP 123),与SeM 136、SeM 138、SeM 142、SeM 146、SeM 149和SeM 144亲缘关系较近。本研究丰富了我国驴腺疫链球菌的流行和传播特征,提供了相关的分子生物学基础,为驴腺疫的防控提供理论依据。

抗马链球菌马亚种组方加味优选及其体内抑菌作用研究

【目的】筛选可抑制马腺疫主要致病菌——马链球菌马亚种的最优中药组方,为临床马腺疫的防治提供参考。【方法】选用赤芍、大黄、山豆根等27种中药,首先通过体外抑菌试验(牛津杯法、最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)、联合药敏试验)结合L(2~6)正交试验初步筛选抗马链球菌马亚种中药组方的最佳优选因素,再通过L(3~6)正交试验进一步筛选基础组方最佳配比;最后在基础组方的基础上,根据中兽医方剂配伍理论,添加黄芪和当归2味补虚药,通过马腺疫小鼠模型体内抑菌试验筛选加味组方配比,结合组方保护率结果及组织脏器病理变化验证加味组方的体内抑菌作用。【结果】试验筛选出了马链球菌马亚种超敏和高敏的7味中药:浙贝母、赤芍、甘草、大黄、雪白睡莲、山豆根和苦参。大黄、雪白睡莲、山豆根、甘草、苦参和浙贝母的MIC分别为0.078、0.078、0.125、0.156、0.156和0.250 mg/mL。雪白睡莲、赤芍、山豆根、甘草、大黄、苦参和浙贝母的MBC分别为0.078、0.125、0.125、0.156、0.156、0.156和0.250 g/mL。根据各单味药物的MIC和两两联合后的MIC计算得出浙贝母与雪白睡莲联合药敏指数>2,二者存在颉颃作用,故剔删浙贝母。通过2次正交试验得出基础组方最佳配比为:赤芍∶甘草∶大黄∶雪白睡莲∶山豆根∶苦参=4∶2∶2∶4∶4∶1;结合加味组方体内抑菌试验可知,黄芪∶当归=1∶1、配伍浓度为0.5 g/mL时,保护率可达87.5%,且中药组方对马链球菌马亚种所致的小鼠肺脏炎性损伤修复良好。【结论】本试验成功优选出1种对马腺疫主要致病菌——马链球菌马亚种具有良好抑菌、组织保护作用的中药组方,配比为:赤芍∶甘草∶大黄∶雪白睡莲∶山豆根∶苦参∶黄芪当归(1∶1)=4∶2∶2∶4∶4∶1∶1。

驴源马链球菌马亚种分离鉴定及消毒剂敏感性研究

为查明2019年4月新疆石河子地区某驴场疑似马腺疫疫病病原及病原菌对消毒剂的敏感性,试验采集临床发病和死亡动物颌下及肺部浓汁进行分离纯化、革兰氏染色、生化鉴定及PCR测序鉴定,测定不同温度、pH值、盐浓度条件下分离株的生长情况,碘伏、新洁尔灭、来苏水及84消毒剂4种消毒剂对分离株的消杀率。结果表明,导致该驴场发病的病原为马链球菌马亚种,分离株对常用消毒剂抵抗力较弱,不耐酸和高盐环境。

北疆地区马链球菌分离鉴定及耐药性和毒力基因分析

为了解新疆北疆地区马匹感染链球菌的种类及耐药性及毒力基因携带情况,本实验在昌吉及伊犁马场共采集132份马鼻拭子样品进行链球菌的分离培养,采用标准K-B纸片扩散法进行药敏实验;设计14对引物,对6个耐药基因检测;用特异性PCR检测链球菌相关的7个毒力基因。结果显示,共分离出24株链球菌,其中肺炎链球菌2株,马链球菌马亚种9株,经过药敏实验,分离菌株对青霉素耐药率为72.41%,对头孢他啶、四环素、强力霉素等种药的耐药率超过50%以上。耐药基因bla TEM、qnrA阳性率分别为66.7%、12.5%;毒力基因fneB、lytA、ply的阳性率分别为37.5%、33.3%、12.5%。本实验中发现1株链球菌(HW5-1-2)和1株马链球菌(Y1)为多重耐药菌株,同时携带耐药基因qnr A和bla TEM,其中Y1同时携带毒力基因fneB。3株马链球菌马亚种D1、D2、D3同时携带毒力基因ply,lytA及fneB。研究结果表明,北疆地区马链球菌分离株的耐药性及多重耐药较严重,耐药基因和毒力基因分布较广泛。

马链球菌马亚种新疆分离株的分离及耐药性和进化分析

为了解新疆马链球菌马亚种流行株的分子特性和遗传变异情况,对2017年采集的病马淋巴组织进行病原分离培养、生化鉴定和药敏试验,并对该分离菌株的SeM基因进行了PCR扩增和测序分析。同时,将该分离株与本实验室2013-2017年分离的10个分离株的SeM基因与国外分离株构建系统进化树。结果表明,成功分离鉴定了马链球菌马亚种ZZM17-1株,该菌株对阿莫西林、环丙沙星、克林霉素、多西环素、庆大霉素、左氧氟沙星、四环素、磺胺甲恶唑、利福平、诺氟沙星、土霉素、头孢噻呋、磺胺嘧啶钠和恩诺沙星等14种药物敏感,对青霉素和氨苄西林表现明显的耐药。基于SeM的系统进化树表明新疆地区马链球菌马亚种分离株分别属于Ⅰ群和Ⅳ群。该结果丰富了国内马链球菌马亚种的基因数据,为本地区开展马腺疫的防治提供了理论依据。

马链球菌马亚种IgG结合蛋白的原核表达和免疫原性

为研究马链球菌马亚种IgG结合蛋白(EAG)免疫原性和保护力,评价其作为马链球菌疫苗抗原的价值。采用PCR法扩增马链球菌马亚种EAG基因,将测序正确的EAG扩增产物与原核表达载体pET-28a(+)连接构建重组质粒,对转化后的大肠杆菌进行诱导表达,用诱导纯化后的重组蛋白作免疫原免疫小鼠,分析重组蛋白免疫小鼠后的抗体水平及对小鼠的免疫保护力。结果表明,诱导后可得到26 kDa的EAG重组蛋白,且该蛋白可与该菌阳性血清发生特异性反应。间接ELISA检测免疫小鼠的抗体效价可达1∶8 100,重组蛋白免疫后对小鼠保护力可达90%。该结果表明,表达的EAG蛋白具有良好的抗原性,可有效提高小鼠的体液免疫水平及免疫保护力。

马链球菌马亚种-MDMC0316株的分离鉴定与遗传进化分析

从内蒙古锡林浩特市某马场中疑似患有马腺疫的马匹下颌部淋巴结中采集脓汁样本,通过实验室常规检测和分子生物学方法进行细菌分离鉴定和遗传进化分析。采用绵羊血琼脂平板划线法分离和纯化培养可疑细菌,并进行革兰染色和镜检;绘制分离菌生长曲线,并对该分离菌进行常规生化试验;对16S rRNA基因使用标准PCR方法扩增和测序并应用Mega 7.0生物软件绘制出该分离菌的系统发育进化树并确定其种属地位;对纯化的分离菌进行药物敏感性试验,拟筛选出辅助治疗效果最佳的抗生素类药物。结果显示,分离菌在绵羊血琼脂平板上呈现典型的β溶血环,染色特点为革兰阳性链球菌,从生长曲线上可以看出分离菌16 h后达到平台期;在生化试验中,分离菌对蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、甘露糖利用呈现阳性,而对乳糖、甘露醇、蕈糖、七叶苷、山梨醇等呈现阴性,对精氨酸脱羧酶分解试验呈阳性,而对硝酸盐(还原)试验、胆汁溶菌试验、马尿酸盐分解试验、VP试验呈现阴性,提示分离菌与典型马链球菌马亚种生化试验标准结果吻合;根据16S rRNA基因BLAST比对分析发现,分离菌与NCBI中已注册的马链球菌马亚种序列同源性为100%,遗传进化树上可以看出分离菌与新疆分离株XJALT-10-M2遗传距离最近,位于相同的分支。为此,将该分离菌命名为马链球菌马亚种MDMC0316株(GenBank登录号:OK254140.1)。最后,根据药物敏感性试验结果,可确定多西环素与红霉素为该分离菌最敏感的抗生素类药物。结果表明,在内蒙古锡林郭勒地区初次分离鉴定了1株马链球菌马亚种,菌株编号为MDMC0316,并进行了遗传进化分析,临床最佳治疗抗生素类药物选定为多西环素与红霉素。

TLRs介导的信号通路在马链球菌感染RAW264.7细胞中的作用

为探究Toll样受体(TLRs)介导的信号通路在马链球菌马亚种(S.equi)感染小鼠巨噬细胞RAW264.7中的作用,收集S.equi感染后不同时间点的RAW264.7细胞,提取总RNA并反转录成cDNA,利用实时荧光定量PCR技术检测细胞Toll样受体1、2、6(TLR1、TLR2、TLR6)、接头蛋白骨髓分化蛋白88(MyD88)及细胞因子IL-1、IL-6、IL-10、IL-12、TNF-αmRNA的表达情况。结果显示,S.equi感染RAW264.7细胞后6h时,TLR1、TLR2、TLR6与MyD88mRNA水平均较对照组没有显著差异(P>0.05);感染后12h时,TLR1、TLR2和TLR6mRNA表达量未出现明显上升(P>0.05),而MyD88mRNA水平极显著升高(P<0.01);感染后24h时,TLR1、TLR2和TLR6mRNA表达水平出现极显著升高(P<0.01),MyD88 mRNA表达没有显著变化(P>0.05),且IL-10和IL-12mRNA水平与对照组相比极显著升高(P<0.01),IL-1、IL-6和TNF-αmRNA水平均极显著下降(P<0.01)。结果表明,TLRs介导的信号通路参与S.equi感染RAW264.7细胞的免疫应答反应。

马链球菌对树突状细胞Toll样受体和MyD88及细胞因子mRNA表达的影响

为探究马链球菌马亚种(Streptococcus equi subsp.equi,S.equi)对小鼠骨髓源树突状细胞(bone marrow derived dendritic cells,BMDCs)TLR1、TLR2、TLR6、MyD88、IL-1、IL-6、IL-10、IL-12、TNF-αmRNA表达的影响,用GM-CSF、IL-4细胞因子刺激小鼠骨髓细胞使其诱导分化成未成熟的BMDCs,感染S.equi后16、20、26h,采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测感染组及未感染组细胞TLRs、MyD88和细胞因子mRNA的表达情况。结果显示,S.equi感染BMDCs后16、20、26h,TLR1、TLR2、TLR6、MyD88mRNA的表达量均显著或极显著的高于未感染组(P<0.05或P<0.01)。S.equi感染DCs后16、26h,IL-1的分泌量较未感染组没有变化(P>0.05),IL-10、TNF-α的分泌量显著或极显著增加(P<0.05或P<0.01)。IL-6在S.equi感染DCs后16h的分泌量显著增加(P<0.05),但感染后26h无显著变化(P>0.05)。IL-12在S.equi感染DCs后16h的表达没有变化(P>0.05),但感染后26h分泌量有所增加(P<0.05)。说明S.equi具有调节DCs TLRs、MyD88和细胞因子表达的能力,从而介导机体的免疫应答反应。

驴源马腺疫链球菌的分离与鉴定

目前,关于马腺疫链球菌感染驴的报道较少。本研究从山东省某驴场的2只病驴颌下淋巴结肿胀化脓液中分离出2株病原菌,经染色镜检、生化试验和16S rDNA的PCR测序鉴定,确定该病原菌为马链球菌马亚种。采用纸片扩散K-B法,对分离菌进行药敏试验,发现其对恩诺沙星、氯霉素、环丙沙星、头孢噻肟和美罗培南高度敏感。本研究为驴感染马链球菌马亚种的诊断与防治提供了参考。

马腺疫链球菌fneB基因LAMP检测方法的建立及应用

为了建立快速简便的fneB-LAMP检测法用于马腺疫病原马链球菌马亚种(S.equi)的检测,本试验采用恒温水浴进行LAMP扩增,建立可视化fneB-LAMP检测方法。结果显示:对大肠埃希菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球、蜡状芽孢杆菌和克雷伯杆菌5种菌与标准S.equi菌株检测,只能够检测出标准阳性菌株;对新疆昭苏县3个马场临床检查疑似马腺疫的鼻拭子和脓汁共40份样品进行fneB-LAMP检测,其中有7株分离菌呈阳性;与普通PCR检测方法相比,LAMP检测方法灵敏度为8×10^(-6)μg/μL,较普通PCR方法高;该方法在粗提模板的情况下只需简单的恒温仪器反应1 h可得到可视化的检测结果。本试验成功建立了马腺疫病原靶向fneB基因LAMP检测的方法,能够快速准确的检测出S.equi,为今后快速诊断马腺疫疾病提供参考。