应用一步PCR法检测并鉴定马疱疹病毒1型和4型

聚合酶链反应 (PCR)可作为一种快速检测并鉴别马疱疹病毒 1型 (EHV 1)和马疱疹病毒 4型 (EHV 4)的诊断方法。PCR引物是根据编码EHV 1和EHV 4的糖蛋白B(gB)基因上的共有的核苷酸序列或型特有的核苷酸序列设计的。利用这两种病毒的型特异性混合引物 ,在一步PCR反应中检测并鉴别EHV 1和EHV 4,而同一疱疹病毒科的单纯疱疹病毒 1型 (HSV 1)、伪狂犬病毒 (PRV)、马立克氏病病毒 (MDV)均无特异性扩增。应用建立的PCR方法检测了普氏野马流产胎儿病料 ,实验结果表明 ,这种PCR方法是一种直接检测并鉴定EHV 1和EHV 4的快速、敏感的诊断方法 ,同时 ,它可在一步PCR反应中直接鉴别这两种病毒 ,可用于病料中EHV 1和EHV 4检测的初步筛选。

套式PCR分型检测马鼻肺炎病毒的方法研究

马鼻肺炎病毒亚型１和亚型２被重新分类并命名为马疱疹病毒１型（ＥＨＶ－１）和马疱疹病毒４型（ＥＨＶ－４）。聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术可应用于检测并区分ＥＨＶ－１和ＥＨＶ－４。选择编码ＥＨＶ－１和ＥＨＶ－４的糖蛋白Ｂ（ｇＢ）基因作为引物。外侧引物为ＥＨＶ－１和ＥＨＶ－４ ＤＮＡ共有的核苷酸序列。内侧引物分别为ＥＨＶ－１或ＥＨＶ－４ ＤＮＡ特有的核苷酸序列。将琼脂免疫扩散试验检测为阴性的７１份马血清样品进行ＰＣＲ检测，其中检出３份血清为阳性，并确诊为ＥＨＶ－１型。结果表明，套式ＰＣＲ的灵敏度比一般ＰＣＲ提高１００倍左右，从而建立了一种快速、敏感、特异的检测并区分ＥＨＶ－１和ＥＨＶ－４的方法，确诊了从新疆普氏野马上分离的ＰＨ９３－１株为ＥＨＶ－１型。

上海市某马场马疱疹病毒1型感染的确诊

采用马疱疹病毒1型和4型二重PCR分型方法,对上海市某马场临床疑似病例的鼻拭子和血浆样品进行检测,同时对扩增产物进行测序和比对,确诊为马疱疹病毒1型阳性,表明上海市马群中存在马疱疹病毒1型感染。因此,应提高上海市马匹饲养管理水平,加强马疱疹病毒1型的定期免疫和检疫,及时对阳性马匹进行隔离,对马厩进行消毒。

用套式PCR分型检测马鼻肺炎病毒

马鼻肺炎病毒亚型1和亚型2被重新分类并命名为马疱疹病毒1型(EHV-1)和马疱疹病毒4型(EHV-4),一般的血清学方法不能区分EHV-1和EHV-4,新疆农业大学动物医学院建立了检测并区分EHV-1和EHV-4的套式PGR诊断方法。选择编码EHV-1和EHV-4的糖蛋白B基因作为引物,外侧引物EHV-

用一步法PCR法检测并鉴定马疱疹病毒1型和4型

马疱疹病毒1型(EHV-1)也叫马流产病毒,马疱疹病毒4型(EHV-4)也称马鼻肺炎病毒,这两种病毒对养马业危害很大,在世界40多个国家和地区存在。马疱疹病毒1型主要引起妊娠马流产、神经性疾病和呼吸系统疾病,马疱疹病毒4型主要引起呼吸系统疾病。新疆大学理化测试中心易新萍等。

含EGFP基因的马疱疹病毒1型新疆株gE基因缺失株的构建

为筛选马鼻肺炎(equine rhinopneumonitis,ER)基因缺失减毒活疫苗的候选毒株,本研究参考GenBank中EHV-1(登录号:KF644579.1)目的基因序列设计同源臂引物,以本地区流行株XJ2015株DNA为模板PCR扩增gE基因同源臂gEH1、gEH1,以EGFP表达盒(CMV+EGFP+polyA)为标记基因,酶切后依次连接至载体pUC-19,成功构建重组质粒pUC-gEH1H2-EGFP。将XJ2015基因组与质粒pUC-gEH1H2-EGFP共转染至RK-13细胞进行同源重组,以EGFP为标记进行gE基因缺失毒株的筛选及纯化,并测定重组毒株效价。结果显示:经5轮荧光噬斑纯化、PCR及测序鉴定,成功获取一株携带EGFP基因的重组毒株XJ2015-△gE-EGFP,且重组毒株效价(107.1TCID50/0.1 mL)较原毒株(108.8TCID50/0.1 mL)下降约101.7TCID50/0.1 mL。采用同源重组技术成功构建了1株马疱疹病毒1型流行株gE基因缺失突变株,为未来筛选马鼻肺炎基因缺失弱毒疫苗奠定了基础。

我国马鼻肺炎流行现状

马鼻肺炎（Equine rhinopneumonitis,ER）是由马疱疹病毒l型（Equineherpesvirus1,EHV-l）和马疱疹病毒4型（Equineherpesvirus4,EHV-4）引起的一种马属动物急性、热性传染病。临床表现为发热、白细胞减少、呼吸道症状、妊娠马流产、胎儿死亡以及脑脊髓炎等症状。

X射线交错互补修复基因1多态性和EB病毒感染对鼻咽癌细胞基本特性的影响

目的探讨X射线交错互补修复基因1(X-ray repair cross-complementing gene 1,XRCC1)多态性与EB病毒感染对鼻咽癌细胞基本特性的影响。方法将鼻咽癌细胞株分组,使之分别表达不同的XRCC1基因型,转染EB病毒,比较转染前后不同基因型鼻咽癌细胞的基本特性,并检测XRCC1蛋白的表达水平。结果 XRCC1不同基因型的鼻咽癌细胞之间基本特性无明显差异,XRCC1蛋白水平无差异。EB病毒感染后,各组鼻咽癌细胞生长加快、增殖能力变强、迁移速度加快、凋亡率降低,XRCC1蛋白水平无明显改变。EB病毒感染后,194位点突变型的鼻咽癌细胞与280、399位点突变型细胞相比,细胞增殖和迁移能力改变程度较小,差异有统计学意义。其他基因型细胞基本特性及XRCC1蛋白水平无差异。结论 EB病毒感染可增加鼻咽癌易感性,EB病毒感染后XRCC1 194位点的Trp突变型基因可能对鼻咽癌有保护作用。

马鼻肺炎双重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

【目的】建立快速、准确检测马疱疹病毒1型(EHV1)和4型(EHV4)的双重荧光定量PCR检测方法。【方法】以EHV1、EHV4的全基因组序列为基础,针对糖蛋白B(gB)基因的保守序列,分别设计EHV1与EHV4特异性引物和探针,筛选引物,优化反应条件,分型检测马疱疹病毒(EHV1、EHV4)。【结果】检测到EHV1、EHV4、EIV、EAV、EVJ和EIAV标准毒株,EHV1、EHV4为阳性结果,其余病毒为阴性结果;EHV1、EHV4DNA模板的最低检出限为1.47×10^2copies/μL;检测64份临床样本,阳性检出率为14.06%,病毒分离证实100%符合。【结论】双重荧光定量PCR检测方法可直接应用于检测并区分EHV1、EHV4,并可在短时间内获得对EHV1/EHV4特异性及敏感性的检测结果。

马鼻肺炎的流行及综合诊治

马鼻肺炎（ER）是由马疱疹病毒引起的马属动物传染病。由2个亲缘密切疱疹病毒，即马疱疹病毒l型（EHV-1）和马疱疹病毒4型（EHV-4）引起。EHV-1又称马流产病毒，EHV-4又称呼吸道感染病毒。 1 病原马病毒性流产的病原为马疱疹病毒1型（EHV-1），马呼吸道感染病毒（又称马鼻肺炎病毒）为马疱疹病毒4型（EHV-4），属疱疹病毒科甲疱疹病毒亚科的成员。

马鼻肺炎病毒双重PCR分型检测方法的建立

根据GenBank中登录的马鼻肺炎病毒1、4型(EHV1、EHV4)糖蛋白B(gB)基因特异保守序列(登录号分别为AY665713、AF030027.1),各设计1对引物,建立了同时分型检测EHV1、EHV4的双重PCR方法;确定其最佳工作条件,并对该方法进行了特异性和敏感性试验。结果显示,在EHV1、EHV4中分别扩增出265bp和537bp的特异性目的条带,而马流感病毒cDNA、马动脉炎病毒cDNA、马乙型脑炎病毒cDNA及马传染性贫血弱毒疫苗株cDNA均未扩增出任何条带。EHV1的DNA最低检出限为2.1pg,EHV4的最低检出限为15pg。表明本试验建立的方法具备很高的应用价值。

鼻咽癌肝转移研究进展

鼻咽癌是常见的恶性肿瘤之一，其肝转移发病率高，且治疗效果及预后差。鼻咽癌肝转移机制复杂，与多种基因及蛋白分子相关。其治疗主要包括放疗、化疗、介入栓塞治疗、手术治疗等。现就其转移机制、诊断及治疗作一综述。

EBV在鼻咽癌肿瘤免疫微环境和免疫治疗中的研究进展

鼻咽癌是一种与EB病毒(EBV)感染密切相关的癌种, 并伴有癌巢周围高水平的免疫细胞浸润。EBV阳性鼻咽癌的肿瘤免疫微环境(TIME)中存在两种功能相反的免疫细胞, 但由于EBV表面膜蛋白和γ干扰素的作用以及程序性死亡受体1的高表达, TIME表现为免疫抑制作用。免疫疗法利用TIME免疫抑制特性改变其中的免疫应答水平, 从而抑制鼻咽癌的进展。EBV相关鼻咽癌的免疫治疗方法包括免疫检查点抑制剂、细胞免疫疗法、肿瘤疫苗与溶瘤病毒免疫疗法。进一步探讨EBV与TIME的关系以及EBV在鼻咽癌免疫治疗策略中的作用, 可为EBV阳性鼻咽癌的精准免疫治疗提供依据。

人免疫球蛋白联合更昔洛韦治疗小儿腺病毒肺炎的临床研究

目的探讨静注人免疫球蛋白(pH 4)联合注射用更昔洛韦治疗小儿腺病毒肺炎的临床疗效。方法选择2014年6月—2016年12月华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院收治的腺病毒肺炎患儿90例,所有患儿按随机数字表法随机分为对照组和治疗组,每组各45例。对照组静脉滴注注射用更昔洛韦,5 mg/kg,滴注时间>1 h,2次/d。治疗组在对照组基础上静脉滴注静注人免疫球蛋白(pH 4),400 mg/kg,1次/d。两组患儿均连续治疗14 d。观察两组的临床疗效,比较两组的临床症状、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、分泌型磷脂酶A2(sPLA2)、克拉拉细胞分泌蛋白(CCSP)和白细胞介素-1(IL-1)水平情况。结果治疗后,对照组和治疗组的总有效率分别为71.11%、95.56%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,治疗组退热时间、咳嗽停止时间、咽痛消失时间、肺部湿啰音消失时间和住院时间均明显短于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组血清TNF-α、sPLA2、CCSP和IL-1水平均明显降低,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组这些观察指标明显低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论静注人免疫球蛋白(pH 4)联合注射用更昔洛韦治疗小儿腺病毒肺炎具有较好的临床疗效,可改善临床症状,降低TNF-α、sPLA2、CCSP和IL-1水平,具有一定临床推广应用价值。

重庆地区鼻咽癌患者血浆EBV-LMP1基因检测及缺失变异分析

目的:研究重庆地区鼻咽癌和非鼻咽癌患者血浆EB病毒潜伏膜蛋白l(EBV-LMP1)基因存在情况及碱基缺失变异状况,探讨其在鼻咽癌发生中的作用。方法:收集重庆籍鼻咽癌患者外周血48例,非鼻咽癌对照者外周血40例,提取DNA后,采用PCR特异性地扩增LMP1基因N端(包含Xho I酶切位点)和C端(包含30 bp缺失的区域),N端PCR产物进行Xho I酶切。用8%聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳分离分析酶切及PCR产物,用双脱氧终止法对部分PCR产物进行测序,用DNAssist软件对序列进行碱基缺失变异分析。结果:48例鼻咽癌外周血中,全部扩增出特异性LMP1基因条带,阳性率为100%。40例非鼻咽对照者外周血中,38例扩增出特异性条带,阳性率为95%。与B95-8原型LMP1比较,电泳分离、酶切分析、测序及软件序列分析,48例鼻咽癌患者和38例非鼻咽癌对照者外周血未发现1例存在LMP1基因N端Xho I酶切位点和C端30 bp的缺失变异。结论:我国重庆地区鼻咽癌患者和非鼻咽癌对照者血浆携带的EBV为非缺失型(原型);LMPl基因缺失变异与鼻咽癌发病的确切关系还需进一步研究。

新疆伊犁地区部分马病血清学调查

为了解新疆伊犁地区马群马流感病毒(equine influenza virus)、马疱疹病毒(equine herpesviruses)以及马沙门菌(Salmonellosis equinum)、马链球菌(Streptococcus equi)的感染情况,采用酶联免疫吸附试验及血凝抑制试验对采自新疆伊犁地区7个马场的277份马血清进行抗体水平检测。结果显示:4种病原中,沙门菌血清抗体阳性率最高26.71%(74/277),马疱疹病毒最低15.16%(42/277);各马场之间马流感病毒、马疱疹病毒,以及沙门菌、马链球菌抗体阳性率差异性极显著(P<0.01);不同马场之间马沙门菌和马链球菌双抗体阳性率差异性极显著(P<0.01);不同马场之间马鼻肺炎和马流感双抗体阳性率差异性极显著(P<0.01)。结果表明:新疆伊犁部分马群存在不同程度的马流感病毒、马疱疹病毒、马沙门菌以及马链球菌的感染。此次调查数据可为新疆地区部分马病的防控工作及马产业的健康发展提供参考。