载脂蛋白C3基因多态性-482C>T与血浆脂质的关系

目的研究载脂蛋白C3基因上游调控区内-482C>T多态性位点与血浆脂质以及载脂蛋白水平的关系。方法应用聚合酶链反应—限制片长多态性方法逐个鉴定每个个体的基因型,并测定其血浆脂质和载脂蛋白水平。结果-482T等位基因携带者具有较高的甘油三酯水平(P=0.044);同时该等位基因的携带者也具有较高的载脂蛋白C2水平(P=0.017)。结论载脂蛋白C3基因-482C>T位点和血浆甘油三酯以及其它几种脂蛋白密切相关。

非小细胞肺癌患者抵抗素样分子β连接黏附分子A驱动蛋白家族成员2c表达情况及其与病理分期的相关性分析

目的 分析非小细胞肺癌患者抵抗素样分子β(RELMβ)、连接黏附分子A(JAM-A)、驱动蛋白家族成员2c(Kif2c)表达情况及其与病理分期的相关性。方法 选取2018年8月至2021年8月我院收治的非小细胞肺癌患者82例为研究对象,以术中切取的非小细胞肺癌病灶组织作为观察组,以切取的周边正常组织为对照组,比较观察组与对照组RELMβ、JAM-A、Kif2c表达水平,不同病理分期非小细胞肺癌患者RELMβ、JAMA、Kif2c表达水平,并分析其与病理分期的相关性。结果 观察组RELMβ、JAM-A、Kif2c表达水平高于对照组(P<0.05)。随着非小细胞肺癌病理分期升高,RELMβ、JAM-A、Kif2c表达水平呈逐渐升高趋势(P<0.05)。Pearson分析法结果显示,非小细胞肺癌患者RELMβ、JAM-A、Kif2c表达情况与病理分期呈正相关(r=0.469、0.385、0.473,P<0.05)。结论 RELMβ、JAM-A、Kif2c在非小细胞肺癌患者中呈高表达,且其表达情况与非小细胞肺癌病理分期有关,临床可据此对非小细胞肺癌进行有效诊断。

KIFC3基因在结直肠癌中的表达及预后分析

目的比较驱动蛋白家族分子C3(KIFC3)基因在结直肠癌组织中的表达及对预后的影响。方法从肿瘤基因组图谱(TCGA)和Oncomine数据库中收集结直肠癌RNA表达数据,分析KIFC3的表达情况;收集2017年1-6月汕头大学医学院附属第一医院收治的19例结直肠癌切除标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测癌组织及癌旁正常组织中KIFC3的表达。结合TCGA结直肠癌患者的临床资料,比较各项临床病理特征中KIFC3的表达水平;采用Kaplan-Meier plotter和Cox回归比较KIFC3高表达组与低表达组患者的预后。结果 KIFC3在结直肠癌中的表达显著高于正常组织(3. 39±6. 26比2. 07±4. 93)(P <0. 05)。结直肠癌患者中发生淋巴结转移的KIFC3 mRNA水平高于无转移者(8. 42±0. 97比8. 05±1. 05),肿瘤浸润T3~4期的KIFC3 mRNA水平高于肿瘤浸润T1~2期的患者(8. 30±1. 01比7. 87±1. 03),病理分期Ⅲ~Ⅳ期的KIFC3 mRNA水平高于Ⅰ~Ⅱ期患者(8. 38±0. 95比8. 06±1. 07)(P <0. 01)。KIFC3表达水平越高,结直肠癌患者总生存时间越短(P <0. 05),KIFC3高表达患者的死亡风险约为低表达患者的1. 8倍(HR=1. 808,95%CI 1. 012~3. 229,P=0. 045)。结论 KIFC3在结直肠癌组织中表达升高,KIFC3高表达的结直肠癌患者预后更差。

NSCLC患者RELM–β、JAM–A、Kif2c蛋白表达水平及意义

目的:探究非小细胞性肺癌(NSCLC)患者抵抗素样分子–β(RELM–β)、连接黏附分子–A(JAM–A)、驱动蛋白家族成员2c(Kif2c)蛋白表达水平及其临床意义。方法:回顾性分析南阳市第一人民医院2018年6月至2019年6月收治的94例NSCLC患者临床及随访资料,应用免疫组织化学法对患者癌组织及癌旁组织中的RELM–β、JAM–A、Kif2c蛋白阳性表达水平进行检测,分析各检测指标蛋白表达与临床病理特征及预后生存的关系。结果:NSCLC患者癌组织中RELM–β、JAM–A、Kif2c蛋白阳性表达率均显著高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05);不同临床分期、淋巴结转移情况患者癌组织中的RELM–β、JAM–A、Kif2c蛋白阳性表达率比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);RELM–β、JAM–A、Kif2c蛋白阳性表达者的中位生存期均显著短于对应蛋白阴性表达者,差异均具有统计学意义(χ^(2)=3.908、4.491、14.414,P均<0.05);COX比例风险回归模型分析显示,临床分期Ⅲ~Ⅳ、淋巴结转移、RELM–β蛋白阳性表达、JAM–A阳性表达、Kif2c阳性表达是NSCLC患者预后生存的独立危险因素,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:RELM–β、JAM–A、Kif2c在NSCLC患者癌组织中的蛋白表达量均异常升高,且与患者临床病理分期、淋巴结转移相关,是影响患者预后的独立危险因素,可能促进该癌症进展。

KIF2C对肝细胞癌细胞恶性生物学行为和人脐静脉内皮细胞血管生成的影响

目的:探究驱动蛋白-13家族2C(KIF2C)对肝细胞癌(HCC)细胞增殖、侵袭和迁移以及人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管生成的影响,为HCC治疗提供潜在靶点。方法:用数据库数据分析KIF2C mRNA和蛋白在HCC组织中的表达及其与血管生成相关因子(VEGFR2和HIF-1α)表达的相关性,常规培养人正常肝细胞QSG-7701、HUVEC和HCC细胞Huh-7、Hep3B2.1-7,用Lipofectamine 3000转染试剂将sh-NC和sh-KIF2C转染至Huh-7、Hep3B2.1-7细胞,qPCR检测各组QSG-7701、Huh-7和Hep3B2.1-7细胞中KIF2C mRNA的表达,WB法检测各组细胞中KIF2C蛋白的表达,细胞克隆形成实验检测敲低KIF2C对Hep3B2.1-7和Huh-7细胞克隆形成的影响,小管生成实验检测敲低KIF2C表达的Huh-7和Hep3B2.1-7细胞的条件培养液对HUVEC血管生成能力的影响。结果:数据库分析结果显示,KIF2C mRNA和蛋白在HCC组织中均呈高表达(均P<0.01),用qPCR和WB法检测人HCC中KIF2C mRNA和蛋白的表达水平,结果显示其mRNA和蛋白在各HCC细胞中也呈高表达(均P<0.01),与数据库数据分析结果相符。数据库数据分析还显示,KIF2C与HCC组织中VEGFR2、HIF-1α的表达水平呈正相关(P<0.05或P<0.01)。成功构建了稳定低表达KIF2C的Huh-7和Hep3B2.1-7细胞(均P<0.01),敲低KIF2C表达均可明显抑制Huh-7和Hep3B2.1-7细胞的增殖能力(均P<0.01)、侵袭和迁移能力(均P<0.01),敲低KIF2C表达的HCC细胞条件培养液均可显著抑制体外HUVEC的血管生成能力(P<0.05或P<0.01)。结论:KIF2C可促进Huh-7和Hep3B2.1-7细胞增殖、侵袭和迁移以及HUVEC血管生成的能力,提示KIF2C可能是治疗HCC的潜在靶点。

肝细胞癌组织HOXC9和KIF4A表达及其临床意义探讨

目的探讨肝细胞癌(HCC)患者癌组织同源盒基因C9(HOXC9)和驱动蛋白家族成员4A(KIF4A)蛋白表达及其临床意义。方法2018年1月~2021年1月我院收治的86例HCC患者,行肝叶手术治疗,取癌组织和癌旁肝组织,采用免疫组织化学染色法检测组织HOXC9和KIF4A蛋白表达。随访2年。结果HCC癌组织HOXC9和KIF4A高表达阳性率分别为69.8%和51.2%,均显著高于癌旁肝组织的15.1%和16.3%,差异具有统计学意义(P<0.05);56例肿瘤细胞低/中分化、40例Ⅱb/Ⅲb期TNM分期、38例有肿瘤包膜侵犯和37例微血管侵犯患者癌组织HOXC9蛋白高表达阳性率分别为78.6%、85.0%、71.1%和83.8%,均显著高于30例高分化、46例Ⅰa/Ⅱa期TNM分期、48例无肿瘤包膜侵犯和49例无微血管侵犯患者癌组织(分别为53.3%、56.5%、47.9%和59.2%,P<0.05);肿瘤细胞低/中分化、Ⅱb/Ⅲb期TNM分期、肿瘤包膜侵犯和微血管侵犯患者癌组织KIF4A蛋白高表达阳性率分别为60.7%、80.0%、60.5%和89.2%,也显著高于对应组癌组织表达(分别为33.3%、26.1%、43.8%和22.4%,P<0.05);在随访结束时,86例患者生存38例(44.2%),死亡48例(55.8%);60例癌组织HOXC9蛋白高表达患者生存时间为14.0(7.8,26.7)个月,显著短于26例HOXC9蛋白低表达患者【27.0(18.8,30.5)个月,P<0.05】;44例癌组织KIF4A蛋白高表达患者生存时间为9.0(7.0,26.3)个月,也显著短于42例HOXC9蛋白低表达患者【15.3(26.0,28.8)个月,P<0.05】。结论HCC患者癌组织HOXC9和KIF4A蛋白高表达可能与肿瘤细胞恶性程度相关,并影响肝叶手术治疗后预后,值得深入研究。

GPRC5A和SOCS3在大肠癌中的表达及临床意义

目的:研究G蛋白偶联受体C家族5A(GPRC5A)和细胞因子信号转导抑制因子-3(SOCS3)在大肠癌中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学(SP法)检测GPRC5A和SOCS3在45例大肠癌、25例大肠腺瘤及22例正常大肠黏膜组织中的表达。结果:1)GPRC5A在大肠癌组织中的表达(22.2%)明显低于腺瘤组织(52.0%,P<0.05),腺瘤组织中的表达明显低于正常大肠黏膜组织(81.8%,P<0.05)。GPRC5A的表达与有无淋巴结转移、Dukes分期、浸润深度密切相关(P<0.05)。2)SOCS3在大肠癌组织中的表达(24.4%)明显低于腺瘤组织(56.0%,P>0.01),腺瘤组织中的表达明显低于正常大肠黏膜组织(86.4%,P<0.05)。SOCS3的表达与肿瘤分化程度、浸润深度、Dukes分期、有无淋巴结转移有关(P<0.05)。3)GPRC5A与SOCS3在大肠癌组织中的表达呈正相关(r=0.503,P<0.05)。结论:GPRC5A和SOCS3的低表达参与了大肠癌的发生、发展,联合检测两蛋白可能作为临床判断大肠癌的恶性程度及预后的参考指标,并有望成为基因治疗的新靶点。

补体C3d-p28对阿尔茨海默病DNA疫苗的免疫增强作用

目的探讨补体C3d-p28作为分子佐剂,在阿尔茨海默病DNA疫苗基因免疫中的作用。方法在第1、8、22、43、64、85、106、127天,将重组质粒p(Aβ3-10)10、p(Aβ3-10)10-C3d-p28.3和pcDNA3.1(+)肌肉注射于APP/PS1双转基因鼠后腿股四头肌内。疫苗接种前、自第2次注射开始每次接种后7天取鼠眶静脉血共8次,以ELISA法检测抗Aβ抗体的滴度和分型;第8次(最后1次)眶静脉取血后进行6d的Morris水迷宫实验,通过定位航行和空间探索实验评估小鼠空间学习记忆能力。水迷宫实验结束后处死小鼠,以ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清液中白细胞介素4(IL-4)和干扰素γ(IFN-γ)水平,免疫组化染色法检测小鼠脑内Aβ斑的表达。结果 p(Aβ3-10)10-C3d-p28.3组抗Aβ抗体水平高于p(Aβ3-10)10组[(55.03±8.93)μg/mLvs.(27.32±7.69)μg/mL,t=-4.455,P<0.05],p(Aβ3-10)10-C3d-p28.3组抗体类型主要是IgG1型[(50.64±6.96)μg/mL],明显高于p(Aβ3-10)10组[(14.15±3.16)μg/mL,P<0.05]。与p(Aβ3-10)10组比较,p(Aβ3-10)10-C3dp28.3组Morris水迷宫实验平均逃避潜伏期变短、穿越平台次数和穿越平台所在象限停留的时间比例明显增多(均P<0.05);脾细胞培养上清液中IL-4水平增高[(110.22±18.12)pg/mL vs.(170.12±22.16)pg/mL,P<0.05]、IFN-γ水平减低[(800.12±80.11)pg/mL vs.(640.12±70.53)pg/mL,F=6.152,P<0.05];脑内沉积的Aβ斑块明显减少(P<0.05)。结论补体C3d-p28分子佐剂使p(Aβ3-10)10-C3d-p28.3抗Aβ抗体的产生增加、Th2型免疫反应增强,转基因鼠空间学习记忆能力提高。

家族性心肌肥大症的分子遗传基础

家族性心肌肥大症是发生频率很高的遗传病,其发生率在0 2 %～0 5 %之间,中国有多达6 0 0万的突变基因携带者。家族性心肌肥大症与两类基因的突变有关,一是心肌蛋白相关基因,目前已发现10种,其中主要是β肌球蛋白基因、肌球蛋白结合蛋白 C基因和肌钙蛋白结合基因,占患者总数的75 %以上。二是非心肌蛋白基因,包括线粒体基因组DNA、线粒体蛋白基因。

过表达内质网小分子热激蛋白提高拟南芥的衣霉素抗性

内质网小分子热激蛋白是热激蛋白家族成员,具有分子伴侣活性.当植物受到内质网胁迫(ER-stress)时,内质网小分子热激蛋白具有缓解内质网胁迫的功能.我们将CaMV35S启动子驱动的内质网小分子热激蛋白基因AtHSP22.0导入拟南芥,Northern-blotting印迹分析表明,内质网小分子热激蛋白在转基因拟南芥中呈现组成型表达.转基因株系衣霉素抗性强于对照,说明AtHSP22.0的过量表达增强了拟南芥的衣霉素抗性,缓解了ER-stress.

一个汉族肥厚型心肌病家系中首次发现肌球连接蛋白-C基因Arg346fs突变

目的研究中国人家族性肥厚型心肌病(HCM)的致病基因突变位点,分析基因型与临床表型的相互关系。方法对5个经过MYH7基因扫描未发现异常的家族性HCM的先证者进行肌球连接蛋白C基因(MYBPC3)扫描,聚合酶链反应(PCR)扩增其功能区外显子片断,双脱氧末端终止法测序。对阳性结果者进行家系中其他成员筛查,并分析患者临床表型特点。结果在1个家系中发现MYBPC3基因的13号外显子的Arg346fs突变,而正常对照组同一位置未见异常,Arg346fs突变为我国患者中首次发现。结论MYBPC3基因为我国家族性HCM的的致病基因之一。其临床表型的异质性提示多因素参与了HCM的发生及外显。

肺癌驱动蛋白超家族5B-转染重排融合基因研究进展

肺癌患者中80％～85％的病例为非小细胞肺癌（non—smallcelllungcancer，NSCLC）。统计数据表明，2010年美国肺癌新发病例22．2万，由肺癌导致的相关死亡人数约16万。我国肺癌相关病死率居恶性肿瘤之首，为30．8／10万。手术、放疗和化疗是NSCLC的主要治疗方法。随着对肿瘤发病机制及其生物学行为研究的不断深入，特异性高、不良反应少的分子靶向治疗对特定基因型人群越来越重要。

Tec真核表达载体构建及其对细胞信号的影响

目的构建人Tec酪氨酸蛋白激酶真核表达载体;研究Tec参与肝细胞再生的可能信号途径。方法经PCR扩增、酶切、连接等基因重组技术将人Tec插入pCDNA3.1(hismycTec)真核表达载体中,并经酶切、PCR、测序鉴定;用脂质体法将构建的真核表达载体瞬时转染Hela细胞,用Western方法检测Tec蛋白是否表达。用荧光素酶报告基因系统,检测Tec是否参与HGF刺激信号途径的活化。结果构建的Tec真核表达载体使Hela细胞高表达Tec蛋白;并发现Tec在HGF介导下,对Elk信号分子活化的报告质粒中荧光素酶的表达有明显增强作用。结论构建了Tec真核表达载体,并能使HGF介导的MAPK途径活化,提示Tec可能参与HGF介导肝细胞增殖的信号调控。

四君子汤含药血清通过抑制RhoA/Rac1/Cdc42通路影响卵巢癌细胞的上皮间质转化

目的探索四君子汤含药血清对卵巢癌细胞增殖迁移、侵袭及上皮间质化的影响,并初步研究其作用机理。方法体外培养人卵巢癌细胞(SKOV3)和人卵巢上皮细胞,随机分为空白对照组、舒尼替尼组、四君子汤Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组。噻唑蓝法检测各组SKOV3细胞和人卵巢上皮细胞增殖变化情况;划痕实验和侵袭(transwell)实验检测各组SKOV3细胞迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹分析法检测各组SKOV3细胞上皮型钙粘蛋白(Ecadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)和细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)蛋白表达情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组SKOV3细胞RhoA、Rac1和Cdc42 mRNA表达变化。结果各组人卵巢上皮细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组相比,舒尼替尼组SKOV3细胞存活率、划痕愈合率、侵袭数量、N-cadherin、Vimentin蛋白、RhoA、Rac1、Cdc42 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05)。四君子汤Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组SKOV3细胞存活率、划痕愈合率、侵袭数量、N-cadherin、Vimentin蛋白、RhoA、Rac1、Cdc42 mRNA和蛋白表达依次降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达依次升高(P<0.05),呈剂量依赖性。四君子汤Ⅲ组上述指标和舒尼替尼组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论四君子汤含药血清能够抑制人卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质化,可能与RhoA/Rac1/Cdc42信号通路激活受阻相关。

Tim-3与自身免疫性疾病

Tim是2001年McIntire等在研究哮喘基因的过程中发现的一个新的基因家族．由于其结构上含有免疫球蛋白V区和黏蛋白区，因此命名为T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子（T—cell immunoglobulin and nmcin—domain—containing molecules，Tim）家族。目前在鼠体内已鉴别出8个成员．Tim-1～Tim-8，

Stx2B与IntiminC300融合蛋白的构建、表达及免疫保护研究

目的 构建表达肠出血性大肠杆菌 (EHEC)O1 57∶H7志贺毒素Ⅱ结合亚单位 (Stx2B)与紧密黏附素C 端免疫保护性片段 (IntiminC30 0 )的融合蛋白 (Stx2B IntiminC30 0 ) ,并观察其免疫保护作用。方法 设计引物采用PCR法自EHECO1 57∶H7基因组扩增Stx2B的编码基因stx2b ,T A克隆后在前期已构建原核表达质粒 pET 2 8a( + ) eaeC30 0的基础上构建融合基因表达质粒 pET 2 8a( + ) stx2b eaeC30 0 ,经测序鉴定后转化E .coliBL2 1 (DE3) ,IPTG诱导表达 ,PAGE检测 ;通过包涵体洗涤与阴离子柱层析纯化 ,获得目的蛋白Stx2B IntiminC30 0 ,以Al(OH ) 3为佐剂皮下注射免疫BALB/c小鼠 ,再以EHECO1 57∶H7超声破菌液腹腔注射免疫后的小鼠 ,观察攻毒保护效果。结果 PCR法自EHECO1 57∶H7基因组扩增出了约 2 90bp的目的片段 ;原核表达质粒 pET 2 8a( + ) stx2b eaeC30 0经酶切及测序鉴定与设计序列一致。转化E .coliBL2 1 (DE3)后IPTG诱导目的蛋白表达率约 2 5% ;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量 (Mr)约 4 3× 1 0 3,破菌后电泳证实目的蛋白以包涵体形式表达。纯化后目的蛋白Stx2B IntiminC30 0的纯度达 75% ,免疫BALB/c小鼠后血清特异性抗体阳转率及抗体效价均显著增高 ,能够抵御致死剂量EHECO1 57∶H7超声破菌?

miR-101对结直肠癌细胞放疗敏感性的影响及机制探讨

目的观察miR-101对结直肠癌细胞放疗敏感性的影响,并探讨其分子机制。方法取结直肠癌细胞株SW620、SW480,稳定过表达miR-101细胞株SW620(miR101-SW620)及其阴性对照GV209-SW620,瞬时沉默miR-101表达细胞株SW480(SW480-miR101)及其阴性对照SW480-NC,采用Western blotting法检测细胞中miR-101靶基因Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)及其下游关键蛋白细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)、人Ras同源基因家族成员A(Rho A)。取SW620、GV209-SW620、miR101-SW620细胞,分别给予0、2、4、6、8 Gy射线处理24 h;Western blotting法检测DNA损伤标志性蛋白γ-H2AX、细胞凋亡标志蛋白Caspase-3判断细胞放疗敏感性变化,同时检测细胞Rac1、Cdc42、Rho A蛋白。结果与SW620、GV209-SW620细胞比较,miR101-SW620细胞Rac1、Cdc42、Rho A蛋白表达降低(P均﹤0.05);与SW480、SW480-NC细胞比较,SW480-miR101细胞Rac1、Cdc42、Rho A蛋白表达均增高(P均﹤0.05)。随着照射剂量增加,结直肠癌细胞γ-H2AX、Caspase-3表达均增高,而Rac1、Rho A、Cdc42蛋白表达均降低(P均﹤0.05);与同等照射剂量下SW620、GV209-SW620细胞比较,miR101-SW620细胞γ-H2AX、Caspase-3蛋白表达均增高,而Rac1、Rho A、Cdc42蛋白表达均降低(P均﹤0.05)。结论 miR-101可能通过调控Rac1/Cdc42/Rho A信号通路增强结直肠癌细胞对放疗的敏感性。

miR-186下调KIF3C抑制PI3K/AKT信号通路抗肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 :探究驱动蛋白家族成员3C(kinesin family member 3C,KIF3C)和微小RNA(mircoRNA,miR)-186对人肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其调控机制。方法 :体外培养人肺癌A549细胞系,然后转染miR-186mimics、miR-186 inhibitor、siRNA(si)-KIF3C、miR-186 inhibitor+si-KIF3C及mimic NC、inhibitor NC和si-NC至A549细胞,分别设为miR-186 mimic组、miR-186 inhibitor组、si-KIF3C组、miR-186 inhibitor+si-KIF3C组及NC组(mimic NC组、inhibitor NC组和si-NC组),非转染的细胞设为Con组。用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)测定A549细胞中miR-186及KIF3C基因表达水平;蛋白免疫印迹(western blotting,WB)法测定KIF3C和磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol 3 kinase/serine threonine protein kinase,PI3K/AKT)通路相关蛋白表达水平;活细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)测定细胞活力;5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2’deoxyuracil nucleoside,EdU)法测定细胞增殖;Transwell小室测定细胞的迁移和侵袭。结果 :miR-186 mimic组miR-186表达水平显著高于mimic NC组(P<0.05),miR-186 inhibitor组miR-186表达水平显著低于inhibitor NC组(P<0.05),si-KIF3C组KIF3C mRNA和蛋白表达水平显著低于si-NC组(P<0.05),以上实验证明了miR-186 mimic、miR-186 inhibitor和si-KIF3C转染成功。与NC组相比,miR-186 mimic组和siKIF3C组细胞活力、增殖率、迁移数、侵袭数及KIF3C、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平显著降低,miR-186 inhibitor组则显著升高(P<0.05);miR-186 inhibitor+si-KIF3C组上述指标显著低于miR-186 inhibitor组,显著高于siKIF3C组(P<0.05)。结论 :过表达miR-186通过下调KIF3C抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能是抑制PI3K/AKT信号通路有关。

参黛清肠汤对溃疡性结肠炎小鼠肠道黏膜保护作用及机制探讨

目的观察参黛清肠汤对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠肠道黏膜的保护作用,并探讨其机制。方法55只C57BL/6小鼠以2.5%葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)灌胃3个周期诱导建立UC模型,建模成功后随机分为5组,另10只C57BL/6小鼠记为正常组。美沙拉嗪组予以200 mg/kg小鼠体质量的美沙拉嗪溶于1 mL/100 g小鼠体质量生理盐水中灌胃,参黛清肠汤低、中、高剂量组分别予以15、30、60 mg/kg参黛清肠汤同法灌胃,模型组和正常组均予以等量生理盐水灌胃,1次/d,给药2周。干预后评价各组疾病活动指数(disease activity index,DAI)和肠道黏膜损伤指数(colonic mucosal damage index,CMDI);苏木素-伊红(HE)染色观察肠道黏膜病理改变;酶联免疫法检测肠道黏膜组织白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;实时反转录荧光聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blotting,WB)分别检测肠道黏膜组织Ras同源基因家族A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK-1)、Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac-1)、p21激活激酶1(PAK-1)、核转录因子-κB(NF-κB)mRNA和蛋白表达。结果HE染色证实UC小鼠建模成功;模型组DAI和CMDI评分,肠道黏膜组织IL-1β、TNF-α含量,肠道黏膜组织RhoA、ROCK-1、NF-κB mRNA及蛋白表达均高于正常组(P<0.05),美沙拉嗪组和参黛清肠汤3剂量组均低于模型组(P<0.05),参黛清肠汤低剂量组均高于美沙拉嗪组(P<0.05),参黛清肠汤高剂量组均低于美沙拉嗪组(P<0.05),模型组肠道黏膜组织Rac-1、PAK-1 mRNA及蛋白表达均低于正常组(P<0.05),美沙拉嗪组和参黛清肠汤3剂量组均高于模型组(P<0.05),参黛清肠汤低剂量组均低于美沙拉嗪组(P<0.05),参黛清肠汤高剂量组均高于美沙拉嗪组(P<0.05),且参黛清肠汤中剂量组与美沙拉嗪组差异均无统计学意义(P>0.05)。模型组肠道黏膜组织病理改变严重,美沙拉嗪组和参黛清肠汤3剂量组病理改变均减轻,且参黛清肠汤高剂量组效果最佳。结论参黛清肠汤能减轻UC小鼠病变,保护肠道黏膜组织,减轻炎症损伤,推测与抑制RhoA/ROCK通路,下调RhoA、ROCK-1与NF-κB表达,上调Rac-1、PAK-1表达有关。