马传染性贫血病毒弱毒株感染驴胎皮肤细胞(FDD)的前病毒DNA整合动态

马传染性贫血病毒（Ｅｑｕｉｎｅｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓａｎｅｍｉａｖｉｒｕｓ，ＥＩＡＶ）弱毒株，经驴胎皮肤（Ｆｅｔａｌｄｏｎｋｅｙｄｅｒｍａｌ，ＦＤＤ）细胞培养、斑点杂交及ＰＣＲ检测，在感染后２－１０天的细胞染色体中均检出前病毒ＤＮＡ，证明ＥＩＡＶ弱毒株对感染细胞具有整合作用。在感染后第６天，整合的前病毒的量达到高峰，其含量与病毒的致细胞病变作用（ＣＰＥ）相对应。前病毒的存在形式为整合形式，未检出非整合形式的前病毒，在健康的ＦＤＤ细胞中未检出前病毒，说明ＥＩＡＶ属于外源性病毒。ＥＩＡＶ弱毒株基因组两端的ＬＴＲ序列之中各存在一个限制酶ＭｌｕⅠ位点，这与美国强毒株相同，但弱毒株基因组的３端ＭｌｕⅠ位点上游２ｋｂ位置可能存在另一个ＭｌｕⅠ位点。

马传染性贫血病毒第1 9、26代驴胎皮肤细胞弱毒前病毒DNA全基因序列分析

不同代次马传染性贫血驴胎皮肤细胞弱毒(Fetal donkey dermal virus,FDDV)的免疫保护效果各不相同,只有第10～15代驴胎皮肤细胞弱毒具有良好的免疫保护效果,可作为疫苗使用,继续传代则疫苗的保护率下降。为确定有、无免疫保护效果的FDDV在基因水平上的差异,本实验对无免疫保护效果的第19、26代驴胎皮肤细胞弱毒前病毒DNA进行了全基因序列测定,并与已测序的疫苗毒株进行序列比较。第19代和第26代FDDV全基因核苷酸序列同源性高达99.5%,与疫苗毒株全基因核苷酸序列的同源性分别为96.9%、96.7%。LTR是EIAV在细胞传代中变异最显著的区域,第19、26代FDDV的LTR与疫苗毒的LTR同源性仅为89.6%、89.3%。马传贫病毒的gag基因高度保守,第19、26代FDDV与疫苗毒株的gag基因推导氨基酸序列仅有2个氨基酸不同。第19、26代FDDV与疫苗毒株的pol基因、env基因的推导氨基酸序列的同源性分别为98.9%、98.8%、93.7%、93.6%。由序列比较结果可以推断,第19代、第26代FDDV不具有免疫保护效果的主要原因可能是由于LTR和env基因的变异,导致病毒复制能力下降或免疫原性丧失,不能诱导机体产生良好的免疫反应。

绵羊进行性肺炎驴胎皮肤细胞毒株的育成及应用

绵羊进行性肺炎病毒(OPPV)在驴胎皮肤细胞(D细胞)上连续快速传代培养至113代,高代次病毒接D细胞后24小时即可引起细胞病变,至5～6天时大部分贴壁细胞脱落,病毒滴度为10^(11.50)TCID_(50)/0.1ml。不同代次的OP-PDV经电镜超薄切片观察,病毒粒子呈球形,直径80～120nm,分布于细胞外及胞浆空胞中,在胞浆膜上可见到出芽增殖的病毒。用OPPDV生产抗原产量高,其特异性,敏感性与绵羊胎肺细胞(FL细胞)抗原一致,用OPPDV油乳剂灭活疫苗免疫绵羊,攻毒后经病毒分离,对照2/2阳性,免疫羊2/3保护,首次证明了本病人工免疫的可能性。

首次用驴胎皮肤细胞试制出无色透明的传贫琼扩抗原

我国现行普遍使用的马传贫血清学诊断法是免疫琼指扩散试验.此法特异性强,检出率高、方法简便、易于推广.我国已将其列入现行的马传贫检疫操作规程.我区现行的马传贫防制方针是检疫、淘汰病马的净化方针,在每年的4个地州的20个县(市)的大规模检疫工作中,约需400毫升传贫琼扩抗原.由于传贫琼扩抗原市场价格较贵以及其它一些原因,1993年我站决定自行试制马传贫琼扩抗原。

痘苗病毒对马属动物细胞的感染性研究

目的研究痘苗病毒天坛株是否能够感染马属动物细胞,并诱导免疫马产生免疫反应。方法首先采用重组绿色荧光蛋白(GFP)的痘苗病毒WR株感染驴胎皮肤细胞(FDD)后,通过流式细胞仪定期检测GFP表达水平(病毒感染率),探索最佳感染时间,进而用重组HIV-1 Gag蛋白的痘苗病毒天坛株感染FDD,通过免疫印记实验确认Gag蛋白在细胞内表达,并且进行胞内染色,通过流式细胞仪监测病毒的复制进程;使用痘苗病毒天坛株空载体接种实验马并监测其诱导的免疫反应。结果痘苗病毒感染FDD使产生病变效应,在其内表达外源蛋白,最佳时间为48h;使实验马产生针对病毒的结合抗体。结论痘苗病毒对FDD易感,痘苗病毒天坛株能使实验马感染,提示痘苗病毒重组EIAV抗原的载体疫苗可用于马体接种免疫。