骆驼蓬多糖调节细胞自噬及巨噬细胞炎症反应的活性研究

目的探讨骆驼蓬多糖调节细胞自噬及巨噬细胞炎症反应的活性。方法用不同浓度的骆驼蓬多糖干预,诱导NRK细胞自噬,用激光共聚焦显微镜观察自噬体,筛选出骆驼蓬多糖诱导细胞自噬的最佳干预浓度和时间范围;利用RAW264.7细胞,以1μg/mL脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)建立体外细胞炎症模型;在骆驼蓬多糖诱导细胞自噬的最佳浓度和时间下进行干预,以CCK-8试验检测细胞活性,用Hoechst和PI双重染色方法观察细胞凋亡,用ELISA试剂盒检测炎症因子IL-1β和IL-6的分泌量。结果骆驼蓬多糖对NRK细胞诱导自噬的最佳时间为12 h,浓度范围为50～100μg/mL。骆驼蓬多糖干预LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型后,对细胞活力均无明显影响,诱导细胞凋亡,呈剂量依赖性,细胞培养液中IL-6和IL-1β分泌量降低,与模型组有显著差异(P(27)0.05)。结论骆驼蓬多糖能抑制LPS刺激诱导的炎症因子的释放,诱导细胞自噬和凋亡,在50～100μg/mL范围内对巨噬细胞RAW264.7具有良好的免疫调节作用。

骆驼蓬多糖提取及对秀丽隐杆线虫多聚谷氨酰胺聚集毒性的影响

目的探讨骆驼蓬多糖提取方法及对秀丽隐杆线虫株AM141肌肉细胞中多聚谷氨酰胺(Poly Q)聚集的影响。方法采用水提分级醇沉法对骆驼蓬多糖进行提取,并用苯酚-硫酸法对其进行含量测定。将骆驼蓬多糖加入培养基中,取样统计成虫肌肉细胞中Poly Q-YFP聚集所形成荧光点数目,以此评价骆驼蓬多糖对秀丽隐杆线虫株AM141中Poly Q聚集的影响。对活性较好的60%乙醇沉淀组分用大孔树脂进行纯化和活性再评价。结果 30%、60%、80%乙醇沉淀骆驼蓬多糖质量分数分别为20.07%、21.80%、19.98%,对秀丽隐杆线虫株AM141 Poly Q-YFP聚集所形成荧光点的抑制率分别为7.9%、17.00%和-1.72%。60%乙醇沉淀部分用大孔树脂纯化后,质量分数较高的10%、20%乙醇洗脱液中多糖质量分数分别为49.76%、38.26%,抑制率分别为35.25%和18.03%。结论利用秀丽隐杆线虫株AM141模型来评价骆驼蓬多糖对Poly Q聚集毒性的影响,方法简便,稳定可靠。且发现60%乙醇沉淀骆驼蓬多糖对秀丽隐杆线虫株AM141中Poly Q聚集的抑制作用最强,并有一定的量效关系。

骆驼蓬粗多糖抗氧化性的研究

采用分光光度法测定骆驼蓬粗多糖对羟基自由基、超氧自由基、亚硝酸根的清除能力及其还原能力。结果表明,骆驼蓬粗多糖对羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O_2^-·)、亚硝酸根(NO_2^-)都具有一定的清除作用,对O_2^-·(IC50=0.47mg/m L)的清除效果优于·OH(IC50=0.89mg/m L),骆驼蓬粗多糖的还原能力随着多糖浓度的增加而增加,说明骆驼蓬粗多糖具有一定的抗氧化能力。