基于行业标准中马和驴成分检测方法用于骡肉检测的分析

应用基于线粒体基因的行业标准检测方法SN/T 3730.4—2013《食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法第4部分:驴成分检测实时荧光PCR法》和SN/T 3730.5—2013《食品及饲料中常见畜类品种的鉴定方法 第5部分:马成分检测实时荧光PCR法》检测骡肉时,存在马、驴成分均可检出的情况,与线粒体严格母系遗传的理论相左。因此,本研究通过测序法和行业标准中的马、驴成分检测方法对骡肉进行检测,对SN/T 3730.4—2013用于骡肉检测的结果进行分析和讨论。本研究基于线粒体基因和核基因聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)测序、SN/T 3730.4—2013、SN/T 3730.5—2013方法对9份单一肉块样品进行了检测。结合线粒体基因和核基因的检测结果,确定3份骡肉均为马骡肉;采用SN/T 3730.4—2013和SN/T 3730.5—2013方法对3份马骡肉均能检出驴成分和马成分,SN/T 3730.5—2013对马骡肉中马成分检测的循环阈值(cycle threshold,Ct)≤20.00;SN/T3730.4—2013对马骡肉中驴成分检测的Ct值在25.00~35.00范围内,且以SN/T 3730.4—2013中引物进行的普通PCR产物测序结果显示,3份骡肉与马、驴均不同源。分析认为,出现该现象的原因可能是SN/T 3730.4—2013靶序列以核内线粒体DNA片段形式和较低的重复数出现在马骡核基因组中,并且发生了部分碱基的插入、缺失。采用行业标准SN/T 3730.4—2013和SN/T 3730.5—2013对已知来源于单一动物源性成分的样品进行马、驴成分检测时,当马成分检测的Ct值≤20.00,同时驴成分检测的Ct值在25.00~35.00范围内时,应考虑马骡成分存在的可能性。