基于AMPK/sirt1/RANKL/OPG通路研究补阳还五汤促进骨质疏松性骨折大鼠愈合的机制

目的基于AMP活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子(sirt)1/核转录因子(NF)-κB受体活化蛋白配体(RANKL)/骨保护素(OPG)信号通路,探究补阳还五汤促进骨质疏松性骨折大鼠骨折愈合的机制。方法将大鼠随机分成假手术组、模型组、补阳还五汤低剂量组(6.25 g/kg)、补阳还五汤中剂量组(12.50 g/kg)和补阳还五汤高剂量组(25.00 g/kg)。除假手术组外,其余组均构建骨质疏松性骨折模型,并给予相应剂量药物干预。检测大鼠骨密度(BMD)值、骨折愈合评分及骨痂体积;自动生化分析仪测定血清碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素、钙和磷水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测股骨组织中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠骨痂组织的病理形态;Western印迹检测股骨组织中AMPK/sirt1/RANKL/OPG通路蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组骨痂骨小梁分布稀疏,成骨细胞大量减少且有纤维组织生成,骨痂体积、血清中ALP、骨钙素、钙和磷水平及股骨组织中MDA水平、RANKL蛋白水平显著升高(P<0.05),BMD值、骨折愈合评分、骨组织中SOD和GSH-Px水平和AMPK、sirt1、OPG蛋白水平显著降低(P<0.05)。与模型组相比,补阳还五汤低、中、高剂量组骨痂骨小梁分布较为密集,成骨细胞增加,骨痂体积、血清中ALP、骨钙素、钙和磷水平及股骨组织中MDA水平、RANKL蛋白水平显著降低(P<0.05),BMD值、骨折愈合评分、骨组织中SOD和GSH-Px水平和AMPK、sirt1、OPG蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论补阳还五汤可能通过抑制氧化应激反应,调节AMPK/sirt1/RANKL/OPG通路,发挥对骨质疏松骨折大鼠的治疗作用。

骨质疏松环境下骨髓间充质干细胞外泌体通过OPG/RANKL调控破骨分化

目的:绝经后骨质疏松PMOP(postmenopause osteoporosis)是一种慢性炎症性疾病,破骨细胞的异常活化是发病的重要原因之一。病理环境下骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)外泌体对破骨细胞的作用及影响尚不明确。本研究分析了PMOP环境下,BMSCs外泌体(exosome,Exo)对破骨细胞分化的调控作用,对于明确骨质疏松的发病机制具有至关重要的意义。方法:分别从正常和绝经后骨质疏松患者骨髓中提取BMSCs,通过超速离心联合Exoquick试剂盒分别提取两种细胞的Exo,即正常BMSCs外泌体(healthyExo,H-Exo)和绝经后骨质疏松骨髓间充质干细胞外泌体(postmenopause osteoporosis-Exo,P-Exo),并通过透射电子显微镜(TEM),纳米颗粒示踪分析技术(NTA)、Western blot对分离的外泌体进行鉴定;两种不同的外泌体被引入RAW264.7细胞中,以便通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、Western blot分析和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色来评估RAW264.7细胞中破骨分化相关指标的表达。同时,使用Western blot和ELISA方法来测定这两种外泌体中OPG/RANKL蛋白的表达水平。实验数据通过SPSS 24.0软件进行统计分析。结果:对提取后的两种外泌体进行形态学比较发现,与H-Exo相比,P-Exo直径更大,P-Exo能够促进RAW264.7细胞破骨分化标志性基因NFATC1和Trap mRNA及蛋白的表达,Trap染色可见分化的破骨细胞,Western blot及ELISA检测两种外泌体OPG/RANKL的表达发现,与H-Exo相比,P-Exo内OPG的表达量下降,而RANKL表达量升高。结论:绝经后骨质疏松中骨吸收增加,可能是炎症微环境下,BMSCs外泌体通过传递RANKL,促进破骨细胞分化引起的。此项研究为深入研究骨质疏松病因的开辟了新的途径,并为骨质疏松的治疗提供了新的治疗靶点。

骨保护素(Opg)基因敲除小鼠发生高转换型骨质疏松和动脉钙化(英文)

骨质疏松以及动脉钙化均是危害极大的临床常见病变,骨保护素(OPG)可能是联系两者的分子之一.构建替换型载体pXpPNT-OPG,利用同源重组,将编码前3个蛋白质结构域的小鼠Opg基因组第二外显子序列剔除掉.通过胚胎干细胞(ES)基因打靶获得了正确重组的ES细胞克隆,ES细胞显微注射后获得嵌合体小鼠,交配传代获得杂合子和纯合子小鼠.RT-PCR和蛋白质印迹实验结果显示,纯合子小鼠没有Opg基因的表达.纯合子小鼠骨量丢失明显,骨生物力学指标明显下降,发生严重的骨质疏松,此外,还有50%以上的纯合子小鼠在早期出现动脉中层钙化.小鼠破骨功能亢进,与此同时,成熟成骨细胞数量增加,矿化功能强于野生型.Opg基因缺失小鼠骨中钙和磷大量流失,而血清中水平没有变化,这提示钙磷代谢异常不是OPG缺失导致动脉钙化的原因.对建立的Opg基因敲除小鼠模型进一步深入的研究,将有助于说明动脉钙化和骨质疏松症相互联系的分子机制,为防治骨质疏松症和动脉钙化的并发提供理论基础支持.

马来酸桂哌齐特对脑梗死老年患者可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体、骨保护素的影响

脑梗死后患者血清及内环境中细胞因子常异常表达，近年人们关注较多的是可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（sTRAIL）在脑梗死中的作用，STRAIL是细胞凋亡的死亡受体配体，参与神经细胞变性和坏死的全过程，与脑梗死的面积有关。骨保护素（OPG）是目前研究最多的TRAIL的一个受体，STRAIL和OPG对促进脑梗死及继发的脑水肿有重要作用。马来酸桂哌齐特是一种新的哌嗪类钙拮抗剂，具有扩张血管和促进细胞营养代谢的双重作用。本研究观察老年脑梗死患者应用马来酸桂哌齐特治疗后血清中STRAIL和OPG表达及其临床价值。

雄激素对体外成骨细胞OPG及其配体基因表达的影响

目的检测小鼠胎鼠成骨细胞体外培养并将不同浓度雄激素干预后,OPG和OPGLmRNA表达的变化,探讨雄激素在成骨细胞介导破骨细胞分化、活化过程中的调控机制。方法分离得到小鼠胎鼠颅盖骨成骨细胞,培养传代并选择第二代细胞用于实验;对第二代成骨细胞实施含10-10mol/L、10-9mol/L、10-8mol/L3种浓度雄激素的培养液干预;抽提细胞RNA,采用RT-PCR方法半定量观察成骨细胞中OPG和OPGL基因mRNA表达的变化。结果实验选用的各浓度组均未出现细胞毒性反应,雄激素干预使成骨细胞中OPG基因表达上调,而OPGL与OPG比率随时间呈递减趋势。结论雄激素可以特异性地在转录水平调节成骨细胞中OPG和OPGL基因的表达。

骨保护素与急性冠脉综合征的相关性研究

目的:探讨血清骨保护素(OPG)水平与急性冠脉综合征(ACS)的关系。方法:选择急性心肌梗死(AMI)组20例、不稳定型心绞痛(UAP)20例、稳定型心绞痛(SAP)20例、对照组20例,采用酶联免疫吸附法(ELLSA)检测患者血清OPG水平。结果:AMI组、UAP组血清OPG水平较SAP和对照组明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);AMI组较UAP组OPG水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);SAP组和对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:血清OPG水平的升高有可能反应ACS的发生、发展程度。

增龄因素对微种植体周围组织骨保护素及配体mRNA表达的影响

目的:分析正畸力作用下局部骨重建差异,探讨增龄因素对微种植体支抗稳定性的影响。方法:以3月龄和6月龄雄性新西兰兔20只为实验动物,每组10只,在兔双侧上颌骨各植入微种植体1枚,共40枚。愈合3周后右侧加载,加载3周后处死,RT-PCR法检测微种植体周围骨组织骨保护素(OPG)及其配体(RANKL)mRNA的表达,比较幼年兔和成年兔微种植体支抗周围骨组织中表达的差异。结果:未加载的微种植体周围骨中OPG、RANKL mRNA表达3月龄组高于6月龄组。加载3周后的微种植体周围骨组织OPG mRNA表达均降低,3月龄组加载压力侧降低最明显;RANKL mRNA表达均升高,3月龄组加载压力侧升高最明显。加载后RANKL/OPG比值均升高,3月龄组压力侧升高最多。结论:3月龄组骨转换活跃,加载后微种植体周围尤其是压力侧骨吸收显著增强,可能导致微种植体支抗稳定性下降。6月龄组微种植体支抗周围骨重建相对平缓,有利于种植体的稳定。

基于OPG/RANKL信号通路探讨黄精多糖对糖尿病大鼠骨质疏松骨代谢的影响

目的基于骨保护素/核因子κB受体活化因子配体(OPG/RANKL)信号通路探讨黄精多糖(PSP)对糖尿病大鼠骨质疏松骨代谢的影响及作用机制。方法选取50只2月龄雄性Wistar大鼠并随机分为对照组、糖尿病骨质疏松(DOP)模型组,高、中、低PSP(H-PSP、M-PSP、L-PSP)组各10只,DOP模型组和PSP组腹腔注射链脲佐菌素(STZ)后饲喂20 w建立DOP模型,造模成功后对照组和DOP模型组灌胃0.9%氯化钠溶液,剂量为10 ml/(kg·d),H-PSP、M-PSP、L-PSP组灌胃PSP溶液,剂量分别为700、400、200 mg/(kg·d),每周检测大鼠体质量。给药8 w后,双能X线骨密度仪检测大鼠股骨骨密度(BMD),酶联免疫吸附试验测定大鼠血清中骨钙素(OC)及尿液中脱氧嘧啶啉(DPD)含量,全自动生化仪检测血清中碱性磷酸酶(ALP)、抗酒石酸性磷酸酶(TRAP)、钙(Ca)、磷(P)及尿钙磷和肌酐(Cre)含量。Western印迹检测股骨OPG、RANKL蛋白表达。结果与对照组比较,造模成功后DOP及PSP组体质量显著增加(P<0.05);给药4 w后,H-PSP、M-PSP组体质量均较模型组明显降低(P<0.05)。给药8 w后,DOP组股骨BMD较对照组显著降低(P<0.05);H-PSP、M-PSP组BMD均较DOP模型组明显升高(P<0.05)。与对照组比较,DOP模型组血清ALP、OC、TRAP、Ca、P及尿Ca、P、DPD/Cre含量显著增加(P<0.05);PSP各剂量组血清ALP、OC、TRAP、Ca、P及尿Ca、P、DPD/Cre均较DOP模型组均有不同程度降低,H-PSP组差异显著(P<0.05)。PSP组股骨组织中RANKL蛋白表达水平较DOP模型组明显降低(P<0.05);各组股骨组织OPG蛋白表达水平均明显升高,H-PSP、M-PSP组与DOP干预组差异有统计学意义(P<0.05)。结论PSP可调节DOP大鼠骨代谢平衡,提高股骨骨密度,对骨质疏松具有改善作用,其作用机制可能与PSP提高OPG蛋白表达和降低RANKL蛋白表达有关。

督灸联合威伐光治疗原发性骨质疏松的临床观察及对OPG/RANKL系统的影响

目的探讨督灸联合光疗对原发性骨质疏松(POP)的临床疗效及对血清骨保护素(OPG)、核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响,从骨代谢的角度探讨其作用机制。方法72例POP患者随机分为对照组36例和治疗组36例。对照组给予口服碳酸钙和阿法骨化醇治疗,治疗组在对照组基础上使用督灸联合威伐光照射疗法。3个月后测量两组治疗前、治疗后中医证候评分、疼痛视觉模拟评分(VAS)、Oswestry功能障碍指数(ODI)评分及血清OPG、RANKL水平变化。结果治疗组临床总有效率(91.1%)显著高于对照组(80.0%,P<0.05)。与治疗前比较,两组治疗后中医证候评分、VAS、ODI评分及RANKL水平显著降低,血清OPG水平显著升高(均P<0.01);治疗后与对照组比较,治疗组中医证候评分、VAS、ODI评分及RANKL水平显著降低,血清OPG水平及OPG/RANKL比值显著升高(P<0.01,P<0.05)。结论督灸联合光疗可有效改善骨质疏松,其机制可能与调节血清OPG、RANKL的水平有关。

2型糖尿病并发周围血管病变患者血清骨代谢相关因子水平变化及其意义

目的 观察2型糖尿病(T2DM)并发糖尿病周围血管病(DPV)患者血清骨代谢相关因子[血清骨桥蛋白(OPN)、骨保护素(OPG)、骨钙素(OC)、维生素D(VD)]水平变化,并评估其对T2DM并发DPV的预测效能,为T2DM并发DPV的早期诊断提供新的生物标志物。方法 纳入111例T2DM患者,根据是否并发DPV(DPV)分为单纯T2DM组49例,DPV组62例。采用EILSA法检测血清骨桥蛋白(OPN)、骨保护素(OPG),电化学发光法检测血清骨钙素(OC),化学发光法检测血清维生素D(VD)。采用单因素及多因素Logistic回归分析T2DM并发DPV的影响因素,Spearman相关性分析血清OPN、OPG、OC水平与T2DM并发DPV患者糖尿病相关危险因素(年龄、病程、血压、血糖、血脂)的关系,受试者工作特征曲线(ROC)评估血清OPN、OPG、OC、VD水平对T2DM并发DPV的预测效能。结果 与单纯T2DM组对比,DPV组血清OPN、OPG水平高(P<0.05),血清OC、VD水平低(P<0.05)。血清OPN、OPG、OC、VD是T2DM并发DPV的影响因素(P均<0.05),血清OPN、OC是T2DM并发DPV的独立影响因素(P均<0.05)。Spearman相关性分析显示,血清OPN水平与T2DM并发DPV患者年龄、糖尿病病程及收缩压呈正相关,与TG呈负相关;血清OPG水平与糖尿病病程、HbA1c、TC、HDL-C及LDL-C呈正相关;血清OC水平与糖尿病病程呈负相关(P均<0.05)。血清OPN、OPG、OC及VD联合预测T2DM患者发生DPV的AUC为0.756,敏感度61.3%,特异度89.8%。结论 T2DM并发DPV患者血清OPN、OPG水平升高,OC、VD水平降低,血清OPN、OC为T2DM患者发生DPV的独立影响因素,四者联合对于T2DM患者并发DPV有一定预测效能。

活血通络胶囊通过OPG/RANKL/PDGF-BB通路对激素性股骨头坏死模型大鼠的干预作用

目的探讨活血通络胶囊(HXTL)对激素性股骨头坏死干预作用的具体机制,同时为防治新型冠状病毒肺炎康复患者的激素性股骨头坏死提供选择。方法将18只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组。对照组和模型组给予生理盐水灌胃,治疗组从第3天到第28天给予活血通络胶囊0.63 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃。采用20 mg·kg^(-1)·d^(-1)甲基强的松龙诱导复制激素性股骨头坏死模型,每周注射3次,连续注射3周。对照组注射等体积生理盐水。模型组股骨头骨小梁稀疏中断,间隙增大证实造模成功。第28天取材,利用Micro-CT和苏木精-伊红染色评估活血通络胶囊对股骨头骨小梁的干预作用,酶联免疫吸附测定法检测骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、β-连环蛋白(β-catenin)、血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)的表达量。结果Micro-CT图像显示,与对照组比较,模型组大鼠股骨头骨小梁稀疏、断裂、排列紊乱,而活血通络胶囊可明显减轻激素性股骨头坏死的骨质丢失;而与模型组比较,治疗组骨体积分数、骨小梁数目和骨小梁厚度明显升高(P<0.05),骨小梁分离度明显减小(P<0.05)。苏木精-伊红染色结果显示,与对照组比较,模型组空骨陷窝明显增多,骨陷窝内骨细胞形态异常;活血通络胶囊可明显改善上述病理变化。定量分析结果显示,与对照组比较,模型组大鼠股骨头骨小梁面积明显减小(P<0.05),空骨陷窝率明显增大(P<0.01);而与模型组比较,治疗组空骨陷窝率明显减少(P<0.01),骨小梁面积明显增大(P<0.05)。酶联免疫吸附测定法结果显示,与模型组比较,活血通络胶囊可促进OPG、RANKL、β-catenin、PDGF-BB蛋白含量增加(P<0.05)。结论活血通络胶囊可改善激素性股骨头坏死的股骨头头内骨小梁结构,其机制可能与调控OPG/RANKL/PDGF-BB信号有关,这在指导新冠肺炎康复患者防治股骨头坏死方面具有重要现实意义。

类风湿关节炎患者OPG、瘦素表达水平与骨质疏松相关性研究

目的:探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血的骨保护素(OPG)、瘦素水平变化及其对RA患者骨质疏松的影响。方法:选择我院收入的类风湿关节炎患者共72例,另外选择60例正常人作为健康对照组,对72例患者给予治疗,评估患者血清OPG、瘦素水平,并对比不同骨质疏松程度下患者的OPG、瘦素水平差异。结果:本组72例类风湿关节炎患者均给予治疗,其中缓解44例,未缓解28例,未缓解的28例患者中16例治疗有效,12例治疗无效。RA组治疗前OPG显著低于对照组及治疗后,瘦素显著高于对照组及治疗后,差异有统计学意义(P<0.05)。缓解组OPG水平显著高于有效组及无效组,瘦素水平显著低于有效组及无效组,差异有统计学意义(P<0.05),有效组OPG水平显著高于无效组,瘦素水平低于无效组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组骨质疏松发生情况对比显示,RA组骨质疏松率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),RA组及对照组骨质疏松患者的OPG表达显著低于骨量正常及骨量减少患者(P<0.05),瘦素表达显著高于骨量正常及骨量减少患者(P<0.05)。结论:RA患者外周血OPG水平明显降低,RA患者较易发生骨质疏松,OPG水平越低,患者骨质疏松越严重。RA患者外周血瘦素显著升高,RA水平与患者骨质水平呈负相关。

失神经支配兔下颌骨骨折愈合过程中CGRP对OPG/RANKL表达的影响

目的 明了失神经支配兔下颌骨骨折愈合过程中CGRP对OPG/RANKL表达的影响及其调节骨折愈合的机制。方法 40只新西兰白兔随机分为:单纯下颌骨骨折组及下齿槽神经离断+下颌骨骨折组。分别于骨折术后7、14、2 1、2 8d处死,取骨痂标本行HE及免疫组织化学染色。结果 单纯骨折组骨折后7d骨痂中即可见到降钙素基因相关肽(CGRP)阳性神经纤维,沿血管分布,14、2 1d在编织骨边缘有大量的CGRP阳性神经纤维,2 8d仍较多。同时骨折后7d骨保护素(OPG)强阳性表达,以后逐渐下降,但均保持较高水平的表达。破骨细胞分化因子(RANKL)的表达高峰则在骨折后第14天;而失神经骨折组除7d骨痂中见CGRP阳性表达外,7d后骨痂中仅有极低水平的CGRP表达。同样,OPG在骨折后7d在骨痂中阳性表达以后持续弱阳性表达。RANKL则持续强阳性表达。结论 在骨折愈合过程中,CGRP能够上调OPG/RANKL的表达量的比值,从而参与骨折愈合过程的调节,失神经支配失去了CGRP对OPG/RANKL表达的调节作用,不利于骨折愈合。

ON、PINP、OPG、IGF-1、TGF-β与股骨颈BMD相关性研究

目的研究骨粘连蛋白(ON)、Ⅰ型原胶原N-端前肽(PINP)、骨保护素(OPG)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)、转化生长因子β(TGF-β)与股骨颈骨密度(BMD)的相关性。方法采用美国Hologic公司Discovery WA型骨密度仪检测股骨颈BMD,采用美国Thermo公司全自动酶标免疫分析仪检测ON、PINP、OPG、IGF-1、TGF-β。将913例受试者检测结果按10岁为年龄段分组,应用SPSS 13.0分析软件进行统计分析。结果男性与女性正常组血清ON、PINP、IGF-1、TGF-β水平均明显高于骨质疏松组,而正常组血清OPG水平均明显低于骨质疏松组(P<0.05)。女性血清ON、PINP、IGF-1、TGF-β水平与股骨颈BMD呈正相关(P<0.05),OPG水平与股骨颈BMD呈负相关(P<0.05)。男性血清ON、IGF-1、TGF-β水平与股骨颈BMD呈正相关(P<0.05),OPG水平与股骨颈BMD呈负相关(P<0.05)。结论血清ON、PINP、IGF-1、TGF-β水平与股骨颈BMD正相关,血清OPG水平与股骨颈BMD负相关。ON、PINP、OPG、IGF-1、TGF-β在骨代谢过程中相互作用影响骨质量,与股骨颈BMD存在重要关联。

复元胶囊对膝骨关节炎大鼠IL-1β、OPG和OPGL mRNA表达的影响

目的观察复元胶囊对膝骨关节炎(OA)大鼠关节软骨中白细胞介素(IL)1β、骨保护素(OPG)及其配体(OPGL)的影响。方法 60只雄性SD大鼠随机分为6组:①正常组10只,不给予任何处理;②模型组10只,Hulth法造模后用生理盐水10 ml/d灌胃;③抗骨增生胶囊组10只,Hulth法造模后每日给予抗骨增生胶囊灌胃;④复元胶囊高、中、低组各10只,Hulth法造模后用不同浓度复元胶囊灌胃。于给药第12周处死大鼠,取各组大鼠膝关节内踝关节软骨标本,观察大体结构并分级;HE染色,观察其镜下结构;反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)法检测膝关节软骨中IL-1β、OPG及OPGL mRNA的表达含量。结果动物模型造模成功,HE染色评分中,复元胶囊高、中剂量组及抗骨增生胶囊组软骨退变程度较模型组明显减轻(P<0.01),复元胶囊组高剂量组OPG mRNA的表达量显著高于模型组(P<0.01),IL-1βmRNA及OPGL mRNA的表达显著低于模型组(P<0.05),OPG与OPGL比率显著高于模型组(P<0.01)和正常组(P<0.01)。结论复元胶囊能够上调软骨中OPG mRNA的表达,下调IL-1βmRNA及OPGL mRNA的表达,使OPG与OPGL的比率上升,表明对软骨退变及软骨下骨的破坏有一定的预防作用。

LC调节人成骨样MG-63细胞表达OPG、RANKL分子机制的研究

目的探讨大黄酸哌嗪雌酚酮(rhein-piperizinyl-estrone,命名为LC)调节人成骨样MG-63细胞表达骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、NF-κB激活受体配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)的分子机制。方法在原工作基础上,选择兼有两种雌激素受体(estrogen receptor,ER)亚型表达的人成骨样MG-63细胞为研究模型,采用RT-PCR、免疫印迹及小RNA干扰等技术,探讨LC对人成骨细胞产生的骨吸收调节因子OPG、RANKL表达的作用及作用机制。结果 LC可上调MG-63细胞OPG表达及下调RANKL表达,该作用可被纯ER阻断剂ICI 182,780完全阻断,应用小RNA干扰技术进一步证实LC对成骨细胞OPG、RANKL表达的调节作用主要是由ERα介导的。结论 LC调节成骨细胞表达OPG、RANKL是经ER途径、主要是由ERα介导的。

乳腺癌骨转移患者血液OSC、OPG、NTX及与尿液NTX水平相关性探讨

目的:探讨乳腺癌骨转移患者血液骨钙素(OSC)、骨保护素(OPG)、Ⅰ型胶原吡啶交联氨基末端肽(NTX)及与尿液NTX水平的相关性。方法:通过对比40例乳腺癌骨转移患者(实验组)和40例健康女性(对照组)血液OSC、OPG、NTX和尿液NTX水平,比较实验组治疗前和对照组的血液OSC、OPG、NTX和尿液NTX水平的差异。评估血液OSC与血液NTX水平相关性,血液OPG与血液NTX水平相关性,血液和尿液NTX水平相关性。结果:实验组中血液OSC、OPG和NTX水平比对照组要高,两组的OSC差异具有统计学意义(P<0.001),两组的OPG差异具有统计学意义(P<0.003),两组的NTX差异具有统计学意义(P<0.001)。相关性统计结果显示血液中的NTX的升高和血液中的OSC及OPG水平具有关性,血液NTX和OSC之间的r=0.768(P<0.001),血液NTX和OPG之间的r=0.685(P<0.001),差异均具有统计学意义;血液NTX和尿液NTX之间也具有相关性r=0.638(P<0.005),差异具有统计学意义。结论:乳腺癌骨转移的患者血液OSC、OPG、NTX及与尿液NTX水平之间具有一定关系,且有一定的临床意义。

不同强度力学刺激对大鼠上颌骨MGF、OPG、RANKL影响

目的分析力生长因子(MGF)、骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)在不同大小咀嚼力大鼠上颌骨中的表达,探讨力学信号在颌骨骨重建中的传导,揭示力学刺激对颌骨骨重建的调节机制。方法雌性健康SD大鼠40只,牙列完好,鼠龄2个月,体质量200~240 g。随机分为2组,喂食不同硬度饲料,建立SD大鼠颌骨不同力学刺激动物模型。一组软食喂养(软食组,硬度123 N),一组硬食喂养(硬食组,硬度216 N)。大鼠在实验开始后2、4个月时分2次处死,取上颌骨第三磨牙区骨组织进行显微CT检测骨组织形态计量学指标,应用Western blot方法检测MGF、OPG、RANKL蛋白质表达,实时荧光定量聚合酶链反应(real time-PCR)方法检测MGF、OPG、RANKL基因表达。结果显微CT检测发现,大鼠上颌骨骨体积分数、骨小梁宽度硬食组较软食组增加显著,骨小梁分离度硬食组较软食组降低显著(t_(2个月)=5.740、3.785、-9.228,t_(4个月)=2.461、3.789、-3.175,P<0.05);大鼠上颌骨中MGF和OPG蛋白及基因表达硬食组较软食组同时上调(t_(2个月蛋白结果)=4.916、4.718,t_(4个月蛋白结果)=7.013、6.726,t_(2个月基因结果)=-12.066、-3.081,t_(4个月基因结果)=-3.446、-10.903,P<0.05),RANKL蛋白及基因表达硬食组较软食组降低(t_(2个月蛋白结果)=-12.222,t_(4个月蛋白结果)=-10.416,t_(2个月基因结果)=-6.722,t_(4个月基因结果)=-3.824,P<0.05);4个月结果与2个月结果相比,MGF、OPG和RANKL蛋白及基因表达均有变化,但不显著。结论较高强度的咀嚼力能够促进大鼠颌骨的生长,促进颌骨骨中MGF和OPG的表达,抑制RANKL的表达,表明力学刺激能够调节MGF和OPG/RANKL/RANK分子系统的表达水平。

中药三七对激素性股骨头坏死兔股骨头微结构的影响及其机制

目的:探究三七对激素性股骨头坏死兔股骨头微结构的影响及其机制。方法:选取洁净级新西兰兔120只,随机选取其中30只作为空白对照组D组,其他90只进行造模,随机分为A、B、C3组,每组各30只。A组予以高剂量三七提取液,B组予以低剂量三七提取液,C组作为造模空白组,C组和D组予以生理盐水。对比治疗4周、8周和12周后,4组兔股骨头正常区面积(NR)、坏死区面积(ROE)、骨表面积/组织体积(BS/TV)、骨体积/组织体积(BV/TV)以及血管内皮生长因子(VEGF)、骨保护素(OPG)和过氧化物酶增值物激活受体γ(PPARγ)的变化情况。结果:经过4周、8周和12周治疗后,A组、B组兔股骨头NR、ROE和ROE/NR指标变化情况优于C组、D组(P<0.05),治疗时间越长效果越好,同时A组指标优于B组指标,差异有统计学意义(P<0.05)。经过4周、8周和12周治疗后,A组、B组兔股骨头BS/TV和BV/TV指标变化情况优于C组、D组(P<0.05),治疗时间越长效果越好,同时A组指标优于B组指标,差异有统计学意义(P<0.05)。经过4周、8周和12周治疗后,A组、B组兔股骨头VEGF和OPG相对表达量优于C组、D组(P<0.05),治疗时间越长效果越好,同时A组指标优于B组指标,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:三七提取液可以有效改善激素性股骨头坏死兔股骨头坏死组织的修复,提高骨密度,对其微观结构状态进行改善,同时提高VEGF和OPCG的作用效果。

结核分枝杆菌裂解物诱导破骨细胞及OPG/RANKL表达变化实验研究

目的探讨结核分枝杆菌超声裂解产物(Mt sonicate)体外诱导小鼠破骨细胞的形成及OPG/RANKL表达变化与裂解物的浓度、时间的依赖性,研究结核杆菌引起骨破坏的相关机制。方法原代培养的BALB/c小鼠骨髓基质细胞以高、中、低浓度的Mt sonicate进行干预,在1、3、7、14d进行TRAP染色,观察破骨细胞的形成,并采用Realtime RT-PCR检测各浓度、时间的骨保护素(OPG)/核因子Kappa B受体活化因子配基(RANKL)mRNA表达。结果 Mt sonicate在体外可诱导小鼠骨髓基质细胞向破骨细胞的转化;破骨细胞数量与Mt sonicate浓度在3、7d时呈显著的正相关(3d:r=0.417,P<0.05;7d:r=0.463,P<0.05);3个浓度干预下,破骨细胞数量在1～7d逐渐增多,7～14d则逐渐减少。7d时,高、中、低浓度Mt sonicate干预下OPG/RANKL mRNA表达比分别为(1.35±0.11)、(7.38±1.15)、(9.85±1.26)。结论小鼠骨髓基质细胞向破骨细胞转化的实验中,存在结核分枝杆菌裂解物的浓度和时间依赖性,且与OPG/RANKL mRNA的表达比呈负相关,破骨细胞形成时的数量与活性受到结核分枝杆菌的调控,其分子机制与OPG/RANKL系统的变化密切相关。