血清骨硬化蛋白、OPG、OPG/TRAIL比值对高血压伴慢性心力衰竭患者发生主要不良心血管事件的预测价值

目的探讨血清骨硬化蛋白、骨保护素(OPG)/肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)比值对高血压伴慢性心力衰竭(CHF)患者发生主要不良心血管事件(MACE)的预测价值。方法选取2019年10月至2022年10月于该院就诊的134例高血压伴CHF患者作为研究对象,根据患者治疗1年内是否发生MACE将其分为MACE组(46例)和无MACE组(88例)。另选取同期于该院进行体检的74例健康者作为对照组。采用酶联免疫吸附实验检测3组血清骨硬化蛋白、OPG和TRAIL水平。收集所有患者的临床资料(包括冠心病史、糖尿病史、收缩压、舒张压)。检测3组血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-10水平。采用Pearson相关分析高血压伴CHF患者血清骨硬化蛋白、OPG和TRAIL水平与相关实验室指标水平的关系。采用多因素Logistic回归分析高血压伴CHF患者发生MACE的危险因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估血清骨硬化蛋白、OPG/TRAIL比值单独及2项指标联合检测对MACE的预测价值。结果无MACE组和MACE组血清骨硬化蛋白、OPG水平及OPG/TRAIL比值均明显高于对照组,TRAIL水平明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。MACE组血清骨硬化蛋白、OPG水平及OPG/TRAIL比值均明显高于无MACE组,TRAIL水平明显低于无MACE组,差异均有统计学意义(P<0.05)。MACE组TNF-α、IL-10、IL-6水平均高于无MACE组,差异均有统计学意义(P<0.05)。MACE组和无MACE组冠心病史和糖尿病史患者比例、收缩压、舒张压以及TC、TG、HDL-C、LDL-C水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。高血压伴CHF患者血清骨硬化蛋白、OPG水平与TNF-α、IL-10、IL-6水平均呈正相关(P<0.05),TRAIL水平与TNF-α、IL-10、IL-6水平均呈负相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,骨硬化蛋白水平升高、OPG水平升高均为高血压伴CHF患者发生MACE的危险因素(P<0.05),而TRAIL水平升高为高血压伴CHF患者发生MACE的保护因素(P<0.05)。血清骨硬化蛋白、OPG/TRAIL比值单独及2项指标联合检测预测高血压伴CHF患者发生MACE的曲线下面积(AUC)分别为0.847、0.803、0.927,且2项指标联合检测的AUC优于血清骨硬化蛋白、OPG/TRAIL比值单独检测的AUC(Z=2.350、2.824,P<0.05)。结论高血压伴CHF患者血清骨硬化蛋白、OPG/TRAIL比值联合检测患者预后发生MACE的预测价值较高。

基于AMPK/sirt1/RANKL/OPG通路研究补阳还五汤促进骨质疏松性骨折大鼠愈合的机制

目的基于AMP活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子(sirt)1/核转录因子(NF)-κB受体活化蛋白配体(RANKL)/骨保护素(OPG)信号通路,探究补阳还五汤促进骨质疏松性骨折大鼠骨折愈合的机制。方法将大鼠随机分成假手术组、模型组、补阳还五汤低剂量组(6.25 g/kg)、补阳还五汤中剂量组(12.50 g/kg)和补阳还五汤高剂量组(25.00 g/kg)。除假手术组外,其余组均构建骨质疏松性骨折模型,并给予相应剂量药物干预。检测大鼠骨密度(BMD)值、骨折愈合评分及骨痂体积;自动生化分析仪测定血清碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素、钙和磷水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测股骨组织中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠骨痂组织的病理形态;Western印迹检测股骨组织中AMPK/sirt1/RANKL/OPG通路蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组骨痂骨小梁分布稀疏,成骨细胞大量减少且有纤维组织生成,骨痂体积、血清中ALP、骨钙素、钙和磷水平及股骨组织中MDA水平、RANKL蛋白水平显著升高(P<0.05),BMD值、骨折愈合评分、骨组织中SOD和GSH-Px水平和AMPK、sirt1、OPG蛋白水平显著降低(P<0.05)。与模型组相比,补阳还五汤低、中、高剂量组骨痂骨小梁分布较为密集,成骨细胞增加,骨痂体积、血清中ALP、骨钙素、钙和磷水平及股骨组织中MDA水平、RANKL蛋白水平显著降低(P<0.05),BMD值、骨折愈合评分、骨组织中SOD和GSH-Px水平和AMPK、sirt1、OPG蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论补阳还五汤可能通过抑制氧化应激反应,调节AMPK/sirt1/RANKL/OPG通路,发挥对骨质疏松骨折大鼠的治疗作用。

骨质疏松环境下骨髓间充质干细胞外泌体通过OPG/RANKL调控破骨分化

目的:绝经后骨质疏松PMOP(postmenopause osteoporosis)是一种慢性炎症性疾病,破骨细胞的异常活化是发病的重要原因之一。病理环境下骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)外泌体对破骨细胞的作用及影响尚不明确。本研究分析了PMOP环境下,BMSCs外泌体(exosome,Exo)对破骨细胞分化的调控作用,对于明确骨质疏松的发病机制具有至关重要的意义。方法:分别从正常和绝经后骨质疏松患者骨髓中提取BMSCs,通过超速离心联合Exoquick试剂盒分别提取两种细胞的Exo,即正常BMSCs外泌体(healthyExo,H-Exo)和绝经后骨质疏松骨髓间充质干细胞外泌体(postmenopause osteoporosis-Exo,P-Exo),并通过透射电子显微镜(TEM),纳米颗粒示踪分析技术(NTA)、Western blot对分离的外泌体进行鉴定;两种不同的外泌体被引入RAW264.7细胞中,以便通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、Western blot分析和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色来评估RAW264.7细胞中破骨分化相关指标的表达。同时,使用Western blot和ELISA方法来测定这两种外泌体中OPG/RANKL蛋白的表达水平。实验数据通过SPSS 24.0软件进行统计分析。结果:对提取后的两种外泌体进行形态学比较发现,与H-Exo相比,P-Exo直径更大,P-Exo能够促进RAW264.7细胞破骨分化标志性基因NFATC1和Trap mRNA及蛋白的表达,Trap染色可见分化的破骨细胞,Western blot及ELISA检测两种外泌体OPG/RANKL的表达发现,与H-Exo相比,P-Exo内OPG的表达量下降,而RANKL表达量升高。结论:绝经后骨质疏松中骨吸收增加,可能是炎症微环境下,BMSCs外泌体通过传递RANKL,促进破骨细胞分化引起的。此项研究为深入研究骨质疏松病因的开辟了新的途径,并为骨质疏松的治疗提供了新的治疗靶点。

重组人骨保护素片段OPG^(179)与人血清白蛋白在毕赤酵母中的融合表达

目的:在毕赤酵母中融合表达人骨保护素(OPG)片段OPG179与人血清白蛋白(HSA)。方法:通过RT-PCR扩增获得OPG179基因,构建表达质粒pHILD2-rhOPG179-HSA,转化至毕赤酵母菌中进行表达、纯化,对分泌表达产物进行SDS-PAGE及Western印迹检测。结果:酶切鉴定与测序结果显示重组表达质粒pHILD2-rhOPG179-HSA正确;经Western印迹检测,融合蛋白rhOPG179-HSA的相对分子质量约为97×103,符合预期值;rhHSA-OPG179在毕赤酵母中的表达量约为80 mg/L。结论:表达并纯化制备了重组骨保护素片段与人血清白蛋白的融合蛋白,为后续的生物学活性研究奠定了一定的基础。

模拟微重力条件下重组骨保护素融合蛋白(rhOPG-HSA)对破骨前体细胞Raw264.7抑制效应的研究

目的探讨在模拟微重力(Simulated microgravity,SMG)条件下重组骨保护素融合蛋白(rhOPG-HSA)对破骨前体细胞Raw264.7的抑制效应。方法在SMG条件下,分别培养破骨前体细胞Raw264.7与成骨细胞MC3T3-E1,利用ELISA法检测MC3T3-E1细胞培养液中骨保护素活性,用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)以及可溶性破骨细胞分化因子(sRANKL)诱导Raw264.7分化为破骨细胞,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法鉴定rhOPG-HSA抑制破骨细胞能力,利用半定量RT-PCR测定破骨细胞中TRAP的表达。结果 SMG条件下,骨保护素活性在72 h后显著降低(P<0.01);Raw264.7细胞经M-CSF及sRANKL诱导3、4、5 d后,与阴性对照组相比,TRAP阳性染色的破骨细胞用rhOPG-HSA处理后明显减少(P<0.05),RT-PCR测定结果表明破骨细胞TRAP的表达降低(P<0.05)。结论 SMG条件下,rhOPG-HSA能够抑制破骨前体细胞Raw264.7的分化。

骨保护素(Opg)基因敲除小鼠发生高转换型骨质疏松和动脉钙化(英文)

骨质疏松以及动脉钙化均是危害极大的临床常见病变,骨保护素(OPG)可能是联系两者的分子之一.构建替换型载体pXpPNT-OPG,利用同源重组,将编码前3个蛋白质结构域的小鼠Opg基因组第二外显子序列剔除掉.通过胚胎干细胞(ES)基因打靶获得了正确重组的ES细胞克隆,ES细胞显微注射后获得嵌合体小鼠,交配传代获得杂合子和纯合子小鼠.RT-PCR和蛋白质印迹实验结果显示,纯合子小鼠没有Opg基因的表达.纯合子小鼠骨量丢失明显,骨生物力学指标明显下降,发生严重的骨质疏松,此外,还有50%以上的纯合子小鼠在早期出现动脉中层钙化.小鼠破骨功能亢进,与此同时,成熟成骨细胞数量增加,矿化功能强于野生型.Opg基因缺失小鼠骨中钙和磷大量流失,而血清中水平没有变化,这提示钙磷代谢异常不是OPG缺失导致动脉钙化的原因.对建立的Opg基因敲除小鼠模型进一步深入的研究,将有助于说明动脉钙化和骨质疏松症相互联系的分子机制,为防治骨质疏松症和动脉钙化的并发提供理论基础支持.

密骨片对绝经后骨质疏松症骨密度、血清骨保护蛋白及其配体水平和骨代谢指标的影响

目的观察密骨片治疗绝经后骨质疏松症患者骨密度(BMD)、血清骨保护蛋白(OPG)和骨保护蛋白配体(OPGL)水平及骨代谢指标的变化。方法将年龄48～65岁的192名自然绝经的妇女进行骨密度测定,对其中160例骨质疏松妇女进行随机分组,其中密骨片组54例,仙灵骨葆组53例,乐力钙组53例;其余BMD正常32例作为对照组。各组均于用药前、后12、24周,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清OPG与OPGL水平、骨碱性磷酸酶(sBAP)、骨钙素(sOC)、Ⅰ型胶原交联C端肽(sCTx)和尿Ⅰ型胶原交联N端肽(uNTx),用双能X线吸收法(DEXA)测定腰椎正位、股骨颈、Ward’s三角和大粗隆的BMD。结果治疗24周后,密骨片组和仙灵骨葆组BMD均有不同程度的提高,OPGL、sBAP、sOC均有明显升高,而OPG、sCTx、uNTx/Cr明显下降,乐力钙组和对照组变化不明显。结论密骨片治疗绝经后骨质疏松症疗效较显著,与仙灵骨葆相仿。单纯服用钙剂不能治疗绝经后骨质疏松症,且继续骨流失。

改良型富血小板纤维蛋白与β⁃磷酸三钙复合物诱导成骨作用与机制

目的探讨改良型富血小板纤维蛋白(advanced platelet⁃rich fibrin,A⁃PRF)与β⁃磷酸三钙(β⁃tricalcium phosphate,β⁃TCP)构成比例对兔股骨缺损模型骨形成的作用及机制,为临床治疗骨缺损提供新思路。方法24只新西兰大白兔构建骨缺损模型并分为模型组、1∶1复合物组(A⁃PRF∶β⁃TCP=1∶1)、2∶1复合物组(A⁃PRF∶β⁃TCP=2∶1)与4∶1复合物组(A⁃PRF∶β⁃TCP=4∶1),每组6只。复合物组在骨缺损处填充复合材料,模型组不充填材料,8周后安乐法处死动物采标本。采用micro⁃CT测定股骨缺损区新生骨的骨密度(bone mineral densi⁃ty,BMD)、骨体积分数(bone volume fraction,BV/TV)、骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th)、骨小梁分离度(trabecular separation/spacing,Tb.Sp)。HE染色观察新骨及新生血管形成情况;扫描电镜观察新生骨组织的形态变化;酶联免疫法检测新生股骨组织中磷酸化丝裂原活化蛋白激酶p38(phospho⁃p38 mitogen activated pro⁃tein kinase,p⁃p38MAPK)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer⁃binding protein homologous pro⁃tein,CHOP)、磷酸化含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(phospho⁃cysteine aspartic protease⁃3,p⁃Caspase3)含量;实时定量PCR检测新生骨组织中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、骨形态发生蛋白⁃2(bone morphogenetic protein⁃2,BMP⁃2)、核因子κ⁃B配体受体致活剂(receptor activator of nuclear factor kappa⁃B ligand,RANKL)、p38MAPK的mRNA表达量;免疫组织化学法观察新生骨组织中OPG、BMP⁃2、RANKL、p⁃p38MAPK、p⁃Caspase3蛋白表达情况;荧光Tunel染色观察新生股骨组织中细胞凋亡情况。结果模型组股骨缺损区域骨形成缓慢,成骨质量差。与模型组相比,复合物组动物股骨缺损区域成骨情况良好,BMD、BV.TV、Tb.Th、Tb.N升高,Tb.Sp下降,新生股骨组织中见新生毛细血管形成;p⁃p38MAPK、CHOP、p⁃Caspase3蛋白表达降低,OPG、BMP⁃2的mRNA与蛋白表达升高,RANKL与p38MAPK的mRNA表达降低(P<0.05);各组新生骨组织中的凋亡检测表明2:1复合物组样本中细胞凋亡率最低(P<0.05);A⁃PRF∶β⁃TCP=2∶1的配比成骨效果最佳。结论由A⁃PRF与β⁃TCP组成复合物能促进OPG表达,抑制RANKL表达和p38MAPK磷酸化,减少新生骨组织细胞凋亡,促进成骨分化。

人牙周膜细胞骨保护因子和破骨细胞分化因子蛋白的表达及1α,25(OH)_2维生素D_3的调节

目的：研究人牙周膜细胞骨保护因子(osteoprotegerm，OPG)和破骨细胞分化因子(receptor activator nucle-ar factor kappa B ligand，RANKL)蛋白的表达，以及骨吸收促进因子1α，25(OH)_2维生素 D_3对 OPG 蛋白表达的影响。方法：用系列酶消化法体外培养人牙周膜细胞，用免疫细胞化学检测细胞上表达的 RANKL 蛋白，以酶联免疫吸附实验检测无外源性刺激以及1α，25(OH)_2维生素 D_3诱导2、4、6 d 时细胞分泌到培养基中的 OPG 蛋白。结果：人牙周膜细胞胞膜和胞浆上表达 RANKL 蛋白，分泌 OPG 蛋白到培养基中。1α，25(OH)_2维生素 D_3降低 OPG蛋白的分泌。结论：人牙周膜细胞表达 OPG 和 RANKL，1α，25(OH)_2维生素 D_3影响 OPG 的表达，推测其通过OPG/RANKL 通路参与骨改建。这一结论为进一步研究牙周膜细胞参与骨改建的机制打下基础。

杜仲对大鼠骨髓基质细胞骨桥蛋白和骨保护素表达的影响 水提液与醇提液有区别吗?

背景:以往实验证实杜仲能促进骨髓基质细胞向成骨细胞分化,但对促进成骨分化的分子机制报道很少。目的:观察中药杜仲水/醇提取物对大鼠骨髓基质细胞骨桥蛋白和骨保护素表达的影响方法:盐杜仲2g,分别加蒸馏水或甲醇至15mL,室温振荡1h,静置过夜后,15000r/min离心10min,弃沉淀。水浸上清不经处理即得水提取物;甲醇浸上清经真空浓缩,再加水至15mL溶解剩余物后,得醇提取物水、醇提取物,用0.22μm滤膜过滤后于-20℃保存。取2月龄SD大鼠6只,体外培养至第3代SD大鼠骨髓基质细胞进行杜仲水/醇提取物诱导,诱导物分为1×10-2,1×10-3,1×10-4和1×10-54个稀释度;阴性对照组加入PBS;诱导培养6d。以免疫细胞化学法测定诱导6d的骨髓基质细胞骨桥蛋白和骨保护素表达。应用反转录-聚合酶链反应方法测定1×10-3,1×10-4稀释度诱导3d的骨髓基质细胞骨桥蛋白和骨保护素的基因表达。结果与结论:细胞免疫化学显示,杜仲水/醇提取物对大鼠骨髓基质细胞骨桥蛋白的表达均有显著的刺激作用,以1×10-4的稀释度作用最强,且醇提取物的作用大于水提取物;骨保护素的表达却无显著变化。反转录-聚合酶链反应显示,水提取物对诱导3d后大鼠骨髓基质细胞骨桥蛋白的基因表达量显著高于醇提取物,骨保护素未检测出表达。证实杜仲水/醇提取物诱导骨髓基质细胞成骨分化与刺激骨桥蛋白表达相关,与骨保护素无关;水提取物促进骨髓基质细胞骨桥蛋白表达早于醇提取物。

重组人骨保护素与重组核因子κb活化因子受体蛋白对破骨前体细胞分化的影响

目的:对比重组人骨保护素(rhOPG-Fc)与重组核因子κb活化因子受体蛋白(rhRANK)对破骨前体细胞分化的影响。方法:采用成骨细胞与破骨前体细胞RAW264.7混合培养,在地塞米松、1,25(OH)2VitD3诱导下生成破骨细胞的方法。研究分3组:rhRANK组:10-5g/L;rhOPG-Fc组:10-5g/L;空白对照组。作用9d后观察破骨细胞数目和形态,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色阳性细胞个数,骨磨片吸收陷窝计数。结果:在空白对照组,小鼠成骨细胞与破骨前体细胞RAW264.7混合培养6d后,开始出现多核细胞,9d时可见大量成熟多核细胞,经TRAP染色证实为成熟破骨细胞,而rhRANK组及rhOPG-Fc组TRAP染色阳性多核细胞数较对照组均减少,特别是rhRANK组减少更明显。骨片吸收陷窝计数显示rhRANK组及rhOPG-Fc组较对照组也明显减少,而相对来说,rhRANK组较rhOPG-Fc组更少。结论:rhOPG-Fc与rhRANK均可以有效抑制破骨前体细胞分化成为成熟破骨细胞,且rhRANK较rhOPG-Fc抑制效果更明显。

人骨保护素(OPG)重组腺病毒的制备及其生物活性研究

采用RT PCR法得到人OPG的编码区cDNA ,克隆至穿梭质粒pShuttle,构建重组有OPG编码区cDNA的腺病毒DNA ,经PacI酶切线性化 ,在脂质体介导下转染HEK2 93细胞 ,制备重组腺病毒并测定病毒滴度约为 5× 10 6 ～1 5× 10 7pfu mL。体外感染小鼠成肌细胞C2C12 ,Westernblot及ELISA检测证实有OPG蛋白的表达 ,并可在细胞培养上清中持续表达 6周。感染OPG重组腺病毒的C2C12细胞生长状态良好、细胞周期无明显变化。将重组腺病毒加入体外培养的小鼠骨髓细胞的培养基中 ,诱导形成的破骨细胞数量及在象牙片上形成的吸收陷窝的数量显著减少 (P <0 0 1)。

关节炎性骨侵蚀和骨保护蛋白的作用

骨侵蚀 (boneerosion)是类风湿性关节炎的一个重要特征 .来自实验性关节炎的最近研究证据提示破骨细胞(osteoclast)是局灶性骨侵蚀的必需要素 .现在已经弄清楚的破骨细胞调节物有两种 :(1 )核因子кB受体性激活因子配体 (receptor activatorofnuclearfactorkappaBligand,RANKL) ,它能促进破骨细胞的成熟 ;(2 )骨保护蛋白 (osteoprote gerin ,OPG) ,它能阻止破骨细胞生成 (osteoclastogenesis) .本文将总结当今有关局灶性骨侵蚀中破骨细胞作用的知识 ;阐述OPG作为一种治疗手段抑制骨吸收的作用 ;并探讨OPG在抑制系统性、炎症性骨丢失方面作用的证据 .

复方丹参滴丸对动脉钙化组织中骨保护蛋白表达的影响

目的研究复方丹参滴丸(DSP)对钙化血管骨保护蛋白(OPG)表达的干预作用。方法28只SD大鼠随机分为对照组、维生素D3(V itD3)组和V itD3+DSP组(15粒.kg-1.d-1)。病理学检查V itD3诱导的血管钙化情况,电极法和自动生化仪酶法分别测定血管壁和骨组织钙含量,免疫组化检测钙化组织中OPG表达。结果病理学观察显示,成功建立V it D3诱发的血管钙化模型。与对照组比较,V it D3组血管壁钙含量和OPG表达明显增加,而骨组织钙含量明显减少;与V it D3组比较,V it D3+DSP组血管壁钙含量和OPG表达明显减少,而骨组织钙含量明显增加。结论提示DSP通过减少大鼠动脉钙化组织中OPG的表达,有效抑制血管钙化。

骨缝牵引中联合应用骨形态发生蛋白-2和骨保护素的实验研究

目的探索上颌骨在骨缝牵引时加入缓释骨形态发生蛋白-2(BMP-2)和骨保护素(OPG)对新骨形成的影响。方法以24只杂种犬为研究对象,随机分为A、B、C组。通过手术在上颌骨腭横缝植入自制的新型牵引器。A、C组术后5 d在牵引区附近注射缓释重组人骨形态发生蛋白-2/聚乳酸-羟基乙酸共聚物/纤维蛋白胶(rhBMP-2/PLGA/FS),B、C组在牵引3周后注射人骨保护素/纤维蛋白胶(rhOPG/FS)。牵引1、2、4、6周后处死动物,采集标本进行组织学染色,并通过组织计量学方法检测腭横缝的组织改建情况。结果A、C组骨缝区成骨细胞功能活跃,透射电镜显示细胞内有大量高尔基复合体、线粒体及粗面内质网。牵引6周时,A、B、C组成骨细胞指数分别为38.5±7.7、35.7±6.5、41.7±11.0,破骨细胞指数分别为5.9±1.0、1.2±0.3、2.8±0.4,骨小梁厚度分别为(38.36±13.28)、(66.20±9.16)、(51.85±9.92)μm;B、C组表现出骨密度增加及破骨细胞指数下降。结论本实验所用牵引器能促进新骨生成;BMP-2与OPG在骨缝牵引过程中有协同作用,可以促进新骨形成及骨改建。

2型糖尿病并发骨质疏松病变患者血清OPG及C-反应蛋白与尿微量清蛋白/肌酐比值的关系

目的探讨糖尿病骨质疏松患者血清骨保护素(OPG)及C-反应蛋白(CRP)与尿微量清蛋白/肌酐(UMA/Cr)比值的关系。方法选取2型糖尿病(T2DM)患者154例,分为无糖尿病骨质疏松(NDO)组65例、非增生性糖尿病骨质疏松(NPDO)组53例、增生性糖尿病骨质疏松(PDO)组36例;另选取40例体检健康者为健康对照(NC)组。酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清OPG水平,同时检测CRP及UMA/Cr;T2DM患者的BCG、CRP及UMA/Cr相互间关系采用Spearman相关分析及偏相关分析。结果在NC组、NDO组、NPDO组及PDO组中OPG依次降低,CRP及UMA/Cr依次增高,组间比较及组间两两比较差异均有统计学意义(均P<0.05);偏相关分析显示,OPG水平与CRP、UMA/Cr呈负相关(均P<0.05),CRP与UMA/Cr呈正相关(P<0.05)。结论糖尿病性骨质疏松症的发展与OPG的降低及CRP、UMA/Cr的增高密切相关,OPG可能是UMA的保护因子,CRP可能是促进因子。

人骨保护素成熟肽表达载体的构建、表达及重组蛋白免疫学鉴定

目的 :构建人骨保护素 (OPG)成熟肽cDNA重组表达载体 ,实现其在毕赤酵母中的高效表达。方法 :由人成骨细胞提取总RNA ,经RT -PCR扩增得到人OPG成熟肽cDNA ,克隆入分泌型表达载体 pPIC9K ,转化酵母细胞 ,G418筛选多拷贝整合的重组子进行甲醇诱导表达 ,产物行Westernblotting 鉴定。结果 :成功构建了人OPG成熟肽表达载体 ,该载体能在酵母细胞中获得分泌表达 ,诱导96h的表达量占上清总蛋白的30 %。重组蛋白相对分子质量约55ku ,可被OPG抗体识别。结论 :重组人OPG成熟肽在酵母表达系统获得较高水平表达 ,为进一步研究开发基因工程药物准备了条件。

独活寄生汤含药血清对成骨细胞OPG/RANKL蛋白表达的影响

目的:检测独活寄生汤含药血清对成骨细胞OPG/RANKL蛋白表达的影响,从分子生物学层面探究独活寄生汤治疗骨质疏松症的机理,为独活寄生汤治疗骨质疏松症提供理论及实验依据。方法:体外培养原代SD新生24 h大鼠成骨细胞,分别用生理盐水血清对照组、独活寄生汤含药血清低浓度,中浓度,高浓度作用于成骨细胞,采用MTT法检测独活寄生汤含药血清对成骨细胞生长的影响,Western B1ot检测独活寄生汤含药血清对成骨细胞OPG、RANKL蛋白表达的影响。结果:独活寄生汤含药血清以浓度及时间的依赖方式促进成骨细胞生长;Westem B1ot结果显示不同浓度的独活寄生汤含药血清能促进成骨细胞OPG蛋白的表达,并且抑制成骨细胞RANKL蛋白的表达。结论:独活寄生汤含药血清可以通过OPG、RANKL系统促进成骨细胞的增殖并且影响成骨细胞的分化。

骨保护蛋白和骨保护蛋白配体在脊柱结核病灶骨中的表达

背景:脊柱结核病灶骨组织硬化的病理过程较为复杂,其发生机制尚不明确。目的:探讨脊柱结核病灶骨不同部位的骨保护蛋白和骨保护蛋白配体的表达。方法:取脊柱结核患者脊柱结核术中切除的骨质,按照部位分成硬化骨组,亚正常骨组和正常骨组。应用PV-6000二步法免疫组化检测技术测定各组标本中骨保护蛋白和骨保护蛋白配体的平均吸光度及阳性面积比,并进行统计学分析。结果与结论:脊柱结核硬化骨组骨保护蛋白平均吸光度,阳性面积比以及骨保护蛋白和骨保护蛋白配体表达的比值均显著高于亚正常骨组和正常骨组(P<0.01或P<0.05)。结果表明骨保护蛋白和骨保护蛋白配体的表达变化与脊柱结核病灶周围硬化骨的产生有关。