体外培养大鼠骨髓间充质干细胞成骨基因表达谱的检测

目的:探讨体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)成骨相关基因的表达谱,明确体外培养大鼠骨髓MSC的成骨潜能。方法:体外培养SD大鼠骨髓MSC,取第3代细胞提取总核糖核酸(RNA),制备杂交探针,并运用SuperArray公司提供的大鼠Oligo GEArray骨再生基因芯片(每张芯片可测113种基因)进行杂交,化学发光检测,通过X线胶片或台式扫描获得化学发光的芯片图像,使用网上提供的综合型GEArry表达分析配套软件(GEArryExpression Analysis Suite)进行完整的芯片数据分析。结果:检测体外培养大鼠骨髓MSC的113种成骨相关的基因,其中有31种基因表达强度较低,45种基因呈中等强度表达,37种基因表达强度较高。结论:体外培养大鼠骨髓MSC具有部分成骨细胞基因表型特征,但成熟成骨细胞的特征基因表达量较低,提示大鼠MSC是具有较强成骨细胞分化潜能的成纤维样细胞。

电磁场对骨髓间充质干细胞骨再生基因表达的影响

目的用骨再生基因芯片技术筛选经电磁场刺激后骨髓间充质干细胞（MSCs）差异表达的骨再生相关基因，并初步探讨电磁场定向分化骨髓MSCs的机制。方法体外培养Sprague-Dawley大鼠的骨髓MSCs，取第3代细胞给予电磁场刺激。提取暴磁组和未暴磁的对照组细胞总RNA，反转录制备杂交探针，并用大鼠骨再生基因芯片（每张芯片可测113种基因）进行杂交、化学发光检测、X胶片曝光、扫描，获得化学发光的芯片图像，采用综合型GEArry表达分析配套软件进行完整的芯片数据分析。选取有代表性的基因进行半定量逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测。结果与对照组细胞相比，在暴磁组细胞中表达差异显著的基因有19个，其中6个基因表达上调，13个基因表达下调。选取其中的3种基因（BMP1、VDR和EGF）进行RT-PCR检测，结果显示与对照组相比，暴磁组的BMP1 mRNA、VDR mRNA表达水平上调；EGF mRNA表达水平下调，与芯片结果一致。结论在15Hz、1mT的正弦波电磁场作用下，骨髓MSCs的骨再生基因表达发生了明显变化，这些基因主要与骨髓MSCs向成骨细胞分化密切相关，对进一步研究电磁场对骨髓MSCs的促分化机制具有指导意义。