绵羊骨形态发生蛋白受体-1B基因研究进展

绵羊繁殖性能在绵羊产业中有着重要意义,除通过一些技术手段(如同期发情、人工授精、超数排卵等)之外,在目前已知的关于能够提高绵羊繁殖力的16个基因共20个突变体当中,以骨形态发生蛋白受体-1B(bone morphogenetic protein receptor type-1B,BMPR-1B)基因对绵羊繁殖力的影响最大。BMPR-1B基因是世界上第一个被发现的多羔主效基因,其编码区的A746G突变导致蛋白质序列中第249位的谷氨酰胺被置换为精氨酸(Q249R),最终能够引起绵羊排卵数和产羔数增加。作者介绍了绵羊多羔主效基因BMPR-1B及其突变体FecB(A746G)的发现与结构,简述了该基因分子方面的作用机理,对BMP/Smad信号通路的调控以及与绵羊繁殖之间的联系,并简单分析了FecB突变后对绵羊卵巢、卵泡等组织细胞功能,激素调节和相关基因表达的影响。进一步加深对BMPR-1B基因的了解,为研究人员探明该基因诱使绵羊等动物提高产羔数的调控机制,相关配体、调控因子和上下游信号蛋白的影响以及加快哺乳动物高效育种繁殖、扩大种群规模和多胎品系的建立,增加养殖人员的经济收入等提供一些参考和帮助。

仿生电刺激联合人工周期对卵巢储备功能减退患者子宫容受性及血清生长分化因子-9、抑制素B、骨形态发生蛋白-10水平的影响

目的探讨仿生电刺激联合人工周期对卵巢储备功能减退(DOR)患者子宫容受性及血清生长分化因子-9(GDF-9)、抑制素B(INHB)、骨形态发生蛋白-10(BMP-10)水平的影响。方法选取2019年1月至2022年3月广西壮族自治区妇幼保健院收治的87例DOR患者作为研究对象。采用随机数字表法分为A组、B组、C组,每组29例。A组采用仿生电刺激治疗,B组采用人工周期治疗,C组采用仿生电刺激联合人工周期治疗。比较三组治疗前后子宫容受性,血清GDF-9、INHB、BMP-10水平,子宫内膜血流参数及卵巢体积;随访1年,比较三组的妊娠情况;比较三组治疗期间不良反应发生情况。结果与治疗前比较,治疗后A组、B组、C组初级卵泡数、优势卵泡数、排卵数及血清GDF-9、INHB、BMP-10水平均升高,卵巢体积均增大,且A组、B组、C组呈增高趋势(P<0.05)。与治疗前比较,治疗后A组、B组、C组子宫内膜血流搏动指数(PI)、子宫内膜血流阻力指数(RI)均减小,且A组、B组、C组呈下降趋势(P<0.05)。随访1年,C组妊娠率高于A组、B组(P<0.05)。治疗期间,三组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论仿生电刺激联合人工周期可提高DOR患者子宫容受性,改善子宫内膜血流参数及卵巢体积,也可改善血清GDF-9、INHB、BMP-10水平,提高自然妊娠率,且安全性好。

淫羊藿素通过雌激素受体和骨形态发生蛋白信号诱导MC3T3-E1 subclone 14细胞分化

目的:观察淫羊藿素(ICT)对MC3T3-E1 subclone 14前体成骨细胞株增殖、分化的影响,以及雌激素受体(ER)和骨形态发生蛋白(BMP)信号在分化中的作用。方法:WST-8、BrdU法检测ICT对MC3T3-E1subclone 14细胞活力和增殖的影响;ICI182780阻断ER受体信号后,检测ICT和noggin对MC3T3-E1 subclone 14细胞碱性磷酸酶(ALP)活性、I型胶原(Col I)和骨钙素(BGP)的影响;实时荧光PCR检测ICT对BMP-2、4、7 mR-NA表达的影响;Western blotting检测ER受体信号阻断后,ICT对Smad1/5/8蛋白磷酸化的影响。结果:ICT(0.1μmol/L、1μmol/L)可以提高MC3T3-E1 subclone 14细胞ALP、Col I、BGP和矿化结节数量(P<0.01或P<0.05),表明ICT有促分化的作用,但对细胞活力和增殖指数无明显影响;阻断ER受体信号后,ICT促分化作用明显下降(P<0.01);ICT可以提高BMP-2、4 mRNA的表达(P<0.01),但对BMP-7 mRNA无作用(P>0.01);阻断ER信号后,ICT促Smad1/5/8磷酸化明显减弱(P<0.01)。进一步阻断BMP/Smad信号可以抑制ICT促分化的作用(P<0.01)。结论:ICT可以通过ER受体激活BMP/Smad信号通路,进而促进MC3T3-E1 subclone 14细胞的分化。

负载骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的水凝胶缓释系统毒性分析

探讨负载骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的水凝胶缓释系统对小鼠的毒性影响。方法 将小鼠分为实验组、阴性对照组和阳性对照组,观测三组小鼠在第30天、60天和90天时的体质量以及主要脏器的质量及脏器质量系数。分析涉及小鼠血液成分的差异,感知免疫球蛋白、补体、炎症因子及淋巴细胞的微妙变化。同时,对比三组小鼠脾脏中B、T细胞的比例明晰。经过研究,在体重、内脏质量、血常规以及淋巴细胞的增长比例上,实验组与阴性对照组并无显著的区别。然而阳性对照组却不同,其在这些方面存在着显著的差异。再看血清中的情况,阳性对照组小鼠的IgE、IgG、IgM、补体C3、TNF-a与IL6浓度均显著高于实验组和阴性对照组,而实验组与阴性对照组比,这些血清成分没有显著的差异。延伸至B、T细胞比例,实验组与阴性对照组的数值诧异的相似,而阳性对照组的数值则较两组为低。汇合研究得出,骨形态发生蛋白-2(BMP-2)在水凝胶载体中缓释,对小鼠并无明显的毒性影响,具备应用于骨缺损修复的安全有效载体的条件。

激素性股骨头坏死患者微小核糖核酸、骨形态发生蛋白-2、1型纤溶酶原激活物抑制剂表达水平及其临床意义

目的探讨激素性股骨头坏死患者血清微小核糖核酸-672-5p(miR-672-5p)、微小核糖核酸-29b(miR-29b)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、1型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)表达水平及其对激素性股骨头坏死的预测价值。方法选取2020年3月至2023年3月河南科技大学第一附属医院收治的116例激素性股骨头坏死患者作为病例组,根据国际骨循环研究会(ARCO)分期标准将其分为Ⅰ期组(41例)、Ⅱ期组(30例)和Ⅲ期组(45例),另选本院同期125例健康体检者作为对照组。比较病例组和对照组及不同ARCO分期激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、BMP-2、PAI-1水平,利用受试者工作特征(ROC)曲线分析各指标的预测价值。结果病例组患者的血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平高于对照组,血清BMP-2水平低于对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅲ期组患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平高于Ⅱ期组和Ⅰ期组,Ⅱ期组高于Ⅰ期组(P<0.05);Ⅲ期组患者血清BMP-2水平低于Ⅱ期组和Ⅰ期组,Ⅱ期组低于Ⅰ期组(P<0.05)。激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平与ARCO分期呈正相关,BMP-2与ARCO分期呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-672-5p、miR-29b、BMP-2、PAI-1预测激素性股骨头坏死的AUC值均大于0.8(P<0.05),表明均具有较高的预测激素性股骨头坏死的效能。结论激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1呈高表达,而血清BMP-2呈低表达,四者均具有较高的预测激素性股骨头坏死的效能。

栉孔扇贝骨形态发生蛋白Ⅰ型受体基因的克隆及表达分析

首次在栉孔扇贝(Chlamys farreri)中克隆了骨形态发生蛋白I型受体(Bone morphogenetic protein type Ⅰ receptor,cfBMPR1)基因cDNA全长序列,该基因开放阅读框长1560bp,编码为519个氨基酸。实时荧光定量反转录PCR(real-time qRT-PCR)分析结果显示,cfBMPR1基因在栉孔扇贝受精卵、4细胞期、囊胚、原肠胚、担轮幼虫期、D型幼虫期和壳顶幼虫期等发育时期均有表达,其中胚胎时期表达量高于幼虫期,提示该基因在扇贝早期发育及幼虫形态形成过程中的重要作用;在成体组织,包括外套膜、鳃、性腺、肾、横纹肌和消化腺中也均检测到了cfBMPR1的表达,其中以性腺和横纹肌中表达量最高,暗示其参与了扇贝包括繁殖和肌肉生长发育等在内的多种生物学过程。研究结果为进一步研究TGF-β信号通路在扇贝生长发育中的功能提供了基础数据。

鸭骨形态发生蛋白SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法的建立

【目的】旨在建立一种检测鸭骨形态发生蛋白(BMPs)mRNA转录水平的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RTPCR检测方法。【方法】根据GenBank中BMP1、BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8a、BMP10和BMP15的核苷酸序列设计并合成特异性引物进行PCR扩增,产物回收后克隆至pMD-18-T载体,构建阳性重组质粒作为标准品,优化SYBR GreenⅠ荧光定量PCR反应条件,建立其标准曲线,对建立的方法进行特异性、敏感性和重复性试验。【结果】建立的BMP1、BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8a、BMP10和BMP15基因实时荧光定量检测方法特异性强,无引物二聚体及非特异性产物,熔解曲线为单峰,相关系数R2均大于0.998,组间和组内变异系数均小于1%。应用该方法检测BMPs基因在半番鸭组织中的表达水平,结果显示,BMP1、 BMP2、 BMP5和BMP7基因在心脏中表达量较高,分别为5.5×10^(4)、 1.1×10^(5)、 5.1×10^(5)和7.7×10^(5)拷贝·μL^(-1);BMP6和BMP10基因在肝脏中表达量较高,分别为7.5×10^(4)和7.6×10^(3)拷贝·μL^(-1);而BMP3、 BMP4、BMP8a和BMP15分别在法氏囊、胸腺、喙和脾脏中表达量最高,分别为1.5×10^(5)、2.1×10^(4)、1.8×10^(3)和3.3×10^(3)拷贝·μL^(-1)。【结论】本研究建立的实时荧光定量PCR方法特异性强、重复性好,为检测鸭BMPs表达水平提供了技术手段。

骨形态发生蛋白家族及其受体在生殖调控中的作用

骨形态发生蛋白 (bonemorphogenelicprotein ,BMP)又称骨形成蛋白 ,属于转化生长因子超家族成员。本文从理化特性、受体种类、信号转导机制 ,以及在动物生殖调控中的作用和受体基因突变所导致的多胎机制等方面 ,详细阐述了有关BMP近年来的研究状况 。

磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/骨形态发生蛋白-15通路与哺乳动物卵巢卵泡发育

哺乳动物卵巢卵泡是由卵母细胞与其周围的颗粒细胞和卵泡膜细胞共同组成的,其生长发育过程是一个高度协调的程序化过程,确保了正常卵母细胞成熟并使其具有受精能力。卵母细胞和颗粒细胞之间的旁分泌和自分泌功能在卵巢卵泡发育过程中具有重要作用,可以为卵泡的发育提供适宜的微环境。磷脂酰肌醇-3激酶/骨形态发生蛋白-15信号通路是其中一个重要的调控通路。骨形态发生蛋白-15是卵巢卵母细胞特异性分泌的信号分子,可以通过旁分泌作用调节卵巢卵泡的发育过程。本文主要概述磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路在卵巢卵泡发育过程中的作用及骨形态发生蛋白-15作为蛋白激酶B/叉头转录因子家族-3a下游信号分子对这一过程的调控,有助于进一步理解卵巢卵泡发育的分子调控以及治疗不孕不育等卵巢疾病。

增生性瘢痕中时序变化的骨形态发生蛋白及其受体

背景:骨形态发生蛋白与瘢痕的形成和发展相关,而成纤维细胞与瘢痕的增殖、成熟关系密切,但骨形态发生蛋白在不同时期增生性瘢痕成纤维细胞中的表达变化尚少见报道。目的:检测骨形态发生蛋白2/4、骨形态发生蛋白7、骨形态发生蛋白IA型受体在不同时期增生性瘢痕成纤维细胞中的表达水平。方法:应用免疫组织化SP法检测来自2008年3月至2010年7月广西壮族自治区人民医院美容整形外科患者的增殖期增生性瘢痕和成熟期增生性瘢痕中成纤维细胞中骨形态发生蛋白2/4、骨形态发生蛋白7、骨形态发生蛋白IA型受体的表达。结果与结论:增生性瘢痕增殖期成纤维细胞中骨形态发生蛋白2/4的表达水平显著高于成熟期(P<0.05);但不同时期增生性瘢痕成纤维细胞中骨形态发生蛋白7和骨形态发生蛋白IA型受体的表达差异无显著性意义(P>0.05)。表明在增生性瘢痕由增生期至成熟期的发展过程中,其成纤维细胞中的骨形态发生蛋白2/4的表达下调,而骨形态发生蛋白7、骨形态发生蛋白IA型受体的表达无变化。

绝经后骨折患者血清骨碱性磷酸酶、Ⅰ型前胶原和骨形态发生蛋白2水平与骨质疏松程度的相关性

目的分析绝经后骨折患者血清骨碱性磷酸酶(BALP)、Ⅰ型前胶原(PCⅠ)和骨形态发生蛋白2水平(BMP-2)及其与骨质疏松程度的相关性。方法选取2019年2月-2020年2月南宁市第二人民医院收治绝经后骨折患者171例作为研究组,根据骨密度(BMD)分为正常亚组55例、减少亚组67例、疏松亚组49例。另选取同时期在医院体检的绝经未骨折女性177例作为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测受试者血清BALP、PCⅠ和BMP-2水平并进行组间比较;采用Spearman法分析血清BALP、PCⅠ和BMP-2水平与骨代谢相关指标的相关性;ROC曲线分析血清BALP、PCⅠ和BMP-2对绝经后骨折的预测价值;多因素Logistic回归分析影响绝经后骨折发生的影响因素。结果与对照组比较,研究组患者血清BALP、PCⅠ水平升高,BMP-2水平降低(t/P=4.173/<0.001、11.693/<0.001、10.038/<0.001);骨密度正常亚组、减少亚组和疏松亚组患者血清BALP、PCⅠ水平依次升高,BMP-2水平依次降低(F/P=9.943/<0.001、83.323/<0.001、63.602/<0.001)。经Spearman法分析,绝经后骨折患者血清BALP、PCⅠ与骨钙素N端中分子片段(N-MID)、β-联降解产物(β-CTX)、骨钙素(OC)呈正相关(BALP:r/P=0.424/0.001、0.536/<0.001、0.622/<0.001;PCⅠ:r/P=0.503/<0.001、0.510/<0.001、0.497/0.006),血清BMP-2与N-MID、β-CTX、OC呈负相关(r/P=-0.597/<0.001、-0.614/<0.001、-0.544/<0.001)。ROC曲线分析结果表明,血清BALP、PCⅠ、BMP-2及三者联合预测绝经后骨折发生的AUC为0.734、0.901、0.845、0.963,三者联合预测价值较单项指标高(Z=8.046、3.377、5.165,P均<0.001)。多因素Logistic回归分析显示,N-MID高、β-CTX高、OC高、BALP高、PCⅠ高和BMP-2低水平是绝经后骨折发生的危险因素[OR(95%CI)=2.223(1.230~3.987)、1.498(1.114~2.014)、3.401(1.713~6.754)、3.560(1.616~7.843)、5.222(1.956~13.941)、3.168(1.986~5.294)]。结论绝经后骨折患者血清中BALP、PCⅠ水平升高,BMP-2水平降低,并且三者均与骨质疏松程度有关。

降脂壮骨中药对食饵性高脂血症大鼠骨组织骨形态发生蛋白2、雌激素受体表达的影响

背景:研究表明活性骨形态发生蛋白2水平的降低可导致严重的类骨质疏松症状,并发现成骨细胞、破骨细胞及骨髓基质细胞上有雌激素受体的存在,认识到雌激素对骨组织具有直接作用。目的:观察降脂壮骨中药对食饵性高脂血症诱发骨质疏松大鼠骨组织骨形态发生蛋白2、雌激素受体表达的影响。方法:健康SD大鼠27只,随机分为3组:正常对照组:上午和下午灌胃生理盐水5mL/kg;高脂血症诱发骨质疏松模型组:上午灌胃高脂饮食5mL/kg,下午灌胃生理盐水5mL/kg;降脂壮骨中药组:上午灌胃高脂饮食5mL/kg,下午灌胃降脂壮骨中药水提液5mL/kg。持续干预8周后采用免疫组织化学方法,对其骨组织中骨形态发生蛋白2、雌激素受体的表达水平进行检测,应用原位杂交方法对骨组织中雌激素受体的mRNA水平进行检测。结果与结论:与模型组比较,降脂壮骨中药组骨组织中骨形态发生蛋白2、雌激素受体表达显著增强(P<0.01),雌激素受体的mRNA表达水平增高。证实降脂壮骨中药能够使食饵性高脂血症诱发骨质疏松大鼠成骨细胞骨形态发生蛋白2、雌激素受体的表达水平增高,起到改善骨质疏松的作用。

骨形态发生蛋白受体2在维甲酸诱导腭裂小鼠胚胎腭突中的表达

目的探讨全反式维甲酸(at RA)对小鼠胚胎腭突中骨形态发生蛋白受体2(BMPR2)表达的影响。方法通过at RA灌胃的方法建立at RA诱导的小鼠腭裂模型,取妊娠15 d(GD15)和17 d的(GD17)的胚胎腭部进行苏木精-伊红染色,并用免疫组织化学及逆转录聚合酶链式反应技术检测BMPR2在胚胎腭部的表达。结果 at RA诱导小鼠形成体积较小的畸形腭突和明显的中缝腭裂畸形。BMPR2在GD15和GD17正常胚胎腭部有高水平的阳性表达,但在腭裂胚胎腭部的表达水平明显减弱。正常胚胎腭部Bmpr2 m RNA在GD15和GD17的表达水平均明显高于腭裂胚胎(P<0.05)。结论 at RA可导致小鼠胚胎腭突发育不良形成腭裂,并显著下调BMPR2表达水平,从而影响腭部发育的正常分子调控过程。

骨形态发生蛋白及其受体在正常成年大鼠脊髓中的表达分布(英文)

目的:观察骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)及其受体在正常成年大鼠脊髓中的表达分布。方法::取正常成年大鼠脊髓并切片,运用免疫组织化学方法分别检测BMP2,4,7及其受体BMPRⅠa,BMPRⅠb,BMPⅡ的表达。结果:在正常成年大鼠脊髓的前角运动神经元、背角感觉神经元、少突胶质细胞、部分小胶质细胞和部分星形胶质细胞表达BMPRⅠa和BMPRⅠb。少突胶质细胞及灰质前角运动神经元表达BMPRⅡ受体,灰质神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)阳性的星形胶质细胞未见BMPRⅡ受体表达,白质的部分GFAP阳性的星形胶质细胞表达BMPRⅡ受体。免疫组织化学未检测出BMP2,4在正常成年大鼠脊髓中表达。BMP7在所有的APC阳性的少突胶质细胞及NeuN阳性的前角运动神经元中表达,在正常脊髓的部分星形胶质细胞中可见表达。磷酸化的pSmad 1/5/8蛋白表达见于所有的少突胶质细胞及神经元、部分星形胶质细胞以及软膜下脊髓周边GFAP阳性的星形胶质细胞,这些细胞也是RC2阳性细胞(即放射状胶质细胞)。结论:BMP2,4在正常成年大鼠脊髓中不表达,BMP受体、BMP7及磷酸化的pSmad 1/5/8蛋白在正常成年大鼠脊髓的多种细胞中表达,提示BMP信号在成体脊髓神经元及胶质细胞功能中起重要作用。

伤科接骨片联合桃红四物汤对胫腓骨骨折的疗效及对骨形态发生蛋白2与成纤维细胞生长因子b的影响

目的观察伤科接骨片单用及与桃红四物汤联用对胫腓骨骨折患者骨痂生长情况、骨折部位疼痛情况及消肿时间的影响,并探讨其促进骨骼愈合的机制。方法选择医院收治的胫腓骨骨折患者90例,随机分为A组(对照组)、B组(伤科接骨片组)和C组(伤科接骨片+桃红四物汤组),各30例,观察不同时点的骨痂生成情况、疼痛程度及消肿时间,检测血骨形态发生蛋白2(BMP-2)、成纤维细胞生长因子b(bFGF)的含量,并对结果进行分析。结果治疗4,6,8周的骨痂生长综合评分,B组、C组均高于A组(P<0.05);治疗4,6周的骨痂生长综合评分,C组高于B组(P<0.05)。治疗3,5,7,9 d,B组、C组与A组比较,患者疼痛程度均减轻(P<0.05);治疗5,7 d,C组疼痛减轻程度优于B组(P<0.05)。治疗后B组、C组与A组比较,患者消肿时间更短(P<0.05),且C组优于B组(P<0.05)。治疗2周后,B组、C组血清中BMP-2及bFGF的含量比A组更高(P<0.05)。结论伤科接骨片能促进胫腓骨骨折患者骨痂生长,减轻疼痛,缩短消肿时间,发挥促骨骼生长作用,伤科接骨片联合桃红四物汤有协同作用,比伤科接骨片单用效果好,其分子生物学机制是通过增加促骨生长因子BMP-2及bFGF的表达。

股骨近端Stro-1^+细胞与骨形态发生蛋白及其受体的相关性

背景:髋关节置换后假体的融合率与假体周围的骨重建密切相关,这个过程中骨髓间充质干细胞的募集、向成骨细胞分化的途径受骨形态发生蛋白调控。目的:分析股骨近端Stro-1+细胞与骨形态发生蛋白7、骨形态发生蛋白受体的相关性。方法:32例患者初次进行髋关节置换,取术中股骨矩开槽时骨块,体外细胞培养14d后检测骨髓间充质干细胞数量,Stro-1+标记干细胞的总量,骨形态发生蛋白7、骨形态发生蛋白受体1a、骨形态发生蛋白受体2的表达。结果与结论:Stro-1+、骨形态发生蛋白7、骨形态发生蛋白受体1a、骨形态发生蛋白受体2的表达在不同年龄组有轻微差异,但差异无显著性意义,在不同性别组差异也无显著性意义;股骨近端Stro-1+细胞数量(即代表具有向成骨细胞分化功能的细胞)与骨形态发生蛋白7表达呈负相关关系,与骨形态发生蛋白受体1a表达呈正相关关系,其可以影响髋关节假体的骨融合与生存率。

骨形态发生蛋白及其受体在哺乳动物繁殖中的作用

骨形态发生蛋白(BM P s)属于转化生长因子-β超家族的成员,最初因其能诱导异位骨形成而得名。随着研究的深入,发现BM P s的功能不限于骨的发育和形成,而是涉及几乎全身所有系统,包括调节哺乳动物生长、细胞分化和细胞凋亡,而且越来越多的研究结果表明,BM P系统在调节雌性和雄性哺乳动物的繁殖中具有至关重要的功能。作者简要介绍了BM P s及其受体的结构与作用机制,并具体介绍了几种BM P s在哺乳动物繁殖中的功能。

雌激素受体β基因沉默对人成骨细胞转化生长因子β1和骨形态发生蛋白2表达的影响

背景:雌激素受体β基因参与骨代谢的研究较少,其对骨代谢的具体调节机制仍不清楚。目的:分析雌激素受体β基因沉默对人成骨细胞转化生长因子β1和骨形态发生蛋白2表达的影响。方法:实验分3组:空白对照组(即h FOB 1.19,未感染任何反转录病毒)、阴性对照组(即含无效干扰片断雌激素受体β-sh RNA-nc)、最佳RNAi组(即ERβ-sh RNA-3)。将前期最佳RNAi组的雌激素受体β-sh RNA反转录病毒载体感染人成骨细胞,通过抗性筛选并扩大培养,利用MTT法检测雌激素受体β稳定抑制后对细胞增殖的影响;随后在雌激素干预下,通过Western blot技术检测雌激素受体β蛋白表达的稳定抑制效率,并使用半定量RT-PCR和Western blot技术检测雌激素受体β稳定抑制后对转化生长因子β1和骨形态发生蛋白2表达的影响。结果与结论:(1)成功筛选出稳定感染ERβ-shR NA-3反转录病毒载体的人成骨细胞,MTT法检测显示雌激素受体β稳定抑制后对细胞的增殖没有明显影响(P>0.05);(2)在雌激素干预下,雌激素受体β蛋白的抑制率为(93.11±0.57)%(P<0.05),且雌激素受体β稳定抑制后对转化生长因子β1 mR NA和蛋白的上调率分别为(26.65±3.81)%和(23.79±3.76)%,骨形态发生蛋白2 mR NA和蛋白的上调率分别为(16.62±1.71)%和(18.08±3.20)%(均P<0.05);(3)结果提示雌激素受体β可能通过调控转化生长因子β1和骨形态发生蛋白2的表达在骨代谢中发挥作用。

骨形态发生蛋白2对退变椎间盘组织学和Ⅰ,Ⅱ型胶原的影响

背景:研究表明,退变椎间盘细胞外基质的主要变化是Ⅱ型胶原和蛋白多糖含量的减少和Ⅰ型胶原含量的增加。目的:观察腺相关病毒介导的骨形态发生蛋白2基因(AAV-BMP-2)对兔退变腰椎间盘内髓核Ⅰ,Ⅱ型胶原的影响。方法:将12只新西兰大白兔L2-3,L3-4,L4-5,L5-6椎间盘针刺制造退变模型后随机分为3组,每组4只。其中AAV-BMP-2组兔椎间盘注射AAV-BMP-2,AAV组兔椎间盘注射不携带目的基因的空载体,生理盐水组兔椎间盘注射生理盐水,注射后第8周处死动物取其相应的椎间盘常规石蜡包埋,组织切片,以苏木精-伊红染色观察其髓核组织学变化,免疫组织化学法检测髓核组织Ⅰ型、Ⅱ型胶原表达并进行半定量分析。结果与结论:普通苏木精-伊红染色结果显示AAV-BMP-2组椎间盘内髓核细胞数目较多,呈单个或者簇状分布,髓核结构清晰,无纤维样组织填充。而AAV组和生理盐水组的组织结构相似,髓核内细胞数目少,髓核皱缩干瘪,细胞间为纤维样组织填充且排列紊乱。免疫组织化学染色显示:AAV-BMP-2组椎间盘髓核内Ⅱ型胶原的表达均高于AAV组和生理盐水组(P<0.05);AAV-BMP-2组椎间盘髓核内Ⅰ型胶原的表达均低于AAV组和生理盐水组(P<0.05)。结果说明,体内转染AAV-BMP-2能抑制椎间盘髓核细胞表达Ⅰ型胶原,促进椎间盘髓核细胞表达合成Ⅱ型胶原,提示维持椎间盘内胶原的含量、种类,可维持椎间盘内组织学的结构和形态,稳定髓核细胞生长环境,延缓椎间盘的退变。

神经营养因子家族及其受体在重组人骨形态发生蛋白-2诱导成骨中的表达

[目的]通过观察重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)诱导成骨过程中神经营养因子(NTFs)家族及受体的表达,探讨神经营养因子在BMP骨诱导中的作用。[方法]建立小鼠右侧股后部异位成骨模型,实验组植入rhBMP-2胶原复合物,对照组仅植入相同体积的胶原海绵。分别于术后7、14和21 d取材,进行组织学、免疫组化及RT-PCR检测。[结果]组织学证实rhBMP-2胶原复合物具有良好的骨诱导能力,而对照组未见成骨。术后第7 d,在大量软骨形成期NGF和TrkA阳性染色达到高峰,成纤维细胞、成软骨细胞、软骨细胞、肥大软骨细胞和成骨细胞中均有阳性表达;BDNF在软骨细胞及软骨基质中有阳性染色,其受体TrkB仅在成软骨细胞和软骨细胞中有表达;NT-3与NGF表达相似,其受体TrkC仅在成软骨细胞和软骨细胞中有阳性染色。术后第14 d,NGF和TrkA阳性表达局限于部分成骨细胞、骨样细胞和成骨样细胞;NT-3在软骨细胞、成骨细胞中明显表达。术后21 d,只有少量成骨细胞、成骨样细胞中有NGF和TrkA的表达。RT-PCR检测结果显示,NTFs mRNA于术后第7 d表达最高,与免疫组化中蛋白质的表达结果相一致。[结论]NTFs及其受体在rhBMP-2诱导成骨过程明显表达,提示NTFs可能通过直接和间接的方式协同BMP的诱导成骨过程。