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人骨形态发生蛋白-2基因克隆及真核表达载体的构建 被引量:6
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作者 周诺 黄旋平 +3 位作者 廖妮 韦山良 梁飞新 麦华明 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期487-489,共3页
目的克隆人骨形态发生蛋白-2(hBMP2)基因片段,构建pcDNA3.1-hBMP2真核表达质粒。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人骨肉瘤中扩增出人骨形态发生蛋白-2基因片段,通过DNA重组技术将该基因片段重组于pcDNA3.1真核表达载体上,... 目的克隆人骨形态发生蛋白-2(hBMP2)基因片段,构建pcDNA3.1-hBMP2真核表达质粒。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人骨肉瘤中扩增出人骨形态发生蛋白-2基因片段,通过DNA重组技术将该基因片段重组于pcDNA3.1真核表达载体上,构建pcDNA3.1-hBMP2重组质粒,通过用PCR扩增、酶切电泳分析及DNA测序的方法对重组DNA进行鉴定。结果经PCR扩增、酶切电泳分析和DNA测序证实,本实验构建的重组质粒目的基因片段为人BMP2-cDNA。结论本实验成功克隆了hBMP2基因并构建成其真核表达质粒。 展开更多
关键词 形态发生蛋白-2 基因克隆 真核表达载体
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重组人骨形态发生蛋白-2在大肠杆菌中的表达及纯化 被引量:6
2
作者 熊绍虎 余 磊 +4 位作者 谭海燕 黄 涛 王朝阳 刘大庸 钟世镇 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第5期413-416,共4页
目的用基因工程技术在大肠杆菌中表达人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)。方法hBMP-2原核表达载体pYR(pBV220-hBMP-2)转化 E coli BL21,SDS-PAGE分析工程菌活化状态以及诱导时间与目的蛋白表达率的关系。离子交换层析 DEAE和分子筛 S-300... 目的用基因工程技术在大肠杆菌中表达人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)。方法hBMP-2原核表达载体pYR(pBV220-hBMP-2)转化 E coli BL21,SDS-PAGE分析工程菌活化状态以及诱导时间与目的蛋白表达率的关系。离子交换层析 DEAE和分子筛 S-300纯化重组蛋白,自然缓降复性法对其复性。结果SDS-PAGE显示在相对分子质量约为13000时出现明显外源蛋白表达带,而且当工程菌30℃活化至D600约为0.45时,其表达效率较高;在此状态下,温度诱导衣达4h,目的蛋白表达量最高,以后随着时间的延长,表达量稍下降。重组蛋白经纯化后植人小鼠肌肉,组织学观察到肌肉内大量间允质细胞增生以及软骨与骨形成。结论重组hBMP-2具有良好异位成骨活性。 展开更多
关键词 形态发生蛋白-2 大肠杆菌 基因工程 蛋白表达 动物实验
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人重组骨形态发生蛋白-2和碱性成纤维细胞生长因子在诱导成骨中的调节作用及其机制 被引量:7
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作者 杜俊杰 罗卓荆 +7 位作者 胡蕴玉 李明全 袁志 曹艳杰 崔庚 李丹 吕荣 王建波 《中国临床康复》 CSCD 2004年第8期1448-1449,共2页
目的:采用原位杂交的方法检测I、II型胶原mRNA的变化及其变化规律,对骨组织中的碱性磷酸酶(ALP)活性进行测定,以分析人重组骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在诱导成骨中的调节作用及其调节机制。方法:BALB/c小... 目的:采用原位杂交的方法检测I、II型胶原mRNA的变化及其变化规律,对骨组织中的碱性磷酸酶(ALP)活性进行测定,以分析人重组骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在诱导成骨中的调节作用及其调节机制。方法:BALB/c小鼠110只采用掷硬币方法随机分为2组,每组55只,设立rhBMP-2/bFGF为实验组,rhBMP-2为对照组,分别于术后3~21d共8个时间点取材,采用原位杂交方法对新生骨组织中的I,II型胶原mRNA进行检测;对ALP活性进行定量分析,观察2组在诱导成骨中I,II型胶原mRNA及ALP的表达情况。结果:①II型胶原mRNA的出现是和成软骨、软骨细胞的出现相伴随的。②作为成骨细胞成熟标志物的I型胶原mRNA、ALP在软骨形成期即有表达,但是随着成骨细胞的出现,骨组织的形成I型胶原mRNA仍表现为高表达,而ALP的表达则呈下降趋势。③实验组I,II型胶原mRNA及ALP的表达早于对照组,在术后7,14,21d,实验组ALP分别为(63.85±6.87),(27.12±4.23),(8.93±1.49)IU/g;对照组ALP分别为(27.26±4.13),(70.65±5.92),(39.46±4.72)IU/g(t=12.40,20.85,17.52,P<0.01)。结论:bFGF增强了rhBMP-2诱导成骨中I、II型胶原mRNA及ALP的表达。 展开更多
关键词 人重组形态发生蛋白-2 碱性成纤维细胞生长因子 诱导 调节作用 原位杂交 胶原 碱性磷酸酶活性
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骨形态发生蛋白-2对软骨寡聚基质蛋白在软骨细胞内表达的影响 被引量:9
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作者 田华 Carrie FANG Paul E.DICESARE 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期317-320,共4页
目的 :定量研究骨形态发生蛋白 (BMP 2 )对软骨寡聚基质蛋白 (COMP)基因在人软骨细胞及ATDC5 5细胞内表达的影响。方法 :原代培养成人及胚胎的关节软骨细胞 ,经BMP 2刺激后 ,利用real timeRT PCR定量分析COMP基因的表达情况 ;采用静息... 目的 :定量研究骨形态发生蛋白 (BMP 2 )对软骨寡聚基质蛋白 (COMP)基因在人软骨细胞及ATDC5 5细胞内表达的影响。方法 :原代培养成人及胚胎的关节软骨细胞 ,经BMP 2刺激后 ,利用real timeRT PCR定量分析COMP基因的表达情况 ;采用静息期不表达COMP基因的鼠源性成软骨细胞株ATDC5 5作为研究对象 ,给以BMP 2刺激 ,通过RT PCR检测COMP表达的变化 ;将COMP基因的全长启动子克隆到报告基因Luciferase的上游并转染入ATDC5 5细胞 ,分别给以 5 0 0 μg·L-1的BMP 2和 /或 10 μg·L-1的Noggin刺激 ,测定其对Luciferase活性的影响。结果 :BMP 2使成人软骨细胞内的COMP基因表达提高近 3倍 ,而对胚胎软骨细胞的作用较弱 ,提高了1.5倍 ;COMP基因在胚胎软骨细胞内的基础表达量约是在成人软骨细胞内的 2倍 ;经BMP 2刺激后ATDC5 5细胞株明显表达COMP基因 ,并且BMP 2的这种效应能够被其拮抗剂Noggin所抑制 ;BMP 2明显促进了Luciferase的活性 ,约提高了 5倍 ,且Noggin特异性的抑制了BMP 2的这种作用。 结论 :BMP 2能够明显促进COMP基因在人关节软骨细胞及鼠源性成软骨细胞株ATDC5 5内的表达。 展开更多
关键词 形态发生蛋白-2 寡聚基质蛋白 细胞 基因表达
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人重组骨形态发生蛋白-2在脊柱融合中的作用 被引量:5
5
作者 王健 《生物骨科材料与临床研究》 CAS 2016年第5期62-66,共5页
脊柱融合是治疗脊柱结核、感染、畸形、椎间盘退行性病变脊柱疾患的有效手段,促进脊柱融合成骨率的方法之一就是使用自体骨移植,但其存在来源有限、取骨处疼痛等弊端,目前人重组骨形态发生蛋白-2(The role of recombinant human bone mo... 脊柱融合是治疗脊柱结核、感染、畸形、椎间盘退行性病变脊柱疾患的有效手段,促进脊柱融合成骨率的方法之一就是使用自体骨移植,但其存在来源有限、取骨处疼痛等弊端,目前人重组骨形态发生蛋白-2(The role of recombinant human bone morphogenetic 2,rh BMP-2)负载于载体是一种理想的自体骨移植材料的替代物,广泛应用于脊柱融合术中,但近来发现了与其相关的一些副反应。本文就其在脊柱融合中的应用的安全性、有效性及相关的副反应进行综述。 展开更多
关键词 人重组形态发生蛋白-2 脊柱融合 作用
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骨形态发生蛋白-2对骨骼作用的研究进展
6
作者 韩培 陈旸 +2 位作者 邵俊杰 蒋垚 曾炳芳 《国外医学(骨科学分册)》 2003年第4期238-240,共3页
骨形态发生蛋白-2在骨和软骨形成和损伤修复中均起很大的作用。其对骨和软骨的作用及机制已经有较深入的研究,并在临床上用于促进骨愈合,修复骨缺损,但在载体、软骨损伤的修复等方面仍有待进一步研究。
关键词 形态发生蛋白-2 形成 形成 作用机制 临床应用
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人骨形态发生蛋白-2真核表达质粒的制备、转染及表达
7
作者 康春雨 章庆国 《现代医学》 2005年第5期302-305,共4页
目的制备含人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)基因的真核表达质粒,获得可稳定高效表达BMP-2的兔骨髓基质细胞,为进一步研究BMP-2在骨牵张区的成骨作用作准备。方法制备携带有hBMP-2的全长真核表达质粒pcDNA3.1-BMP2。通过脂质体法将所得到的... 目的制备含人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)基因的真核表达质粒,获得可稳定高效表达BMP-2的兔骨髓基质细胞,为进一步研究BMP-2在骨牵张区的成骨作用作准备。方法制备携带有hBMP-2的全长真核表达质粒pcDNA3.1-BMP2。通过脂质体法将所得到的重组真核质粒转染到兔骨髓基质细胞中,用G418进行梯度筛选,从而得到能够稳定表达hBMP-2的细胞克隆。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨髓基质细胞(MSCs)hBMP-2 mRNA的表达。结果重组质粒通过EcoRI酶切后,电泳图示约1.5 kb的hBMP-2的目的片段及5.5 kb的载体片段,经测序显示核苷酸序列正确无误。经RT-PCR检测hBMP-2在转录水平mRNA的表达情况,提示转染组hBMP-2的mRNA量较空白对照组明显增加。结论成功制备了含hBMP-2基因的真核表达质粒,转染后获得了高效表达hBMP-2的兔骨髓基质细胞。 展开更多
关键词 形态发生蛋白-2 真核表达质粒 髓基质细胞 基因转染
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骨形态发生蛋白-2与椎间盘细胞Sox9和Ⅱ型胶原基因的调控关系 被引量:12
8
作者 赵勇 王文波 +2 位作者 李吉友 卢宇 霍锐 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 2005年第10期612-615,共4页
目的:探讨骨形态发生蛋白-2(BMP-2)对椎间盘细胞Sox9和Ⅱ型胶原基因表达的调节作用。方法:应用逆转录聚合酶链反应和Western印迹检测不同浓度BMP-2对培养的人椎间盘细胞中软骨特异性基因Sox9和Ⅱ型胶原基因表达的调节作用。结果:BMP-2... 目的:探讨骨形态发生蛋白-2(BMP-2)对椎间盘细胞Sox9和Ⅱ型胶原基因表达的调节作用。方法:应用逆转录聚合酶链反应和Western印迹检测不同浓度BMP-2对培养的人椎间盘细胞中软骨特异性基因Sox9和Ⅱ型胶原基因表达的调节作用。结果:BMP-2浓度为100ng/ml和1000ng/ml时,椎间盘细胞中Sox9和Ⅱ型胶原基因mRNA表达与0ng/ml组(对照组)相比明显增加(P<0.05);在蛋白水平的检测中,也得到了一致的结果。结论:BMP-2可以按照剂量依赖方式正向调节椎间盘细胞Sox9和Ⅱ型胶原基因的表达,提示BMP-2可能对退变早期的椎间盘具有修复功能。 展开更多
关键词 形态发生蛋白-2 SOX基因 胶原 基因表达 椎间盘
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神经突触核蛋白-γ、骨形态发生蛋白2、基质金属蛋白酶9在口腔颌面部鳞癌中的表达情况及相关性分析 被引量:1
9
作者 齐晓宇 《中国当代医药》 2019年第32期144-147,共4页
目的分析神经突触核蛋白-γ(SNCG)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)在口腔颌面部鳞癌中的表达情况及相关性。方法选取2016年1月21日~2017年1月21日我院存档的70例口腔颌面部鳞癌组织蜡块标本作为肿瘤组织,另选择70例... 目的分析神经突触核蛋白-γ(SNCG)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)在口腔颌面部鳞癌中的表达情况及相关性。方法选取2016年1月21日~2017年1月21日我院存档的70例口腔颌面部鳞癌组织蜡块标本作为肿瘤组织,另选择70例癌旁组织与70例正常组织进行参照。依据肿瘤细胞的分化程度,将70例肿瘤组织标本分为高分化组(15例),中分化组(33例)及低分化组(22例)。依据是否出现淋巴结转移情况,将70例肿瘤组织标本分为淋巴结转移(30例)及淋巴结未转移(40例)。比较三组不同组织部位标本中的SNCG、BMP-2、MMP-9表达情况;比较不同分化程度肿瘤组织中SNCG、BMP-2、MMP-9的表达阳性率;分析淋巴结转移对肿瘤组织中SNCG、BMP-2、MMP-9表达阳性率的影响;分析SNCG、BMP-2、MMP-9三者之间的相关性。结果肿瘤组织中的SNCG、MMP-9的阳性率高于癌旁组织和正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);癌旁组织与正常组织的SNCG、MMP-9阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。肿瘤组织和癌旁组织中的BMP-2的阳性率高于正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);癌旁组织与肿瘤组织的BMP-2阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。高、中、低分化组肿瘤组织中的BMP-2与MMP-9阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);高分化组肿瘤组织中的SNCG阳性率低于低、中分化组,差异有统计学意义(P<0.05);低、中分化组肿瘤组织中的SNCG阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。出现淋巴结转移组织中的SNCG、MMP-9阳性率高于淋巴结未转移组织,差异有统计学意义(P<0.05)。SNCG与BMP-2蛋白成正相关性(r=0.420,P<0.05),BMP-2与MMP-9成正相关性(r=0.390,P<0.05),SNCG与MMP-9成正相关性(r=0.561,P<0.05)。结论在口腔颌面部鳞癌中,SNCG、BMP-2、MMP-9三者互成正相关性,具有高表达特征,可作为该类肿瘤疾病的常用检测指标。 展开更多
关键词 口腔颌面部 鳞癌 神经突触核蛋白-γ 形态发生蛋白2 基质金属蛋白酶9 表达 相关性
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骨形态发生蛋白-2对椎间盘细胞软骨特异性基因mRNA的调节作用
10
作者 王文波 赵勇 卢宇 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 北大核心 2005年第5期395-395,共1页
目的 探讨骨形态发生蛋白(BMP)-2对椎间盘细胞软骨特异性基因Sox9、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因的调控作用。方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测BMP-2对培养的人椎间盘细胞中Sox9、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因mRNA表达的调控作... 目的 探讨骨形态发生蛋白(BMP)-2对椎间盘细胞软骨特异性基因Sox9、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因的调控作用。方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测BMP-2对培养的人椎间盘细胞中Sox9、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因mRNA表达的调控作用。结果 在BMP-2浓度为100μg/L(0.149±0.006,P〈0.05)和1000μg/L(0.163±0.006,P〈0.01)时,其对椎间盘细胞中Sox9基因mRNA可起到显著的正向调控作用;在此浓度下,它也可以对Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因mRNA起到正向调控作用。结论 BMP-2可以按照剂量依赖方式正向调控椎间盘细胞中Sox9、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因的表达。 展开更多
关键词 基因MRNA表达 形态发生蛋白-2 人椎间盘细胞 特异性 逆转录-聚合酶链反应 调节作 BMP-2 调控作用 蛋白聚糖
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血管内皮生长因子和骨形态发生蛋白-2对成骨细胞群成骨作用的影响
11
作者 向琳 《国际口腔医学杂志》 CAS 2011年第3期296-296,共1页
血管发生是骨修复早期的关键环节之一,功能性微血管网的形成对骨组织再生至关重要,可促进血管内皮细胞与成骨细胞在信号通路上的相互作用,有利于后者在骨缺损区的募集和分化。
关键词 形态发生蛋白-2 血管内皮生长因子 作用 细胞群 组织再生 血管内皮细胞 信号通路 血管发生
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人骨形态发生蛋白-2重组腺病毒的构建与制备
12
作者 刘继中 纪宗玲 +3 位作者 朱帮福 陶惠人 胡蕴玉 陈苏民 《生物技术通讯》 CAS 2003年第1期16-19,共4页
将人BMP-2的编码区cDNA克隆至穿梭载体pShuttle,以PI-SceI和I-CeuI切下含BMP-2编码区cDNA的片断,在体外与PI-SceI/I-CeuI切开的腺病毒DNA连接,构建重组有BMP-2全长编码区基因的腺病毒DNA,PCR鉴定正确后,经PacI酶切线性化,在脂质体介导... 将人BMP-2的编码区cDNA克隆至穿梭载体pShuttle,以PI-SceI和I-CeuI切下含BMP-2编码区cDNA的片断,在体外与PI-SceI/I-CeuI切开的腺病毒DNA连接,构建重组有BMP-2全长编码区基因的腺病毒DNA,PCR鉴定正确后,经PacI酶切线性化,在脂质体介导下转染HEK293细胞,反复冻融制备重组腺病毒,空斑形成试验测定病毒滴度约为7.5×106~1.5×107pfu/ml。以BMP-2重组腺病毒感染体外培养的小鼠成肌细胞C2C12,Westernblot检测证实有BMP-2表达。 展开更多
关键词 形态发生蛋白-2 重组腺病毒 构建 制备 基因表达
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骨形态发生蛋白-2基因工程菌的构建及可溶性研究 被引量:1
13
作者 赵瑾 陈洪 林陈水 《浙江工业大学学报》 CAS 2012年第3期257-260,共4页
骨形态发生蛋白是一类调节骨组织发育的生长因子,其中骨形态发生蛋白-2诱导成骨活性最强,在骨组织工程研究中最具研究意义.为获得能高效表达溶解性高的人骨形成蛋白-2(BMP-2)的基因工程菌,用PCR方法扩增得到BMP-2的基因序列,直接将PCR... 骨形态发生蛋白是一类调节骨组织发育的生长因子,其中骨形态发生蛋白-2诱导成骨活性最强,在骨组织工程研究中最具研究意义.为获得能高效表达溶解性高的人骨形成蛋白-2(BMP-2)的基因工程菌,用PCR方法扩增得到BMP-2的基因序列,直接将PCR产物连接到胞内融合表达型T载体质粒pMT-L上,构建包括麦芽糖结合蛋白(MBP)、连接肽、6个His、EKsite(Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)和BMP-2的表达载体,转化E.coli DH5α,经抗性筛选和菌落PCR鉴定,抽提阳性克隆质粒转化表达宿主E.coli BL21(DE3),成功构建可在大肠杆菌细胞质内表达MBP-BMP-2融合蛋白的基因工程菌.工程菌经0.1mmol/L IPTG诱导后,可获得表观分子量约为55kD的以可溶形式表达的BMP-2融合蛋白. 展开更多
关键词 形态发生蛋白-2(BMP-2) 菌落PCR 麦芽糖结合蛋白 融合表达
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骨形态发生蛋白-2在先天性胫骨假关节中的应用进展 被引量:4
14
作者 邓华军 梅海波 《临床小儿外科杂志》 CAS 2016年第3期288-291,311,共5页
先天性胫骨假关节(congenital pseudarthrosis of the tibia,CPT)是发生在儿童的一种罕见疾病,常伴随Ⅰ型神经纤维瘤病(Neurofibromatosis type 1,NF —1)。由于胫骨发育畸形导致胫骨成角、髓腔狭窄或囊肿,最终形成不愈合的假... 先天性胫骨假关节(congenital pseudarthrosis of the tibia,CPT)是发生在儿童的一种罕见疾病,常伴随Ⅰ型神经纤维瘤病(Neurofibromatosis type 1,NF —1)。由于胫骨发育畸形导致胫骨成角、髓腔狭窄或囊肿,最终形成不愈合的假关节[1]。自 Paget 于1891年报道该病以来,其病因机制尚未阐明[1-3]。治疗主要以手术为主,尽管术式不断改进,但目前仍没有一种理想的术式,术后肢体短缩、成角畸形、再骨折不愈合等风险并未降低[4]。近年来骨形态发生蛋白(Bone Morphogenetic Proteins,BMPs)在骨缺损及骨不连中的应用成为热点,BMPs 属于转化生长因子β(Transforming Growth Factor beta,TGF —β)超家族中的一种蛋白调节因子,对于骨及软骨的形成与修复起着关键性作用[5]。美国食品药物管理局(Food and Drug Administration,FDA)目前已批准人重组骨性态发生蛋白-7(Recombinant Human Bone Morphogenetic Protein —7,rhBMP —7)以及人重组骨性态发生蛋白—2(Recombinant Human Bone Morphogenetic Protein -2,rhBMP —2)用于成人脊柱融合手术、成人胫骨开放性骨缺损及胫骨骨不连等一些特定骨科疾病[6,7]。近年来 BMP -2在儿童先天性胫骨假关节治疗中的应用取得了一定疗效,本文就 BMP—2在儿童先天性胫骨假关节中的应用综述如下。 展开更多
关键词 形态发生蛋白-2 先天性胫假关节 应用 PROTEIN 美国食品药物管理局 Ⅰ型神经纤维瘤病 转化生长因子Β 折不愈合
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骨形态发生蛋白-7对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用 被引量:1
15
作者 曹东明 李晓慧 +1 位作者 李龙 裴海涛 《中国临床医学》 2013年第5期616-619,共4页
目的:探讨骨形态发生蛋白-7(130ne morphogenetic protein-7,BMP-7)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法:采用线栓法建立大脑局灶性脑缺血再罐注损伤模型,按照随机数字表法将Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组... 目的:探讨骨形态发生蛋白-7(130ne morphogenetic protein-7,BMP-7)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法:采用线栓法建立大脑局灶性脑缺血再罐注损伤模型,按照随机数字表法将Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、BMP-7治疗组。在缺血2 h再灌注24 h后对各组进行神经功能评分。采用原位末端标记法(TUNEL法)检测皮质区神经细胞凋亡,采用实时定量-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western b10tting)分别检测皮层区凋亡活化因子-1(apoptotic protease activating factor-1,Apaf-1)和Bcl-2/腺病毒E1 B 1 9kDa相互作用蛋白3(Bcl-2/adenovirus E1B 19 kDa interacting protein 3,BNIP3)的mRNA及蛋白的表达。结果:与模型组相比,BMP-7治疗组大鼠神经功能评分明显降低,TUNEL阳性细胞数减少,缺血侧皮层Apaf-1和BNIP3的mRNA和蛋白表达均降低。结论:BMP-7可能通过下调Apaf-1和BNIP3的表达抑制神经细胞凋亡,从而减轻脑缺血再灌注损伤。 展开更多
关键词 脑缺血再灌注损伤 形态发生蛋白-7 凋亡活化因子-1 BCL-2 腺病毒E1B 19kDa相互作用蛋白3
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重组人骨形态发生蛋白-2的制备及成骨活性表征
16
作者 李贵龙 王靖 刘昌胜 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第8期3183-3188,共6页
骨形态发生蛋白-2(BMP-2)是重要的骨诱导生长因子,是提高骨修复材料活性和临床骨修复效果的有效手段和关键物质。由于BMP-2在体内含量低,依靠从动物体内提取难以满足临床需求。本文研究满足临床需求的BMP-2的制备方法,并评价其生物活性... 骨形态发生蛋白-2(BMP-2)是重要的骨诱导生长因子,是提高骨修复材料活性和临床骨修复效果的有效手段和关键物质。由于BMP-2在体内含量低,依靠从动物体内提取难以满足临床需求。本文研究满足临床需求的BMP-2的制备方法,并评价其生物活性。采用密码子优化方法,并通过进一步更换其中部分核苷酸编码,得到优化的h BMP-2基因的DNA序列,制备大肠杆菌rh BMP-2菌株,通过发酵及工艺优化,获得BMP包涵体,经分离纯化与复性,制备出高纯度的rh BMP-2。测定C2C12细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性来表征单倍体和二倍体BMP-2的成骨活性,发现二倍体rh BMP-2的成骨活性明显高于单倍体rh BMP-2,并且随着BMP-2浓度增加,碱性磷酸酶活性上升。体内动物异位成骨实验发现rh BMP-2肌带植入小鼠体内3周后,取出的异位骨颗粒鲜艳饱满,骨结构完整;HE切片和Masson三色切片都显示出良好的异位成骨效果。此方法制备的rh BMP-2具有良好的诱导成骨分化能力,可用于骨组织修复,满足临床需要。 展开更多
关键词 修复 生物医学工程 蛋白 蛋白质复性 形态发生蛋白-2 原核表达
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骨形态发生蛋白的可溶性表达、纯化及抗体制备 被引量:3
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作者 邓少林 权毅 +1 位作者 潘显明 屈波 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期19-22,51,共5页
目的用RT-PCR技术优化表达条件获得表达量比较高的BMP-2ω蛋白,获得纯度较高的蛋白。方法用RT-PCR技术从SAOS-2细胞的总RNA中扩增出BMP-2基因片段BMP-2ω(606-846bp),并插入到原核表达载体pET-28a(+)上;转化大肠杆菌BL21(DE3),进行诱导... 目的用RT-PCR技术优化表达条件获得表达量比较高的BMP-2ω蛋白,获得纯度较高的蛋白。方法用RT-PCR技术从SAOS-2细胞的总RNA中扩增出BMP-2基因片段BMP-2ω(606-846bp),并插入到原核表达载体pET-28a(+)上;转化大肠杆菌BL21(DE3),进行诱导表达研究,使其在大肠杆菌中能够可溶性表达,用镍离子螯和柱(Ni-NTA)纯化BMP-2ω蛋白,获得纯度较高的蛋白,用纯蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。结果ELISA结果显示效价可达到1∶6400;Western印迹结果表明该抗体可以与BMP-2蛋白特异结合。结论为BMP-2在骨肉瘤发生、发展中的作用的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 形态发生蛋白-2 原核表达 抗体
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骨肉瘤组织中环氧合酶-2和基质金属蛋白酶-2的表达及其意义 被引量:5
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作者 祝勇 池永龙 +1 位作者 王岩峰 范广宇 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2005年第2期91-94,共4页
目的探讨环氧合酶-2(COX-2)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在骨肉瘤中表达的临床意义。方法采用免疫组织化学方法(S-P法)检测31例骨肉瘤组织标本中COX-2和MMP-2蛋白的表达。结果骨肉瘤组织中COX-2和MMP-2蛋白的阳性率分别为61.30%和54.80%,... 目的探讨环氧合酶-2(COX-2)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在骨肉瘤中表达的临床意义。方法采用免疫组织化学方法(S-P法)检测31例骨肉瘤组织标本中COX-2和MMP-2蛋白的表达。结果骨肉瘤组织中COX-2和MMP-2蛋白的阳性率分别为61.30%和54.80%,显著高于对照组骨软骨瘤组织(P<0.05)。COX-2的表达与骨肉瘤组织分级、肺转移有关(P=0.033,P=0.008)。MMP-2的表达与肺转移有关(P=0.019),而与组织分级关系不大(P=0.821)。COX-2的表达与MMP-2的表达密切相关(r=0.007,P=0.008)。二者的表达与患者的性别、年龄无关。结论在骨肉瘤中,COX-2、MMP-2参与肿瘤发生发展过程,并且它们之间具有协同作用。 展开更多
关键词 肉瘤组织 环氧合酶-2 基质金属蛋白-2(MMP-2) MMP-2蛋白 其意义 表达 COX-2 免疫组织化学方法 组织分级 临床意义 组织标本 发生发展 协同作用 肺转移 阳性率 对照组
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和胃接骨胶囊对实验性大鼠骨折愈合过程中BMP-2表达的影响 被引量:4
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作者 周辉 范希玲 +3 位作者 韩根勇 张志敬 乐军 胡庆丰 《中医正骨》 2007年第4期3-5,共3页
为探讨和胃接骨胶囊对实验性大鼠骨折愈合过程中骨形态发生蛋白-2表达的影响,取SD大鼠60只,随机分为生理盐水组、麝香接骨丹组、和胃接骨胶囊组,徒手造成大鼠下肢胫腓骨标准骨折模型,造模成功后分别于1、2、4、6周每组断颈法处死5只大鼠... 为探讨和胃接骨胶囊对实验性大鼠骨折愈合过程中骨形态发生蛋白-2表达的影响,取SD大鼠60只,随机分为生理盐水组、麝香接骨丹组、和胃接骨胶囊组,徒手造成大鼠下肢胫腓骨标准骨折模型,造模成功后分别于1、2、4、6周每组断颈法处死5只大鼠,取骨痂组织制成病理切片,采用免疫组化染色技术进行染色,并用图像分析系统对骨形态发生蛋白-2的表达进行定量分析。结果显示,在骨折愈合过程中各组骨形态发生蛋白-2含量的总体变化趋势基本相同,骨形态发生蛋白-2表达的高峰都出现在骨折后第2周,但和胃接骨胶囊组骨形态发生蛋白-2阳性产物含量优于同期其他两组(P<0.05)。表明和胃接骨胶囊能诱导骨形态发生蛋白-2的合成,可能是其促进骨折愈合的机理之一。 展开更多
关键词 和胃接胶囊/药效学折愈合腐物作用 骨形态发生蛋白-2的表达/药物作用 实验研究动物大鼠
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BMP-2、bFGF在牵引成骨中的表达及意义 被引量:18
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作者 周诺 麦华明 +1 位作者 梁飞新 韦山良 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2004年第5期465-468,共4页
目的 :通过两种不同术式的比较 ,研究骨形态发生蛋白 - 2 (BMP - 2 )、碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)的表达水平和成骨的关系 ,探讨牵引成骨的成骨机制。方法 :2 8只狗随机分为牵引成骨组和直接延长组各 12只及正常对照组 4只 ,用免疫... 目的 :通过两种不同术式的比较 ,研究骨形态发生蛋白 - 2 (BMP - 2 )、碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)的表达水平和成骨的关系 ,探讨牵引成骨的成骨机制。方法 :2 8只狗随机分为牵引成骨组和直接延长组各 12只及正常对照组 4只 ,用免疫组化染色方法观察比较BMP - 2、bFGF在两组牵引第 6天、固定 2周、固定 8周时的表达情况。结果 :两组在牵引第 6天骨断端附近的新生编织骨边缘基质及周缘的活跃的成骨细胞、骨膜下及牵开区增生活跃的间充质细胞、成纤维细胞、胶原纤维基质均可见BMP - 2、bFGF强阳性的染色 ,染色平均灰度比较均无统计学差异 (P >0 .0 5 ) ;牵引后固定 2周 ,牵引组新生编织骨边缘的成骨细胞、软骨细胞、牵开区纤维结缔组织仍可见BMP - 2、bFGF阳性染色 ,而直接延长组的BMP - 2、bFGF在牵开区的染色强度明显降低 (P <0 .0 5 ) ;牵引后固定8周 ,BMP - 2、bFGF在牵引组和直接延长组的组织中的染色强度均明显减弱 ,染色灰度比较均无统计学差异 (P >0 .0 5 )。结论 :在下颌骨牵引成骨过程中 ,在机械的牵引力和微创伤等多种因素刺激下 ,局部牵开区BMP - 2和bFGF持续高表达。两种生长因子可能共同参与促进了牵开区大量新骨的形成。 展开更多
关键词 牵引成 形态发生蛋白-2 碱性成纤维细胞生长因子 表达
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