动脉阻塞性疾病患者血浆骨形态发生蛋白-4的表达变化及其与炎症和血管损伤的相关性

目的:骨形态发生蛋白-4(bone morphogenentic protein-4,BMP4)在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的病理过程中具有重要调节作用,但相关的临床研究较少。本研究拟观察以AS为主要病理特点的动脉阻塞性疾病(arterial occlusive disease,ACD)患者血浆BMP4的表达情况,并分析血浆中BMP4与炎症因子和血管损伤标志物之间的相关性。方法:共招募38名诊断为ACD的患者(ACD组)和38名体检志愿者(对照组),抽取ACD组患者术前和对照组体检时的静脉血,比较2组血常规指标的差异。采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血浆中BMP4、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-10及血管内皮钙黏蛋白(vascular endothelial cadherin,VE-cadherin)的表达变化,并进一步分析BMP4与以上各指标之间的相关性。结果:与对照组相比,ACD组患者血常规结果表现为中性粒细胞-淋巴细胞比值[neutrophil to lymphocyte ratio,NLR;1.63(1.26,1.91)vs 3.43(2.16,6.61)]和血小板-淋巴细胞比值[platelet to lymphocyte ratio,PLR;6.37(5.26,7.74)vs 15.79(7.97,20.53)]升高、淋巴细胞-单核细胞比值[lymphocyte to monocyte ratio,LMR;5.67(4.41,7.14)vs3.43(2.07,3.74)]下降(均P<0.05);ACD组患者血浆BMP4[581.26(389.85,735.64)pg/mL vs 653.97(510.95,890.43)pg/mL]、TNF-α[254.16(182.96,340.70)pg/mLvs293.29(238.90,383.44)pg/mL]及内皮标志物VE-cadherin[1.54(1.08,2.13)ng/mL vs 1.85(1.30,2.54)ng/mL]的水平均显著升高,而抗炎因子IL-10的水平显著下降[175.89(118.39,219.25)pg/mLvs135.92(95.80,178.04)pg/mL](均P<0.05)。2组间促炎因子IL-1β的差异无统计学意义[300.39(205.39,403.56)pg/mL vs 378.46(243.20,448.69)pg/mL;P=0.09]。相关分析结果表明:血浆BMP4水平与促炎因子IL-1β(r=0.35)、TNF-α(r=0.31)以及内皮标志物VE-cadherin(r=0.47)呈正相关,与抗炎因子IL-10呈负相关(r=-0.37;均P<0.01)。结论:ACD患者血浆BMP4的水平升高,且与患者的炎症水平和血管损伤程度具有相关性。

骨形态发生蛋白-4对人始基卵泡的作用

【目的】观察骨形态发生蛋白-4(BMP-4)对人卵巢组织体外培养中始基卵泡存活和生长发育的影响。【方法】34例卵巢组织切成2mm×2mm×1mm皮质片,每例标本的皮质片均随机分成3组:研究组(BMP-4组)、对照组和非培养组,培养15d后行组织学检查、雌孕激素测定和凋亡分析。【结果】培养结束后对照组和研究组始基卵泡比例分别为58%±35%和48%±40%,低于非培养组(91%±9%),P<0.05;窦前卵泡比例分别为52%±40%和42%±35%,高于非培养组(9%±9%),P<0.05。研究组间质细胞凋亡指数和培养液孕激素浓度分别为(0.16±0.08)μg/L和(3.6±2.0)μg/L,低于对照组,对照组分别为(0.41±0.16)μg/L和(6±4)μg/L(P<0.05)。【结论】BMP-4可以促进始基卵泡向窦前卵泡转化,降低细胞凋亡率,抑制孕激素分泌,是卵泡生长发育过程中的促进因子。

骨形态发生蛋白-4基因单核苷酸多态性与颈椎后纵韧带骨化症

目的探讨骨形态发生蛋白-4(BMP-4)单核苷酸多态性与颈椎后纵韧带骨化(OPLL)的遗传关联性。方法 OPLL病例组和正常对照组各200例,利用聚合酶链反应(PCR)和直接测序法分析BMP-4上4个单核苷酸多态性位点6007C>T(rs17563),-5826G>A(rs1957860),3564C>T(rs2855532)和IVS-160C>T(rs2071047)基因型及等位基因的分布。结果 两组间位点rs17563、rs2855532基因型与等位基因型有显著性差异(P<0.05)。病例组中rs17563带C+基因型与C-基因型骨化椎体数量有非常高度显著性差异(P<0.001),前者骨化椎体数量明显少于后者;rs2855532T+基因型与T-基因型骨化椎体数量有显著性差异(P<0.05),前者骨化椎体数量多于后者。余两位点无显著性差异(P>0.05)。结论 BMP-4基因的两个单核酸多态性位点rs17563、rs2855532等位基因型突变与OPLL的发生和发展有关。

骨形态发生蛋白-4的研究进展

骨形态发生蛋白（bone morphogenetic proteins，BMPs）属转化生长因子13（transforming growth factor-β，TGF-β）超家族成员，是1965年由Urist等首先从脱钙骨基质提取物中分离得到的一种具有独特异位骨和软骨诱导活性的酸性蛋白质。这种蛋白质具有使未分化的间充质定向分化为成骨细胞，并进而合成胶原、形成钙化骨组织的能力，因此命名为骨形态发生蛋白。在体（invivo）和离体（indtro）实验表明，

骨形态发生蛋白-4基因重组腺病毒载体的构建

目的:通过Cre/LoxP位点特异性重组系统构建携带人骨形态发生蛋白-4基因的重组腺病毒载体(Ad.BMP4)。方法:根据GenBank获得BMP4的基因序列合成引物,经PCR扩增获得长度为1230bp的BMP4基因片断,经酶切、测序鉴定后,与腺病毒穿梭质粒pSuCMV连接,随后与5'缺陷型腺病毒右臂的质粒pBGHloxPΔE1E3通过脂质体Lipofectamine2000共转染至293细胞,获得重组腺病毒Ad.BMP4,并予以扩增、纯化、鉴定。结果:经酶切电泳和测序证明获得的BMP4基因片断序列、大小和方向正确,目的基因插入的位置、方向正确,经重组、扩增和纯化后获得病毒滴度为2.9×109pfu/ml的重组腺病毒Ad.BMP4,以PCR扩增和测序的方法证实了所构建病毒含有目的基因的片断,安全性检测证明所构建的腺病毒无野生性腺病毒的存在。结论:通过Cre/LoxP位点特异性重组系统构建了腺病毒Ad.BMP4。采用的腺病毒载体点特异性重组的方法极大地提高了包装成功率,且包装成功的病毒颗粒均为含有目的基因的重组病毒,从而保证了重组过程的快速和高效。

人骨形态发生蛋白-4成熟肽cDNA的克隆

目的 :克隆人骨形态发生蛋白 4完整成熟肽的基因。方法 :根据Genebank人骨形态发生蛋白 4的基因序列化学合成两条引物 ,从人胎盘组织中提取得到总RNA ,用反转录聚合酶链式反应 (RT PCR )技术扩增出长 0 .3 4kb编码人骨形态发生蛋白 4(BMP 4)成熟肽的基因序列。将所得的基因片段插入克隆载体PBluescriptⅡSK质粒中并转化大肠杆菌TG 1,提取重组质粒 ,酶切鉴定并测序。结果 :RT PCR产物琼脂糖凝胶电泳显示一长约 3 70bp的条带 ,阳性克隆质粒经双酶切可切出约 3 5 0bp的片段 ,全自动DNA测序结果表明和Genebank中的序列完全相符。结论 :通过反转录聚合酶链式反应可从人胎盘组织中成功克隆出人BMP 4成熟肽基因。

骨形态发生蛋白-4和-7对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响

目的探究骨形态发生蛋白-4(bone morphogenetic protein-4,BMP-4)和BMP-7对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,h PDLSCs)增殖和成骨分化的影响。方法免疫磁珠法分离培养人PDLSCs,观察细胞生长情况,鉴定细胞表型(CD146、CD44和CD34)和多项分化潜能(成骨、成脂)。将获得的PDLSCs分为BMP-4处理组、BMP-7处理组、BMP-4+BMP-7处理组,分别进行浓度梯度实验(每组均加入浓度梯度为0,5,10,20,40 ng/ml的相应BMP培养基培养192 h)和时间梯度实验(每组加入浓度为40 ng/ml的对应BMP培养基,均以0,48,96,144,192 h的时间梯度进行培养),收集细胞。MTT法和碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测PDLSCs增殖和ALP活性,免疫化学染色分析成骨分化相关基因骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen typeⅠ,COLⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白(collagen typeⅢ,COLⅢ)表达改变。结果分离培养的PDLSCs高表达表面抗原CD146(93%)、CD44(91. 2%),低表达CD34(1. 8%),经成骨、成脂诱导后,分别形成红色矿化结节和橘红色颗粒状脂滴。BMP-4、BMP-7、BMP-4+BMP-7均可呈时间和剂量依赖方式促进PDLSCs增殖和ALP活性表达(P <0. 05),且可增加成骨分化相关基因OCN、BSP、COLⅠ和COLⅢ表达(P <0. 05)。与BMP-4或BMP-7相比,BMP-4+BMP-7联合作用时,PDLSCs增殖和ALP活性更强(P <0. 05),然而OCN、BSP、COLⅠ和COLⅢ表达差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论 BMP-4、BMP-7、BMP-4+BMP-7均可促进PDLSCs增殖和成骨分化,BMP-4+BMP-7联合作用时细胞增殖和ALP活性更强,具有协同作用。

骨形态发生蛋白-4对肝干细胞增殖与分化的影响

目的:探讨骨形态发生蛋白-4(BMP-4)对大鼠肝干细胞系WB-F344的增殖及分化的影响。方法:采用50 ng/mL的基因重组BMP-4作用于WB-F344细胞,以BMP-4拮抗剂Noggin(200 ng/mL)阻断BMP-4的作用为对照。在实验不同时间点,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测BMP-4对WB-F344增殖的影响,透射电镜下观察细胞的超微结构特征,RT-PCR检测各试验组中WB-F344细胞可能分化表型特异性分子标志物的mRNA表达。结果:细胞增殖实验显示:在不同作用时间点,BMP-4干预组的细胞吸光值均高于Noggin处理组和空白对照组。透射电镜下可观察到BMP-4干预后的WB-F344细胞具有分化良好的上皮细胞的超微结构特征。RT-PCR显示BMP-4诱导WB-F344分化后,肝干细胞的肝细胞特异性分子标志物的mRNA显著表达。结论:BMP-4可促进肝干细胞WB-F344的增殖,并诱导其向肝细胞定向分化。

骨形态发生蛋白-4在创伤性骨化性肌炎大鼠模型的表达及意义

目的探讨骨形态发生蛋白-4 (BMP-4)在大鼠创伤性骨化性肌炎(TMO)模型的表达及意义。方法选取60只4~6周龄SD大鼠,随机分为对照组、模型组和药物组,模型组和药物组均建立大鼠右侧跟腱创伤性异位骨化模型,药物组大鼠予塞来昔布10mg/(kg·d)灌胃,模型组、对照组分别灌胃2mL生理盐水,于第5、10周各麻醉30只实验动物,拍片观察异位骨化形成情况,定量分析BMP-4与IL-2基因表达,以Western blot检测BMP-4蛋白的表达。结果模型组与药物组跟腱均有异位骨的形成,药物组跟腱异位骨化形成速率低于模型组,发生成骨时间较晚,差异有统计学意义(P<0.05)。术后实时定量PCR检测数据表明,模型组大鼠右跟腱组织中BMP-4基因表达明显高于左跟腱组织,药物组大鼠右跟腱组织中BMP-4基因表达显著降低。蛋白质免疫印迹检查组织中BMP-4蛋白的表达发现,药物组大鼠骨化组织部位BMP-4蛋白明显低于模型组。免疫组化结果表明,模型组大鼠组织中BMP-4蛋白表达的阳性率明显高于同只大鼠左腿对照组织;药物组大鼠跟腱组织中BMP-4表达的阳性率较模型组降低,并药物组BMP-4表达阳性率随着用药时间的延长而降低,跟腱组织中BMP-4表达的阳性率与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BMP-4在创伤性骨化性肌炎大鼠模型的表达与骨化程度呈正相关,塞来昔布可有效地减少或减轻大鼠跟腱术后炎症反应,抑制BMP-4表达,从而减缓创伤性骨化性肌炎的发生。

富血小板纤维蛋白对兔下颌骨牵引成骨区骨形态发生蛋白-4表达的影响

目的:探讨富血小板纤维蛋白(PRF)对牵引成骨区骨形态发生蛋白-4(BMP-4)表达的影响。方法:25只大耳白兔随机分2组,分别行双侧下颌骨皮质骨切开术,一侧下颌骨牵引间隙放置PRF膜作为实验组,对侧作为对照组,分别于稳定期第3、7、14、21、28天处死一组动物,切取牵引间隙处骨痂行H-E染色和BMP-4免疫组织化学显色,细胞图像分析仪测量牵引间隙处骨痂BMP-4表达情况。结果:下颌牵引延长后牵引间隙均有新骨形成,免疫组织化学显色显示BMP-4主要定位于成骨细胞的细胞质中。实验组在稳定期3、7、14、21 d BMP-4表达的阳性细胞率和阳性面积百分比均显著高于对照组,稳定期28 d BMP-4表达的阳性细胞率和阳性面积百分比与对照组比较差异均无统计学意义。结论:PRF能促进兔下颌骨牵引成骨区新骨的生成,BMP-4可能在牵引成骨过程中调控组织细胞应力信号传递,发挥成骨作用。

过表达骨形态发生蛋白-4对小鼠诱导性多能干细胞生物学活性的影响

目的构建过表达骨形态发生蛋白-4(BMP4)基因的慢病毒载体,探讨其过表达后对小鼠诱导性多能干细胞(i PS)生物学活性的影响。方法采用慢病毒转染建立稳定过表达BMP4的i PS细胞株(BMP4过表达组),未作任何转染的细胞为空白组,转染慢病毒阴性对照组的细胞为空载体组。CCK8检测各组细胞增殖活性,碱性磷酸酶(ALP)活性检测细胞分化程度,荧光定量聚合酶链反应检测BMP4、成釉细胞蛋白(AMBN)、细胞角蛋白(CK)14、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、骨唾液酸蛋白(BSP)及骨细胞特异转录因子Runx2的mRNA表达。结果与空白组及空载体组相比,BMP4过表达组的细胞增殖活性及ALP活性升高(P<0.05),Runx2、AMBN、CK14、DSPP、BSPmRNA的表达增加(P<0.05)。结论 BMP4基因能够促进i PS的牙向分化。

人骨形态发生蛋白-4@MSNs调控Wnt/β-连环蛋白信号促进骨髓间充质干细胞成骨分化

目的探讨介孔二氧化硅(MSNs)纳米颗粒负载人骨形态发生蛋白-4(BMP-4)对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响和作用机制。方法制备BMP-4@MSNs,扫描电镜观察其形态和表征,计算BMP-4的载药量、包封率和体外缓释率。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测BMSCs增殖能力,茜素红染色检测BMP-4@MSNs对BMSCs的成骨诱导能力,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测BMSCs的相关成骨基因和蛋白表达。组内比较采用One-way ANOVA分析。结果合成的BMP4@MSNs直径大小为(140.4±1.683)nm,载药量为29.4%,包埋率为84.9%。BMP4@MSNs组细胞增殖高于MSNs组在第3天(1.13±0.07比1.35±0.16,t=3.545,P<0.05)、第5天(1.39±0.08比1.64±0.07,t=3.401,P<0.05)、第7天(1.65±0.10比2.11±0.20,t=5.069,P<0.05)。BMP4@MSNs组的成骨矿化结节茜素红染色深度高于对照组和MSNs组。RT-PCR和Western blot结果提示BMP4@MSNs具有上调成骨相关基因和蛋白(RUNX2、OCN、Osterix)的表达,及上调Wnt/β-连环蛋白(β-Catenin)信号通路相关基因和蛋白(β-Catenin、LRP5)的表达和下调GSK-3β关基因和蛋白的表达。结论BMP-4@MSNs通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进骨髓间充质干细胞成骨分化。

同源盒基因／骨形态发生蛋白-4信号在小儿先天性肛门直肠畸形中的表达

目的探讨同源盒基因（Hox）/骨形态发生蛋白-4（BMP-4）信号在小儿先天性肛门直肠畸形中的表达。 方法实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测音猬因子（Shh）、BMP-4和Hox在小儿先天性直肠肛门畸形中的表达水平。用乙烯硫脲诱导孕鼠胎仔产生先天性肛门畸形鼠胚。免疫组织化学和RT-qPCR检测受孕后第12、13、14、15、16天胎仔直肠末端Shh、BMP-4和Hox的表达。Western blot检测受孕第16天胎仔直肠末端Shh、BMP-4和Hox水平。 结果对照组中Shh、BMP-4和Hox水平约为小儿先天性肛门直肠高位畸形组织中2倍；低位畸形组织中Shh、BMP-4和Hox水平与对照组比较没有明显变化。免疫组织化学结果发现，对照组和乙烯硫脲组中Shh、BMP-4和Hox在13 d平均吸光度值达到高峰，在14、15、16 d出现明显下降；对照组和乙烯硫脲组Shh 13 d时平均吸光度值依次为：0.405±0.014、0.284±0.024，BMP-4 13 d时平均吸光度值依次为：0.287±0.023、0.214±0.012 ，Hox 13 d时平均吸光度值依次为：0.395±0.029、0.199±0.015，Shh、BMP-4和Hox水平均低于对照组。对照组和乙烯硫脲组中BMP-4 mRNA水平在13 d有所增高，从14 d开始出现明显下降。对照组和乙烯硫脲组中Shh、Hox mRNA水平在12、13、14 d表达较高，而15 d表达水平明显下降，16 d有微弱回升。乙烯硫脲组中Shh、BMP-4和Hox蛋白表达水平均明显低于对照组，Shh从1.314±0.024下降至1.035±0.018，BMP-4从1.412±0.034下降至0.854±0.028，Hox从1.052±0.014下降至0.632±0.041。 结论Hox/BMP-4信号在小儿先天性肛门直肠高位畸形中低表达，乙烯硫脲可以干扰胚胎发育过程中Hox/BMP-4信号表达。

骨形态发生蛋白-4在高糖环境下静脉桥增殖重构进程中的作用研究

目的观察糖尿病大鼠自体静脉桥的形态学变化以及骨形态发生蛋白-4(bone morphogenic protein-4,BMP4)和增殖细胞抗原Ki-67在其管壁中的表达与分布情况,初步探讨BMP4在高糖环境下静脉桥增殖重构进程中的潜在作用。方法选用8周龄的48只雄性Sprague-Dawley大鼠,随机分配为非糖尿病组(即血糖正常组,n=24)及糖尿病组(n=24),采用高脂高糖饮食联合链脲佐菌素的诱导方法构建糖尿病大鼠模型。两组大鼠均建立单侧颈外静脉-颈总动脉桥接模型,每组分别于术前,术后1周、2周和4周获取大鼠静脉桥(n=6)。应用HE染色切片测算大鼠静脉桥血管壁的形态学参数,免疫组化观察Ki-67及BMP4在管壁中的表达及分布情况,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)检测BMP4基因和蛋白在静脉桥中的表达量。结果在大鼠静脉桥增殖重构进程中,管壁随时间进展不断增厚,而糖尿病大鼠术后内膜和中膜厚度均高于同期的正常大鼠(P<0.05)。免疫组化提示Ki-67表达于大鼠静脉桥管壁平滑肌细胞的胞核,Ki-67的阳性表达随桥血管增殖重构进程逐渐增高,而术后糖尿病大鼠静脉桥内Ki-67的阳性细胞数高于同期的正常大鼠(P<0.05)。免疫组化提示BMP4表达于大鼠静脉桥管壁平滑肌细胞的胞浆,结合RT-PCR及Western blot检测发现,正常大鼠术后静脉桥中仅有少量BMP4的表达,而糖尿病大鼠静脉桥管壁内BMP4的阳性细胞数以及在基因和蛋白水平的表达量均随时间进展逐渐增高,并高于术后同期的正常大鼠(P<0.05)。结论糖尿病大鼠静脉移植术后桥血管增殖性重构改变与管壁内BMP4的高表达密切相关,而BMP4可能在高糖环境下静脉桥加速失效进程中发挥了重要的促进作用。

利用包载骨形态发生蛋白-4腺病毒异位成骨移植修补骨缺损的研究

目的构建包载骨形态发生蛋白(BMP)-4的腺病毒并利用其骨骼肌内异位成骨特性,探索移植异位形成的自体骨进行骨缺损修补的体内效果。方法2018年6月至2020年3月,将BMP-4基因构建入AAV载体内,纯化出AAV-BMP-4。将AAV-BMP-4吸附于明胶海绵(Gelfoam)上并植入郑州大学实验动物中心SPF饲养室饲养的SCID小鼠的股肌袋内,4周后进行AAV-BMP-4的活性测定。在小鼠背部皮下应用AAV-BMP-4,观察骨骼肌肉诱导异位成骨,待骨组织形成稳定后,取出这些骨组织移植入事先制备好的小鼠的颅骨缺损模型中,观察其骨缺损修复效果。结果成功构建出纯化后浓度达5×1012 vp/ml的AAV-BMP-4病毒颗粒。病毒颗粒植入小鼠的股肌袋内可成功诱导异位骨组织的形成,小鼠背部皮下植入AAV-BMP-4+Gelfoam复合体后4周出现了少量的新生骨组织,骨量达1 cm×2 cm×2 cm。X线和MicroCT的检查均证实了小鼠的背部皮下骨组织形成。经修剪移植入小鼠颅骨缺损模型处的骨组织在植入缺损处后,没有出现异常增生的现象,而是不断地随着时间的推移进行着外形的轻微改建,颅骨缺损得到了良好的修复。结论体外构建的AAV-BMP-4具有良好的生物学活性,AAV-BMP-4+Gelfoam在骨骼肌肉中可有效诱导成骨,利用新生骨组织可以成功地修复颅骨缺损的动物模型。移植的骨组织植入颅骨缺损后未出现过度生长的现象,且与宿主骨结合良好。

骨形态发生蛋白质-4转染骨髓间充质干细胞复合双层聚乳酸羟基乙酸共聚物支架修复兔膝关节软骨缺损

目的：探讨骨形态发生蛋白质-4（BMP-4）基因转染骨髓间充质干细胞（BMSCs）复合聚乳酸羟基乙酸共聚物（PLGA）修复兔全层关节软骨缺损的效果。方法：取兔骨髓间充质干细胞，分离培养后，免疫组织化学鉴定BMSCs。采用电转法将pcDNA3-1-BMP-4质粒导入BMSCs。转染成功后培养备用。制备直径为4mm的双层PLGA支架。新西兰大白兔随机分成空白组、PLGA组、PLGA/BMSCs组、PLGA/BMP-4/BMSCs组4组，将双层PLGA支架置入兔双膝关节股骨内侧髁软骨缺损中。观察并记录术后动物膝关节活动情况。第8、16周时取膝关节置入组织行H-E染色，在扫描电镜下观察置入的PLGA新生组织。采用RT-PCR法定量检测4组修复软骨缺损处新生的软骨Ⅱ型胶原、SOX9、蛋白聚糖基因的表达水平。结果：术后各组动物膝关节活动正常，未见炎症反应。第8、16周时PLGA/BMP4/BMSCs组兔膝关节损伤修复优于其他3组。H-E染色结果可见PLGA/BMP4/BMSCs组膝关节损伤修复效果优于其他3组。RT-PCR结果显示PLGA/BMP4/BMSCs组兔置入的PLGA新生的软骨中Ⅱ型胶原、SOX-9、蛋白聚糖基因的表达水平显著高于其他各组。结论：BMP-4转染BMSCs后能够促进骨髓间充质干细胞分化成软骨细胞，双层PLGA支架置入有利于兔膝关节软骨缺损区的修复。

骨形态发生蛋白-4对甲状腺癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响及机制

目的探讨骨形态发生蛋白-4(BMP4)通过细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路对甲状腺癌细胞增殖、凋亡和迁移能力的影响.方法将甲状腺乳头状癌(TPC-1)细胞随机分为空白对照组(BC)、阴性对照组(NC)和干扰组(KD),BC组细胞不转染,NC组细胞转染阴性对照质粒,KD组细胞转染BMP4干扰质粒.实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定细胞中BMP4mRNA水平,细胞计数试剂盒(CCK-8)测定细胞增殖,流式细胞术测定细胞凋亡,Transwell小室和划痕实验测定细胞迁移能力,蛋白质印迹法(Western blot)测定3组TPC-1细胞ERK1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、p38MAPK、p-p38MAPK蛋白水平.应用SPSS20.0统计软件分析,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,两组比较采用t检验,3组比较采用方差分析,组内两两比较采用LSD检验.结果 TPC-1细胞中BMP4 mRNA水平(5.86±0.42)高于HT-ori3细胞(正常甲状腺细胞)(1.00±0.03,t=30.537,P<0.05).与BC组(1.00±0.02)和NC组(0.97±0.03)比较,KD组TPC-1细胞中BMP4 mRNA水平(0.35 ±0.06)降低(t=577.000,P<0.05),吸光度(A)值降低(F=12.923、20.544,P<0.05),细胞凋亡率升高(F=130.460,P<0.05),细胞迁移细胞数和迁移面积降低(F=21.483、27.015,P<0.05),p-ERK1/2、p-p38MAPK蛋白水平降低(F=30.787、10.990,P<0.05),BC组和NC组TPC-1细胞各指标比较差异无统计学意义(t =2.103、0.232、0.533、0.187、0.210、0.209、0.687、0.325、0.415,P>0.05).结论沉默BMP4可抑制甲状腺癌细胞增殖和迁移能力,促进细胞凋亡,其机制可能与下调ERK1/2/p38MAPK信号通路有关.

重组人骨形态发生蛋白4在毕赤酵母中的表达研究

试图建立人骨形态发生蛋白-4在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达技术.包括:将hBMP4成熟片段从全长cDNA亚克隆到分泌型表达载体质粒pPIC9K多克隆位点上,构建能表达rhBMP4的载体质粒pPIC9K-hBmp4.经转化Pichia pastoris宿主菌株GS115,PCR鉴定基因整合后,摇瓶培养,用甲醇诱导表达.表达上清液经SDS-PAGE和Western-blot分析,结果表明rhBMP4以单体形式分泌到发酵上清液中,单体分子质量大小约为26 ku,摇瓶表达量达到20.13μg/mL.