类风湿关节炎患者血清骨形态发生蛋白-6和白细胞介素-34表达及其与关节超声指标的相关分析

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者血清骨形态发生蛋白-6(BMP-6)和血清白细胞介素-34(IL-34)表达及其与关节超声指标检的相关性分析。方法回顾性分析本院2020年1月至2022年1月收治的RA患者120例,将其作为RA组,参照28处关节疾病活动度评估指数(DAS28)将其分为RA活动期组(84例)和RA缓解期组(36例),所有患者均行超声造影(CEUS)检查,同期选取90名健康体检者作为对照组,比较各组受试者血清BMP-6、IL-34水平、CEUS下时间-强度曲线和定量参数值,同时采用Pearson相关性分析RA患者血清BMP-6和IL-34表达及其与各关节超声指标检的相关性。结果RA组的血清BMP-6、IL-34均明显高于对照组,峰值强度(PI)、曲线下面积(AUC)、滑膜面积均大于对照组,达峰时间(TP)短于对照组(P均<0.01);RA活动期组的血清BMP-6、IL-34明显高于RA缓解期组,PI、AUC、滑膜面积均大于RA缓解期组,TP短于RA缓解期组(P均<0.01);Pearson相关性分析显示,RA患者血清BMP-6、IL-34与PI、AUC呈正相关,与TP呈负相关(均P<0.01)。结论RA患者血清BMP-6和IL-34呈明显高表达,其可反映RA的病理过程及病情变化,同时CEUS可准确评估RA关节滑膜炎活动性,为RA病情变化提供影像学证据。

重组人骨形态发生蛋白-6的表达、纯化及其活性分析

利用RT_PCR从人胎盘组织中获取BMP_6成熟肽的cDNA片段 ,并克隆到表达载体pET_15b中 ,构建hBMP_6成熟肽的非融合蛋白表达质粒pET_BMP6 ,转化E .coliBL2 1(DE3)。IPTG诱导 4h后 ,工程菌高表达rhBMP_6成熟肽 ,在SDS_PAGE上出现预期的新蛋白带 (≈ 15kD) ,约占菌体总蛋白的 10 % ,表达产物以包涵体形式存在。分离和纯化的包涵体溶解于 8mol L尿素 ,在变性溶解状态下经阳离子交换层析 ,得到目的蛋白纯度达 95 %以上。再经稀释复性后 ,约 80 %的rhBMP_6形成同源二聚体。体外活性分析结果显示 :rhBMP_6可以提高C3H10T1 2细胞碱性磷酸酶活性及促进I型胶原、Osterix(Osx)和骨钙素 (Osteocalcin)等成骨细胞表型转化标记基因mRNA的表达 。

骨形态发生蛋白-6对氧化应激状态下的视网膜色素上皮细胞基质金属蛋白酶及其抑制剂的影响

目的探讨骨形态发生蛋白-6(bone morphogenetic protein-6,BMP-6)保护视网膜色素上皮细胞免受氧化应激损伤的可能作用机制。方法将ARPE-19细胞分别置正常对照、75μmol·L-1 H2O2(H2O2组)、75μmol·L-1 H2O2+150 ng·mL-1 BMP-6(H2O2+BMP-6组)及150 ng·mL-1BMP-6(BMP-6组)环境中培养0 h、3 h、6 h、9 h及12 h后,用MTT法观察细胞的活性,确定试剂的干预时间。选定作用时间后采用Western blot及RT-qPCR测定基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)以及基质金属蛋白酶抑制剂(the inhibitor of matrix metalloproteinase-1,TIMP-1)蛋白及mRNA水平的变化。结果作用3 h及6 h后,H2O2组、BMP-6组及H2O2+BMP-6组细胞活性(3 h为0.524 8±0.024 0、1.012 5±0.017 7、0.591 7±0.099 8;6 h为0.459 3±0.030 9、1.077 5±0.021 4、0.582 0±0.013 9)差异均有统计学意义(均为P<0.05)。MMP-2、MMP-9、TIMP-1的mRNA及蛋白水平的检测结果是一致的,H2O2组、BMP-6组及H2O2+BMP-6组两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.05),各组的不同时间差异也均有统计学意义(均为P<0.05)。H2O2组随着作用时间的延长,MMP-2、MMP-9在蛋白及mRNA水平的含量表达明显增加,而TIMP-1在蛋白及mRNA水平的表达均是降低的。BMP-6组MMP-2、MMP-9在蛋白及mRNA水平的表达明显降低,而TIMP-1在蛋白及mRNA水平的表达均是升高的。BMP-6+H2O2组MMP-2、MMP-9的水平均较单纯H2O2组的水平低,而TIMP-1的水平是升高的。结论 H2O2是通过打破基质金属蛋白及其抑制剂的平衡起到氧化损伤作用。而BMP-6可以保护视网膜色素上皮细胞免受氧化应激的损伤,其可能机制是通过基质金属蛋白酶系统起作用的。

猪骨形态发生蛋白-6基因多态性及其与产仔性能的关联性分析

试验旨在研究猪骨形态发生蛋白-6(bone morphogenetic protein 6,BMP-6)基因多态性及其与产仔性能的关联。采用PCR-SSCP技术检测了野猪、民猪、长白猪、北京黑猪、法系大白猪5个猪种268个个体BMP-6基因的多态性,并分析了BMP-6基因多态性与法系大白猪产仔性能的关联性。结果表明,猪BMP-6基因CDS区1104位存在1个G→A的同义突变,产生AA、AB、BB 3种基因型,其中在野猪和民猪中,A等位基因频率高;在长白猪、北京黑猪和法系大白猪中,B等位基因频率高。不同基因型对法系大白猪产仔数和产活仔数的影响差异显著(P<0.05),初步认为BMP-6基因多态性与产仔性能显著关联。

骨形态发生蛋白-6的研究进展

骨形态发生蛋白 (BMPs)属于转化生长因子 -β(TGF-β)超家族的成员 ,最初因其能促进成骨细胞、成软骨细胞的分化和诱导异位骨的形成而得名。随着研究的深入 ,BMPs的广泛生物学功能不仅限于其诱导成骨活性 ,而且涉及几乎全身所有系统的发育和形成 ,包括心血管、胃肠、呼吸、泌尿生殖、体被及神经系统的胚胎发育、生长及分化等。 BMP- 6是 BMPs家族成员中之一 ,除了具有 BMP家族的一些特征外 ,还有其独特的分子生物学功能。本文主要阐述了 BMP- 6在近五年中的研究进展 ,包括其结构特征、信号的传递、生物学功能的多样性及其临床应用前景。

骨形态发生蛋白-6对过氧化氢造成的视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用

目的:观察骨形态发生蛋白-6(bone morphogenetic protein,BMP-6)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)作用的人视网膜色素上皮株ARPE-19细胞的细胞形态、增殖以及凋亡的影响。方法:常规培养ARPE-19细胞,分为正常对照组、75μmol/L H_2O_2及150ng/mL BMP-6、75μmol/L H_2O_2+150ng/mL BMP-6环境中培养3、6、9、12h后,MTT比色法检测细胞的活性;流式细胞仪检测细胞的周期及凋亡变化。结果:H_2O_2作用组的细胞活性随着作用时间的延长逐步降低;而BMP-6+H_2O_2组的细胞活性则较H_2O_2组高,在3h及6h时两组相比差异有统计学意义(P<0.05);细胞形态观察发现:H_2O_2培养6h后,细胞数量减少,细胞发生脱落,而添加BMP-6后细胞脱落及凋亡均要明显减少。结论:BMP-6可以一定程度上保护视网膜色素上皮受到氧化应激的损伤。

骨形态发生蛋白-6基因及其在哺乳动物生殖中的作用

骨形态发生蛋白-6(BMP-6)是骨形态发生蛋白(BMPs)家族的成员之一,最初研究是发现它具有诱导软骨内骨化、骨折愈合和异位骨形成的活性,但随着研究的逐步深入发现它在动物体内具有非常广泛的作用。本文就它在哺乳动物生殖中的相关研究做一简要总结,初步阐述了BMP-6在哺乳动物与生殖相关的器官中不同细胞类型内的表达格局、信号传递过程及其调控机制、以及BMP-6在调节哺乳动物生殖过程中的作用,并提出一些有待研究的问题。

骨形态发生蛋白-6对小鼠腔前卵泡体外成熟的影响

目的：观察骨形态发生蛋白（BMP-6）在小鼠体内和体外卯泡的定量表达，探讨外源性BMP-6对小鼠腔前卵泡体外成熟的影响及其可能的作用机制。方法：采用免疫印迹观察BMP-6蛋白在不同年龄小鼠体内，以及体外培养不同时间的卵泡中定量表达情况；采用腔前卵泡体外培养方法，将不同浓度的rhBMP-6添加至培养液中持续到培养8d或11d，观察腔前卵泡的生长、成熟情况；应用ELISA法测定和比较添加BMP-6不同剂量组在培养6、10、11d的培养液中雌二醇和孕酮的含量。结果：免疫印迹结果显示，在体内和体外培养的卵泡中均检测到BMP-6蛋白的表达，体外表达量明显低于体内。体外培养中，相对于对照组，50ng／mlBMP-6添加至培养8d显著增加腔前卵泡的成熟率，而添加至培养11d显著降低腔前卯泡的成熟率；100ng／mlBMP-6添加至培养8d和11d对腔前卵泡的成熟率无影响；50和100ng／mlBMP-6对于腔前卵泡的生长，形态上并无明显变化。ELISA结果显示，50ng／mlBMP-6添加至培养11d组中，6、10、11d培养液中雌二醇和孕酮含量低于对照组，而添加至培养8d组中，10、11d培养液中雌二醇和孕酮显著升高；100ng／mlBMP-6添加至培养8d和11d，培养液中孕酮含量明显低于其他组，但雌二醇却明显高于其他组。结论_夕h源性BMP-6能够促进腔前卵泡的体外成熟，这种作用可能是通过影响类固醇激素的合成和（或）分泌而产生的。

骨形态发生蛋白-6对转化生长因子-β2所致视网膜色素上皮细胞迁移的影响

目的探讨骨形态发生蛋白-6(BMP-6)对转化生长因子-β2(TGF-β2)所致视网膜色素上皮(RPE)细胞迁移的影响。方法RPE细胞常规培养后,用5μg·L-1 TGF-β2处理48 h,Western blot检测细胞中BMP-6蛋白水平的变化,Transwell法检测细胞迁移能力变化。随后,筛选BMP-6 siRNA抑制率最高的片段用于后续实验,构建BMP-6过表达质粒并进行鉴定后用于后续实验,RPE细胞随机分组,即(1)对照组加入正常培养基培养48 h;(2)TGF-β2组培养基中加入5μg·L-1 TGF-β2培养48 h;(3)BMP-6 siRNA组转染BMP-6-homo-1087后培养48 h;(4)BMP-6过表达组转染BMP-6过表达质粒后培养48 h;(5)TGF-β2+BMP-6过表达组转染BMP-6过表达质粒24 h后,加入5μg·L-1TGF-β2继续培养48 h。Transwell法检测细胞迁移数的变化,倒置显微镜观察细胞形态的变化。结果TGF-β2组迁移细胞数为(122.00±5.57)个,与对照组(63.67±4.04)个相比差异有统计学意义(P=0.000)。TGF-β2组BMP-6蛋白表达水平为0.41±0.13,与对照组(0.70±0.08)相比差异具有统计学意义(P=0.031)。BMP-6 siRNA组迁移细胞数为(115.67±1.53)个,与对照组(57.00±7.00)个相比差异具有统计学意义(P=0.000)。BMP-6过表达组迁移细胞数为(44.33±5.51)个,与对照组(60.00±6.25)个相比差异无统计学意义(P=0.076)。TGF-β2+BMP-6过表达组迁移细胞数为(90.33±3.51)个,与TGF-β2组(112.00±9.64)个相比差异具有统计学意义(P=0.016)。结论BMP-6可以阻止TGF-β2所致的RPE细胞的迁移,为增生性玻璃体视网膜病变的防治提供新的视角。

骨形态发生蛋白-6在骨膜细胞向软骨细胞诱导分化中的作用

目的观察骨形态发生蛋白-6（BMP-6）对兔骨膜细胞（PDCs）向软骨细胞分化的影响。方法以兔胫骨骨膜为材料，采用组织块培养法分离PDCs，培养至第3代用于实验。实验分3组：对照组、软骨诱导液组、BMP-6联合诱导液组，分别加入普通培养基、软骨诱导液和BMP-6加软骨诱导液。倒置显微镜观察各组PDCs的形态变化，14 d后分别用Ⅱ型胶原（COL2A1）免疫组织化学染色和甲苯胺蓝染色检测PDCs的COL2A1和蛋白聚糖（ACAN）的合成；反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测COL2A1、ACAN和性别决定区Y框蛋白-9（Sox-9）的mRNA和蛋白表达水平。结果（1）软骨诱导液组和BMP-6联合诱导液组PDCs逐渐变为类圆形软骨细胞形态，COL2A1免疫组织化学、甲苯胺蓝染色均为阳性，其中BMP-6联合诱导液组染色更深，对照组为阴性。（2）RT-PCR结果显示BMP-6联合诱导液组COL2A1、ACAN、Sox-9 mRNA表达量（0.813±0.042，1.621±0.156，0.927±0.218）明显高于软骨诱导液组（0.443±0.086，0.652±0.126，0.513±0.172）和对照组（0.181±0.042，0.272±0.062，0.214±0.062）（P=0.000）。（3） Western blot检测各组细胞COL2A1、ACAN、Sox-9蛋白表达，其中BMP-6联合诱导液组（0.347±0.091，0.782±0.214，0.381±0.108）蛋白表达明显高于软骨诱导液组（0.205±0.065，0.513±0.128，0.223±0.054）和对照组（0.105±0.036，0.268±0.072，0.125±0.041）（P=0.000）。结论骨膜细胞在软骨诱导液诱导条件下可以向软骨细胞分化，BMP-6具有显著促进骨膜细胞向软骨细胞分化的作用。

富血小板纤维蛋白对牵引成骨区BMP-6表达的影响

目的探讨应用富血小板纤维蛋白(PRF)对牵引成骨区骨形态发生蛋白-6(BMP-6)表达的影响。方法25只大耳白兔随机分5组,分别行双侧下颌骨皮质骨切开术,一侧下颌骨牵引间隙放置PRF膜,作为实验组,对侧作为对照组,分别于稳定期第1、3、7、14、28天处死1组动物,切取牵引间隙处骨痂行HE染色和BMP-6免疫组织化学染色,细胞图像分析仪测量牵引间隙处骨痂BMP-6表达情况。结果下颌牵引延长后牵引间隙均有新骨形成,免疫组化染色显示BMP-6主要定位于成骨细胞的胞浆中。实验组在稳定期第1、3、7天BMP-6表达的阳性细胞率和阳性面积百分比均高于对照组(P<0.05),稳定期第14、28天BMP-6表达的阳性细胞率和阳性面积百分比均与对照组比较差异无统计学意义。结论 PRF能促进兔下颌骨牵引成骨区新骨的生成,BMP-6可能在牵引成骨过程的早期调控组织细胞应力信号传递,发挥成骨作用。

rhBMP-6的表达和纯化

骨形态发生蛋白 (bonemorphogenetic protein,BMP) -6属于转化生长因子 (transforming growth fac-tor) -β超基因家族 ,在骨的形成中具有重要作用 ,并受雌激素选择性上调 .本研究利用 RT-PCR从人胎盘组织中扩增 BMP-6成熟肽的 DNA片段 ,克隆到 p GEX-5 X-1中 ,构建 GST-BMP6融合蛋白表达载体 p GEX-BMP-6,转化 E.coli DH5 α.克隆质粒转化的工程菌 ,经 IPTG诱导 4h后 ,高效表达 GST-BMP6融合蛋白 ,在 SDS-PAGE上出现一新蛋白带 ,分子量约为 42 k D,约占总蛋白的 2 5 % ,表达产物以包涵体形式存在 .菌体超声破碎 ,经 0 .3 %N-十二烷基肌氨酸钠 (SKL)溶解包涵体 ,离心后的上清液加入 0 .6% Triton X-1 0 0螯合 SKL.然后利用谷胱甘肽 Sepharose-4B亲和层析纯化 .结合 GST-BMP6的介质经洗涤、Xa因子酶切得到纯度达 95 %的 rh BMP-6蛋白 .

BMP-6与新生血管性年龄相关性黄斑变性的相关性

目的:探讨新生血管性年龄相关性黄斑变性(nARMD)患者房水中骨形态发生蛋白6 (BMP-6)、白细胞介素-6(IL-6)及血管内皮生长因子(VEGF)的变化及其与黄斑区视网膜厚度的相关性。方法:收集2015-06/2017-03于我院眼科就诊的nARMD患者34例35眼作为nARMD组,选取同期于我院住院行白内障手术的年龄相关性白内障患者20例20眼作为对照组。采用光学相干断层扫描(OCT)测量两组患者黄斑区1mm范围内的平均视网膜厚度(CSMT)。通过ELISA法检测房水中BMP-6的浓度,流式微球技术(CBA)测量IL-6和VEGF的浓度。结果:nARMD组患者房水中BMP-6水平(35. 29±4. 27pg/mL)明显低于对照组(62. 04±2. 78pg/mL),而VEGF水平(93. 13±47. 25pg/mL)明显高于对照组(69. 21±13. 40pg/mL),差异均有统计学意义(P<0. 05),两组患者房水中IL-6的水平差异无统计学意义(P>0. 05)。Spearman相关性分析表明,nARMD组患者房水中BMP-6含量与CSMT呈负相关(rs=-0. 409,P=0. 015)。结论:nARMD患眼房水中BMP-6浓度下降,而VEGF浓度升高,BMP-6含量与CSMT呈负相关,其可能参与nARMD的发病过程。

葛根素对糖尿病性骨质疏松小鼠骨密度及氧化应激的影响

目的:观察葛根素对糖尿病性骨质疏松(DOP)小鼠骨密度及氧化应激的影响。方法:将45只KKAy小鼠给予高糖高脂饲料饮食和链脲佐菌素腹腔注射构建DOP模型,造模成功后随机分为模型组、二甲双胍组及葛根素组各15只,另取15只C57BL/6J小鼠作为对照组。治疗8周后,观察各组小鼠骨密度(BMD)、糖代谢指标[空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹胰岛素(FINS)]、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHDG)、骨桥蛋白(OPN)及转化生长因子-β(TGF-β)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠胰腺组织病理学改变;实时荧光定量聚合酶链反应法(RT-PCR)及蛋白免疫印迹法分别检测各组小鼠胰腺组织骨形态发生蛋白-6(BMP-6)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA及蛋白表达情况。结果:与对照组比较,模型组小鼠BMD、FINS、CAT和SOD明显降低(P<0.05),FBG、HbA1c、MDA、8-OHDG、OPN、TGF-β及胰腺组织BMP-6和VEGF mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05);模型组小鼠胰腺组织紊乱,细胞间隙增宽,可见大量中性粒细胞,细胞核受损。与模型组比较,二甲双胍组及葛根素组小鼠BMD、FINS、CAT和SOD水平明显上升(P<0.05),FBG、HbA1c、MDA、8-OHDG、OPN、TGF-β及胰腺组织中BMP-6和VEGF mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05);二甲双胍组及葛根素组干预后,小鼠胰腺组织损伤程度明显改善。结论:葛根素能够调节DOP小鼠胰腺组织BMP-6、VEGF mRNA及蛋白的表达,改善BMD,减少氧化应激损伤。