血清骨形态发生蛋白-7转化生长因子-β1与原发性肾病综合征患者疗效的相关性研究

目的 研究血清骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic protein 7,BMP-7)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)与原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome,PNS)患者疗效的相关性。方法 将纳入研究的82例PNS患者根据疗效分为完全缓解组(27例)、部分缓解组(31例)和未缓解组(24例),同期选择潜江市中心医院60例正常体检者作为对照组。比较各组患者及健康体检者血清BMP-7、TGF-β1表达水平,分析PNS患者血清BMP-7与TGF-β1的相关性,比较不同疗效的PNS患者治疗前后血清BMP-7、TGF-β1表达水平。结果 PNS患者血清TGF-β1水平均明显高于对照组,BMP-7水平明显低于对照组(P<0.05)。PNS患者血清BMP-7与TGF-β1呈负相关(r=-0.675,P<0.05)。不同疗效PNS患者治疗后血清BMP-7表达水平较治疗前明显升高,血清TGF-β1表达水平明显降低(P<0.05)。完全缓解组治疗前后血清BMP-7表达水平明显高于部分缓解组和未缓解组,血清TGF-β1表达水平明显低于部分缓解组和未缓解组(P<0.05)。部分缓解组患者治疗前后血清BMP-7表达水平明显高于未缓解组,血清TGF-β1表达水平明显低于未缓解组(P<0.05)。结论 血清BMP-7、TGF-β1与PNS患者疗效存在密切相关性,可作为临床评估指标。

基于BMP-2/BMP-7机制探讨生龙接骨胶囊预防老年骨质疏松性胸腰椎骨折术后再发性骨折的作用

目的探讨生龙接骨胶囊对老年骨质疏松性胸腰椎骨折(OTF)术后再发性骨折的作用,并基于骨形态发生蛋白-2/骨形态发生蛋白-7(BMP-2/BMP-7)机制初步分析其作用机制。方法选取2020年1月至2022年10月在南昌市洪都中医院收治的100例行经皮椎体成形术(PVP)的老年OTF患者为研究对象,按随机数字表法分为常规组(50例)和胶囊组(50例)。常规组采用常规的PVP治疗,胶囊组患者在常规组基础上服用生龙接骨胶囊治疗。比较两组患者椎体结构(Cobb角和伤椎椎体前缘高度比)、治疗前后血清BMP-2、BMP-7水平、骨代谢指标[骨特异性碱性磷酸酶(BALP)、Ⅰ型原胶原N端前肽(PⅠNP)、骨钙素(OST)]、骨密度(BMD)、康复情况[Oswestry腰椎功能障碍指数(ODI)]评估、疼痛等级[视觉模拟评分法(VAS)]评分、临床有效率、椎体再骨折发生率和不良反应发生情况。结果治疗后,两组患者Cobb角改善,伤椎椎体前缘高度比优于治疗前,胶囊组均优于常规组,差异有统计学意义(P<0.05);胶囊组的BMP-2、BMP-7表达量高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05);患者术后再发性骨折情况均良好,胶囊组愈合速度快于常规组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,胶囊组的BALP、PⅠNP、OST均高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05);两组患者的BMD高于治疗前,且胶囊组高于常规组,ODI评分、VAS评分均低于治疗前,且胶囊组低于常规组,差异有统计学意义(P<0.05);胶囊组的临床总有效率(95.0%)高于常规组(80.0%),胶囊组的再骨折发生率(4%)低于常规组(18%),差异有统计学意义(P<0.05);两组患者均未见明显不良反应。结论生龙接骨胶囊能通过上调患者血清BMP-2、BMP-7水平,改善BMD从而预防老年OTF的术后再发性骨折,其机制可能与生龙接骨胶囊能刺激BMP信号通路,加速成骨细胞分化有关。

帕立骨化醇对肾性骨病大鼠骨代谢及TGF-β/BMP-7/Smad通路的影响

目的:探讨帕立骨化醇对肾性骨病(ROD)大鼠骨代谢及转化生长因子-β(TGF-β)/骨形态发生蛋白-7(BMP-7)/Smad通路的影响。方法:将90只大鼠随机分为6组:对照组、模型组、帕立骨化醇低剂量(0.2μg/kg)组、帕立骨化醇中剂量(0.4μg/kg)组、帕立骨化醇高剂量(0.8μg/kg)组、骨化三醇(10μg/kg)组,每组15只,对照组大鼠以普通饲料喂养,其余各组大鼠用含有腺嘌呤的饲料喂养,诱导建立ROD模型。分组进行药物治疗后,测定各组大鼠肾功能指标血尿素氮(BUN)与血肌酐(Scr)水平、血钙与血磷水平、股骨骨密度(BMD)、股骨生物力学指标最大载荷、弹性模量与屈服载荷、血清炎症因子IL-6、IL-17水平;采用蛋白免疫印迹法检测骨组织TGF-β/BMP-7/Smad通路蛋白表达情况。再次取45只大鼠随机分为3组:帕立骨化醇(0.8μg/kg)组、TGF-β抑制(LY2157299,150 mg/kg)组、帕立骨化醇(0.8μg/kg)+TGF-β抑制(LY2157299,150 mg/kg)组,每组15只,同样方法建立ROD模型。分组以药物治疗后,测定各组大鼠肾功能指标与股骨生物力学指标水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠血钙水平、BMD、弹性模量、最大载荷、屈服载荷、骨组织TGF-β/BMP-7/Smad通路蛋白TGF-β及BMP-7表达、p-Smad3/Smad3显著降低(P<0.05),BUN与Scr水平、血磷水平、血清IL-6与IL-17水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,帕立骨化醇低、中、高剂量组和骨化三醇组大鼠血钙水平、BMD、弹性模量、最大载荷、屈服载荷、骨组织TGF-β/BMP-7/Smad通路蛋白TGF-β及BMP-7表达、p-Smad3/Smad3均升高,BUN与Scr水平、血磷水平、血清IL-6与IL-17水平均降低,且帕立骨化醇各组之间呈剂量依赖性(P<0.05),帕立骨化醇高剂量组和骨化三醇组比较,大鼠各指标差异无统计学意义(P>0.05)。与帕立骨化醇+TGF-β抑制组比较,帕立骨化醇组大鼠肾功能指标BUN、Scr与血磷水平降低(P<0.05),血钙水平、BMD、弹性模量、最大载荷、屈服载荷升高(P<0.05);TGF-β抑制组大鼠肾功能指标BUN、Scr与血磷水平升高(P<0.05),血钙水平、BMD、弹性模量、最大载荷、屈服载荷降低(P<0.05)。结论:帕立骨化醇可通过激活TGF-β/BMP-7/Smad信号通路抑制炎症反应,改善ROD大鼠肾功能及骨代谢异常,降低血磷水平,提高血钙水平及骨密度,修复骨生物力学,改善骨病症状。

骨形态发生蛋白-7及抑制性Smads在糖尿病肾病发生发展中的表达变化

本文采用免疫组化、Western blot及荧光实时定量PCR方法,动态观察链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱导的大鼠糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)发生早期肾脏骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)、Smad6、Smad7蛋白及mRNA表达。结果显示,在正常及DN大鼠肾小管均有BMP-7、Smad6、Smad7蛋白表达,以胞浆表达为主。DN大鼠BMP-7、Smad6蛋白表达较正常大鼠明显增多(P<0．05),且BMP-7的mRNA表达呈先增加后降低的状态;而Smad7蛋白和mRNA的表达均呈先增加后降低的状态。转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)及Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,COL-Ⅰ)mRNA在DN大鼠肾脏表达较正常大鼠明显增多(P<0．05),且随着糖尿病进展有逐渐增加的趋势。结果提示,作为TGF-β超家族信号分子的一员,BMP-7信号及抑制性Smad通路在DN肾纤维化发生早期可能起重要的反馈性抑制作用。

血清CTRP3、BMP-7及PetCO_(2)对呼吸窘迫综合征患儿机械通气撤机的预测价值

目的:探讨新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)血清补体C1q-肿瘤坏死因子相关蛋白3(CTRP3)、骨形态发生蛋白-7(BMP-7)及呼吸末二氧化碳分压(PetCO_(2))对机械通气撤机的预测价值。方法:选取80例NRDS患儿为研究对象,依据撤机结局分为成功组54例、失败组26例。比较2组基线资料。分析不同组、不同严重程度患儿PetCO_(2)、血清CTRP3、BMP-7水平,分析其与生化指标、疾病严重程度相关性。评价PetCO_(2)、血清CTRP3、BMP-7对撤机结局的预测价值。采用SPSS24.0对数据进行分析,计数资料采用×^(2)检验,计量资料采用t检验。结果:治疗12h、24h后成功组PetCO_(2)分别为(36.32±1.88)(mmHg)4、(33.06±1.79)(mmHg)4,血清BMP-7水平分别为(44.03±5.17)pg/mL、(41.16±4.88)pg/mL,血清℃TRP3水平分别为(345.59±60.03)μg/L、(377.41±75.80)μg/L;治疗12h、24h后失败组PetCO_(2),分别为(38.62±1.93)(mmHg)4、(38.57±1.90)(mmHg)4,血清BMP-7水平分别为(48.82±5.96)pg/mL、(48.39±5.63)pg/mL,血清CTRP3水平分别为(316.68±55.56)μg/L、(320.03±66.67)μg/L,治疗12h、24h后成功组PetCO_(2)、血清BMP-7水平低于失败组,血清CTRP3水平高于失败组(P<0.05);PetCO_(2)、BMP-7与PaO,呈负相关,且与PaCO_(2)、SNAPPE-ⅡI评分、TGF-β1、IL-6、TNF-α、病情严重程度呈正相关,而CTRP3与之相反(P<0.05);治疗12h、24h后血清CTRP3、BMP-7及PetCO_(2),联合预测撤机结局的AUC大于单项预测(P<0.05)。结论:血清CTRP3、BMP-7及PetCO_(2),对NRDS患儿撤机结局预测具有应用价值。

血清TXNIP、sTREM-1、BMP-7水平变化与原发性肾病综合征患者疾病转归的关系

目的 探讨血清硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)、可溶性髓系细胞触发受体-1(sTREM-1)、骨形态发生蛋白-7(BMP-7)水平变化与原发性肾病综合征(PNS)患者疾病转归的相关性。方法 选取医院2019年4月至2022年4月收治的91例PNS患者为研究组,同期91例健康体检者为对照组,比较两组入院时血清TXNIP、sTREM-1、BMP-7、肾功能指标[尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、尿酸(UA)]水平,分析血清各指标水平与肾功能的相关性;比较复发和未复发患者(入院时、治疗3个月、6个月后)血清各指标水平;分析治疗后血清各指标水平联合预测PNS患者复发的价值,分析各指标不同水平患者复发危险度。结果 入院时研究组血清TXNIP、sTREM-1高于对照组,血清BMP-7低于对照组(P<0.05);入院时研究组血清BUN、Scr、UA高于对照组(P<0.05);入院时血清TXNIP、sTREM-1水平与BUN、Scr、UA水平均呈正相关,血清BMP-7水平与BUN、Scr、UA水平均呈负相关(P<0.05);入院时、治疗3个月、6个月后复发患者血清TXNIP、sTREM-1水平高于未复发患者,BMP-7水平低于未复发患者(P<0.05);治疗3、6个月后血清各指标联合预测PNS患者复发价值大于单独预测;治疗3、6个月后血清各指标高水平患者复发危险度是低水平的1.906、2.114、0.581倍/2.571、3.222、0.480倍。结论 血清TXNIP、sTREM-1、BMP-7水平与PNS患者病情程度密切相关,可作为评估PNS病情转归的有效指标。

新生儿呼吸窘迫综合征患儿血清HMGB1、RAGE、BMP-7表达及与肺部超声评分的相关性

目的 分析新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)患儿血清高迁移率族蛋白1(HMGB1)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、骨形态发生蛋白-7(BMP-7)表达及与肺部超声评分的相关性。方法 选择2018年6月至2023年6月收治的100例NRDS患儿纳入观察组,同期选择100例健康新生儿纳入对照组,均进行血清HMGB1、RAGE、BMP-7检测和肺部超声检查及评分。根据NRDS患儿肺部超声评分将其分为低评分组(评分<12分)、中评分组(评分12~24分)及高评分组(评分>24分)。比较两组研究对象的血清HMGB1、RAGE、BMP-7水平和肺部超声评分;比较不同肺部超声评分患儿的血清HMGB1、RAGE、BMP-7水平;分析观察组中血清HMGB1、RAGE、BMP-7表达与肺部超声评分的相关性。结果 观察组的血清HMGB1、RAGE及BMP-7水平及肺部超声评分高于对照组(P<0.05)。肺部超声显示低评分组47例,中评分组33例,高评分组20例;低评分组的血清HMGB1、RAGE及BMP-7水平低于中评分组和高评分组(P<0.05);中评分组的血清HMGB1、RAGE及BMP-7水平低于高评分组(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,血清HMGB1、RAGE、BMP-7表达与肺部超声评分呈正相关(P<0.05)。结论 NRDS患儿血清HMGB1、RAGE、BMP-7表达及肺部超声评分均会明显增高,血清HMGB1、RAGE、BMP-7表达与肺部超声评分呈正相关。

骨形态发生蛋白-7在糖尿病肾病发生发展中的作用

骨形态发生蛋白-7(BMP-7)作为一种成骨蛋白,属于转化生长因子β(TGF-β)超家族中的一员,是维持肾脏正常发育的重要因子。近年来国内外研究表明,BMP-7在慢性肾脏疾病中有重要的抗纤维化作用。本文主要就BMP-7在糖尿病肾病发生、发展中的作用做一综述。

TGF-β_(1)通过miR-21d-5p调控BMP7表达诱导肾小管上皮细胞增殖及迁移

目的:探讨转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))可能通过微小RNA-21d-5p(miR-21d-5p)对骨形态发生蛋白7(BMP7)的调控,从而对肾小管上皮细胞的增殖以及迁移的影响及可能机制。方法:观察TGF-β_(1)处理的肾小管上皮细胞HK-2并检测miR-21d-5p的表达,在HK-2细胞中分组转染miR-21d-5p或anti-miR-21d-5p,再使用TGF-β_(1)处理,观察过度表达或抑制表达miR-21d-5p对TGF-β_(1)诱导肾小管上皮细胞的细胞活性及迁移的影响。分析TGF-β_(1)、miR-21d-5p与BMP7的靶向关系。共转染miR-21d-5p和pcDNA3.1-BMP7,或anti-miR-21d-5p和si-BMP7,使用TGF-β_(1)处理,评估TGF-β_(1)、miR-21d-5p与BMP7的在肾小管上皮细胞的增殖以及迁移的相互关系。结果:TGF-β_(1)处理HK-2细胞后,miR-21d-5p表达和迁移细胞数量升高(P<0.05),P21和E-钙黏蛋白(E-cadherin)水平降低(P<0.05)。过度表达miR-21d-5p增加TGF-β_(1)诱导HK-2细胞增殖和迁移上调(P<0.05),降低P21和E-cadherin蛋白表达(P<0.05),过度表达BMP7可以逆转此过程。抑制miR-21d-5p降低TGF-β_(1)诱导HK-2细胞增殖和迁移细胞水平(P<0.05),显著升高P21和E-cadherin蛋白水平(P<0.05),被抑制表达的BMP7可以逆转此过程。结论:TGF-β_(1)可能通过miR-21d-5p靶向调控BMP7表达,从而诱导肾小管上皮细胞增殖及迁移,进一步影响肾脏纤维化进展。

骨形态蛋白-7对糖尿病大鼠nephrin表达和分布的影响

目的观察骨形态蛋白-7(BMP-7)对糖尿病(DM)大鼠nephrin表达和分布的影响。方法20只链脲左菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型随机分为糖尿病组(DM)和BMP-7治疗组(BMP-7)各10只,另以10只大鼠作对照组(NC)。BMP-7组每周2次腹腔注射人重组BMP-730μg/kg。DM组和NC组给予等量的生理盐水注射。于8、16、24周检测不同时间点24h尿蛋白、尿肌酐和血糖。24周处死动物,PAS染色和透射电镜观察肾组织学改变,RT-PCR、免疫荧光检测nephrin的表达和分布,免疫组化技术检测TGF-β1和WT1的表达。结果与NC组比,DM组24h尿蛋白、肾质量/体质量指数、TGF-β1的表达均显著高于NC组(F值分别为174.3、38.9、117.7,P均小于<0.01)差异均具有统计学意义。而内生肌酐清除率(Ccr)、足细胞数目、nephrin的表达显著低于NC组(F值分别为13.4、79.04、65.5,P均<0.01),而且nephrin由正常的沿毛细血管襻线状分布向颗粒状、团块状改变。BMP-7组24h尿蛋白、肾质量/体质量、TGF-β1的表达较DM组显著降低,Ccr、足细胞数目和nephrinmRNA的表达显著增加,且保持着正常的沿毛细血管襻线状分布,肾脏病理改变减轻。结论外源性的运用BMP-7可以有效地抑制糖尿病引起的nephrin表达的下调,维持nephrin在足细胞上的正常分布;BMP-7对糖尿病大鼠肾脏保护作用可能与拮抗了TGF-β1的活化有关。

骨形态形成蛋白-7对体外培养肾小管上皮细胞TGF-β1诱导转分化的作用

目的观察骨形态形成蛋白-7(BMP-7)对转化生长因子β1穴TGF-β1雪诱导的人类肾小管上皮细胞穴HKC雪转分化的作用,并探讨其作用机制。方法将体外培养的HKC分为5组(1)无血清培养基阴性对照组;(2)TGF-β1阳性对照组;穴3雪BMP-7单独作用组;穴4雪BMP-7与TGF-β1共同作用组;穴5雪BMP-7预处理后加入TGF-β1组。间接免疫荧光法测定HKC角蛋白(keratin)的表达;免疫组织化学方法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及E-钙粘素(E-cadherin)表达;流式细胞技术测定α-SMA阳性HKC的百分数;半定量反转录PCR穴RT-PCR雪方法测定HKC细胞α-SMA、TGF-β1及其Ⅱ型受体mRNA的表达。结果TGF-β1与BMP-7共同作用HKC细胞48h,α-SMA表达较阳性对照组减弱,而E-钙粘素及角蛋白表达较阳性对照组增强,与阴性对照组相比差异无显著性;BMP-7预处理后再加入TGF-β1作用HKC细胞48h,α-SMA表达较阳性对照组减弱,而E-钙粘素及角蛋白表达较阳性对照组增强,与阴性对照组相比差异无显著性;流式细胞技术测定α-SMA阳性HKC的百分数,在BMP-7与TGF-β1共同作用组明显低于阳性对照组(9.7%vs19.8%熏5.8%vs19.8%熏P<0.05)。BMP-7组预处理组亦明显低于阳性对照组(8.7%vs19.8%,P<0.05)。RT-PCR显示BMP-7与TGF-β1共同或者预处理HKC细胞熏α-SMAmRNA表达分别为阳?

骨形态发生蛋白-7复合纤维蛋白对大鼠骨质疏松性椎体骨折愈合的影响

目的:观察以纤维蛋白为载体的骨形态发生蛋白-7(BMP-7)对骨质疏松性椎体骨折愈合的影响,探讨局部应用BMP-7纤维蛋白复合物治疗骨质疏松性椎体骨折的可行性。方法:雌性SPF级8月龄SD大鼠54只,随机选取36只,经去除卵巢建立骨质疏松模型并随机分为A、B组,每组18只;另18只行伪手术,在背部卵巢周围切除等体积脂肪,作为对照组(C组)。术后3个月所有动物采用L5椎体手术开窗刮除术区内松质骨方法建立骨折模型,A组骨折区内放入含BMP-724μg和纤维蛋白20mg的凝胶状混合物,B组和C组于同部位放入等体积小牛血清,盖好窗口骨瓣。建立骨折模型后4、6、8周,每组处死动物3只,取L5椎体切片行HE染色;6、8、12周时每组处死动物3只,行L5椎体力学性能测试(载荷能力、弹性模量和最大应变量)。结果:骨折后4周3组骨折区均有纤维骨痂形成,但B组纤维骨痂量少于A、C组;6周时A、C组有较多骨性骨痂形成,B组仅有微量骨性骨痂;8周时A、C组均为成熟小梁骨,骨折基本愈合,B组骨性骨痂量少,仍以纤维骨痂为主,尚有部分骨缺损存在;各时间点A组与C组相似。骨折后6、8、12周A、C组L5椎体的最大载荷、弹性模量及8、12周时的最大应变量均明显高于B组(P<0.05或0.01),B组6周时的最大应变量与A、C组比较无显著性差异(P>0.05),各时间点A组与C组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:局部应用以纤维蛋白为载体的BMP-7能明显促进大鼠骨质疏松性椎体骨折的愈合,纤维蛋白可作为BMP-7的载体。

骨形态发生蛋白-7及其对椎间盘退变修复作用的研究进展

椎间盘退行性疾病（degenerative disc disease,DDD）是临床常见病。近年来,应用生长因子、细胞及基因等生物技术和手段治疗DDD引起了广泛关注。其中,骨形态发生蛋白-7（bone morphogenefic proteins,BMP-7）由于其对软骨细胞、纤维环细胞及髓核细胞合成代谢具有显著促进作用,已成为国内外众多学者的研究热点。笔者就BMP-7及其对椎间盘退变修复作用的研究进展做一综述。

重组骨形态发生蛋白-7基因转染软骨细胞的实验研究

目的 :研究外源性人重组骨形态发生蛋白 - 7(rhBMP - 7)基因在转染的软骨细胞中的表达情况。方法 :用脂质体介导法将rhBMP - 7转入兔关节软骨细胞 ,分别用免疫组化染色和逆转录 -聚合酶链式反应 (RT -PCR)检测其表达 ,同时用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法 (MTT法 )检测了表达产物的活性。结果 :48h后转染的软骨细胞有明显的 pcDNA3-rhBMP7基因表达 ,转染细胞的表达产物对正常软骨细胞的增殖有显著的促进作用。结论 :外源性rhBMP - 7基因可在软骨细胞中获得高效表达 。

腺病毒介导人骨形态蛋白-7基因感染大鼠髓腔细胞的实验研究

目的 :观察已构建好的腺病毒介导的骨形态蛋白 7基因感染大鼠髓腔内细胞的情况 ,为腺病毒介导BMP 7的进一步基因治疗提供可靠的实验基础。材料和方法 :从人骨肉瘤细胞株U 2OS中获得hBMP 7的cDNA片段 ,插入穿梭质粒后在大肠杆菌内与腺病毒实现同源重组 ,阳性克隆转染 2 93细胞 ,扩增纯化得到大量病毒后注入大鼠椎体髓腔中 ,用冲洗髓腔的方法和流式细胞仪分析来观察注射椎体和上位椎体髓腔内细胞感染腺病毒BMP 7的情况 ,并观察病毒感染的时限。结果 :经体外检测能高效表达活性BMF 7的构建好的AdBMP 7注入椎体髓腔后 ,髓腔冲洗液的荧光显微镜观察 ,术后 1 2d和 2 4d都有感染了带有荧光蛋白标记的髓腔内细胞 ,而且在注射椎体的上位椎体中也出现了感染病毒的细胞。结论 :腺病毒介导的BMP -7基因能够在体内感染髓腔细胞并分泌活性的BMP -7,可以成为基因治疗的有效手段。

化瘀泻浊方对肾间质纤维化大鼠骨形态发生蛋白-7的影响

目的观察化瘀泄浊方对肾间质纤维化(RIF)大鼠骨形态发生蛋白(BMP)-7的影响。方法选用健康、雌性SD大鼠50只,用单侧输尿管结扎方法复制大鼠RIF模型,将其随机分为假手术组、化瘀泄浊方组(化瘀泄浊方5.7 g.kg-1.d-1经口灌服)、阿魏酸哌嗪分散片组(予阿魏酸哌嗪分散片6.7 mg.kg-1.d-1)、缬沙坦组(予缬沙坦5.3 mg.kg-1.d-1经口灌服)及模型组(予同等量生理盐水经口灌服),每组10只大鼠。行HE、Masson染色观察梗阻侧肾脏组织形态学改变并用免疫组化方法检测观察梗阻侧肾脏BMP-7表达水平。结果模型组及各治疗组与假手术组相比均呈现程度不同的病理损害,梗阻肾间质BMP-7蛋白表达也明显减少(P<0.01)。各治疗组与模型组比较,BMP-7表达明显增加(P<0.01)。治疗各组间比较,化瘀泄浊方组优于阿魏酸哌嗪分散片组(P<0.01),其他各组间均无明显差异(P>0.05)。结论输尿管梗阻后肾组织呈现程度不同的病理损害,肾纤维化面积明显增加,这可能与BMP-7表达减少有关,化瘀泄浊方对其有一定的上调作用。

四氯化碳诱导性肝纤维化大鼠肝组织骨形态发生蛋白-7的表达

目的探讨四氯化碳(CCl4)诱导性肝纤维化大鼠的肝组织纤维化与骨形态发生蛋白-7(BMP-7)表达的相互关系。方法将健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组和肝纤维化组。对照组大鼠每周一、四背部皮下注射橄榄油(0.12ml/100g),肝纤维化组每周一、四背部皮下注射60%CCl4橄榄油(0.3ml/100g),连续注射6、10、16和21周。实验结束时处死大鼠,取肝中叶,石蜡包埋、切片。行天狼猩红染色,观察肝组织胶原纤维的增生情况;行BMP-7免疫组织化学染色和Western blotting检测,观察肝组织BMP-7的表达。结果天狼猩红染色显示对照组大鼠仅在肝门静脉及门管区看到少量的胶原纤维,各肝纤维化组大鼠均可见肝组织呈明显的胶原纤维增生,且随着时间的延长,肝纤维化程度逐渐加重;免疫组织化学染色显示,对照组大鼠肝组织中可见极少量的BMP-7表达阳性的细胞,6周肝纤维化组大鼠可见较多的BMP-7阳性表达细胞,但随着实验时间的延长,BMP-7阳性细胞呈递减的趋势,至21周肝纤维化组大鼠肝组织中基本呈阴性表达;Western blotting法检测大鼠肝组织BMP-7的表达结果与免疫组织化学的结果基本一致。结论CCl4诱导性肝纤维化大鼠肝组织BMP-7的表达与肝纤维化的程度呈负相关的趋势,推测BMP-7可能对肝纤维化具有一定的保护作用。

从骨形态发生蛋白-7探讨肾藏精理论的物质基础

采用文献整理与理论评述相结合的方法,对骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)的特性与中医肾藏精理论进行相关性分析,从现代分子生物学角度探讨肾藏精理论的物质基础。BMP-7主要由肾脏和骨骼分泌,对于肾脏的发育及正常功能的维持必不可少,并具有抗纤维化及强大的成骨作用,与中医肾藏精主骨等功能关系密切;BMP-7能抑制血管钙化,维持脉道通利。认为BMP-7多项生物学功能与肾藏象中肾的生理功能存在一定相关性,初步具备了成为肾藏精实质的现代物质基础的可能。

淫羊藿对糖皮质激素大鼠肾脏损害的预防作用及对骨形态发生蛋白-7的影响

目的观察醋酸泼尼松对大鼠肾脏组织形态学和功能的影响,探讨淫羊藿(EP)对糖皮质激素(GC)大鼠肾脏损害的预防作用及对骨形态发生蛋白-7(BMP-7)的影响。方法 3月龄SD大鼠24只随机分为3组:正常对照(Cont组)组、糖皮质激素组(GC组)和淫羊藿防治组(GC+EP组),均为上午选模给药,下午防治给药,灌胃给药90 d。苏木素-伊红染色法观察肾脏组织形态学,分光光度计比色法测定血清肌酐和尿素氮(BUN)含量,免疫组化法检测肾脏BMP-7的表达。结果 GC组大鼠部分肾小球明显萎缩,个别肾小管萎缩,少数肾小管有蛋白管型,BUN含量增高(P<0.01),肾脏BMP-7表达减少(P<0.01);与GC组比较,GC+EP组肾小球基本正常,肾小管未见明显萎缩,无蛋白管型的发生,BUN含量和肾脏BMP-7表达正常(P<0.001)。结论EP可通过上调肾脏BMP-7表达预防GC所致的肾脏结构和功能损害。

骨形态发生蛋白-7对胚胎小鼠髓核细胞成骨分化和Notch信号表达的影响

目的:探索骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)诱导胚胎小鼠椎间盘髓核细胞(nucleus pulposus,NP)的成骨分化及对经典Notch信号通路的调控作用。方法:重组腺病毒BMP-7(recombinant adenovirus-mediated bone morphogenetic protein-7,Ad-BMP-7)、绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,Ad-GFP)在HEK293细胞中扩增,感染NP细胞。实验分为BMP-7组(n=3)、GFP组(n=3)、空白组(n=3)。RT-PCR检测BMP-7的m RNA水平表达;Real-time PCR检测成骨指标骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)以及经典Notch信号通路分子的m RNA表达水平;Western blot检测成骨转录因子Runx2和OPN的蛋白表达水平;采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)读数和ALP染色检测ALP活性。结果:Ad-BMP-7和Ad-GFP在HEK293细胞中高滴度的扩增。NP细胞中BMP-7的基础表达很低,Ad-BMP-7感染NP细胞可高表达BMP-7,并明显提高OPN、OPG的m RNA水平表达(OPN:BMP-7组21.16±0.45,GFP组1.00±0.07,空白组2.84±1.27,F=613.815,P=0.000,BMP-7组与GFP组、空白组比较均P=0.000;OPG:BMP-7组2.05±0.37,GFP组1.00±0.06,空白组1.22±0.36,F=10.046,P=0.012,BMP-7组与GFP组比较P=0.016,与空白组比较P=0.047),成骨转录因子Runx2及OPN的蛋白表达水平也均高于对照组,特异性成骨指标ALP的活性明显增强,ALP染色呈紫蓝色,明显高于对照组(BMP-7组222 676.8±7 643.2,GFP组31 455.5±4 930.6,空白组42 407.3±10 926.8,F=513.417,P=0.000,BMP-7组与GFP组、空白组比较均P=0.000)。AdBMP-7感染3 d可促进Notch信号通路Notch-1、Notch-2、Jag-1、Hey-1的m RNA水平表达增高(Notch-1:BMP-7组5.90±0.66,GFP组2.83±0.32,空白组1.00±0.05,F=94.574,P=0.002,BMP-7组与GFP组比较P=0.003,与空白组比较P=0.004;Notch-2:BMP-7组150.35±11.78,GFP组1.94±0.46,空白组1.01±0.19,F=318.962,P=0.001,BMP-7组与GFP组、空白组比较均P=0.000;Jag-1:BMP-7组7.97±0.00,GFP组2.22±0.71,空白组1.00±0.00,F=166.476,P=0.001,BMP-7组与GFP、空白组比较均P=0.000;Hey-1:BMP-7组11.23±0.4,GFP组0.42±0.04,空白组1.00±0.10,F=1 082.054,P=0.000,BMP-7组与GFP组、空白组比较均P=0.000),但第7天回复到基础表达水平,其余信号分子表达无明显差异。结论:腺病毒介导的BMP-7可诱导NP细胞成骨分化,可能与Notch信号通路部分分子的一过性上调相关。