氟砷联合暴露对大鼠骨组织骨形态发生蛋白2和骨形成相关因子Runt转录因子2基因转录表达的影响

目的观察慢性氟砷联合暴露对大鼠骨组织骨形态发生蛋白2（BMP．2）和骨形成相关因子Runt转录因子2（Runx2）基因转录表达的影响及交互作用。方法选取160只8同龄清洁级Wistar大鼠作为研究对象，体重为（200±50）g，根据2X4析因实验设计按体重采用随机数字表法分成16组，每组10只，雌雄各半。用氟化钠（NaF：空白对照0．0mg／kg、低氟5．0mg／kg、中氟10．0mg／kg、高氟20．0mg／kg）和亚砷酸钠（NaAsO2：空白对照0．0ms／ks、低砷2．5ms／ks、中砷5．0mg／ks、高砷10．0mg／kg）灌胃，每周连续灌胃6d，停灌1d，共连续灌胃6个月。依据上述因素将大鼠分为对照组（F0.0As0.0）、低氟组（F50As0.0）、中氟组（F100As0.0）、高氟组（F20．0As0.0）、低砷组（F0.0As2.5）、中砷组（F0.0As5.0）、高砷组（F0.0As100）、低氟低砷组（F5．0As2.5）、低氟中砷组（F5.0As5.0）、低氟高砷组（F5.0As10.0）、中氟低砷组（F10.0As2.5）、中氟中砷组（F10.0As5.0）、中氟高砷组（F10．0As10.0）、高氟低砷组（F20.0As2.5）、高氟中砷组（F20.0As5．0）、高氟高砷组（F20.0As10.0）。采用氟离子选择电极法检测尿氟（UF），原子荧光光谱法检测尿砷（UAs），实时荧光定量PCR法检测BMP-2及Runx2mRNA表达水平。结果F0.0As0.0组、F0．0As2.5组、F0.0As5.0组、F0.0As10.0组均无氟斑牙出现，其余各组均出现不同程度氟斑牙。氟斑牙的发生与染氟剂量存在剂量．反应关系，在高氟（20．0mg／kg）剂量下，随染砷剂量增加氟斑牙损伤程度增加（x2=9．124，P〈0．05）。与F0.0As0．0组（0．99±0．08、0．99±0．07）比较，F5.0As0．0、F10.0As0.0、F20.0As0.0组骨组织BMP-2mRNA水平（1．01±0．07、1．06±0．06、1．21±0．05）及Runx2mRNA水平（1．03±0．04、1．24±0．03、1．33±0．10）随染氟剂量的升高均有升高趋势。氟对BMP-2及Runx2mRNA表达有主效应（F=3．067、2．927，P均〈0．05）；氟砷联合对BMP-2及Runx2mRNA表达存在交互作用（F=3．817、4．802，P均〈0．05）。结论氟砷联合暴露对大鼠骨组织BMP．2及Runx2mRNA表达作用主要表现为氟的主效应，砷间接参与氟致骨毒性过程，氟砷联合对BMP-2及Runx2mRNA表达的交互作用主要表现为拮抗作用。

补肾壮筋汤对骨折模型大鼠Runt相关转录因子2表达的影响

目的研究补肾壮筋汤对骨折模型大鼠Runt相关转录因子2(Runx2)表达的影响。方法在Wistar大鼠双侧胫骨中上1/3段造成骨折,对骨折不做任何固定。将72只SPF级大鼠随机分为模型组、左归丸组、右归丸组、补肾壮筋汤组4组,每组18只。于第1,2,4周每组分别处死6只大鼠,取骨痂标本,免疫组化法检测标本中的Runx2表达,应用计算机图像分析系统进行定量分析。结果左归丸、右归丸、补肾壮筋汤对Runx2的表达均有促进作用,在第2周时达到高峰,随后有所回落。各组间平均光密度(MOD)值比较:各治疗组MOD值显著高于模型组,左归丸组、补肾壮筋汤组MOD值显著高于右归丸组,补肾壮筋汤组MOD值显著高于左归丸组,差异有统计意义(P<0.05)。结论补肾壮筋汤能显著促进骨折愈合过程中Runx2的表达,使骨折断端血循环重建及成骨过程加快,缩短骨折愈合时间,是治疗骨折的有效方剂。

前交叉韧带离断骨关节炎大鼠印第安刺猬蛋白以及Runt相关转录因子2的表达

背景:印第安刺猬蛋白(Ihh)及其信号蛋白Gli1以及Runt相关转录因子2(Runx2)是骨关节炎密切相关的因子,在骨关节炎发病过程中,是引起关节退行性改变的重要原因之一。目的:探索Ihh,Gli1以及Runx2在骨关节炎发病过程中的作用。方法:将30只SD大鼠随机分成对照组(n=10)和模型组(n=20)。模型组大鼠取一侧膝关节行前交叉韧带离断建立骨关节炎模型,分别于造模后4周及12周,各取10只大鼠进行观察。对照组大鼠仅暴露前交叉韧带,于术后12周进行观察。结果与结论:与对照组相比,造模4周后可见骨关节炎模型大鼠膝关节出现软骨退变,膝关节软骨中Ihh,Gli1及Runx2表达水平明显增高,而造模12周后软骨退变进一步加重,但膝关节软骨中Ihh,Gli1及Runx2表达水平下降。提示Ihh,Gli1及Runx2在骨关节炎退变过程中起重要作用,其表达水平在骨关节炎的早期即明显升高,可作为骨关节炎防治研究中的评价指标。

雷公藤甲素对大鼠血管钙化过程中骨形态发生蛋白2和Runt相关转录因子2蛋白表达的影响

目的探究雷公藤甲素对大鼠血管钙化过程中骨形态发生蛋白2(BMP-2)和Runt相关转录因子2(Runx2)蛋白表达的影响。方法选取30只雄性清洁级SD大鼠随机分成对照组、钙化模型组和雷公藤干预组,每组10只。对照组给予肌肉注射0.9%氯化钠注射液和单纯花生油灌胃;钙化模型组给予肌肉注射维生素D3和尼古丁溶于花生油灌胃处理,制作胸主动脉钙化模型;雷公藤干预组在钙化模型组处理的基础上加用雷公藤甲素干预。喂养4周后处死大鼠,取胸主动脉,用von Kossa染色及苏木精-伊红染色反映血管钙化情况,检测血管钙含量和碱性磷酸酶(ALP)活性,蛋白质印迹法检测BMP-2、Runx2蛋白表达。结果von Kossa染色结果显示,与钙化模型组相比,雷公藤干预组血管中膜棕黑色颗粒显著减少,显示血管钙化程度较轻。苏木精-伊红染色结果显示,雷公藤干预组大鼠动脉组织血管内膜破坏不明显,中膜钙化灶钙化程度较钙化模型组明显减轻。雷公藤干预组血管组织中钙含量和ALP活性明显低于钙化模型组[(31.9±2.3)μmol/g protein比(47.6±3.6)μmol/g protein、(82.4±0.9)U/g protein比(149.6±2.7)U/g protein](均P<0.05)。蛋白质印迹法检测结果显示,与钙化模型组相比,雷公藤干预组血管组织中BMP-2和Runx2的表达水平显著下调。结论雷公藤甲素具有减轻血管钙化的作用,这种作用可能与雷公藤甲素抑制参与血管平滑肌细胞成骨转分化的重要信号通路上BMP-2/Runx2蛋白的表达有关。

子宫内膜腺癌组织中人类RUNT相关转录因子3与果蝇zeste基因增强子同源物2的表达

目的:检测子宫内膜腺癌组织中人类RUNT相关转录因子3(RUNX3)和果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)的表达。方法:采用免疫组化SP法检测60例子宫内膜腺癌、40例子宫内膜增殖症和20例正常增生期子宫内膜组织中RUNX3与EZH2蛋白的表达。结果:子宫内膜腺癌、子宫内膜增殖症与正常增生期子宫内膜组织RUNX3蛋白的阳性表达率分别为43.3%(26/60)、67.5%(27/40)与95.0%(19/20),3组间相比,差异有统计学意义(χ2=18.090,P<0.001);上述3种组织中EZH2蛋白的阳性表达率分别为75.0%(45/60)、42.5%(17/40)与15.0%(3/20),3组间相比,差异有统计学意义(χ2=25.041,P<0.001)。RUNX3蛋白的表达与子宫内膜腺癌的组织分化程度、TNM分期及浸润深度有关(χ2=-3.561,-2.367,5.370,P均<0.05),EZH2蛋白的表达与子宫内膜腺癌的组织分化程度及浸润深度有关(χ2=-3.084,5.568,P均<0.05)。子宫内膜腺癌组织中RUNX3和EZH2蛋白的表达相关(rP=0.330,P=0.007)。结论:RUNX3蛋白表达缺失和EZH2蛋白过度表达在子宫内膜腺癌的发生与发展中起重要作用,高表达的EZH2可能在一定程度上参与调控RUNX3基因的表达下调。

结肠癌病灶内Runt相关转录因子2与增殖基因、抑癌基因、血管新生分子的相关性研究

目的:探讨结肠癌病灶内Runt相关转录因子2(RunX2)与增殖基因、抑癌基因、血管新生分子的相关性。方法:90例原发性结肠癌患者作为结肠癌组、68例良性结肠息肉患者作为结肠息肉组,对比两组病灶组织中RunX2及增殖基因、抑癌基因、血管新生分子表达量的差异,进一步采用Pearson检验评估结肠癌组织中RunX2表达量与增殖基因、抑癌基因、血管新生分子表达量的相关关系。结果:结肠癌组病灶中RunX2mRNA的表达量高于结肠息肉组。结肠癌组病灶中增殖基因GTPBP4、HOXB7、ZNF331、ADAM17、HSP60 mRNA的表达量高于结肠息肉组;抑癌基因ATF3、FOXN3、OTUD1、NDRG2mRNA的表达量低于结肠息肉组;血管新生分子Musashi 1、NF-κB、RegⅣ、STAT3mRNA的表达量高于结肠息肉组。结肠癌病灶中RunX2mRNA表达量与上述增殖基因、抑癌基因、血管新生分子表达量直接相关。结论:结肠癌病灶内RunX2异常高表达,且具体表达量与癌细胞的增殖活性、血管新生活性均呈正相关,是导致结肠癌发生发展的重要分子靶点。

Choukroun′s富血小板纤维蛋白对人成骨细胞增殖分化及细胞外调节蛋白激酶1/2-Runt相关转录因子2通路的影响

目的 分析Choukroun′s富血小板纤维蛋白(PRF)对人成骨细胞增殖分化及ERK1/2-Runx2通路的影响。方法 组织块法分离人成骨细胞,设置对照组、PRF1组和PRF2组,分别用不含PRF、含1×PRF浸出液和2×PRF浸出液的DMEM完全培养基培养。检测细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、I型胶原表达及细胞矿化能力,Western blot法测定细胞外调节蛋白激酶1/2-Runt相关转录因子2(ERK1/2-Runx2)信号通路蛋白表达情况。结果 与对照组比较,PRF1组和PRF2组MTT实验A值及ALP活性均升高,且PRF2组高于PRF1组(P<0.05);与培养1天比较,培养3、7天时三组MTT实验A值均升高,且培养7天高于培养3天(P<0.05)。培养7天,PRF1组和PRF2组I型胶原平均灰度值高于对照组,PRF2组高于PRF1组(P<0.05)。培养14、21天,PRF1组和PRF2组钙结节积分光密度高于对照组,PRF2组高于PRF1组(P<0.05);培养21天三组钙结节积分光密度均高于14天(P<0.05)。与对照组比较,PRF1组和PRF2组p-ERK1/2、Runx2蛋白表达升高,且PRF2组高于PRF1组(P<0.05)。结论 PRF可能通过激活ERK1/2-Runx2信号通路参与人成骨细胞增殖分化过程。

人Runt相关转录因子3、zeste基因增强子同源物2蛋白表达与局部进展期直肠癌新辅助化疗敏感性的关系

目的探究人Runt相关转录因子3(RUNX3)和zeste基因增强子同源物2(EZH2)在直肠癌中的表达情况和相关性,探究RUNX3和EZH2蛋白表达与局部进展期直肠癌患者XELOX方案新辅助化疗敏感性的关系。方法31例术前未经抗肿瘤治疗的直肠腺癌患者的癌组织和癌旁组织作为癌组和癌旁组,实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应检测两组中RUNX3和EZH2 mRNA相对表达量,同时采用免疫组织化学法检测两组中RUNX3和EZH2的蛋白表达情况,分析RUNX3和EZH2在癌组织和癌旁组织中的表达差异;将26例术前行3周期XELOX方案新辅助化疗的局部进展期直肠癌患者的治疗前活检蜡块作为治疗前组,其术后病理蜡块作为治疗后组,病理肿瘤缩退学分级评估患者新辅助化疗疗效,采用免疫组织化学法检测两组中RUNX3和EZH2的蛋白表达情况,分析两基因蛋白表达模式与新辅助化疗疗效的关系。结果与癌旁组相比,癌组RUNX3 mRNA的表达下调,蛋白的阳性表达率降低(P=0.001),EZH2 mRNA的表达上调,蛋白的阳性表达率升高(P=0.022);癌组中RUNX3和EZH2的mRNA表达呈负相关(r=-0.599,P=0.000);12例接受新辅助化疗的患者达到TRG0~TRG2级,新辅助化疗总体有效率为46.15%(12/26);与治疗前组相比,治疗后组RUNX3蛋白阳性表达率有上升趋势,但差异无统计学意义(P=0.163),EZH2蛋白阳性表达率有下降趋势,但差异无统计学意义(P=0.095);治疗前组RUNX3阳性表达的患者新辅助化疗有效率为75.00%(9/12),EZH2阴性表达的患者新辅助化疗有效率为77.78%(7/9),RUNX3+/EZH2-的患者新辅助化疗有效率为100%(7/7),高于其他蛋白表达模式(P=0.019),多因素Logistic回归显示RUNX3蛋白的表达情况是患者新辅助化疗疗效的影响因素。结论RUNX3在直肠癌组织中阳性表达率低于癌旁组织,EZH2在直肠癌组织中阳性表达率高于癌旁组织,二者在直肠癌中的表达呈负相关;XELOX方案新辅助化疗可能会对直肠癌中RUNX3和EZH2的表达产生影响;RUNX3高表达和EZH2低表达的局部进展期直肠癌患者XELOX方案新辅助化疗更敏感。

敲低Runt相关转录因子2(Runx2)表达抑制结肠癌细胞生长和迁移

目的构建稳定低表达Runt相关转录因子2(Runx2)的HCT-8结肠癌细胞,检测对结肠癌细胞生长和迁移等生物学行为的影响。方法首先采用Western blot法检测Runx2在不同结肠癌细胞系中表达,确定HCT-8结肠癌细胞高表达Runx2;将含有Runx2的慢病毒短发卡RNA(shRNA)的干扰载体与慢病毒包装辅助质粒共转染人胚肾HEK293FT细胞后,收集病毒上清,感染HCT-8结肠癌细胞。经嘌呤霉素筛选后,获得慢病毒介导的Runx2 shRNA的稳定表达细胞,利用实时定量PCR和Western blot法检测Runx2的shRNA的干涉效果;用CCK-8法检测细胞增殖活性、平板克隆形成实验检测癌细胞生长、Transwell^(TM)侵袭实验和划痕愈合实验检测Runx2 shRNA转染对癌细胞侵袭和迁移的影响。结果建立了稳定敲低Runx2水平的HCT-8结肠癌细胞;敲低HCT-8细胞Runx2表达水平后,癌细胞的生长、侵袭和迁移受到明显抑制。结论敲低Runx2抑制结肠癌细胞的生长、侵袭和迁移。

微小RNA对高磷诱导血管钙化中Runt相关转录因子2表达调控作用的研究进展

高磷血症是导致慢性肾脏病及终末期肾脏病患者血管钙化的独立危险因素。在高磷环境的刺激下,血管平滑肌细胞可表达Runt相关转录因子2(Runx2),促进血管平滑肌细胞向成骨样细胞转化。而微小RNA(miRNA)可通过转录后负性调控靶细胞Runx2表达起到促进或抑制血管钙化的作用。本文对在高磷状态下与血管平滑肌细胞产生Runx2相关的miRNA的研究进行综述。

炎症微环境下miR-30a调控Runx相关转录因子2对人牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的:探究炎症微环境下微小RNA-30a(miR-30a)调控Runt相关转录因子2(Runx2)对人牙周膜干细胞成骨分化的影响。方法:体外培养人牙周膜干细胞(hPDLSCs),随机分为对照组、模型组、miR-30a mimics(模拟物)组、miR-30a mimics阴性对照组、miR-30a inhibitor(抑制剂)组、miR-30a inhibitor阴性对照组,除对照组外,其余各组以脂多糖诱导细胞炎症微环境,构建体外炎症模型,然后分组处理并诱导其成骨分化,采用碱性磷酸酶(ALP)及茜素红染色检测各组细胞成骨分化情况;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞miR-30a、成骨相关基因Runx2 mRNA表达水平;采用蛋白免疫印迹实验检测各组细胞Runx2、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)蛋白表达情况。结果:与对照组相比,模型组细胞miR-30a表达、细胞上清液中TNF-α及IL-6水平均升高(均P<0.05),Runx2 mRNA表达水平、ALP阳性细胞相对比例、矿化结节相对比例、Runx2、OPN及OCN蛋白表达水平均降低(均P<0.05)。与模型组相比,miR-30a mimics组细胞miR-30a表达、细胞上清液中TNF-α及IL-6水平均升高(均P<0.05),Runx2 mRNA表达水平、ALP阳性细胞相对比例、矿化结节相对比例、Runx2、OPN及OCN蛋白表达水平均降低(均P<0.05);miR-30a inhibitor组细胞miR-30a表达、细胞上清液中TNF-α及IL-6水平均降低(均P<0.05),Runx2 mRNA表达水平、ALP阳性细胞相对比例、矿化结节相对比例、Runx2、OPN及OCN蛋白表达水平均升高(均P<0.05);miR-30a mimics阴性对照组、miR-30a inhibitor阴性对照组细胞各指标无明显变化(均P>0.05)。结论:炎症微环境下hPDLSCs中miR-30a高表达,可下调Runx2表达,促进炎症进展,进而抑制hPDLSCs成骨分化。

转录因子EZH2和RUNX3在骨巨细胞瘤中的表达及与复发的关系研究

目的:探讨zeste基因增强子同源物2(EZH2)和人类RUNT相关转录因子3(RUNX3)在骨巨细胞瘤中的表达,及与骨巨细胞瘤复发的关系。方法:选取2013年10月至2018年1月在本院经病理组织检查确诊为骨巨细胞瘤并接受手术治疗者53例为研究对象,术中收集骨巨细胞瘤患者瘤组织以及瘤旁组织(距瘤组织>3cm),采用免疫组织化学法检测EZH2和RUNX3的表达,分析其与患者临床病理特征的关系;采用Spearman进行相关性分析;术后随访36个月,比较复发组与未复发组EZH2和RUNX3的表达情况。结果:骨巨细胞瘤瘤组织EZH2阳性表达率(69.81%)高于瘤旁组织(15.09%)(P<0.05),RUNX3阳性表达率(32.08%)低于瘤旁组织(86.79%)(P<0.05);瘤组织EZH2、RUNX3表达与肿瘤直径、影像学分级、病理学分级、组织浸润程度均有关(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,骨巨细胞瘤瘤组织中EZH2、RUNX3表达呈负相关(r=-0.544,P<0.05);复发组EZH2阳性表达率(93.33%)高于未复发组(60.53%)(P<0.05),RUNX3阳性表达率(0.00%)低于未复发组(44.74%)(P<0.05)。结论:骨巨细胞瘤瘤组织中EZH2为高表达,RUNX3为低表达,且与患者临床病理特征密切相关,EZH2、RUNX3表达呈负相关,EZH2可能抑制RUNX3表达,EZH2、RUNX3可能用于骨巨细胞瘤的病情及预后评估。

成骨细胞分化相关转录因子及其调控机制

成骨细胞的分化成熟是骨形成的前提,在该过程中需要多种因素的参与和调控。骨形成相关转录因子是其他因素如生长因子、细胞因子和动力传导的中枢和靶向,在促使间充质祖细胞向功能性成骨细胞的转化过程中起着关键作用。本文将介绍几个常见的成骨相关转录因子:R unx2、O sterix、M sx1/2和D lx5/6。

核相关转录因子2对LOVO细胞裸鼠移植瘤的影响

目的:探讨核相关转录因子2(Runx2)基因表达对直肠癌细胞株LOVO细胞裸鼠移植瘤放射敏感性的影响。方法:采用RT-PCR法检测直肠癌及癌旁组织中Runx2 mRNA的表达。荧光定量RT-PCR和Western blotting分别检测转染48 h细胞中Runx2 mRNA、蛋白表达;CCK-8检测增殖,克隆形成实验观察Runx2对LOVO的的影响;TUNEL法检测细胞凋亡;裸鼠移植瘤实验检测Runx2表达联合X射线照射对直肠癌细胞的生长抑制作用。结果:Runx2 mRNA在人直肠癌细胞组织中的相对表达水平为0.83±0.31,癌旁组织为0.43±0.25(P<0.05)。与对照组(0.88±0.09)相比,下调组细胞Runx2的基因相对表达水平(0.23±0.04)显著降低,上调组细胞中的Runx2 mRNA表达水平(1.47±0.09)显著升高。Runx2下调组直肠癌LOVO细胞放射敏感性降低,Runx2上调组放射敏感性升高(P<0.05)。下调组增殖被抑制,凋亡率(58.16±0.92)%增加(P<0.05);Runx2上调组LOVO细胞增殖能力明显增强,细胞凋亡率(13.23±0.37)%降低(P<0.05)。20 Gy X射线照射后,Runx2下调组瘤体平均体积(2.53±0.23)cm^3较对照组(3.82±0.31)cm^3明显减小(P<0.05),上调组平均体积明显变大(5.21±0.21)cm^3(P<0.05)。结论:下调Runx2表达能抑制人直肠癌细胞LOVO细胞裸鼠移植瘤的生长,增强瘤体的放射敏感性。

miR-192-5p靶向CKIP-1促进骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化

背景:酪蛋白激酶2结合蛋白1(casein kinase 2-interaction protein-1,CKIP-1)是一种重要的骨形成负调控基因,其敲除鼠骨质显著增强、骨形成和骨密度也显著提高。而miRNA作为较早发现的小分子调控物,对大多数编码基因具有调控作用,在成骨分化中发挥重要作用。目的:探讨miRNA/CKIP-1对骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其分子机制。方法:采用miRNA-Seq技术检测2022年3-6月在开封市中心医院骨外科就诊32例骨质疏松患者及同期体检中心健康人群骨髓间充质干细胞中miRNA的变化情况;利用Targetscan网站预测靶向调控CKIP-1的miRNA,利用荧光素酶报告基因实验检测miRNA与CKIP-1启动子区DNA的结合;在骨髓间充质干细胞中转染miR-192-5p类似物(miR-192-5p mimics)/阴性对照(NC mimics)或miR-192-5p抑制剂(miR-192-5p inhibitor)/阴性对照(NC inhibitor),成骨诱导后第7,14天,通过实时荧光定量PCR技术及茜素红染色检测成骨标志基因Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素、抗骨桥蛋白、骨唾液蛋白及CKIP-1的表达水平和骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的情况;采用蛋白质免疫印迹实验及茜素红染色检测miR-192-5p/CKIP-1/轴对细胞成骨分化的的调控作用。结果与结论:与健康组相比,骨质疏松组有16个miRNA表达明显升高,53个miRNA表达明显降低(P<0.05);利用Targetscan网站预测,并通过荧光素酶报告基因实验验证,发现miR-192-5p与CKIP-1有互补的核苷酸序列(P<0.05);过表达miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著升高(P<0.05),抑制miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),而沉默CKIP-1的表达后,Runx2、骨钙素及骨桥素的蛋白水平增加(P<0.05),逆转了敲低miR-192-5p对细胞成骨分化的抑制作用。上述结果证实,miR-192-5p在骨质疏松症中表达降低;miR-192-5p通过靶向抑制CKIP-1的表达,促进骨髓间充质干细胞成骨分化。

转录因子Runx2对人乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮-间充质转化能力的影响

目的:建立稳定敲减Runt相关转录因子2(Runx2)表达的人乳腺癌MDA-MB-231细胞系,探讨Runx2对MDA-MB-231细胞上皮-间充质转化(EMT)、转移和侵袭能力的影响。方法:利用LV-Runx2-RNAi慢病毒载体感染MDA-MB-231细胞,构建稳定低表达Runx2的MDA-MB-231细胞株,检测比较Runx2表达水平对MDA-MB-231细胞的形态及E-cadherin、N-cadherin、β-catenin和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达的影响。侵袭实验和软琼脂集落形成实验分析比较抑制Runx2表达对乳腺癌细胞侵袭和非锚定生长能力的效应。结果:E-cadherin蛋白表达在敲减Runx2表达的MDA-MB-231细胞中明显高于常规MDA-MB-231细胞(P<0.05),而N-cadherin、β-catenin和MMP-9蛋白表达在敲减Runx2表达的MDA-MB-231细胞中明显低于常规MDA-MB-231细胞(P<0.05)。敲减Runx2表达的MDA-MB-231细胞侵袭和非锚定生长能力明显低于常规MDA-MB-231细胞(P<0.05)。结论:在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中抑制Runx2表达可以通过调控EMT相关蛋白的表达进而抑制乳腺癌细胞的EMT过程,从而对细胞的侵袭和转移起负调控作用。

低氧诱导因子-1α对骨髓间充质干细胞成骨分化与血管生成相关因子的影响

目的探讨低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)在SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)中对成骨分化和血管生成相关细胞因子的影响。方法分离并培养BMSCs,采用流式细胞术进行鉴定;分别构建上调和下调HIF-1α基因的质粒载体及对照组质粒,使用Lipofectamine?LTX转染试剂将各组质粒分别转染至BMSCs,将细胞分为过表达实验组、过表达对照组、低表达实验组和低表达对照组。各组成骨诱导3、7 d后分别进行茜素红染色;RT-PCR检测目的基因HIF-1α,成骨分化特异标志物Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2),以及血管生成特异标志物血小板衍生生长因子-BB(platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的mRNA表达水平;用Western blot检测目的蛋白HIF-1α及Runx2、PDGF-BB的蛋白表达量。结果流式鉴定BMSCs表面标记物CD29、CD45阳性表达率分别为98.2%和4.2%;RT-PCR结果显示:过表达实验组BMSCs中HIF-1α、Runx2、TGF-β和PDGF-BB的mRNA表达显著升高(P<0.001);低表达组中HIF-1α、Runx2、TGF-β和PDGF-BB的mRNA表达显著降低(P<0.001);Western blot结果显示:过表达实验组BMSCs中HIF-1α、Runx2和PDGF-BB的蛋白表达量均增高(P<0.001),低表达实验组中HIF-1α、Runx2和PDGF-BB蛋白表达量降低(P<0.001)。茜素红染色结果显示,低表达实验组钙结节面积小于其对照组,过表达实验组红色钙结节面积显著大于其对照组,随着成骨诱导时间的增加,各组钙化面积也增大。结论上调和下调HIF-1α后可调控BMSCs的成骨分化及血管生成相关因子表达。

敲低转录因子Runx2调节结肠癌移植瘤体外生长的实验研究

目的:研究敲低转录因子Runx2对结肠癌移植瘤体外生长的影响。方法:培养结肠癌细胞株HT29并分别转染阴性对照(NC)-shRNA的质粒、Runx2-shRNA的质粒,将转染shRNA的结肠癌细胞注射进入C57裸鼠的皮下,分别作为NC组和Runx2敲低组。建立模型1、2、3周后,采集血清并测定肿瘤标志物的含量,采集肿瘤病灶并测定增殖、凋亡基因的表达量。结果:模型建立后1、2、3周时,Runx2敲低组小鼠血清中CCSA-2、CEA、CA19-9的含量以及移植瘤病灶中Rac1、Wnt3a、PLD2、FAM96B的蛋白表达量均显著低于NC组,Runx2敲低组移植瘤病灶中MS4A12、ASPP2、Fas的蛋白表达量均显著高于NC组。结论:敲低转录因子Runx2能够抑制结肠癌移植瘤的体外生长。

川芎嗪抑制血管紧张素II诱导的平滑肌细胞NF-κB激活和骨形成蛋白-2表达降低(英文)

本文旨在观察血管紧张素II (angiotensin II, Ang II)对血管平滑肌细胞核转录因子-κB (nuclear factor-κB, NF-κB)的活性及骨形成蛋白-2 (bone morphogenetic protein-2, BMP-2)表达的影响,以探讨Ang II参与动脉粥样硬化的机制,并探讨川芎嗪是否能抑制Ang II的促动脉粥样硬化作用。采用Western blot、免疫组化和原位杂交等方法分别检测Ang II刺激和川芎嗪干预后NF-κB活性、BMP-2 蛋白和 mRNA 表达的变化。结果显示:(1) Ang II 刺激激活 NF-κB。Ang II 刺激 15 min 即有 NF-κB p65核转移,30 min 达高峰(P<0.01),1 h 后减退。川芎嗪抑制 Ang II诱导的NF-κB激活,与Ang II组比较,川芎嗪 + Ang II组NF-κB活性显著降低 (P<0.01)。 (2) Ang II 刺激 6 h 时 BMP-2 表达增强(P<0.05),12 h 时减弱(P<0.01),24 h 时更弱(P<0.01)。川芎嗪 + Ang II组中,川芎嗪干预6 h 时BMP-2 表达亦增强,12 与24 h 时保持正常水平。 (3) 川芎嗪对正常细胞的NF-κB活性和BMP-2 表达无影响。以上结果表明,Ang II刺激后激活NF-κB并最终使生长抑制因子BMP-2 表达下降,这可能是其参与动脉粥样硬化发生的机制之一。BMP-2 一过性增高可能不依赖NF-κB通路的激活。川芎嗪可抑制Ang II诱导的NF-κB激活与 BMP-2 表达降低,提示它在抗动脉粥样硬化形成中起重要作用。

Nrf2的失活对应力负荷下的骨形成的影响

目的通过核转录因子2(Nrf2)基因敲除小鼠探索Nrf2在应力所致骨形成中的作用。方法通过PCR检测选取同窝杂交出生的小鼠Nrf2基因敲除(KO)组及野生(WT)组,按时给予尺骨2 Hz峰值4 000压力连续3 d(120转/d),测量2组尺骨相对矿化面积及相对骨形成率。结果负荷引起的骨形成在KO组小鼠中被抑制。与WT组相比,KO组小鼠的相对骨形成率降低约84%(P<0.01)。结论骨内Nrf2的失活将影响应力负荷所致的骨形成。