负载柚皮苷AKE/GB30网箱在脊柱骨缺损模型修复中的作用及对BMPs-VEGF信号通路的影响

目的:观察负载柚皮苷的AKE/GB30网箱在脊柱骨缺损模型中的修复作用,并基于骨形成蛋白(BMPS)-血管内皮生长因子(VEGF)信号通路探讨该生物材料的作用机制。方法:用牙钻在30只新西兰雄兔L5与L6椎间制作一个7mm×5mm×4mm的缺损,建立脊柱骨缺损模型,制备AKE/GB30网箱。测试负载柚皮苷的AKE/GB30网箱生物力学性能,检测其体外释药行为。将造模成功的新西兰兔随机数字表法分为3组,即空白组、自体骨移植组、骨移植生物材料+柚皮苷联合组,除空白组外分别予以自体骨移植、负载柚皮苷的AKE/GB30网箱进行修复。术后6周、12周每组各取5只兔,微计算机断层扫描(Micro CT)检测骨修复情况[包括骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)和骨小梁数目(Tb.N)];实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨形成蛋白2(BMP2)、VEGF、Runt相关转录因子2(RUNX2)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)信使核糖核酸(mRNA)表达;免疫印迹法(WB)检测骨组织BMP2、VEGF、RUNX2、ALP、OCN蛋白表达。结果:AKE/GB30网箱制作成功,且其特性检测结果符合脊柱骨缺损修复要求;负载柚皮苷的AKE/GB30网箱最大抗压强度为28MPa,最大抗压力为15N,6周时其累积释药率达(98.15±1.47)%;各组术后12周时BV/TV、Tb.Th和Tb.N,骨组织BMP2、VEGF、RUNX2、ALP、OCN的mRNA与蛋白表达均高于术后6周时(P<0.05),且自体骨移植组、骨移植生物材料+柚皮苷联合组上述指标均高于空白组(P<0.05),自体骨移植组、骨移植生物材料+柚皮苷联合组上述指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:负载柚皮苷的AKE/GB30网箱在脊柱骨缺损模型修复的效果等同于自体骨移植,可能是通过促进BMP2、VEGF、RUNX2、ALP、OCN表达实现的。

髓芯减压联合骨形成蛋白活性诱导棒植入术治疗早期股骨头坏死的效果

目的探讨髓芯减压联合骨形成蛋白(BMP)活性诱导棒植入术治疗早期股骨头坏死的效果。方法回顾性分析2018年6月至2022年6月收治的116例早期股骨头坏死患者,按照不同的手术方式分为髓芯减压联合BMP活性诱导棒组(BMP组)和同种异体骨组。BMP组60例,采用髓芯减压联合BMP活性诱导棒植入术治疗。同种异体骨组56例,采用髓芯减压联合同种异体骨打压植骨术治疗。对比两组患者术前、术后6个月和术后1年的髋关节Harris评分、疼痛视觉模拟评分(VAS)的差异,并对患者术后1年疗效和股骨头存活率进行比较。结果所有患者均获得随访,两组患者术前VAS评分、Harris评分差异无统计学意义(P>0.05),术后6个月、1年时两组患者VAS评分、Harris评分均显著改善,且BMP组优于同种异体骨组,差异有统计学意义(P<0.05)。术后1年时,BMP组Harris髋关节评分优良率高于同种异体骨组,差异有统计学意义(P<0.05);BMP组股骨头存活率高于同种异体骨组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论髓芯减压联合BMP活性诱导棒植入术治疗早期股骨头坏死早期具有疗效,能够加速诱导新骨生成,提高新骨质量,为股骨头提供生物力学支撑,有效避免股骨头塌陷,且生物相容性好、能够在体内降解吸收,值得在临床上推广。

阿达木单抗治疗强直性脊柱炎患者的效果及其对炎性反应及骨形成生物活性蛋白水平的影响

目的:分析强直性脊柱炎患者应用阿达木单抗治疗的效果及其对炎性反应、骨形成生物活性蛋白水平的影响。方法:选取我院2020年1月—2022年3月收治的89例强直性脊柱炎患者作为研究对象,以抽签的方法进行分组。对照组44例给予常规治疗,研究组45例增加阿达木治疗。对比两组患者脊柱功能、炎性反应水平、骨形成生物活性蛋白水平、不良反应发生情况。结果:研究组患者Bath强直性脊柱炎疾病活动性指数(BASDAI)评分、Bath强直性脊柱炎功能指数(BASFI)评分、Bath强直性脊柱炎综合评价(BAS-G)评分均低于对照组(P<0.05);研究组患者肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)水平均低于对照组(P<0.05);研究组患者骨硬化蛋白(SOST)水平高于对照组,骨形态发生蛋白2(BMP-2)水平低于对照组(P<0.05);两组患者皮肤瘙痒发生率、恶心呕吐发生率、转氨酶升高发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:阿达木单抗联合常规治疗能够有效提高强直性脊柱炎患者脊柱功能,减轻炎症反应,调节骨形成生物活性蛋白水平,且安全性较高。

骨形成蛋白7对糖皮质激素诱导PC12细胞凋亡的作用研究

目的探究骨形成蛋白7(BMP-7)对糖皮质激素(GC)诱导PC12细胞凋亡的作用。方法采用不同浓度GC干预PC12细胞,明确不同浓度GC对PC12细胞凋亡的影响;在PC12细胞中感染BMP-7过表达/敲低慢病毒和对照病毒,然后采用DMSO或GC干预细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Bax基因表达,Western blotting法检测Cleaved-Caspase-3蛋白表达。结果不同浓度GC处理后的细胞凋亡率、Bax基因和Cleaved-Caspase-3蛋白表达比较,差异有统计学意义(P<0.05);与0μmol/L GC比较,GC浓度为10μmol/L时,PC12细胞凋亡率明显升高(P<0.05);GC浓度为50μmol/L时,PC12细胞Bax基因和Cleaved-Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05)。过表达或敲低BMP-7后4组细胞的细胞凋亡率、Bax基因和Cleaved-Caspase-3蛋白表达比较,差异有统计学意义(P<0.05);与GC-NC组比较,GC-oe BMP-7组细胞凋亡率、Bax基因和Cleaved-Caspase-3蛋白表达均降低(P<0.05);与DMSO-NC组比较,GC-oe BMP-7组细胞凋亡水平、Bax基因和Cleaved-Caspase-3蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。与DMSO-NC组比较,DMSO-sh BMP-7组细胞凋水平、Bax基因和Cleaved-Caspase-3蛋白表达均增加(P<0.05);与GC-NC组比较,GC-sh BMP-7组细胞凋水平、Bax基因和Cleaved-Caspase-3蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论高水平GC激素诱导PC12细胞凋亡增加,BMP-7可以拮抗GC诱导的细胞凋亡增加。

鸡胚骨形成蛋白(BMPs)基因表达水平的发育性变化

【目的】分析骨形成蛋白(Bone morphogenetic proteins,BMPs)基因在鸡胚不同发育阶段的表达水平,为进一步研究BMPs基因的功能提供依据。【方法】选取AA肉鸡种蛋100枚进行孵化,分别于孵化期第1、2、3、4、5、6、9、12、15、18 d(记为E1~E18)选取胚蛋6枚,E1~E6采集整胚,E12~E18分别采集大脑、心脏、肝脏和腿肌组织。采用定量PCR(qPCR)方法检测BMP2、BMP4和BMP7基因的表达丰度。【结果】BMP2基因在E1~E6中的表达水平呈现先上升后下降的趋势;BMP2在E4、E5和E6中的表达水平显著高于E1(P<0.05);BMP2在大脑中的表达显示, E12显著高于E1(P<0.05),而到了E18阶段反而极显著低于E1(P<0.01);BMP2在心脏和腿肌中的表达均是E9显著或极显著大于E1(P<0.05或P<0.01);鸡胚发育到了后期(E15和E18),BMP2在心脏和肝脏中的表达却显著或极显著低于E1时期(P<0.05或P<0.01)。BMP4在E1~E6中的表达水平也是呈现先上升后下降的趋势;BMP4基因在E3~E6整胚和E9胚龄的大脑、心脏、肝脏和腿肌中的表达水平均显著或极显著高于E1胚龄(P<0.05或P<0.01)。BMP7在E4、E5和E6的表达与BMP2、BMP4类似,即BMP7基因的表达水平显著或极显著高于E1时期(P<0.05或P<0.01),但在E2和E3时期,BMP7表达水平反而降低了,且E2时期极显著低于E1时期(P<0.01);在整胚和大脑中的结果显示,E4~E18阶段BMP7基因的表达水平呈现逐渐降低趋势,到E18时期大脑中的BMP7基因的表达水平极显著低于E1时期(P<0.01);与E1相比,在心脏中BMP7到E12时期达到最低水平(P<0.01),而肝脏中BMP7基因表达水平在E12和E15阶段均极显著低于E1(P<0.01)。【结论】BMP2、BMP4和BMP7基因在整胚的表达水平呈现先上升后下降趋势,至E4时期到达最高点;BMP2基因在E9、E12、E15和E18的心脏、肝脏和腿肌中的表达均呈现下降趋势。说明BMPs基因在器官形成初期起着关键作用,之后随着器官发育完成BMPs基因的作用逐渐减弱。

骨形成蛋白(BMP)复合材料的研究与应用

骨形态形成蛋白(BMP)具有诱导成骨的作用,是目前研究生物活性材料的一个方面。本文从生物材料角度介绍了BMP的特性及其复合移植物用于修复骨缺损、骨不连等方面的近况。

抗骨形成蛋白(BMP)单链抗体的构建

从一株鼠抗ＢＭＰ单克隆抗体杂交瘤中扩增出其可变区基因片段，并将其分别克隆入ｐＵＣ１８、１９载体，利用双脱氧链终止法进行序列测定和计算机分析后，应用一段人工合成的含１５个氨基酸的连接肽，将重链基因（ＶＨ）的Ｃ端和轻链基因（ＶＬ）的Ｎ端连接起来，构建成单链抗体（ｓｃＦｖ）。将其克隆入融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－１，在大肠杆菌ＪＭ１０９中获得初步表达。

骨形成蛋白(BMP)盖髓的临床病理学观察

本文报告了应用 BMP 盖髓117例128颗牙的临床效果,此外选择12颗因正畸需要拔除的恒磨牙,(牙合)面人工穿髓,应用 BMP 盖髓,分别于术后不同时间拔除牙齿进行组织学观察。结果发现,BMP组术后2周,一年以后的临床治愈率分别为98.82%和98.59%,均高于氢氧化钙,但无统计学意义。组织学观察证实,术后4周 BMP 组有牙本质桥形成,而对照组没有。术后12周,BMP组牙本质桥依然完整。未观察到任何毒副作用;而氢氧化钙组此时虽有牙本质桥形成,但根管壁有大量的修复性牙本质沉积。因此,BMP 盖髓的临床效果不低于氢氧化钙。

骨形成蛋白7通过激活I型受体BMPR1A、BMPR1B抑制肺大细胞癌NCI-H460细胞的增殖

背景与目的已有的研究发现骨形成蛋白7(bone morphogenetic protein7,BMP7)具有抑制和促进多种肿瘤发生发展的双重作用,但其对肺癌细胞增殖的影响及其具体机制尚不明确。本实验首先检测了外源性BMP7对肺癌细胞增殖的影响,然后通过在肺癌细胞系中阻断不同的I型受体,观察其对BMP7生物学作用的影响,以探讨不同的I型受体在BMP7信号传导过程中的作用。方法应用RT-PCR及MTT方法分别检测4种非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞系和人支气管上皮细胞系(HBE)中BMP7I型受体的表达情况及外源性BMP7对肺癌细胞增殖能力的影响,并联合运用抗体阻断的方法阻断NCI-H460细胞中内源性I型抗体,采用MTT法检测BMP7对NCI-H460细胞增殖的影响,分析不同的I型受体在BMP7信号传导过程中的作用。结果NCI-H460细胞系中三种I型受体均有表达。外源性BMP7抑制了肺大细胞癌NCI-H460细胞的增殖(P=0.002)。运用特异性抗体阻断NCI-H460细胞内源性BMPR1A、BMPR1B、BMPR1A+BMPR1B后BMP7对NCI-H460增殖的抑制作用明显减弱(P=0.003,P=0.014,P<0.001),而阻断ACVR1A后BMP7对NCI-H460增殖的抑制作用无明显变化(P=0.074)。结论BMP7通过激活BMPR1A、BM-PR1B两种I型受体抑制NCI-H460细胞的增殖。

骨形成蛋白(BMP)-2/4与IA型BMP受体在口腔鳞癌中的表达

目的 :认识和分析 BMP及其受体与口腔鳞癌发生、发展的可能关系。方法 :用免疫组织化学方法分析BMP- 2 / 4,BMP受体 (BMPR- IA)在口颊部粘膜正常上皮、慢性炎症和鳞癌上皮中的表达 ,标本为 :18例正常上皮 (normal buccal mucosa,NB) ,2 4例慢性炎症 (nonspecific chronic inflammation,NCI) ,5 8例鳞癌(squamous cell carcinoma,SCC)。结果 :BMP- 2 / 4,BMPR- IA在口腔粘膜的正常与慢性炎症上皮中有弱表达 ,NB与 NCI无明显差别 ;在鳞癌上皮中除 6例 BMP- 2 / 4表达为阴性外 ,余均有阳性或强阳性表达 ,明显高于 NB、NCI两组 ;鳞癌中高分化、中分化、低分化三组间的表达无明显差别。结论 :BMP- 2 / 4,BMPR- IA可能参与了对口腔鳞癌发生、发展的调控。

骨形成蛋白(BMP)盖髓的实验观察

骨形成蛋白是一种高效的骨诱导因子,本文观察它用于直接盖髓的效果。术后2周,可见具有典型造牙本质细胞的规则牙本质和骨样牙本质形成,并组成牙本质桥。而在氢氧化钙组,未观察到牙本质形成。术后3周,BMP组牙本质桥形成趋于完成,而氢氧化钙组刚开始。术后12周,两组均有牙本质形成。但氢氧化钙组根管侧壁有大量修复性牙本质形成,本结果显示了临床应用BMP保存活髓治疗的可能性。

骨形成蛋白(BMP)-2/4,IA型BMP受体及Smad1、4、5在Tca8113舌癌细胞中的表达及意义

目的 认识和分析BMPs及其信号传导因子与口腔鳞状细胞癌发生、发展的可能关系。方法 用免疫组织化学方法检测BMP - 2 / 4 ,IA型BMP受体及Smad1,4 ,5在Tca8113细胞中表达并分析其意义。结果 BMP - 2 / 4 ,IA型BMP受体及Smad1,4 ,5在Tca8113细胞中有表达。其中 ,在胞浆中发现有BMP - 2 / 4的阳性信号 ,在胞膜中有IA型BMP受体的阳性信号 ,在胞质、胞核中有Smad1,4 ,5的强阳性表达。结论 BMPs及其信号传导因子与口腔鳞状细胞癌发生。

骨形成蛋白7(BMP7)基因的克隆及序列分析

目的 :克隆BMP7全长cDNA ,构建BMP7克隆质粒。方法 :通过反转录PCR技术和巢式PCR技术从人类胚胎肾 2 93细胞中克隆BMP7基因 ,应用互补拼接的方法对其进行修复获得全长cDNA ,将其与T载体进行连接得到BMP7克隆质粒。结果 :琼脂糖电泳及测序结果显示经过修复后的BMP7基因与预期结果相一致 ,酶切鉴定及测序结果证明pT BMP7克隆质粒结构正确。结论 :BMP7基因的克隆为进一步研究BMP7基因和蛋白的成骨功能奠定了基础。

重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)对人脑胶质瘤细胞凋亡的影响

目的 研究BMP 2是否对胶质瘤细胞也具有诱导凋亡作用。方法 培养的人脑胶质瘤细胞系SHG 4 4中加入rhBMP 2 ,运用透射电镜观察凋亡的超微结构 ,流式细胞仪技术分析细胞DNA周期变化 ,琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段的改变。结果 电镜下可见细胞核染色质浓缩、边集、核碎裂 ;DNA周期分析显示在G1期峰前存在一个凋亡峰 ( 12 1% ) ;DNA电泳呈梯状。结论 rhBMP 2在体外对人脑胶质瘤细胞系SHG 4 4有明显诱导凋亡的作用。

骨形成蛋白-2(BMP-2)与雌激素敏感性的人类乳腺癌的关系

目的:研究BMP-2(BoneMorphogeneticProtein-2,骨形成蛋白-2)在乳腺癌细胞系中的表达,探讨其对乳腺癌细胞的作用机制,评估其在乳腺癌基因治疗上的作用。方法:采用分子生物学方法(MolecularBiology)检测6种人类乳腺癌细胞系中BMP-2的表达,并分析对乳腺癌细胞生长的影响及其与治疗的关系。结果:BMP-2在所有人类乳腺癌细胞系中表达,其抑制乳腺癌细胞的生长,主要抑制于细胞周期的G1期,其抑制作用与p21蛋白的诱导有关。结论:BMP-2是对雌激素敏感的人类乳腺癌细胞的强有力抑制剂,这有可能成为在分子水平上治疗乳腺癌的新方法。

牛骨形成蛋白(bBMP)骨诱导的体外实验观察

用牛骨形成蛋白(bBMP)在体外实验中观察BMP的骨诱导过程,实验结果表明,bBMP不仅可以在组织培养基中诱导生成软骨,而且可以形成软骨-骨样组织。在组织培养基中,bBMP与肌肉组织作用1d后即可诱导间充质细胞转变为具有合成、分泌骨-软骨基质的细胞。骨软骨组织是在基质形成的基础上建立发展的,这种基质在初始阶段为无细胞的均质样结构,以后逐渐出现骨、软骨细胞。超微结构观察发现,骨-软骨基质为多种成份的复合体,其中有胶原纤维,蛋白多糖,基质小泡及变性的肌纤维,并有多种细胞成分。这种骨一软骨组织没有典型的血管结构,通过自身逐渐增加的小腔隙以及与周围肌肉组织、组织液的直接接触获取营养。在体外组织培养基中,bBMP诱导生成的骨组织不进行钙化。

转化生长因子β1(TGF-β1)和骨形成蛋白2(BMP2)体外联合诱导成牙本质细胞样细胞分化

目的:观察转化生长因子β1(transform ing growth factorβ1,TGF-β1)和骨形成蛋白2(bone morphogeneticprote in 2,BMP2)联合应用对体外培养的鼠牙乳头成牙本质细胞分化的影响。方法:取17 d胎龄小鼠下颌第一磨牙牙胚,胰蛋白酶消化分离牙乳头,置半固态培养基培养6 d,半固态培养基中单独加入重组TGFβ1、BMP2,或分别与肝素联合,或TGFβ1和BMP2联合,组织学观察牙乳头的形态学变化。结果:TGF-β1或BMP2单独加入时未见细胞极化,但基质分泌增加。TGF-β1或BMP2加肝素可诱导牙乳头周边细胞发生极化,并分泌胞外基质。半固态培养基中同时加入TGF-β1和BMP2的牙乳头培养6 d后,牙乳头周边细胞出现极化和功能性分化,牙乳头周边胞外基质沉积明显,且可见牙乳头尖形态的维持及从牙乳头尖至牙乳头基底部成牙本质细胞分化梯度的维持。结论:本研究结果证实,在没有内釉上皮和完整的基底膜存在的情况下,TGF-β1和BMP2加肝素可诱导培养的牙乳头出现成牙本质细胞分化,并促进胞外基质的分泌。TGF-β1和BMP2均能诱导成牙本质细胞的细胞学分化和分泌功能,二者联合应用可协同发挥作用增强诱导效果。

牛骨形成蛋白(bBMP)体内骨诱导活性的实验研究

参照杨连甲的方法从小牛骨基质中提取牛骨形成蛋白（ｂＢＭＰ），经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析，ｂＢＭＰ含６７、４３、３０、２２、１８和１４ｋＤ六种蛋白组分，保留ＢＭＰ活性蛋白成份，植入小鼠股部肌肉后的Ｘ线及组织学观察发现，所提取的ｂＢＭＰ具有较高的骨诱导活性，ｂＢＭＰ植入后１４天即可见有新骨形成，２１天时有含骨髓的板层状骨形成。采用ｂＢＭＰ单克隆抗体的免疫组织化学染色发现，ＢＭＰ存在于未分化间充质细胞胞浆和骨形成过程中的成骨细胞内。

骨形成蛋白(BMP)-2/4,-5与IA型BMP受体在口腔正常上皮、良性病变及癌变中的表达分析

认识 BMP及其受体与口腔正常上皮及其癌变的关系 ,有助于深入了解口腔上皮癌变的机理。本文用免疫组织化学方法对 BMP- 2 / 4,- 5与 BMP受体 BMPR- IA在口腔颊部粘膜正常上皮、良性病变和癌变中的表达进行观察和半定量分析。标本包括 :9例正常上皮 (normal buccal m ucosa,NB)、 8例慢性炎症 (nonspecific chronic inflam mation,NCI)、 7例过度角化 (hyperkeratosis,HK)、 5例乳头状瘤 (squam ous cell papilloma,SCP)、 2 9例鳞癌 (squamous cell carcinoma,SCC)、10例癌旁上皮 (epithelium im mediately adjacent to carcinom a,EAC)以及 6例硬腭粘膜上皮 (norm al mucosa of hard palate,NHP)。结果显示 :BMP- 2 / 4,- 5与 BMPR- IA在口腔粘膜的正常与良性病变上皮中有弱的和不均一的阳性表达 ,NB与 NHP无明显差别。而除 3例 SCC外 ,其它 SCC几乎均有程度不一的阳性表达。在 EAC中的表达接近于 SCC,二者明显高于正常与良性组。此外 ,转移在淋巴结中的癌细胞的 BMP- 2 / 4与 BMP- 5阳性程度略高于原发灶的癌细胞。本文认为 :BMP- 2 / 4,-5与 BMPR-

辛伐他汀对体外培养鼠骨形成蛋白BMP-2基因的调控

目的研究辛伐他汀对鼠骨形成蛋白(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)及其m RNA表达的影响,验证辛伐他汀是否能够促进鼠成骨细胞的骨形成.方法将兔子分为假手术组,模型组和辛伐他汀组3个小组,每组6只.在辛伐他汀组用药1月、2月和4月时,收集各组兔子的耳中央动脉血清,将上述血清加入鼠MC3T3-E1细胞培养4d后提取总RNA,逆转录出骨形成蛋白BMP-2的cDNA后进行实时荧光定量PCR,对产物进行检测.结果用药1个月,辛伐他汀组BMP-2表达量较假手术组高2.79倍(P=0.0004),较模型组高2.66(P=0.001);用药2个月,辛伐他汀组BMP-2表达量较假手术组高1.88倍,较模型组高1.75倍(P=0.001);用药4个月,辛伐他汀组BMP-2表达量较假手术组高0.86倍(P=1.000),较模型组高1.04倍.结论辛伐他汀对骨形成有正效应.