骨形成蛋白Ⅱ型受体基因R491W突变导致家族性原发性肺动脉高压

目的 :验证骨形成蛋白Ⅱ型受体 (BMPR2 )基因突变是否能导致中国汉族人家族性原发性肺动脉高压 (PPH)。 方法 :对一个独立的家族性PPH家系和 1 0例散发患者及 1 0 0例正常人进行BMPR2基因突变扫描 ,外周血白细胞中提取基因组脱氧核糖核酸 (DNA) ,聚合酶链反应扩增BMPR2基因 1～ 1 3号外显子 ,自动测序仪检测突变。 结果 :此家系先证者BMPR2基因第 4 91密码子位置发生C→T转换 ,使精氨酸 (R)变为色氨酸 (W)。家系中另两例患者也携带此突变 ,而其他家系成员和散发病例以及正常人均未发现BMPR2基因 1～ 1 3号外显子的异常改变。 结论 :BMPR2基因R4 91W错义突变能导致家族性PPH ,这与国外研究结果一致。

长链非编码RNA HOX转录反义RNA对微小RNA-519c-3p/骨形成蛋白Ⅱ型受体调控骨关节炎进展作用及分子机制

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)HOX转录反义RNA(HOTAIR)通过miR-519c-3p/骨形成蛋白Ⅱ型受体(BMPR2)调控骨关节炎进展的作用及分子机制。方法利用生物信息学网站ENCORI、TargetScanHuman 8.0工具分析预测LncRNA HOTAIR的下游miR-519c-3p以及靶基因BMPR2,并通过双荧光素酶报告及RIP实验验证分子间的相互结合。通过慢病毒转染将miR-519c-3p在细胞中过表达后,将构建好的软骨细胞分为NC组和miR-519c-3p过表达组(miR-519c-3p组)。两组细胞分别应用CCK-8检测、蛋白质印迹、实时荧光定量聚合酶链反应、酶联免疫吸附试验等检测探究LncRNA HOTAIR/miR-519c-3p/BMPR2轴对人软骨细胞骨关节炎的进展的影响。结果与NC组比较,miR-519c-3p组细胞生长变慢,降解酶[降基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP9、MMP13、含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS)4和ADAMTS5]和促炎因子(白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α)水平显著降低,而COL2A1和SOX9水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。此外,LncRNA HOTAIR可结合miR-519c-3p,并且BMPR2是miR-519c-3p的下游靶基因,回补实验证实LncRNA HOTAIR可通过miR-519c-3p/BMPR2轴调控人软骨细胞生长、降解酶以及促炎因子的分泌。结论LncRNA HOTAIR可通过miR-519c-3p/BMPR2轴调控骨关节炎的进展。

骨形成蛋白Ⅱ型受体基因与家族性及特发性肺动脉高压的关系

近年研究发现骨形成蛋白Ⅱ型受体（ bone morphogenetic protein type Ⅱ receptor, BMPR2）基因突变可以影响肺血管细胞的增殖与凋亡，是家族性肺动脉高压（FPAH）和特发性肺动脉高压（IPAH）的重要致病基因。美国心脏病学会基金会（ACCF）／美国心脏学会（AHA）2009年3月发表的肺动脉高压专家共识建议对FPAH患者家族成员进行BMPR2基因突变的筛查，以期早期诊断。本文就BMPR2基因及其与FPAH及IPAH关系的研究进展作简要综述。

先天性心脏病并肺动脉高压患儿骨形成蛋白Ⅱ型受体基因新突变

目的探讨骨形成蛋白Ⅱ型受体(BMPR2)基因外显子突变与先天性心脏病并肺动脉高压(CHD/PAH)之间的关系。方法收集66例无血缘关系的CHD/PAH患儿。均为汉族;男39例,女27例;VSD 25例,复杂CHD 20例,PDH 16例,ASD 5例。另收集66例健康儿童作为健康对照组。采集所有对象外周静脉血,提取基因组DNA,PCR方法扩增BMPR2基因的13个外显子编码序列后,对扩增产物纯化后进行测序,测序峰图用Sequencher 4.7 Demo软件进行分析,与GenBank人BMPR2的基因序列进行比对。结果 1.病例组检出1例部分性房室隔缺损并二尖瓣前叶裂、PAH患儿BMPR2基因外显子8发生错义突变,经数据库查对,该突变为一新的突变位点,而其余病例与健康对照组均未发现相同位点发生碱基突变;2.病例组9例和健康对照组10例儿童BMPR2基因编码区有一单核苷酸多态位点,即c.2811G>A,2组间差异无统计学意义。结论在我国汉族CHD/PAH患儿中首次发现BMPR2基因外显子8发生错义突变,该新的错义突变可能与CHD并PAH形成有关。

骨形态形成蛋白-Ⅱ型受体基因突变与特发性肺动脉高压

特发性肺动脉高压（idiopathic pulmonary arterial hypertension,IPAH）是一种病因尚未明确的严重疾病,最终发生右心衰,预后不佳。近年的研究表明IPAH是遗传和环境共同作用的结果,其中遗传因素占主要地位。IPAH的致病基因-编码骨形态形成蛋白-Ⅱ型受体（BMPR-Ⅱ）基因已找到,下面就IPAH与BMPR-Ⅱ基因突变的关系研究进展作一简单综述。

小鼠BMPR-Ⅱ单克隆抗体的制备与鉴定的实验研究

目的制备小鼠骨形成蛋白Ⅱ型受体(BMPR-Ⅱ)的单克隆抗体并鉴定其活性。方法以BMPR-Ⅱ为抗原免疫BalB/c小鼠,通过杂交瘤技术建立稳定分泌抗BMPR-Ⅱ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,克隆化培养后接种于小鼠腹腔制备BMPR-Ⅱ的单克隆抗体,通过间接酶联免疫吸附试验、免疫印迹、免疫组织化学、免疫荧光技术对其进行鉴定。结果获得一株能稳定分泌抗BMPR-Ⅱ单克隆抗体的杂交瘤细胞,命名为3F6,其腹水效价为105,亚类为IgG1;通过免疫印迹、免疫组织化学、免疫荧光证实制备的BMPR-Ⅱ抗体可与组织和细胞中的BMPR-Ⅱ蛋白特异性结合。结论本实验成功制备了可稳定分泌具有生物活性的BMPR-Ⅱ单克隆抗体的杂交瘤细胞及特异性的BMPR-Ⅱ单克隆抗体,可用于BMPR-Ⅱ免疫检测方法的初步应用。

miR-21-5p在肺动脉高压发病机制中的调控作用研究

目的研究mi R-21-5p在肺动脉高压发病中的调控机制。方法应用q RT-PCR方法检测mi R-21-5p在正常人和先天性心脏病伴肺动脉高压患者血清,以及常氧和缺氧处理肺动脉平滑肌细胞中的表达;利用Edu渗入法以及划痕实验研究mi R-21-5p对肺动脉平滑肌细胞增殖及迁移的影响;应用Targetscan软件进行靶基因预测并在肺动脉平滑肌细胞中进行验证。结果肺动脉高压患者血清mi R-21-5p水平显著高于正常人血清(P<0.001);与常氧相比,缺氧处理肺动脉平滑肌细胞明显促进mi R-21-5p表达(P<0.01);mi R-21-5p能够促进缺氧条件下的肺动脉平滑肌细胞增殖、迁移;双荧光素酶报告系统证明mi R-21-5p能够结合骨形成蛋白Ⅱ型受体(BMPR2)的3'UTR;鉴定mi R-21-5p在肺动脉平滑肌细胞中靶向BMPR2基因。结论 mi R-21-5p调控靶基因BMPR2参与肺动脉高压发病。

肺动脉高压病因学最新研究进展

肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)是一组少见的、预后不良的疾病,以进行性增高的肺动脉压力和阻力为特征。其病理变化包括肺血管收缩与重构、肺血管平滑肌和内皮细胞的异常增殖、血栓形成等。PAH的发病机制复杂,最新研究表明肺动脉高压病因包括骨形成蛋白Ⅱ型受体(BMPR2)和活化素受体样激酶(ALK1)等遗传基因变异以及过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR)、Rho激酶信号通路等的异常。这为肺动脉高压的治疗和预防提供了更多的理论依据。

内皮功能异常与肺动脉高压发病机制新认识

肺动脉高压(PAH)是一组以肺血管阻力持续增加为特征的临床综合征,其发病机制至今尚未完全清楚。PAH的发生、发展涉及肺动脉内皮功能异常,一氧化氮、依前列醇、内皮素1等分泌失衡,炎症发生,内皮祖细胞参与血管重构,以及骨形成蛋白Ⅱ型受体基因突变等多种因素的交互作用。现从这几方面的新观点进行综述,相信这些研究将为更新的靶向疗法提供理论依据。

人BMPR2基因5′侧翼序列生物信息学分析及克隆

目的分析人BMPR2基因5′侧翼序列的特征,预测其潜在的启动子区段,克隆5′侧翼大片断。方法提取人BMPR2基因的5′侧翼序列,用CpG岛预测软件、重复序列分析软件、启动子预测软件对其进行生物信息学分析,用分段克隆再拼接的方法克隆其5′侧翼近5.5K的大片断。结果人BMPR2基因属于典型的CpG岛相关基因;有4个可能参与转录调控的Alu序列;有多个潜在的启动子区段。成功构建了重组质粒pGL3-Basic-5.5K,其插入片断包含人BMPR2基因5′侧翼近5.5 K的序列。结论人BMPR2基因5′侧翼大片段的成功克隆及生物信息学预测将为通过实验手段研究该基因的表达调控奠定坚实的基础。

miR-19a调控BMPR2与VEGF在肺动脉高压大鼠肺血管重构中的作用

目的探讨miR-19a调控骨形成蛋白Ⅱ型受体(BMPR2)与血管内皮生长因子(VEGF)在肺动脉高压(PAH)大鼠肺血管重构中的作用。方法 24只SD大鼠行左侧全肺切除制备PAH模型,成功后随机分为P0、P1、P2、P3组各6只,另取6只仅左侧开胸作为假手术对照(C组)。P1、P2、P3组经气管分别导入过载miR-19a腺相关病毒(AAV)质粒、封闭miR-19a AAV质粒、空载miR-19a AAV质粒,P0、C组均经气管导入等量生理盐水。喂养8周后,检测平均肺动脉压力(m PAP);取右肺组织,HE染色观察肺动脉病理改变,计算肺细小动脉平均中膜厚度(MT),实时荧光定量PCR法检测肺组织中的miR-19a、VEGF mRNA,Western blotting法检测肺组织中的BMPR2蛋白。结果 m PAP C组<P2组<P3、P0组<P1组(P均<0. 01)。与C组比较,P0、P1、P2、P3组均有血管重构表现;与P3组比较,P1组血管重构程度增强,而P2组血管重构程度减弱,P0组无明显变化。MT C组<P2组<P3、P0组<P1组(P均<0. 05或<0. 01)。肺组织中miR-19a、VEGF mRNA表达量C、P2组<P3、P0组<P1组(P均<0. 05或<0. 01),肺组织中BMPR2蛋白表达量P0、P1、P3组低于C、P2组(P <0. 05或<0. 01)。结论 miR-19a能通过调控BMPR2和VEGF的表达,从而影响PAH大鼠肺血管重构。

补肾调经方对小鼠体外培养卵泡卵母细胞BMPRⅡ/ALK6-Smads表达的影响

目的观察补肾调经方对小鼠体外培养窦前卵泡成活数及卵母细胞骨形成蛋白Ⅱ型受体(bone morphogenetic protein receptorⅡ,BMPRⅡ)/激活素受体样激酶6-Smads(activin receptor-like kinase6-drosophila mothers against decapentaplegic proteins,ALK6-Smads)信号通路的影响,探讨其提高体外生长卵泡卵母细胞质量的作用机制。方法 65只12日龄健康雌性昆明小鼠,采用机械法分离其窦前卵泡,分别以正常大鼠血清、高、中、低剂量补肾调经方大鼠含药血清、高剂量补肾调经方大鼠含药血清+K02288孵育,分为对照组、补肾高、中、低剂量组(即补肾组)、抑制剂组,普通法体外培养。培养第6天比较补肾组与对照组窦前卵泡成活数,实时荧光定量PCR法检测卵母细胞中BMPRⅡ、ALK6、Smad1、Smad5、Smad8mRNA表达;细胞免疫荧光法检测上述指标和磷酸化的Smad1/5/8(phospho-Smad1/5/8,p-Smad1/5/8)蛋白表达水平。结果与对照组比较,补肾高剂量组窦前卵泡成活数增加,补肾各剂量组BMPRⅡ、ALK6、Smad5、Smad8 mRNA表达水平升高,上述指标及p-Smad1/5/8蛋白表达水平升高,补肾高、中剂量组Smad1 mRNA及其蛋白表达水平升高(P<0.05)。与补肾高剂量组比较,抑制剂组p-Smad1/5/8蛋白表达降低(P<0.05)。结论补肾调经方能增加体外培养窦前卵泡成活数,提高卵母细胞质量,其作用机制可能与调控卵母细胞中BMPRⅡ/ALK6-Smads信号通路有关。

肺动脉高压相关因子研究进展

肺动脉高压以肺血管阻力升高为特征，由于小肺动脉血管平滑肌细胞增殖，肺动脉血管阻力升高，导致右心室衰竭直至死亡。肺动脉高压的发生不能以单一的病理生理理论来解释，而是涉及多种分子介质、遗传因素和平滑肌细胞、内皮细胞等多种细胞异常。最近的研究表明多种因子通过不同的途径参与了肺动脉高压的发病机制，包括骨形成蛋白Ⅱ型受体、Notch3、过氧化物酶增殖体激活受体γ、PTEN等。

瑞舒伐他汀对野百合碱诱导大鼠肺动脉高压的干预及机制研究

目的探讨瑞舒伐他汀干预野百合碱诱导大鼠肺动脉高压的作用及可能机制。方法 48只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(n=8)和野百合碱组(n=40),正常对照组予皮下注射生理盐水,野百合碱组一次性皮下注射1%野百合碱50mg/kg,4周后再随机分为肺动脉高压组(n=16)、瑞舒伐他汀低剂量组[2mg/(kg·d),n=12]、瑞舒伐他汀高剂量组[10mg/(kg·d),n=12],瑞舒伐他汀低剂量组和高剂量组于野百合碱注射第4周末起每日给予瑞舒伐他汀灌胃,正常对照组、肺动脉高压组仅予生理盐水灌胃,干预4周。观察各组大鼠的一般情况,各组干预结束后测量平均右心室压力(mRVP)、平均肺动脉压力(mPAP)和右心室肥厚指数(RVHI);HE染色观察肺小动脉管壁厚度与血管外径之比(WT%)和管壁面积占血管总面积的百分比(WA%);Western blot法检测骨形成蛋白Ⅱ型受体(BMPR-Ⅱ)、Smad4蛋白在肺动脉中的表达水平。结果瑞舒伐他汀能降低mRVP[瑞舒伐他汀低剂量组(24.58±1.38)、瑞舒伐他汀高剂量组(21.56±3.05)比肺动脉高压组(35.28±2.81)mmHg,均P<0.05],降低mPAP[瑞舒伐他汀低剂量组(30.26±1.57)、瑞舒伐他汀高剂量组(27.88±2.17)比肺动脉高压组(41.23±2.63)mmHg,均P<0.05],减轻肺小动脉管壁厚度(P<0.01)、右心室肥厚程度(均P<0.05),上调肺动脉BMPR-Ⅱ和Smad4蛋白的表达(均P<0.05)。结论瑞舒伐他汀缓解已经形成的肺动脉高压,减轻右心室肥厚,可能是通过上调BMPR-Ⅱ、Smad4蛋白的表达来实现的。

锌稳态、金属反应转录因子与肺高血压

肺高血压是一种以肺动脉阻力进行性升高(平均肺动脉压≥20 mm Hg, 1 mm Hg=0.133 kPa)为主要临床特征,以肺血管重构为主要病理改变,以右心衰竭为最终结局的肺血管增生性疾病,肺高血压的形成主要与基因表达异常(如骨形成蛋白Ⅱ型受体基因及前列腺素Ⅰ合酶基因).